Clasificación y grado de necrosis en colgajo cutáneo aleatorio en ratas tras tratamiento con células madre precondicionadas con hipoxia y retardo del colgajo / Classification and score of necrosis in random skin flap in rats after treatment with transplantation of hypoxia preconditioned adipose-derived stem cells and flap delay

RESUMEN

Introducción y Objetivo: Realizar una clasificación de necrosis en colgajos cutáneos aleatorios (predispuesto a necrosis) según los hallazgos macroscópicos e histopatológicos, con o sin tratamiento para aumentar la supervivencia del colgajo, podría ser útil para analizar de forma global el colgajo y evaluar distintas modalidades para disminuir la necrosis. Nuestro objetivo es evaluar si existe más de un patrón de necrosis cutánea del colgajo cutáneo aleatorio al séptimo día de postoperatorio realizando una clasificación de necrosis y comparar la efectividad de los métodos de retardo del colgajo y células madres derivadas de tejido adiposo (ASCs) con y sin precondicionamiento para aumentar la supervivencia del colgajo. Material y Método: Utilizamos 40 ratas macho adultas sometidas a colgajo cutáneo aleatorio en el área dorsal de 2 x 8 cm agrupadas en control, RTC (retardo del colgajo), ASCs y ASCs-H (células madre derivadas de tejido adiposo precondicionadas con hipoxia). Realizamos cálculo del área, puntuación de necrosis y estudio histológico de los colgajos al séptimo día con hematoxilina-eosina, inmunohistoquímica con VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) y cuantificación del colágeno tipo I y III. Resultados: Según la clasificación, el tipo 0 fue considerado como piel normal; tipo 0+ con cambio adaptativo reversible; tipo 1 necrosis menor con inflamación superficial; tipo 2 necrosis menor con inflamación profunda; y finalmente el tipo 3 necrosis en su grado máximo. La piel sana mantiene la coloración y textura elástica y blanda. A medida que progresa la necrosis cambia hacia un tono más oscuro, y la textura y consistencia van aumentando hasta tornarse acartonada y delgada. En los tipos 0+ y 1 observamos focos de reepitelización temprana al séptimo día, mientras que en estadios más avanzados la necrosis fue completa. El grupo de RTC presenta una menor puntuación y por lo tanto necrosis de menor grado respecto al resto de los grupos tratados. Por otra parte, el porcentaje global de necrosis fue menor en los grupos tratados con ASCs y ASCs-H respecto al grupo control (p ≤ 0.05). Conclusiones: La clasificación y puntuación de necrosis parece ser un método adecuado para comprender la evolución de la necrosis del colgajo cutáneo aleatorio y como herramienta para investigación. La necrosis de bajo grado permitiría un afrontamiento conservador y expectante respecto a la de mayor grado. El grupo RTC presentó un puntuación menor al séptimo día con mayor capacidad de reepitelización, mientras que los tratamientos con ASCs y ASCs-H lograron una menor área de necrosis de forma global al séptimo día

ABSTRACT

Background and Objective: Perform a characterization and classification of necrosis in random skin flaps (predisposed to necrosis) according to the macroscopic and histopathological findings, with or without treatment to increase the survival of the flap, it could be useful to analyze in a global way the flap and evaluate different modalities for decrease necrosis. Our aim is to evaluate if there is more than one skin cutaneous necrosis pattern of the random cutaneous flap on the seventh postoperative day, performing a necrosis classification and to compare the effectiveness of the flap delay and adipose tissue derived stem cells (ASCs) with and without preconditioning methods to increase the survival of the flap. Methods: Forty adult male rats subjected to random skin flap in the dorsal area of 2 x 8 cm grouped into control group, RTC (flap delay), ASCs (adipose-derived stem cells) and ASCs-H (hypoxic preconditioning of adipose-derived stem cells), were used. Area calculation, necrosis score and histological study of flaps on the seventh day with hematoxylin-eosin, immunohistochemistry with VEGF (vascular endothelial growth factor) and quantification of type I and III collagen were performed. Results: According to the classification of necrosis, type 0 was considered normal skin; type 0+ with reversible adaptive change; type 1 minor necrosis with superficial inflammation; type 2 minor necrosis with deep inflammation; and finally type 3 necrosis in its maximum degree. Healthy skin maintains coloring, elastic and soft texture. As necrosis progresses shifts towards a darker tone, texture and consistency increases until it becomes stiff and thin. In types 0+ and 1, foci of early reepithelialization was observed on the seventh day, while more advanced in the classification stages, necrosis is complete. The group of RTC presents a lower score and therefore lesser degree of necrosis with respect to the rest of the treated groups. Moreover the overall percentage of necrosis was lower in the groups treated with ASCs and ASCs-H in the control group (p ≤ 0.05). Conclusions: The classification and the score of necrosis seems to be a suitable method for understanding the evolution of skin flap necrosis and as a tool for research. Low-grade necrosis allows conservative and expectant confrontation with respect to higher grades. The RTC group presented a lower necrosis score on the seventh day with greater reepithelialization capacity, whereas treatment with ASCs and ASCs-H achieved a lower area of necrosis overall on the seventh day