Escherichia coli expression and characterization of alfa-amylase from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465 / Expressão e caracterização de Escherichia coli de alfa-amilase de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465

Alpha amylase, catalyzing the hydrolysis of starch is a ubiquitous enzyme with tremendous industrial applications. A 1698 bp gene coding for 565 amino acid amylase was PCR amplified from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, cloned in pET21a (+) plasmid, expressed in BL21 (DE3) strain of E. coli and characterized. The recombinant enzyme exhibited molecular weight of 63 kDa, optimum pH 8, optimum temperature 70°C, and KM value of 157.7µM. On pilot scale, the purified enzyme efficiently removed up to 95% starch from the cotton fabric indicating its desizing ability at high temperature. 3D model of enzyme built by Raptor-X and validated by Ramachandran plot appeared as a monomer having 31% α-helices, 15% β-sheets, and 52% loops. Docking studies have shown the best binding affinity of enzyme with amylopectin (∆G -10.59). According to our results, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276, and Arg175 constitute the potential active site of enzyme.

A alfa-amilase, que catalisa a hidrólise do amido, é uma enzima ubíqua com imensas aplicações industriais. Um gene de 1698 pb que codifica a amilase de 565 aminoácidos foi amplificado por PCR, a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, clonado no plasmídeo pET21a (+), expresso na cepa BL21 (DE3) de E. coli e caracterizado. A enzima recombinante exibiu peso molecular de 63 kDa, pH ótimo igual a 8, temperatura ótima de 70° C e valor KM de 157,7 µM. Em escala piloto, a enzima purificada removeu com eficiência até 95% de amido do tecido de algodão, indicando sua capacidade de desengomagem em alta temperatura. O modelo 3D da enzima construída por Raptor-X e validada por Ramachandran plot apareceu como um monômero com 31% de hélices alfa, 15% de folhas beta e 52% de loops. Os estudos de docking mostraram melhor afinidade de ligação da enzima com amilopectina (∆G: - 10,59). De acordo com nossos resultados, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276 e Arg175 constituem o sítio ativo potencial da enzima.

Escherichia coli expression and characterization of alfa-amylase from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465 / Expressão e caracterização de Escherichia coli de alfa-amilase de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465

Alpha amylase, catalyzing the hydrolysis of starch is a ubiquitous enzyme with tremendous industrial applications. A 1698 bp gene coding for 565 amino acid amylase was PCR amplified from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, cloned in pET21a (+) plasmid, expressed in BL21 (DE3) strain of E. coli and characterized. The recombinant enzyme exhibited molecular weight of 63 kDa, optimum pH 8, optimum temperature 70°C, and KM value of 157.7µM. On pilot scale, the purified enzyme efficiently removed up to 95% starch from the cotton fabric indicating its desizing ability at high temperature. 3D model of enzyme built by Raptor-X and validated by Ramachandran plot appeared as a monomer having 31% α-helices, 15% β-sheets, and 52% loops. Docking studies have shown the best binding affinity of enzyme with amylopectin (∆G -10.59). According to our results, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276, and Arg175 constitute the potential active site of enzyme.(AU)

A alfa-amilase, que catalisa a hidrólise do amido, é uma enzima ubíqua com imensas aplicações industriais. Um gene de 1698 pb que codifica a amilase de 565 aminoácidos foi amplificado por PCR, a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, clonado no plasmídeo pET21a (+), expresso na cepa BL21 (DE3) de E. coli e caracterizado. A enzima recombinante exibiu peso molecular de 63 kDa, pH ótimo igual a 8, temperatura ótima de 70° C e valor KM de 157,7 µM. Em escala piloto, a enzima purificada removeu com eficiência até 95% de amido do tecido de algodão, indicando sua capacidade de desengomagem em alta temperatura. O modelo 3D da enzima construída por Raptor-X e validada por Ramachandran plot apareceu como um monômero com 31% de hélices alfa, 15% de folhas beta e 52% de loops. Os estudos de docking mostraram melhor afinidade de ligação da enzima com amilopectina (∆G: - 10,59). De acordo com nossos resultados, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276 e Arg175 constituem o sítio ativo potencial da enzima.(AU)

Escherichia coli expression and characterization of α-amylase from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465 / Expressão e caracterização de Escherichia coli de alfa-amilase de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465

