TcYchF - uma nova ATPase associada à maquinaria de tradução do protozoário Trypanosoma cruzi / TcYchF - a new ATPase associated with the machinery of translation of the protozoa Trypanosoma cruzi

RESUMO

Muitos processos celulares, incluindo síntese de proteínas, tráfego vesicular, transporte intracelular, sinalização e diferenciação celular, envolvem um importante grupo de proteínas da superfamília das P-loop GTPases. Algumas dessas GTPases, embora ubíquas, não tem função conhecida. Dentro desse último grupo está a subfamília de GTPases conhecida como YchF. A subfamília das GTPases YchF pertence a família das Obg GTPases, é ubíqua em bactérias e eucariotos e apresenta uma notável conservação de seqüência. Nós caracterizamos o ortólogo da YchF em Trypanosoma cruzi, TcYchF, potencialmente associada com a maquinaria de tradução. TcYchF é uma proteína de 44,3 kDa e possui grande percentagem de similaridade com seus ortólogos eucarióticos (45 a 86%), bem como com os ortólogos bacterianos (38 a 43%). Algumas das mais importantes características do domínio G, responsável pelo reconhecimento e hidrólise do GTP e interação com outras proteínas, são cnservadas em TcYchF. Apesar da sua classificação como uma GTPase, verificamos que a TcYchF hidrolisa preferencialmente ATP em relação à GTP. Embora a função das proteínas da subfamília YchF seja desconhecida, outros membros da família Obg, a qual YchF pertence, estão involvidos na biogênese das subunidades ribossomais. Algumas delas foram encontradas em associação com ribossomos, sugerindo que possam ser fatores envolvidos no processo de tradução. De fato, a análise por western blot do fracionamento de polissomos por gradiente de sacarose mostrou que TcYchF estava associada tanto com subunidades ribossomais quanto com polissomos, sugerindo o seu envolvimento com a maquinaria de tradução de T. cruzi. A análise proteômica desses imunocomplexos mostra a associação da TcYchF não só com proteínas ribossomais, mas com diversos fatores de tradução e com a proteína RPN7 da subunidade regulatória do proteassomo. Esses resultados foram corroborados pela análise de imunoprecipitação, que mostrou que TcYchF...