Estudo da modulação do metabolismo lipídico de células dendríticas humanas na infecção por Toxoplasma gondii / Study of modulating lipid metabolism in human dendritic cells infected with Toxoplasma gondii

RESUMO

A toxoplasmose é uma doença de alta prevalência no mundo, causada pelo Toxoplasma gondii, um parasita intracelular obrigatório. O T. gondii possui mecanismos de modulação do metabolismo do seu hospedeiro que garantem sua sobrevivência e a instalação da infecção crônica. Um dos tipos celulares mais permissivos à infecção e multiplicação do T. gondii são as células dendríticas (DC), paradoxalmente as células apresentadoras de antígeno mais eficazes, com capacidade de deflagrar uma resposta imune protetora eficaz e duradoura. Neste trabalho, estudamos a modulação do metabolismo lipídico de células dendríticas humanas na infecção por T. gondii. Mostramos que o parasita induziu a maturação da célula e um padrão misto de resposta inflamatória, com altas concentrações das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF-alfa e da citocina antiinflamatória IL-10. Após 3 horas de infecção, verificamos que T. gondii induziu a expressão gênica de ciclooxigenase-2 (COX-2). De forma importante, observamos por qRT-PCR que a infecção com T. gondii regulou positivamente a expressão do gene do receptor nuclear (RN) regulado por lipídios PPARgama, mas não do LXRbeta. Já a expressão do mRNA das moléculas envolvidas no transporte e estoque de lipídios, FABP4 e ADRP, alvos do PPARgama, e ABCA1, alvo do LXRbeta, foram aumentadas pela infecção de 3 horas com o parasita. Utilizando duas técnicas distintas (BODIPY e coloração com ósmio) avaliamos a biogênese de corpúsculos lipídicos (CL) após infecção com o T. gondii e constatamos que essas organelas não foram induzidas após 3 horas de infecção. Entretanto, após 24 horas, 90% das DC apresentaram CL e o número de CL por DC foi estatisticamente maior. Observamos a presença de CL em DC não infectadas pelo parasita, mostrando que a indução da biogênese de CL é um fenômeno parácrino, não dependente da infecção celular. Avaliamos também a importância do PPARgama na infecção por T. gondii, através do tratamento das DC com seu agonista ou antagonista. Após 3 horas, apenas os genes ADRP, FABP4 e ABCA1, alvos dos receptores nucleares, foram modulados. Por último, investigamos a influência do T. gondii na expressão das moléculas apresentadoras de antígenos lipídicos. Por citometria de fluxo, constatamos que não há alteração na expressão de membrana dessas moléculas. Contudo, por qRT-PCR, observamos que o T. gondii regula negativamente a expressão dos genes cd1d e cd1e. Em conclusão, mostramos que T. gondii foi capaz de regular positivamente o metabolismo lipídico das DC e negativamente as moléculas apresentadoras de lipídios CD1, sem a participação essencial de PPAR nesses processos.