Preservación de hepatocitos en soluciones de UW y HTK con adición de fluorocarbonos / Hepatocyte preservation in UW and htk solutions with hydrocarbon addiction

RESUMEN

Antecedentes una de las limitantes del trasplante de hepatocitos es la corta supervivencia de los hepatocitos aislados. Objetivo: este estudio evalúa la utilidad de los fluorocarbonos adicionados a la solución de Universidad de Wisconsin (UW) y a la solución de Histidina-Triptófano-Ketoglutarato (HTK) en la preservación de hepatocitos. Método: se aislaron hepatocitos de ratas Fisher con la técnica de digestión por colagenasa, con una viabilidad mayor a 85 por ciento de acuerdo a la técnica de exclusión de azul de tripano. Se suspendieron 1.2 x 10 8 un volumen total de 20 mL de HTK (HTK), HTK con perfluoro-n-octano (HTK+ PFC), UW (UW), UW con perfluoro-n-octano(UW-PFC) y medio E. Williams como grupo control (GC). Las cinco muestras de cada grupo se almacenaron a 4 ºC durante 40 horas. Se realizaron determinaciones de viabilidad celular, formación de vesículas de membrana grandes y LDH extracelular a las 0, 12, 24 y 36 horas. Resultados: la viabilidad de los hepatocitos fue menor en la solución UW comparada con el resto de los grupos de estudio a las 12 horas y 24 horas (p < 0.05 para ambas), pero a las 36 horas no existió diferencia entre los grupos. La presencia de vesículas de membranas grandes fue menor en la solución de UW + PFC que en el resto de las soluciones de estudio, pero esta diferencia sólo alcanzó significancia estadística al comparar soluciones con o sin fluorocarbonos en ninguno de los tiempos de estudio. Conclusiones: la adición de fluorocarbonos en la solución de UW disminuye la formación de vesículas de membrana grandes (daño irreversible), mejorando la viabilidad de los hepatocitos. Sin embargo, la adición de fluorocarbonos a cada solución no incrementa el tiempo de preservación con una viabilidad superior al 50 por ciento más allá de 24 horas.