Interação entre o receptor AT1 da angiotensina II e o mas protoc-oncogene / Interation between the protooncogene mas product and the angiotensin II AT1 receptor

RESUMO

1. Em vista de evidências de que o mas proto-oncogene pode modular as respostas do receptor AT1 à angiotensina II (AngII), o objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de técnicas de biologia molecular e ensaios farmacológicos, a possível interação entre os receptores AT1 e o mas. Para isso foram construídos mutantes do AT1 com alterações de resíduos com possível participação num hipotético heterodímero (a) os resíduos Cys18 e Lys20 do domínio N-terminal, sugeridos como estabilizadores de um sítio regulador na região extracelular do receptor AT1 (Santos e cols, 2004) são portanto possíveis mediadores do processo de dimerização. (b) a Lys102, cuja substituição por alanina promoveu a formação de um dímero funcional com o mutante K199A (Monnot e cols. 1996). 2. O receptor AT1 selvagem e os seus mutantes K102A, C18F/K20A, bem como o mas proto-oncogene, foram expressos e co-expressos de forma correta como planejado para o desenvolvimento deste trabalho. 3. Mutações simultâneas (C18F/K20A), mas não isoladas, dos resíduos Cys18 e Lys20 comprometem a ligação do receptor AT1 à AngII. 4. Células CHO expressando o receptor mas ou os mutantes C18F/K20A (da região N-terminal) e K102A (da terceira hélice transmembranar) do receptor AT1, não apresentam ligação e resposta funcional significativa quando estimuladas com AngII. 5. A co-expressão dos receptores AT1 selvagem+mas em boa afinidade pelo agonista AngII porém em deficiência na ativação funcional, em comparação com AT1 selvagem. 6. Células CHO co-expressando receptores K102A+mas não apresentaram ligação nem ativação funcional quando estimuladas pela AngII. 7. A co-expressão dos receptores C18F/K20A+mas promove ligação e ativação funcional próximas às observadas para o receptor AT1 selvagem em resposta ao agonista AngII. 8. A região N-terminal do receptor AT1 de AngII é um importante ponto de interação com o agonista e com outros receptores, possivelmente através da formação de heterodímeros