Expresión del gen esp (enterococcus surface protein) de enterococcus faecalis en un modelo in vitro de dientes extraídos / Gene expression esp (enterococcus surface protein) of enterococcus faecalis in an in vitro model of extracted teeth

RESUMEN

Objetivo: Determinar la presencia y expresión del gen esp en cepas clínicas de Enterococcus faecalis a partir de un modelo in vitro de dientes extraídos. Métodos: Se diseñó un sistema in vitro para evaluar la formación del biofilm mediante microscopía de fluorescencia y la expresión del gen esp. El sistema estuvo constituido por un diente humano previamente extraído, cortado y preparado que proporcionó, mediante su conducto radicular, una superficie adecuada para la formación del biofilm por parte de E. faecalis. El sistema dispuso de una cámara anaerobia que permitió el crecimiento de la bacteria en el caldo de cultivo y evitó su contaminación con otros microorganismos. Esta cámara estuvo constituida por un tubo de micro centrifuga estéril, cortado y unido por el extremo inferior al extremo apical del diente seccionado. Resultados: Los resultados que se obtuvieron tanto por microscopia de fluorescencia como por RT-PCR permitieron cuantificar el nivel de expresión del gen esp en las bacterias durante su crecimiento y formando el biofilm en la superficie de los conductos radiculares. Todas las cepas evaluadas presentan el gen esp. Sin embargo, el biofilm de la cepa CC02 expresó el gen esp cuatro veces más en comparación al gen esp de la cepa de referencia. Conclusión: La expresión del gen esp podría estar asociada con la formación de biofilm en E. faecalis y la adherencia a superficies abióticas. Podría convertirse en una diana terapéutica prometedora en los programas de control de infecciones persistentes por Enterococcus spp. asociados a la presencia de biofilm (AU)

ABSTRACT

Objective: To determine the presence and expression of Enterococcus faecalis Esp gene in several strains from an in vitro model on extracted teeth. Methods: An in vitro system was designed to evaluate the biofilm formation through fluorescence microscopy and gene expression that could be associated to biofilm formation. The system consisted of a previously extracted human tooth that was cut and prepared to provide by means of its root canal, an adequate surface for biofilm formation on behalf of Enterococcus faecalis. The system disposed an anaerobe chamber that allowed the growth of bacteria in broth culture and avoided contamination with other microorganisms. This chamber consisted of a sterile micro centrifuge tube, which was cut and united by its inferior end to the apical end of the sectioned tooth. Results: The results obtained with fluorescence microscopy and RT-PCR allowed the quantification of the Esp gene levels of expression in bacteria growing and forming biofilm in root canal surfaces. Conclusion: The expression of Esp gene is associated with biofilm formation in E. faecalis and in the adherence to abiotic surfaces. It could be a promising therapeutic target in control programs for the eradication of persistent infections associated with the presence of E faecalis in biofilm (AU)