Alpha amylase, catalyzing the hydrolysis of starch is a ubiquitous enzyme with tremendous industrial applications. A 1698 bp gene coding for 565 amino acid amylase was PCR amplified from Geobacillus thermodenitrificans DSM465, cloned in pET21a (+) plasmid, expressed in BL21 (DE3) strain of E. coli and characterized. The recombinant enzyme exhibited molecular weight of 63 kDa, optimum pH 8, optimum temperature 70°C, and KM value of 157.7µM. On pilot scale, the purified enzyme efficiently removed up to 95% starch from the cotton fabric indicating its desizing ability at high temperature. 3D model of enzyme built by Raptor-X and validated by Ramachandran plot appeared as a monomer having 31% α-helices, 15% ß-sheets, and 52% loops. Docking studies have shown the best binding affinity of enzyme with amylopectin (∆G -10.59). According to our results, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276, and Arg175 constitute the potential active site of enzyme.

A alfa-amilase, que catalisa a hidrólise do amido, é uma enzima ubíqua com imensas aplicações industriais. Um gene de 1698 pb que codifica a amilase de 565 aminoácidos foi amplificado por PCR, a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, clonado no plasmídeo pET21a (+), expresso na cepa BL21 (DE3) de E. coli e caracterizado. A enzima recombinante exibiu peso molecular de 63 kDa, pH ótimo igual a 8, temperatura ótima de 70° C e valor KM de 157,7 µM. Em escala piloto, a enzima purificada removeu com eficiência até 95% de amido do tecido de algodão, indicando sua capacidade de desengomagem em alta temperatura. O modelo 3D da enzima construída por Raptor-X e validada por Ramachandran plot apareceu como um monômero com 31% de hélices alfa, 15% de folhas beta e 52% de loops. Os estudos de docking mostraram melhor afinidade de ligação da enzima com amilopectina (∆G: - 10,59). De acordo com nossos resultados, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276 e Arg175 constituem o sítio ativo potencial da enzima.

Escherichia coli expression and characterization of -amylase from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465

Abstract Alpha amylase, catalyzing the hydrolysis of starch is a ubiquitous enzyme with tremendous industrial applications. A 1698 bp gene coding for 565 amino acid amylase was PCR amplified from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, cloned in pET21a (+) plasmid, expressed in BL21 (DE3) strain of E. coli and characterized. The recombinant enzyme exhibited molecular weight of 63 kDa, optimum pH 8, optimum temperature 70°C, and KM value of 157.7µM. On pilot scale, the purified enzyme efficiently removed up to 95% starch from the cotton fabric indicating its desizing ability at high temperature. 3D model of enzyme built by Raptor-X and validated by Ramachandran plot appeared as a monomer having 31% -helices, 15% -sheets, and 52% loops. Docking studies have shown the best binding affinity of enzyme with amylopectin (G -10.59). According to our results, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276, and Arg175 constitute the potential active site of enzyme.

Resumo A alfa-amilase, que catalisa a hidrólise do amido, é uma enzima ubíqua com imensas aplicações industriais. Um gene de 1698 pb que codifica a amilase de 565 aminoácidos foi amplificado por PCR, a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, clonado no plasmídeo pET21a (+), expresso na cepa BL21 (DE3) de E. coli e caracterizado. A enzima recombinante exibiu peso molecular de 63 kDa, pH ótimo igual a 8, temperatura ótima de 70° C e valor KM de 157,7 µM. Em escala piloto, a enzima purificada removeu com eficiência até 95% de amido do tecido de algodão, indicando sua capacidade de desengomagem em alta temperatura. O modelo 3D da enzima construída por Raptor-X e validada por Ramachandran plot apareceu como um monômero com 31% de hélices alfa, 15% de folhas beta e 52% de loops. Os estudos de docking mostraram melhor afinidade de ligação da enzima com amilopectina (G: - 10,59). De acordo com nossos resultados, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276 e Arg175 constituem o sítio ativo potencial da enzima.

