Efeito da desepitelizaçäo na síntese de glicosaminoglicanos em córneas humanas mantidas em cultura / Effect of epithelial debridement on glycosaminoglycan synthesis by human corneal explants

RESUMO

Os objetivos do presente trabalho foram identificar os glicosaminoglicanos presentes na córnea humana, analisar a síntese dos glicosaminoglicanos em córneas humanas mantidas em cultura e avaliar o efeito da remoção do epitélio sobre a síntese destes compostos em córneas mantidas em cultura. Para tal, foram utilizadas córneas do Banco de Olhos do Hospital São Paulo que foram rejeitadas para transplantes. Os glicosaminoglicanos foram extraídos após proteólise dos tecidos com papaína e identificados por uma combinação de eletroforese em gel de agarose e degradação enzimática com mucopolisacaridases bacterianas específicas. Os principais glicosaminoglicanos extraídos da córnea humana foram o queratam sulfato e o dermatam sulfato, cada um correspondendo a cerca de 50 por cento do total. Para analisar os glicosaminoglicanos sintetizados em cultura, as córneas foram mantidas em meio Fl2, por 24 horas, a 37§C, em atmosfera contendo 2,5 por cento de gás carbônico. Ao meio de cultura foi adicionado 35S-sulfato, de forma que os glicosaminoglicanos sintetizados em 24 horas fossem, então, metabolicamente marcados. OS 35S-glicosaminoglicanos foram isolados da mesma forma descrita acima, exceto que foram vistos por radioautograma e quantificados em um contador de cintilações. O principal glicosaminoglicano sintetizado foi o dermatam sulfato (72 por cento do total), seguido pelo queratam sulfato (l7 por cento). Além desses dois glicosaminoglicanos, apareceu heparam sulfato (11 por cento), que não foi identificado como constituinte da córnea por estar em pequena quantidade (abaixo do limite de detecção do método). Esses resultados sugerem que o dermatam sulfato e o heparam sulfato apresentem uma taxa de turnover maior que a do queratam sulfato. A desepitelização corneana levou a uma alteração no padrão de síntese de glicosaminoglicanos, com uma maior marcação de dermatam sulfato e uma diminuição no heparam sulfato, em relação ao controle. Este efeito foi proporcional à área da córnea desepitelizada. Para verificar quais Os glicosaminoglicanos sintetizados em cada camada celular, o epitélio, o endotélio e o estroma foram separados e os glicosaminoglicanos sintetizados em cada uma delas foram identificados. Verificou-se que os ceratócitos foram os principais responsáveis pela síntese de dermatam sulfato e queratam sulfato, enquanto as células epiteliais produziram basicamente heparam sulfato. Esta observação explica a ...(au)