Optimización de la metodología de cultivo de condrocitos de discos procedentes de hernias discales y comprobación de la presencia del Toll-like receptor 4 (TLR 4) / Optimization of methods of chondrocyte cell culture from human disc hernia subjects and testing the presence of Toll-like receptor 4 (TLR 4)

RESUMEN

Objetivo: Optimizar la técnica de cultivo de células del disco intervertebral en humanos y confirmar la expresión del Toll-like receptor 4 (TLR4 ). Material y método: Se cultivaron muestras de núcleo pulposo obtenidas durante la cirugía de hernia discal. Las células cultivadas de los nueve pacientes (todos con degeneración del disco moderada-grave en la escala de Pfirrmann) fueron observadas para determinar su capacidad de crecimiento. Las células cultivadas obtenidas se estudiaron con el fin de determinar su fenotipo mediante inmunotinción y rtPCR. La presencia de TLR4 fue comprobada por los mismos métodos. Resultados: Las células aisladas se sembraron a diferentes concentraciones. La concentración ideal se obtuvo para las condiciones óptimas del cultivo. Se confirmó que el fenotipo de las células fue condrocitario y se confirmó la presencia del receptor TLR4 en las células cultivadas. Conclusión: Se confirma la presencia tanto de ARNm como de la proteína del receptor TLR4 en los condrocitos del disco intervertebral. Este hallazgo allana el camino para la caracterización de las funciones de este receptor en los procesos inflamatorios de la hernia de disco (AU)

ABSTRACT

Objective: To optimize the technique of culturing human intervertebral disc cells, and to confirm the expression of toll-like receptor 4 (TLR4) in these cells. Material and method: Samples of nucleus pulposus obtained during disc hernia surgery were cultured. Cells from nine patients (all with moderate-severe disc degeneration scores, based on the Pfirmann scale) were followed up to determine their growing capacity. The obtained cultured cells were tested for the chondrocyte phenotype by immunostaining and rt-PCR and the presence of TLR4 was tested by the same methods. Results: The cells were isolated and seeded at different concentrations. The ideal concentration was obtained for optimal culture conditions. The cells were confirmed to have the chondrocyte phenotype and TLR4 was confirmed to be present in the cultured cells. Conclusion: This study confirms the presence of both mRNA and TLR4 protein in intervertebral disc chondrocytes. This paves the way for elucidating of the roles of this receptor in the inflammatory processes of disc hernia (AU)