Clinical and microbiological characteristics of dogs in sepsis in an academic veterinary hospital in the north of Paraná / Características clínicas e microbiológicas de cães em sepse de um hospital veterinário escola do norte do Paraná

Sepsis is a life-threatening organ dysfunction caused by a patient's unregulated response to an infectious process. In veterinary medicine, the exact incidence of sepsis is unknown. Early recognition of sepsis in critically ill patients is essential for rapid and effective therapeutic intervention. The present study aimed to apply the criteria of an adapted sepsis assessment protocol based on the Second International Consensus Definition for Sepsis and Septic Shock or Sepsis-2 of human medicine, in canine patients with suspected systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and/or organ dysfunction, and to identify infectious agents as well as their antimicrobial resistance profile in the focus of infection, in the bloodstream and colonizing the rectal mucosa. Patients were evaluated for survival and severity of sepsis. Of the 37/42 dogs that met the sepsis criteria, six presented septic shock, 26 (70.2%) had at least two signs of SIRS, and sepsis with organ dysfunction was diagnosed in 27 (73%) dogs. The primary dysfunctions observed were decreased level of consciousness in 21/37 (56.8%), hyperlactatemia in 19/37 (51.4%), and hypoalbuminemia in 18/37 (48.6%). Two or more SIRS signs associated with hypotension and hypoalbuminemia were related to more than half of the deaths. The most frequent infectious focus was skin and soft tissue in 20/37 (54%), followed by organs and cavities in 8/37 (21.6%). The survival rate was 56.7%. Blood culture confirmed bacteremia in nine patients (24.3%), with a predominance of Gram-positive microorganisms (Staphylococcus intermedius, Streptococcus spp.) in 66.6% of dogs and one yeast (Candida glabrata). The most frequent bacteria in the focus of infection were gram-negative bacteria (46.2%), mainly Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, and Pseudomonas aeruginosa, in 19.5%, 14.6%, and 12.1%, respectively. We observed colonization by gram-negative bacteria such as E. coli-ESBL (31.5%), K. pneumoniae-ESBL (15.7%), and P. aeruginosa (15.7%), and the presence of ESBL bacteria was more associated with death when compared with other microorganisms. Vancomycin-resistant Enterococcus (VRE) were isolated from rectal mucosa in four dogs. Gram-negative microorganisms were the most frequent in both infections and colonization, and most of them were resistant to fluoroquinolones, sulfonamides, tetracyclines, and cephalosporins. Based on this information, it can be concluded that mortality due to sepsis in dogs was high. Due to the presence of multi-resistant bacteria, the use of antimicrobials should be judicious, suggesting the implementation of the same precautions used in human hospitals to prevent the spread of multi-resistant microorganisms.(AU)

A sepse é uma disfunção orgânica ameaçadora à vida, causada por uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção e na medicina veterinária sua incidência exata é desconhecida. O reconhecimento precoce da sepse nos pacientes críticos é essencial para que a intervenção terapêutica seja rápida e eficaz. Assim, os objetivos do presente estudo foram aplicar os critérios de um protocolo de avaliação da sepse adaptado com base no Segundo Consenso Internacional para Sepse e Choque Séptico, ou Sepse-2, da medicina humana, em pacientes caninos com suspeita de infecção e/ou Síndrome da Resposta Inflamatória Sistêmica e/ou disfunção orgânica e identificar os agentes infecciosos bem como seu perfil de resistência a antimicrobianos no foco de infecção, na corrente sanguínea e colonizando a mucosa retal. Os pacientes foram avaliados quanto à sobrevivência e severidade da sepse. Dos 37/42 cães que se enquadraram nos critérios de sepse, seis estavam em choque séptico, 26 (70,2%) apresentaram pelo menos dois sinais de SIRS, e a sepse com disfunção orgânica foi diagnosticada em 27 (73%) cães. As principais disfunções verificadas foram diminuição do nível de consciência em 21/37 (56,8%), hiperlactatemia em 19/37 (51,4%) e hipoalbuminemia em 18/37 (48,6%). A presença de dois ou mais sinais de SIRS associados com hipotensão e hipoalbuminemia estiveram relacionadas com mais da metade dos óbitos. O foco infeccioso mais frequente foi pele e partes moles em 20/37 (54%) seguido por órgãos e cavidades em 8/37 (21,6%). A taxa de sobrevivência foi de 56,7%. Na hemocultura confirmou-se bacteremia em nove pacientes (24,3%), com predominância de microrganismos gram-positivos (Staphylococcus intermedius, Streptococcus spp.) em 66,6% dos cães e uma levedura (Candida glabrata). As bactérias mais frequentes no foco de infecção foram as gram-negativas (46,2%) principalmente Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa, em 19,5%, 14,6% e 12,1% respectivamente. Foi constatada colonização por bactérias gram-negativas como E. coli-ESBL (31,5%), K. pneumoniae-ESBL (15,7%) e P. aeruginosa (15,7%), sendo que a colonização de cães por bactérias ESBL foi associada ao óbito quando comparada com outros microrganismos. Foram também isolados da mucosa retal Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) em quatro cães. Os microrganismos gram-negativos foram os mais frequentes, tanto nas infecções quanto nas colonizações e a maioria apresentava resistência à fluorquinolonas, sulfonamidas, tetraciclinas e cefalosporinas. Com base nestas informações, conclui-se que a mortalidade em decorrência da sepse em cães foi alta, e devido à presença de bactérias multirresistentes, o uso de antimicrobianos deve ser criterioso, sugerindo-se ainda a implantação das mesmas precauções utilizadas em hospitais humanos para evitar disseminação de microrganismos multirresistentes.(AU)

