Heparinóides do crustáceo Goniopsis cruentata: estrutura, atividades farmacológicas e interação com células endoteliais / Heparinoids the crab Goniopsis cruentas: structura, pharmacological activities and interation with endothelial cells

RESUMO

Heparinóides A e B foram isolados dos tecidos do caranguejo Goniopsis cruentata após proteólise, cromatografia de troca iônica, fracionamento com acetona caracterizados por eletroforeses (géis de agarose e pofiacrilamida), análises uimicas, enzimáticas e de Ressonância Nuclear Magnética. Essas análises 10straram que os heparinóides A e B (12,8-13,6 kDa) apresentam pequenas iferenças estruturais o que sugere que eles tenham estruturas primárias emelhantes. Análises enzimáticas e de RNM revelaram que os heparinóides do aranguejo (Hepn) estão enriquecidos em dissacarídeos dissulfatados contendo lucosaminas N-sulfatadas ligadas a unidades de ácido D-glucurônico 2-0ulfatado. Além disso, Hepn mostraram baixa atividade anticoagulante in vitro pelos létodos de aPTI, PT, HEPTES TI. Por outro lado, apresentam alta atividade ntitrombótica in vivo e menor efeito antihemostático quando comparados com a eparina de mamíferos. O efeito dos Hepn nas células endoteliais de aorta de coelho (RAEC) foi também investigado. Hepn estimularam a síntese de heparam ulfato antitrombótico de forma semelhante a heparina de mamíferos (Hep). Ensaios e competição entre Hepn e Hep biotinilada mostraram que hepn competem arcialmente pelos mesmos sítios de ligação da heparina de mamíferos em RAEC. epn foram biotinilados e a ligação às RAEC foi analisada usando técnicas ítoquímicas e microscopia confocaf. A ligação dos heparinóides A e 8 biotinilados s RAEC mostrou ser dose dependente com Ko de 87,5 nM e 119,4 nM para ligação s células e ligação de maior afinidade à matriz extracelular com Ko de 28 nM e 7,5 nM, respectivamente. Por outro lado, esses compostos foram detectados apenas na matriz extracelular (MEC) das células endoteliais e colocalizaram )m a fibronectina. Esses resultados mostram que embora os heparinóides presentem diferenças estruturais quando comparados com heparinas de lamiferos, mantiveram atividade antitrombótica e capacidade de interagir com a IEC das células endoteliais. Além disso, uma vez que hepn podem deslocar a Jação de Mhep, pode-se concluir que Hepn e Hep interagem com os mesmos sítios ligação na MEC de RAEC quando estimulam a síntese de heparam sulfato antitrombótico. Essa é a primeira descrição de um composto rico em resíduos de ácido glucurônico 2-O-sulfato que é potente antitrombótico embora com baixa atividade anticoagulante in vitro.