Padronização de método molecular para diagnóstico de tuberculose em decorrência de infecção causada pelo Mycobacterium bovis BCG / Standardization of molecular method for diagnosis of tuberculosis in result of infection caused by Mycobacterium bovis BCG

RESUMO

A única vacina disponível contra a Tuberculose é a BCG, produzida com o Bacilo de Calmette-Guérin a partir de cepas atenuadas de Mycobacterium bovis. Diversos autores têm demonstrado que sua eficiência pode variar entre 0% e 80%. Há várias razões para esse fato diferenças genotípicas nas cepas estudadas e utilizadas para vacina, utilização de diferentes doses da vacina e desenvolvimento de tuberculose em indivíduos vacinados e naqueles que fizeram uso terapêutico da vacina para tratamento de carcinoma de bexiga. Além disso, grande número de casos de infecção disseminada tem sido relatado em indivíduos imunocomprometidos, infectados ou não pelo HIV. Indivíduos que desenvolvem tuberculose em decorrência da vacinação devem ter diagnóstico diferencial em relação à infecção causada por Mycbacterium tuberculosis. Nosso objetivo foi padronizar um método molecular rápido para diagnosticar a infecção causada por M. bovis BCG decorrente da vacinação. A amplificação do DNA extraído pelo método de hidrólise alcalina foi feita por PCR multiplex com iniciadores específicos para região RD1 presente em cepas do complexo M. tuberculosis e deletada em cepas de M. bovis BCG. A separação dos produtos de PCR foi feita por eletroforese em gel de poliacrilamida a 5% e visualização em UV após coloração com brometo de etídio. Uma banda de 200pb indicou amplificação da região flanqueadora à RD1, evidenciando presença de M. bovis BCG, e uma banda de 150pb indicou amplificação da região RD1, presente no complexo M. tuberculosis. A disponibilização de uma técnica rápida para o diagnóstico diferencial entre a infecção decorrente da vacina BCG ou por M. tuberculosis é de grande interesse para a conduta clínica, uma vez que a baciloscopia negativa não pode excluir a infecção em presença de sintomatologia, e que a cultura, por suas características, possibilitará um resultado conclusivo após pelo menos 40 dias. Dessa forma, este teste está disponibilizado no LAQUAS...