Clinical and microbiological characteristics of dogs in sepsis in an academic veterinary hospital in the north of Paraná / Características clínicas e microbiológicas de cães em sepse de um hospital veterinário escola do norte do Paraná

Sepsis is a life-threatening organ dysfunction caused by a patient's unregulated response to an infectious process. In veterinary medicine, the exact incidence of sepsis is unknown. Early recognition of sepsis in critically ill patients is essential for rapid and effective therapeutic intervention. The present study aimed to apply the criteria of an adapted sepsis assessment protocol based on the Second International Consensus Definition for Sepsis and Septic Shock or Sepsis-2 of human medicine, in canine patients with suspected systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and/or organ dysfunction, and to identify infectious agents as well as their antimicrobial resistance profile in the focus of infection, in the bloodstream and colonizing the rectal mucosa. Patients were evaluated for survival and severity of sepsis. Of the 37/42 dogs that met the sepsis criteria, six presented septic shock, 26 (70.2%) had at least two signs of SIRS, and sepsis with organ dysfunction was diagnosed in 27 (73%) dogs. The primary dysfunctions observed were decreased level of consciousness in 21/37 (56.8%), hyperlactatemia in 19/37 (51.4%), and hypoalbuminemia in 18/37 (48.6%). Two or more SIRS signs associated with hypotension and hypoalbuminemia were related to more than half of the deaths. The most frequent infectious focus was skin and soft tissue in 20/37 (54%), followed by organs and cavities in 8/37 (21.6%). The survival rate was 56.7%. Blood culture confirmed bacteremia in nine patients (24.3%), with a predominance of Gram-positive microorganisms (Staphylococcus intermedius, Streptococcus spp.) in 66.6% of dogs and one yeast (Candida glabrata). The most frequent bacteria in the focus of infection were gram-negative bacteria (46.2%), mainly Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, and Pseudomonas aeruginosa, in 19.5%, 14.6%, and 12.1%, respectively. We observed colonization by gram-negative bacteria such as E. coli-ESBL (31.5%), K. pneumoniae-ESBL (15.7%), and P. aeruginosa (15.7%), and the presence of ESBL bacteria was more associated with death when compared with other microorganisms. Vancomycin-resistant Enterococcus (VRE) were isolated from rectal mucosa in four dogs. Gram-negative microorganisms were the most frequent in both infections and colonization, and most of them were resistant to fluoroquinolones, sulfonamides, tetracyclines, and cephalosporins. Based on this information, it can be concluded that mortality due to sepsis in dogs was high. Due to the presence of multi-resistant bacteria, the use of antimicrobials should be judicious, suggesting the implementation of the same precautions used in human hospitals to prevent the spread of multi-resistant microorganisms.(AU)

