Histological Changes of the Ovary of Adult Mice Exposed Prenatally to Flunitrazepam / Cambios Histológicos del Ovario de Ratones Adultos Expuestos Prenatalmente a Flunitrazepam

ABSTRACT

Flunitrazepam (FNZ) is a minor tranquillizer involving allosteric modulation of the GABA receptor complex. It is a ligand of the peripheral benzodiazepine receptor (PBR) that participates in cholesterol transport in steroidogenic organs. The purpose was to investigate whether a single oral dose of FNZ of 2.5 mg/kg of body weight (bw), administered on day 6 of gestation, alters the structure of the adult ovary of mouse offsprings at 2 months of age. The mouse offsprings of the in utero FNZ-treated group and those of the control group (C) were killed. Ovaries were obtained in early estrous, fixed in Zenker solution, and processed by routine histological techniques. Serial sections were observed under light microscopy to determine the characteristics and quantity of follicles in different stages of development and of the corpus luteum. The ovarian tissues from the FNZ group depicted a great staining affinity, enlarged nuclei with abundant heterochromatin clumps. The quantity of primordial, primary and secondary normal follicles in the FNZ group decreased significantly (p< 0.01). The number of primary atretic follicles increased (p<0.01) and the secondary ones remained constant as in group C. Histological changes and statistical data suggest that FNZ produces long-lasting epigenetic or genotoxic effects in follicular and corpus luteum cells of the ovary of prenatally FNZ-treated mice.

RESUMEN

El flunitrazepam (FNZ) es un tranquilizante menor que actúa modulando el receptor GABA, es un ligando del receptor benzodiazepínico periférico (PBR), el cual participa en el transporte de colesterol en órganos esteroidogénicos. El objetivo de este trabajo fue investigar si una dosis oral de FNZ (2.5mg/kg de peso) administrada en el sexto día de gestación, altera la estructura del ovario en crías de ratón adultos. Las crías del grupo FNZ tratadas in utero con la benzodiazepina, así como el grupo control, fueron sacrificadas. Los ovarios se extrajeron en estro temprano, se fijaron en líquido de Zenker y procesaron con las técnicas habituales de histología. Los cortes seriados fueron analizados mediante microscopia óptica, los folículos fueron identificados y contados de acuerdo a los diferentes estadios del desarrollo, así como las células del cuerpo lúteo. El tejido ovárico en el grupo de FNZ presentó una gran afinidad tintórea, núcleos grandes y con abundantes cúmulos de heterocromatina. El número de folículos primordiales, primarios y secundarios en el grupo FNZ disminuyó (p<0.01). Contrario al número de folículos atrésicos que aumentaron (p<0.01), a excepción de los folículos atrésicos secundarios que no fueron diferentes a los controles. Las alteraciones histológicas y los datos estadísticos sugieren que el FNZ produce un efecto epigenético o genotóxico de largo plazo tanto en los folículos como en las células del cuerpo lúteo, de ratones tratados prenatalmente con el fármaco.