Caracterização dos receptores P2 em eosinófilos de ratos e possíveis papéis funcionais / Characterization of the P2 receptors in rat eosinophil and possible functional roles

RESUMO

O ATP e outros nucleotídeos podem ser liberados das células para o meio extracelular, através de mecanismos regulados ou pela perda da integridade da membrana. Uma vez no meio extracelular, os nucleotídeos atuam via receptores P2, um grupo de receptores que abrange duas famílias os receptores P2X que são canais iônicos ativados por ligantes e os receptores P2Y que são receptores acoplados à proteína G. Esses receptores foram caracterizados em diversas células do sistema imune de rato. Contudo, não há na literatura nenhuma caracterização descrita em eosinófilos. Estes são importantes por estarem envolvidos na asma e em diversos processos patológicos e fisiológicos. Por isso, fomos investigar a expressão dos receptores P2 nessas células, usando técnicas de eletrofisiologia, análise da variação de cálcio e imunofluorescência. Na primeira etapa do nosso trabalho, procuramos investigar a expressão de receptores P2X 9ionotrópico) por eletrofisiologia. Através da amplitude da corrente máxima normalizada, obtivemos a seguinte ordem de potência ATP> ATPyS> 2meSATP> ADP> αβmeATP> βymeATP> BzATP> UTP> UDP> cAMP, sugerindo a presença dos receptores P2x2, P2X4, e P2X7. Nos experimentos de análise de variação de cálcio intracelular obtivemos a seguinte ordem de potência UTP> ATPyS> ADP> UDP> ATP> BzATP> 2meSATP> αβmeATP> cAMP> Adenosina > βyme ATP, sugerindo a presença de P2X1, P2X2, PaX4, P2x4, P2Y1, P2Y2, P2Y4. Na imunofluorescência verificamos a expressão dos receptores P2Y2, P2Y4 e P2Y13. A partir dessa caracterização, fomos investigar a participação desses receptores na migração, in vitro, dos eosinófilos em sistema de transwell e observamos que o ATP foi capaz de induzir maior migração dos mesmos. Esse efeito foi bloqueado pela suramina um antagonista geral dos receptores P2. Além disso, empregamos o modelo de pleurisia alérgica em ratos para verificar se os receptores P2 poderiam estar implicados na migração dos eosinófilos para algum sítio de inflamação. Nossos resultados mostraram que a suramina diminuiu o número de células na cavidade pleural, indicando a participação de receptores P2, na resposta inflamatória. Nossos resultados demonstraram que eosinófilos de rato expressam receptores P2X e P2Y e que a ativação desses receptores pode aumentar a migração de eosinófilos in vitro e in vivo.