A sepse é uma disfunção orgânica ameaçadora à vida, causada por uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção e na medicina veterinária sua incidência exata é desconhecida. O reconhecimento precoce da sepse nos pacientes críticos é essencial para que a intervenção terapêutica seja rápida e eficaz. Assim, os objetivos do presente estudo foram aplicar os critérios de um protocolo de avaliação da sepse adaptado com base no Segundo Consenso Internacional para Sepse e Choque Séptico, ou Sepse-2, da medicina humana, em pacientes caninos com suspeita de infecção e/ou Síndrome da Resposta Inflamatória Sistêmica e/ou disfunção orgânica e identificar os agentes infecciosos bem como seu perfil de resistência a antimicrobianos no foco de infecção, na corrente sanguínea e colonizando a mucosa retal. Os pacientes foram avaliados quanto à sobrevivência e severidade da sepse. Dos 37/42 cães que se enquadraram nos critérios de sepse, seis estavam em choque séptico, 26 (70,2%) apresentaram pelo menos dois sinais de SIRS, e a sepse com disfunção orgânica foi diagnosticada em 27 (73%) cães. As principais disfunções verificadas foram diminuição do nível de consciência em 21/37 (56,8%), hiperlactatemia em 19/37 (51,4%) e hipoalbuminemia em 18/37 (48,6%). A presença de dois ou mais sinais de SIRS associados com hipotensão e hipoalbuminemia estiveram relacionadas com mais da metade dos óbitos. O foco infeccioso mais frequente foi pele e partes moles em 20/37 (54%) seguido por órgãos e cavidades em 8/37 (21,6%). A taxa de sobrevivência foi de 56,7%. Na hemocultura confirmou-se bacteremia em nove pacientes (24,3%), com predominância de microrganismos gram-positivos (Staphylococcus intermedius, Streptococcus spp.) em 66,6% dos cães e uma levedura (Candida glabrata). As bactérias mais frequentes no foco de infecção foram as gram-negativas (46,2%) principalmente Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa, em 19,5%, 14,6% e 12,1% respectivamente. Foi constatada colonização por bactérias gram-negativas como E. coli-ESBL (31,5%), K. pneumoniae-ESBL (15,7%) e P. aeruginosa (15,7%), sendo que a colonização de cães por bactérias ESBL foi associada ao óbito quando comparada com outros microrganismos. Foram também isolados da mucosa retal Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) em quatro cães. Os microrganismos gram-negativos foram os mais frequentes, tanto nas infecções quanto nas colonizações e a maioria apresentava resistência à fluorquinolonas, sulfonamidas, tetraciclinas e cefalosporinas. Com base nestas informações, conclui-se que a mortalidade em decorrência da sepse em cães foi alta, e devido à presença de bactérias multirresistentes, o uso de antimicrobianos deve ser criterioso, sugerindo-se ainda a implantação das mesmas precauções utilizadas em hospitais humanos para evitar disseminação de microrganismos multirresistentes.(AU)

AVALIAÇÃO DO MICROBIOMA E DA DINÂMICA DE CRESCIMENTO DE CODORNAS SUPLEMENTADAS COM ADITIVOS FITOGÊNICOS COMO ALTERNATIVAS AOS ANTIMICROBIANOS MELHORADORES DE DESEMPENHO

