Produçäo e propriedades da amilase de Trichoderma pseudokoningüi / Production and proprieties of amylases of Trichoderma pseudokoningüi

RESUMO

Trichoderma pseudokoningii. Rifai foi isolado como contaminante em experimentos realizados sob nitrogênio líquido. Apresentou atividade amilolítica superior a de outros fungos isolados do solo ou do ambiente. Verificou-se que exuste relaçäo direta entre o crescimento do fundo e a produçäo de amilase. A maior produçäo de amilase ocorreu quando meio mineral mínimo foi suplementado com amido a 2%, farelo de trigo a 1% e líquido resultante do processamento do milho (corn steep liquor) a 1%. A amilase foi parcialmente purificada (4,9 vêzes) através de precipitaçäo com sulfato de amônio e cromatografia em Sephacryl S-200. Apresentou somente uma banda no gel corado para atividade, mas o gel para proteínas mostrou várias bandas, indicando que a preparaçäo näo está totalmente pura. A análise cromatográfica dos produtos de hidrólise, mostrou unicamente a presença de glucose, confirmando que a amilase em estudo é uma glicoamilase. O pH ótimo de atividade foi determinado ser entre 4,0 a 5,0 com máximo em 4,2. A enzima é estável na faixa de pH de 4,0 a 6,0. A temperatura ótima encontrada foi 60ªC, retendo 90% de atividade por um periodo de duas horas de pré incubaçäo a esta temperatura a esta temperatura. Ensaios de especificidade mostraram atividade superior sobre amido de milho que de batata ou amido solúvel, e que a preparaçäo atuava com menor velocidade, mas significativamente sobre amido cru. Mostrou açäo sobre o pululano, e näo sobre o ciclo dextrina ou maltose, indicando, neste caso a ausência de atividade de transglicosilase. O Km para o amido foi da ordem de 2,7 g/l