Leukocyte Reduction Filters: an alternative source of Peripheral Blood Mononuclear Cells / Filtros de leucodepleción: una alternativa para la obtención de células mononucleares de sangre periférica

ABSTRACT

The use of human Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) for research purposes is widely extended. Typically, PBMC are separated from blood donations after volume reduction (buffy coat) and a subsequent density gradient centrifugation. However, policies on blood donation and processing for transfusion medicine have introduced the use of Leukocyte Reduction Filters (LRF). Blood Transfusion Services still process blood samples and produce buffy coats, but only a few units and specifically to obtain random platelets. Therefore, it is important to find alternative sources of PBMC. We have tested the possibility to use the cells retained by the LRF as an alternative source, with special interest on monocytes, because of their potential use as dendritic cell (DC) precursors for immunotherapy. Cells from filters were recovered at high numbers (about 5x108 PBMC) and viability (> 95%), and the phenotypic and functional experiments confirmed that they were similar to those cells obtained from buffy coats. Monocytes were differentiated in vitro to DC, showing no differences from those obtained from the buffy coats. The results have shown that elution of PBMC from LRF is a valid alternative source to obtain all blood cell types, including monocytes to generate functional DC (AU)

RESUMEN

Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC, Peripheral Blood Mononuclear Cells) son de uso común en los laboratorios de investigación. En general, las PBMC se obtienen a partir de donaciones de sangre - de las que se obtienen los «buffy coats» (BC)– y tras un proceso de centrifugación en gradiente de densidad. Sin embargo, en los últimos años se ha introducido el uso de los filtros de leucodepleción en el procesamiento de la sangre destinada a la medicina transfusional. Los Bancos de Sangre aún procesan y producen BC, en general para obtener «pools» plaquetarios, aunque la tendencia es a su desaparición. Por ello, es importante definir fuentes alternativas de las que obtener los PBMC. Una posibilidad, que hemos querido comprobar, es la utilización de las células que quedan retenidas en los filtros, en especial de monocitos, debido a su potencial uso como precursores de células dendríticas para inmunoterapia. Los resultados que hemos obtenido muestran que las células pueden ser eluidas de los filtros en un elevado número (del orden de 5x108 PBMC) y viabilidad (>95%). Además, el perfil fenotípico y funcional es similar al obtenido al analizar células generadas a partir del clásico BC. Los monocitos se diferenciaron in vitro a células dendríticas, de forma similar a los monocitos obtenidos a partir de BC. En resumen, la elución de las células retenidas en los filtros de leucodepleción es una alternativa válida a los clásicos BC para obtener todos los tipos celulares presentes en sangre periférica, incluyendo monocitos para su diferenciación en células dendríticas (AU)