Isolamento, viabilidade em baixas temperaturas e cultivo axênico de cistos de Giardia duodenalis em pacientes da região noroeste do Paraná / Isolation, viability in low temperatures and axenic culture of cysts of Giardia duodenalis of patients of the region the northwest of the Paraná

RESUMO

A giardiose é um grande problema de saúde pública. O objetivo deste trabalho foi isolar cistos de Giardia duodenalis a partir de fezes humanas, verificar a viabilidade dos cistos em função do tempo de estocagem embaixa temperatura e promover o desencistamento para obtenção de trofozoítos para cultura axênica. Os cistosforam isolados e purificados, de acordo com a técnica de Roberts-Thompson et al. As amostras foram divididas em duas partes, uma das partes foi utilizada para verificar a viabilidade dos cistos estocados à baixa temperatura, e a outra foi submetida à axenização, desencistamento e cultivo. Para o desencistamento,utilizaram-se as técnicas de Bingham-Meyer e de Feely et al. A viabilidade dos cistos em função do tempo deestocagem em baixa temperatura decresceu com o tempo de armazenamento. Não foram observadas mudanças estatisticamente significativas na viabilidade das amostras isoladas, após 24, 48, 72 horas e nos dois meses seguintes. Do terceiro ao quinto mês, houve decréscimo na porcentagem de cistos viáveis e, nonono mês, perda total da viabilidade. Não foi observado crescimento in vitro das amostras axenizadas. Este estudo poderá contribuir para expandir os conhecimentos deste parasito e, posteriormente, auxiliar na detecção de diferenças entre cepas.

ABSTRACT

Giardiosis is a serious public health problem. The objective of this work was to isolate cysts of Giardia duodenalis taken from human stools, in order to verify the viability of the cysts in function of the time ofstockage in low temperature, as well as to obtain trophozoites for axenic culture. The isolated cysts were isolated and purified using the technique of Roberts-Thompson et al. The samples were divided in two groups; one was used to verify the viability of the stored cysts in low temperature, while the other was submitted toaxenization, excystation and culture. For excystation, two techniques were used. The viability of the cysts’stockage in low temperature decreased with storage time. Statistically significant changes in the viability of theisolated samples were not observed after 24, 48, 72 hours, and in the following two months. From the third tothe fifth month, there was a decrease in the percentage of viable cysts, and the ninth month total loss of viability occurred. Growth in vitro of the axenic samples was not observed. This study will be able to contribute to expanding the knowledge of this parasite and, later aid in the detection of differences between types.

RESUMEN

La giardiosis es un gran problema de salud pública. El objetivo de este trabajo fue aislar quistes de Giardia duodenalis a partir de los excrementos de seres humanos, verificar la viabilidad de los quistes en función deltiempo de almacenamiento en baja temperatura y promover el desenquistamiento para la obtención detrofozoitos para la cultura axénica. Los quistes fueron aislados y purificados, de acuerdo con la técnica deRoberts-Thompson et. al. Las muestras fueron divididas en dos partes, una de las partes fue utilizada paraverificar la viabilidad de los quistes mantenidos en bajas temperaturas, y otra fue sometida al axenización, al desenquistamiento y cultivo. Para el desenquistamiento, se utilizaron las técnicas de Bingham-Meyer y de Feelyet. al. La viabilidad de los quistes en función del tiempo de mantenimiento en baja temperatura disminuyó conel tiempo de almacenamiento. No fueron observados cambios estadísticamente significativos en la viabilidad delas muestras aisladas, después de 24, 48, 72 horas y en los dos meses siguientes. Del tercero al quinto mes, hubo una disminución del porcentaje de quistes viables y, en el noveno mes, ocurrió pérdida total de laviabilidad. No fue observado crecimiento in vitro de las muestras axenizadas. Este estudio podrá contribuir para ampliar los conocimientos de este parásito y, más adelante auxiliar en la detección de diferencias entre cepas.