Characterization of cryopreserved primary human corneal endothelial cells cultured in human serum-supplemented media / Caracterização de células endoteliais corneanas humanas primárias criopreservadas cultivadas em meio suplementado com soro humano
Arq. bras. oftalmol
; 79(1): 37-41, Jan.-Feb. 2016. graf
Article
em En
| LILACS
| ID: lil-771900
Biblioteca responsável:
BR1.1
ABSTRACT
ABSTRACT Purpose:
To compare cryopreserved human corneal endothelial cells (HCECs) grown in human serum-supplemented media (HS-SM) with cryopreserved HCECs grown in fetal bovine serum-supplemented media (FBS-SM).Methods:
Three pairs of human corneas from donors aged 8, 28, and 31 years were obtained from the eye bank. From each pair, one cornea was used to start a HCEC culture using HS-SM; the other cornea was grown in FBS-SM. On reaching confluence, the six cell populations were frozen using 10% dimethyl sulfoxidecontaining medium. Thawed cells grown in HS-SM were compared with those grown in FBS-SM with respect to morphology, growth curves, immunohistochemistry, real time-reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for endothelial cell markers, and detachment time.Results:
No difference in morphology was observed for cells grown in the two media before or after cryopreservation. By growth curves, cell counts after thawing were similar in both media, with a slight trend toward higher cell counts in FBS-SM. Cells grown in both the media demonstrated a similar expression of endothelial cell markers when assessed by immunohistochemistry, although HCEC marker gene expression was higher in cells grown in HS-SM than in those grown in FBS-SM as assessed by RT-PCR. With FBS-SM, there was a tendency of longer detachment time and lower cell passages.Conclusions:
HS-SM was similar to FBS-SM for cryopreservation of cultured HCECs as assessed by analysis of cell morphology, proliferation, and protein expression, although marker gene expression was higher in cells grown in HS-SM than in those grown in FBS-SM. Detachment time was longer with FBS-SM and in lower passages.RESUMO
RESUMO Objetivo:
Comparar células endoteliais de córnea humana (HCECs) criopreservadas e cultivadas em meio suplementado com soro humano (HS-SM) com HCEC criopreservadas e cultivadas em meio suplementado com soro bovino fetal (FBS-SM).Métodos:
Três pares de córneas humanas de doadores com 8, 28 e 31 anos de idade foram obtidos do banco de olhos e, de cada par, uma córnea foi utilizado para iniciar uma cultura com HS-SM e outra com FBS-SM. Ao atingir a confluência, as populações de células foram congeladas utilizando-se dimetil-sulfóxido 10% no respectivo meio de cultura. Após descongeladas, as células cultivadas em HS-SM foram comparados com as cultivadas em FBS-SM por meio de morfologia, curva de crescimento, imuno-histoquímica, reação em cadeia de Reação em cadeia da polimerase da transcrição reversa em tempo real (RT-PCR) para marcadores de células endoteliais e tempo de descolamento.Resultado:
Não foram observadas diferenças morfológicas antes ou após a criopreservação. Curva de crescimento mostrou contagens celulares semelhantes em ambos os meios, com discreta tendência para um maior número em FBS-SM. As células cultivadas em ambos os meios mostraram expressão semelhante de marcadores celulares endoteliais quando avaliadas por imuno-histoquímica, embora a expressão genética de marcadores para HCEC tenha sido maior em HS-SM quando avaliado por RT-PCR. Houve uma tendência de maior tempo de descolamento com FBS-SM e passagens iniciais.Conclusões:
HS-SM foi semelhante ao FBS-SM na criopreservação de HCEC cultivadas in vitro quando avaliadas por morfologia celular, proliferação celular e expressão proteica, embora a expressão genética de marcadores endoteliais tenha sido maior em células cultivadas em HS-SM quando comparadas a células cultivadas em FBS-SM. O tempo de descolamento foi maior quando utilizado FBS-SM e em passagens iniciais.Palavras-chave
Texto completo:
1
Coleções:
01-internacional
Base de dados:
LILACS
Assunto principal:
Endotélio Corneano
/
Criopreservação
/
Técnicas de Cultura de Células
/
Células Endoteliais
/
Soro
Limite:
Animals
/
Humans
Idioma:
En
Revista:
Arq. bras. oftalmol
Assunto da revista:
OFTALMOLOGIA
Ano de publicação:
2016
Tipo de documento:
Article
País de afiliação:
Estados Unidos
País de publicação:
Brasil