Capacidad de las células Hep-2, Hep-2000® Inmunofluorescencia y Hep-2000® Colorzyme, en la determinación de ANAS y SSA/Ro en la evaluación inicial en pacientes con Enfermedad del Tejido Conectivo no Diferenciada / Capacity of cells Hep-2, Hep-2000® Immunofluorescence and Hep-2000® Colorzyme, in the determination of ANAS and SSA/Ro, in the initial evaluation of patients with Undifferentiated Connective Tissue Disease

RESUMEN

Introducción: la presencia de anticuerpos antinucleares (ANAS) ha sido tradicionalmente asociada a enfermedades del tejido conectivo; su determinación se constituye en una importante herramienta en el diagnóstico de estas entidades. Para su evaluación, se han utilizado métodos de inmunofluoresencia (IFI) que emplean como sustrato las células Hep-2. En los últimos años, se han generado nuevos sustratos celulares a partir de la manipulación genética de las iniciales denominados Hep-2000®. Estas permiten la identificación del antígeno Ro de manera simultánea. La incorporación reciente de métodos enzimáticos para la lectura de la prueba, ha generado una nueva técnica llamada Colorzyme que permite el uso del microscopio de luz, constituyéndose en una alternativa económica y funcional en comparación con la IFI convencional. Objetivo: el presente estudio pretende establecer la capacidad para detectar ANAS en los sustratos Hep-2 y Hep-2000® por las técnicas de IFI y Colorzyme, en un grupo de pacientes con Enfermedad del Tejido Conectivo no Diferenciada (ETCND). Adicionalmente comparó la detección del antígeno Ro en los sustratos Hep-2000® con los resultados obtenidos por la técnica de ENAS ELISA tradicional. Materiales y métodos: se analizaron 26 pacientes con ETCND a quienes se les determinó ANAS por las técnicas Hep-2 IFI; Hep-2000® IFI; Hep-2000 Colorzyme y ENAS por ELISA Screening (con especificidad para los autoantígenos Sm, RNP, SS-A/Ro, SS-B/La, Scl-70 y Jo-1). Resultados: los resultados encontrados por las técnicas revelan un mayor rendimiento diagnóstico (ANAS positivos) en las células Hep-2000® 23 (88%) por IFI y 21 (81%) Colorzyme, comparadas con 20 (76%) del sustrato Hep-2 IFI. Todos los patrones “clásicos” IFI estuvieron representados en la técnica de Hep-2 IFI; en la técnica de Hep-2000® IFI no se observó el patrón homogéneo, por Colorzyme no se observaron los patrones nucleolar ni el citoplasmático. En todas las técnicas la forma predominante de presentación fue el patrón moteado fino 50% Colorzyme, 42,9 % para Hep-2000® IFI y 34,6% para Hep-2 IFI. En general se obtuvieron buenas correlaciones en los resultados entre las técnicas Hep-2000® IFI y la enzimática (r=0,74 p<0,000) con una concordancia 0,71 (Cohen K, p<0,000), mas no así con Hep-2 que fue de 0,21 (p<0,03). Las correlaciones entre los patrones de IFI (r=0,6 p<0,000) y las diluciones (r=0,75 p<0,000) fueron mejores entre los sustratos Hep-2000®, comparadas con las células Hep-2 (r=0,5 p<0,003). Para establecer la capacidad de identificación del autoantígeno Ro de las técnicas Hep-2000®, se compararon los resultados obtenidos con los de la técnica específica de ELISA para SSA-Ro. Las células Hep-2000® mostraron una sensibilidad del 66% por IFI y del 33% Colorzyme. Conclusiones: la utilización de células Hep-2 sigue siendo una buena alternativa para la determinación de ANAS. Sin embargo, las células Hep- 2000® pueden considerarse un sustrato útil y confiable en nuestro medio, tanto por color como IFI. La técnica por color facilita su realización al abolir el uso de IFI, recurso tecnológico escaso en muchas instituciones. Los resultados negativos para Ro deben ser interpretados con cautela pacientes con ETCND, en algunos de estos casos es posible se requiera de la confirmación por otros métodos.

ABSTRACT

Introduction: The presence of antinuclear antibodies (ANAS) has been traditionally associated to conective tissue diseases. and their determination is an important tool in the diagnose of these entities. In the last years the Cells Hep-2 has been used .in the Inmunofluoresencia technique (IFI),. New cellular sustratos has been generated by genetic manipulation, denominated Hep-2000®. These allow the identification of the antigen Ro in the same procedure. The recent incorporation of enzymatic methods for the reading of the test, has generated a new technique called Colorzyme, This allows the use of the microscope of light that become the procedure in an economical and functional alternative in comparison with the conventional IFI. Objective: The present study pretend to establish the capacity of detection of ANAS in sustratos Hep-2 and Hep-2000® for IFI and Colorzyme, in a group of patients with No Differentiated Conective Tissue Disease (NDCTD). Additionally compares the detection of the antigen Ro in Hep-2000® cells and confront the results obtained by the ENAS-ELISA technique . Materials and methods: The presence of ANAS were analyzed in the serum of 26 patients with NDCTD by the techniques Hep-2 IFI; Hep-2000® IFI; Hep-2000 Colorzyme® and ENAS for ELISA Screening (with specificity for the auto antigens Sm, RNP, SS-A/Ro, SS-B/La, Scl-70 and Jo-1). Results: Hep-2000® demonstrated a better capacity in order to found ANAS 23 (88%) for IFI and 21 (81%) for Colorzyme, compared with 20 (76%) of Hep-2 IFI. All the patterns «classic¼ IFI was represented in the Hep-2 cells IFI; Hep-2000 IFI the homogeneous pattern was not observed. In Colozyme tecnique the nucleolar and citoplasmic patron was not observed. In all the techniques the predominant form of presentation was the speckle-fine pattern 50% Colorzyme, 42.9% for Hep-2000® IFI and 34.6% for Hep-2 IFI Good correlations were obtained in the results among the technique Hep-2000® IFI and the Colorzyme (r=0.74 p <0.000) but not in the Hep-2 IFI substrate 0.21 (p <0.03). The correlations among the patterns of IFI (r=0.6 p <0.000) and the dilutions (r=0.75 p <0.000) were better among the Hep-2000® substrates, compared with the Hep-2 cells (r=0.5 antigen by Hep-2000®, results were compared with those obtained by ELISA specific for SSA-Ro. The Hep-2000® cells showed a sensibility of 66% by IFI and 33% by Colorzyme.

Conclusions:

The use of Hep-2 cells are a good alternative for the determination of ANAS However, Hep-2000® cells can be considered an useful and reliable substrate in Colombia. The Colorzyme abolish the use of IFI microscope, -an expensive and sophisticated instrument-. However the negative results for Ro in this substrate do not discarded the presence of antigens in this group of patients.