Isolamento e caracterizaçäo de genes II da superfamília gp85/sialidases expressos nas formas amastigotas de Trypanosoma cruzi / Isolation and characterization of group II genes from 85/sialidase superfamily expresses at amastigote stage of Trypanosoma cruzi

RESUMO

O Trypanosoma cruzi é o protozoário flagelado causador da Doença de Chagas ou tripanosomíase americana, que atinge milhoes de pessoas na América Latina. Esse microorganismo apresenta um ciclo de vida complexo e o estágio evolutivo amastigota é a forma de replicaçao do parasita encontrada no hospedeiro mamífero. Os amastigotas se caracterizam pela presença cie um flagelo curto e forma oval, e sao fundamentais para a persistência da infecçao pelo T. cruzi no hospedeiro vertebrado. Pouco se sabe sobre a constituiçao bioquímica das formas amastigotas, tendo sido poucos os genes isolados e caracterizados até o presente. No entanto sabe-se que a superfamília gênica das gp85/sialidases, que codificam para antígenos de superfície com papel importante na adesao e invasao do parasita, possui membros que sao expressos também nas formas amastigotas do T. cruzi. No presente trabalho é feita a caracterizaçao de cDNAs de formas amastigotas intracelulares da cepa Sylvio (clone X10/4) do Trypanosoma cruzi. Esses cDNAs foram denominados TcSx e foram isolados com sonda de um gene que codifica uma glicoproteína de superfície de 85 kilodáltons das formas tripomastigotas do parasita, descrito anteriormente na literatura. Os dados mostram que o gene TcSx23 e seus similares (TcSx2, TcSx7, TcSxl8, TcSx19 e TcSx32) constituem novos genes que podem ser inseridos na família 11 das gp85/sialidases. A análise das seqüências de nucleotídeos e de aminoácidos revela diferenças significativas entre TcSx23 e as proteínas SA85 -1, ASP-1 e ASP-2 que sao expressas nas formas amastigotas. O gene TcSx23 é transcrito e traduzido nas formas tripomastigotas e amastigotas gerando peptídeos de -80 e 50 kDa e anticorpos anti-TcSx23 mostram que a localizaçao celular dos epítopos reconhecidos por esses anticorpos difere nas duas formas do parasita, sendo de superfície em tripomastigotas e intracelular nos amastigotas. Alguns motivos peptídicos presentes em membros da família 11 das gp85/sialidases e que desempenham papel de adesinas, por exemplo Tc85 e gp82, estao ausentes em TcSx23. É possível que o polipeptídeo TcSx23 e...(au)