Proteinase activity in latex of three plants of the family Euphorbiaceae

ABSTRACT

In the family of Euphorbiaceae, the genera Euphorbia and Sapium are known to contain essentially latex-bearing species. In the present study, the latex of Euphorbia selloi (Klotzsch & Garcke) Boiss., Euphorbia papillosa A.St.-Hil., and Sapium glandulosum (L.) Morong, plants native from Brazil, were examined concerning proteolytic activity. All studied species have proteins with significant proteolytic activity and E. papillosa has the greatest specific activity. Aiming to verify the type of protease present, an assay with different inhibitors was performed. In the three tested plants, the proteolytic activity was significantly inhibited by a serine protease inhibitor 4-(2-aminoethyl)-benzenesulfonyl fluoride hydrochloride (AEBSF). Using techniques of electrophoresis with polyacrylamide gels (SDS-PAGE), the subunits of proteins were separated according to their molecular masses, and the protein activity was visually detected by zymography.

RESUMO

Dentro da família Euphorbiaceae, os gêneros Euphorbia e Sapium são conhecidos por incluírem basicamente espécies produtoras de látex. No presente estudo, o látex das plantas Euphorbia selloi (Klotzsch & Garcke) Boiss., Euphorbia papillosa A.St.-Hil. e Sapium glandulosum (L.) Morong, espécies nativas do Brasil, foi analisado em relação à atividade proteolítica. Todas as amostras analisadas possuem proteínas com significativa atividade, sendo que o látex da espécie E. papillosa apresenta a maior atividade específica. Com o objetivo de analisar quais os tipos de proteases responsáveis pela atividade proteolítica, realizaram-se ensaios com diferentes inibidores. Nas três plantas testadas a atividade foi inibida significativamente pelo cloridrato de 4-(fluoreto de 2-aminoetilbenzenossulfonil) (AEBSF), um inibidor de serino-proteases. Utilizando técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), as subunidades das proteínas foram separadas de acordo com sua massa molecular e, através da zimografia, a atividade proteolítica pode ser detectada visualmente.