Isolamento, identificação clássica e análise molecular de bactérias provenientes de coprólitos de sítios arqueológicos brasileiros / Isolation, identification classical and molecular analysis of bacteria from coprolites from archaeological sites in Brazil

RESUMO

A partir de amostras de coprólitos brasileiros datados entre 3490 mais ou menos 120 a 430 mais ou menos 70 anos, recuperados de escavações arqueológicas no Brasil, fomos capazes de isolar bactérias da família Bacillaceae. Objetivou-se com esse estudo testar e padronizar técnicas para detecção, identificação e caracterização molecular de microrganismos bacterianos nessas amostras. Os coprólitos foram inicialmente tratados com radiação ultravioleta, buscando eliminar contaminantes externos e posteriormente perfurados para retirada do material mais interno. Esse material foi cultivado em aerobiose em diferentes meios de cultura, originando o isolamento de bastonetes Gram positivos formadores de endósporos. Esses microrganismos foram submetidos a provas bioquímicas e fisiológicas, de sensibilidade a antimicrobianos, reação em cadeia da polimerase (PCR), clonagem e sequenciamento, buscando sua identificação e caracterização. Medidas para evitar a contaminação por microrganismos modernos foram tomadas, como a utilização de apenas controles negativos nas reações de PCR, duplicação dos experimentos, entre outras. Das 7 amostras de coprólitos utilizadas, apenas 5 originaram algum isolado, sendo estas datadas entre 3490 mais ou menos 120 a 430 mais ou menos 70 anos ou sem datação conhecida . O emprego de diferentes técnicas laboratoriais para identificação de microrganismos antigos ficou evidente. Essa diversificação aumenta as chances de identificação dos isolados, o que possibilitou concluir que se tratava de representantes da família Bacillaceae, do gênero Bacillus e correlatos.