O objetivo desse trabalho foi identificar a composição química dos óleos essenciais 9 (OLES) de Mentha piperita, Melaleuca alternifolia, Baccharis trimera e Citrus 10 bergamia; identificar a susceptibilidade antimicrobiana de 15 antibióticos 11 comercializados no Brasil; determinar a atividade antimicrobiana destes OLES frente 12 a isolados de cepas bacterianas de S. aureus, E. coli e S. enteritidis; testar a 13 susceptibilidade bacteriana de sorovares de Salmonella spp frente ao óleo essencial 14 de M. piperita; estudar o efeito do uso dos OLES de M. piperita e M. alternifolia sobre 15 o microbioma intestinal de codornas de corte, avaliar morfometria e a histologia do 16 epitélio intestinal; avaliar o desempenho zootécnico, as características de rendimento 17 e qualidade de carne de codornas de corte submetidas à suplementação dietética com 18 como alternativas aos antimicrobianos melhoradores de desempenho. Neste sentido, 19 foram realizados 5 estudos. No primeiro estudo, foi realizado levantamento 20 bibliográfico utilizadas as palavras-chave: eubióticos, fitobióticos, óleos 21 essenciais, extratos fitogênicos, frango de corte e suas correspondentes em inglês. 22 Após comparações de diversos parâmetros sobre o uso ou não uso de fitogênicos, 23 verificou-se que a substituição dos antibióticos pelos fitogênicos pode ser considerado 24 positiva para o desempenho, histomorfologia da parede intestinal, perfil bioquímico do 25 sangue, característica de carcaça e número de bactérias encontradas no intestino. No 26 segundo estudo foram identificados os compostos químicos dos OLES de M. piperita, 27 M. alternifolia, B. trimera e C. bergamia, e foi avaliada a ação antimicrobiana destes 28 OLES e de 15 antibióticos comercializados no Brasil, sobre cepas de E. coli, S. aureus 29 e S. enteritidis. Os compostos majoritários de M. piperita, M. alternifolia, B. trimera e 30 C. bergamia, foram respectivamente: mentol (45%); terpinen-4-ol (42,5%) e acetato 31 de carquejila (62,9%), acetato de linalila (40,6%). Para E. coli a concentração inibitória 32 mínima (CIM) observada foi 6,25; 25; 50 e 12,5, para S. aureus, a CIM observada foi 33 3,12; 6,25; 50 e 12,5; para S. enteritidis a CIM observada foi 6,25;12,5; 12,5 e 25 34 mg/mL para M. piperita; M. alternifolia; B. trimera; C. bergamia, respectivamente. Para 35 E. coli a CBM observada foi 6,25; 25; 50 e 12,5, para S. aureus a CBM observada foi 36 12,50; 50; 50; 50, para S. enteritidis a concentração bactericida minima (CBM) 37 observada foi 6,25;12,5; 12,5 e 25 mg/mL para M. piperita; M. alternifolia; B. trimera; 38 C. bergamia, respectivamente. 80% dos antibióticos testados apresentaram eficiência, 39 20% apresentaram eficiência intermediária e nenhum se apresentou resistente contra 40 a cepa de S. enteritidis. Para E. coli, 66,67% dos antibióticos testados apresentaram 41 eficiência, 13,33% apresentaram eficiência intermediária e 20% foram resistentes. 42 Para S. aureus, 40% dos antibióticos testados apresentaram eficiência, 33,33% 43 apresentaram eficiência intermediária e 26,67% foram resistentes. No terceiro estudo, 44 foi analisada a susceptibilidade bacteriana de Salmonella spp., compreendendo oito 45 sorovares; sendo determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a 46 Concentração Bactericida Mínima (CBM) do óleo essencial de M. piperita. A 47 susceptibilidade aos antibióticos (antibiograma) foi determinada pelo método de disco- 48 difusão em ágar Mueller-Hinton. A atividade antimicrobiana do óleo essencial foi 49 avaliada pela determinação da CIM e pela CBM. 50% dos sorovares de Salmonella 50 apresentaram resistência à 66,66% dos antibióticos utilizados. Verificou-se que 62,5%2 51 dos sorovares sofreram efeito bacteriostático e 37,5% dos sorovares sofreram efeito 52 bactericida à concentração de 1,56 mg/mL de óleo essencial de M. piperita. No quarto 53 estudo, foi analisado o efeito do uso dos OLES de M. piperita e M. alternifolia sobre 54 morfometria e o microbioma intestinal de codornas de corte, sob condições normais 55 de alimentação. Para o estudo da morfometria intestinal foi utilizado o delineamento 56 inteiramente ao acaso, em esquema fatorial: quatro rações experimentais x três 57 segmentos do intestino (4x3), com cinco repetições. Para o estudo do microbioma foi 58 utilizado o delineamento inteiramente casualizado (DIC), sendo 4 tratamentos 59 (controle, bacitracina de zinco e OLES de M. piperita e M. alternifolia), com 8 60 repetições de 7 aves totalizando 224 aves na fase de 1 a 42 dias. O uso de M. 61 alternifolia (50 mg/kg de ração) na dieta das codornas de corte promoveu melhores 62 resultados para morfometria intestinal se equivalendo ao uso de Bacitracina de zinco. 63 O uso de M. piperita e M. alternifolia alterou o microbioma gastrointestinal das 64 codornas de corte de forma negativa em relação às bactérias patogênicas, mas 65 reduziu a diversidade bacteriana patogênica em relação ao controle. No quinto estudo, 66 com este estudo objetivou-se avaliar o efeito do uso dos OLES de M. piperita e M. 67 alternifolia sobre desempenho, qualidade da carne e lipidemia de codornas de corte. 68 Para o estudo do desempemho e qualidade da carne foi utilizado DIC sendo 4 69 tratamentos com 8 repetições de 7 aves. Para o estudo da lipidemia utilizou-se o DIC 70 em esquema fatorial: 4x2, sendo quatro tratamentos (Controle, Bacitracina de zinco, 71 M. piperita e M. alternifolia), e duas condições de coleta (com e sem jejum de 12 72 horas), com oito repetições, sendo uma ave por repetição. O uso de aditivos 73 fitogênicos à base de OLES de M. piperita e M. alternifolia na dieta de codornas de 74 corte, pode proporcionar desempenhos zootécnicos, rendimentos de carcaça quente 75 e resfriada, pesos relativos dos orgãos, bem como características de qualidade da 76 carne comparáveis ao uso de antibióticos promotores de crescimento. A Bacitracina 77 de zinco e os OLES de M. piperita e M. alternifolia não alteraram o nível sérico de 78 colesterol total, triglicerideos e o peso das aves. Houve redução no HDL nas aves 79 tratadas com Bacitracina de zinco e com os OLES de M. piperita e M. alternifolia, em 80 8,12; 16,52 e 3,36% respectivamente. O uso da Bacitracina de zinco, M. piperita e M. 81 alternifolia associado às diferentes condições de coleta não aumentaram os valores 82 séricos de LDL e VLDL. Os coeficientes de variação da condição após 12 horas de 83 jejum apresentaram-se 86% inferiores à condição sem jejum.

