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Structural and functional characterization of SARS-CoV-2 RBD domains produced in mammalian cells
Preprint
em En
| PREPRINT-BIORXIV
| ID: ppbiorxiv-432424
Artigo de periódico
Um artigo publicado em periódico científico está disponível e provavelmente é baseado neste preprint, por meio do reconhecimento de similaridade realizado por uma máquina. A confirmação humana ainda está pendente.
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ABSTRACT
As the SARS-CoV-2 pandemic is still ongoing and dramatically influences our life, the need for recombinant proteins for diagnostics, vaccine development, and research is very high. The spike (S) protein, and particularly its receptor binding domain (RBD), mediates the interaction with the ACE2 receptor on host cells and may be modulated by its structural features. Therefore, well characterized recombinant RBDs are essential. We have performed an in-depth structural and functional characterization of RBDs expressed in Chinese hamster ovary (CHO) and human embryonic kidney (HEK293) cells. To structurally characterize the native RBDs (comprising N- and O-glycans and additional posttranslational modifications) a multilevel mass spectrometric approach was employed. Released glycan and glycopeptide analysis were integrated with intact mass analysis, glycan-enzymatic dissection and top-down sequencing for comprehensive annotation of RBD proteoforms. The data showed distinct glycosylation for CHO- and HEK293-RBD with the latter exhibiting antenna fucosylation, higher level of sialylation and a combination of core 1 and core 2 type O-glycans. Additionally, from both putative O-glycosylation sites, we could confirm that O-glycosylation was exclusively present at T323, which was previously unknown. For both RBDs, the binding to SARS-CoV-2 antibodies of positive patients and affinity to ACE2 receptor was addressed showing comparable results. This work not only offers insights into RBD structural and functional features but also provides a workflow for characterization of new RBDs and batch-to-batch comparison.
cc_by_nc_nd
Texto completo:
1
Coleções:
09-preprints
Base de dados:
PREPRINT-BIORXIV
Idioma:
En
Ano de publicação:
2021
Tipo de documento:
Preprint