Determinação da sensibilidade do teste de ELISA para pesquisa de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em amostras de águas brutas / Sensitivity of ELISA for detecting Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in raw waters samples

RESUMO

Os métodos microscópicos para detecção de Cryptosporidium e Giardia são dispendiosos e apresentam reprodutibilidade variável e baixa recuperação, porém a rigorosa padronização da técnica e o controle de qualidade nos testes de recuperação permitem sua utilização em amostras ambientais. Neste estudo foi determinada a sensibilidade do ELISA, analisando-se o limite de detecção. Ademais, foi verificada aviabilidade de utilizá-lo como teste de triagem nos locais em que os métodos microscópicos foram aplicados para confirmar a veiculação de oocistos e cistos íntegros, e que podem representar risco de transmissão da criptosporidiose eou giardíase. Os limites de detecção foram altos 98 cistos e 3.492 oocistos. Do total de amostras ambientais analisadas, 20 % foram positivas para Cryptosporidium spp. e nenhuma para Giardia spp.. Concluiu-se que ELISA não apresenta sensibilidade adequada como teste de triagem para a finalidade deste estudo, pois as amostras ambientais geralmente apresentam números de cistos e oocistos abaixo daqueles observados em amostras fecais infectadas, para as quais os kits de reagente ELISA foram validados. Além disso, as diluições das soluções estoques dos cistos e oocistos em água destilada podem ter resultado em condições de reações desfavoráveis e ter influenciado na sensibilidade do ELISA.

ABSTRACT

The microscopic methods for detecting Cryptosporidium and Giardia are expensive, and a variablereproducibility and a low recovery are found. Nevertheless, a rigorous technical standardization and aquality control in the recovery testing give support to use them for analyzing the environmental samples.This study determined the sensitivity of ELISA for analyzing Giardia spp. and Cryptosporidium spp.in raw water samples. Also, it was investigated whether this assay could be used as a screening test fordetecting Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts in raw water samples; and to deduce the potentialtransmission of giardiasis and cryptosporidiosis from these specimens. The detection limits were high,being 98 cysts and 3.492 oocysts. Of the analyzed environmental samples, 20 % showed ELISA positivefor Cryptosporidium spp., and none for Giardia spp.. Therefore, ELISA showed to be unsuitable to beused as screening assay, because in the environmental samples usually occur a lower numbers of oocystsand cysts than those regularly found in infected stool samples, for which these kits have been validated.Furthermore, the dilutions prepared from the stock solutions of cysts and oocysts in distilled water couldhave resulted in unfavorable reaction conditions, and it has affected the sensitivity of ELISA.