Effects of tissue handling and processing steps on PCR for detection of Mycobacterium tuberculosis in formalin-fixed paraffin-embedded samples / Efeitos das etapas de tratamento e processamento do tecido na PCR para detecção de Mycobacterium tuberculosis em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina
Rev. Inst. Med. Trop. Säo Paulo
; 50(6): 321-326, Nov.-Dec. 2008. ilus, graf, tab
Artigo
em Inglês
| LILACS
| ID: lil-499793
Biblioteca responsável:
BR1.1
ABSTRACT
Development and standardization of reliable methods for detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples is an important goal in laboratories throughout the world. In this work, lung and spleen fragments from a patient who died with the diagnosis of miliary tuberculosis were used to evaluate the influence of the type of fixative as well as the fixation and paraffin inclusion protocols on PCR performance in paraffin embedded specimens. Tissue fragments were fixed for four h to 48 h, using either 10 percent non-buffered or 10 percent buffered formalin, and embedded in pure paraffin or paraffin mixed with bee wax. Specimens were submitted to PCR for amplification of the human beta-actin gene and separately for amplification of the insertion sequence IS6110, specific from the M. tuberculosis complex. Amplification of the beta-actin gene was positive in all samples. No amplicons were generated by PCR-IS6110 when lung tissue fragments were fixed using 10 percent non-buffered formalin and were embedded in paraffin containing bee wax. In conclusion, combined inhibitory factors interfere in the detection of M. tuberculosis in stored material. It is important to control these inhibitory factors in order to implement molecular diagnosis in pathology laboratories.
RESUMO
O desenvolvimento e a padronização de métodos confiáveis para a detecção de Mycobacterium tuberculosis em amostras clínicas é um objetivo importante nos laboratórios de todo o mundo. Neste trabalho, fragmentos de pulmão e baço de paciente que morreu com o diagnóstico de tuberculose miliar foram usados para avaliar a influência do tipo de fixador e dos protocolos de fixação e inclusão em parafina na performance da PCR. Fragmentos de tecido foram fixados por quatro h a 48 h, usando formalina não tamponada a 10 por cento ou formalina tamponada a 10 por cento e incluídos em parafina pura ou misturada a cera de abelha. As amostras foram submetidas a PCR para amplificação do gene da beta-actina humana e, separadamente, para amplificação da sequência de inserção IS6110, específica do complexo M. tuberculosis. O resultado da amplificação do gene da beta-actina foi positivo em todas as amostras. Não foram gerados amplicons na PCR-IS6110 em amostras de tecido pulmonar fixadas usando formalina não tamponada a 10 por cento e incluídas em parafina com cera de abelha. Em conclusão, fatores inibitórios combinados interferiram na detecção de M. tuberculosis em material de arquivo. É importante controlar estes fatores inibitórios para poder implementar o diagnóstico molecular em laboratórios de patologia.
Texto completo:
Disponível
Coleções:
Bases de dados internacionais
Contexto em Saúde:
ODS3 - Saúde e Bem-Estar
/
Doenças Negligenciadas
Problema de saúde:
Meta 3.3: Acabar com as doenças tropicais negligenciadas e combater as doenças transmissíveis
/
Doenças Negligenciadas
/
Tuberculose
Base de dados:
LILACS
Assunto principal:
Baço
/
Tuberculose
/
Reação em Cadeia da Polimerase
/
Pulmão
/
Mycobacterium tuberculosis
Tipo de estudo:
Estudo diagnóstico
/
Guia de prática clínica
Limite:
Animais
/
Humanos
Idioma:
Inglês
Revista:
Rev. Inst. Med. Trop. Säo Paulo
Assunto da revista:
Medicina Tropical
Ano de publicação:
2008
Tipo de documento:
Artigo
/
Documento de projeto
País de afiliação:
Brasil
Instituição/País de afiliação:
Universidade Federal de São Paulo/BR