The objective of this work was to identify a chemical composition of essential oils 96 (ESOL) from M. piperita, M. alternifolia, Baccharis trimera and Citrus bergamia. Identify 97 an antimicrobial susceptibility of 15 antibiotics marketed in Brazil. To determine the 98 antimicrobial activity of these ESOL against bacterial strains of S. aureus, E. coli and 99 S. enteritidis.Test the bacterial susceptibility of Salmonella spp serovars against the 100 essential oil of M. piperita. Study or effect of using of the ESOL of M. piperita and M. 101 alternifolia on intestinal microbiome of meat quails to evaluate morphometry and 102 histology of the intestinal epithelium. Evaluate the zootechnical performance, 103 according to performance characteristics and quality of meat quails submitted to 104 dietary supplementation as alternatives to antimicrobials that improve performance. In 105 this sense, five studies carried out. In the first study, a bibliographic survey carried out 106 using the keywords: eubiotics, phytobiotics, essential oils, phytogenic extracts, 107 broiler chicken and their correspondents in English. After comparing several 108 parameters on the use or not use of phytogenics, it found that the replacement of 109 antibiotics by phytogenics considered positive for performance, histomorphology of the 110 intestinal wall, biochemical profile of the blood, carcass characteristic and number of 111 bacteria found in the intestine. In the second study, the chemical compounds of the 112 ESOL of M. piperita, M. alternifolia, B. trimera and C. bergamia identified, and the 113 antimicrobial action of these ESOL and 15 antibiotics commercialized in Brazil on E. 114 coli strains evaluated. S. aureus and S. enteritidis. The major compounds of M. 115 piperita, M. alternifolia, B. trimera and C. bergamia, were respectively: menthol (45%), 116 terpinen-4-ol (42.5%) and carquejila acetate (62.9%), linalyl acetate (40.6%). For E. 117 coli the minimum inhibitory concentration (MIC) was 6.25; 25; 50 and 12.5, for S. 118 aureus, the MIC observed was 3.12; 6.25; 50 and 12.5; for S. enteritidis the MIC 119 observed was 6.25; 12.5; 12.5 and 25 mg / mL for M. piperita; M. alternifolia; B. trimera; 120 C. bergamia, respectively. For E. coli the observed MBC was 6.25; 25; 50 and 12.5, 121 for S. aureus the observed MBC was 12.50; 50; 50; 50, for S. enteritidis the observed 122 minimal bactericidal concentration (MBC) was 6.25; 12.5; 12.5 and 25 mg / mL for M. 123 piperita; M. alternifolia; B. trimera; C. bergamia, respectively. The antibiotics tested 124 showed 80% efficiency, 20% showed intermediate efficiency and none were resistant 125 against the S. enteritidis strain. For E. coli, 66.67% of the tested antibiotics showed 126 efficiency, 13.33% showed intermediate efficiency and 20% were resistant. For S. 127 aureus, 40% of the tested antibiotics were efficient, 33.33% had intermediate efficiency 128 and 26.67% were resistant. In the third study, the bacterial susceptibility of Salmonella 129 spp. analyzed, comprising eight serovars; being determined the MIC and MBC of the 130 ESOL of M. piperita. The susceptibility to antibiotics (antibiogram) determined by the 131 disk-diffusion method on Mueller-Hinton agar. The antimicrobial activity of the essential 132 oil assessed by the determination of MIC and MBC. Salmonella serovars showed 50% 133 of resistance to 66.66% of the antibiotics used. It found that 62.5% of serovars suffered 134 a bacteriostatic effect and 37.5% of serovars suffered a bactericidal effect at the 135 concentration of 1.56 mg / mL of essential oil of M. piperita. In the fourth study, the 136 effect of using ESOL of M. piperita and M. alternifolia on intestinal morphometry and 137 microbiome of meat quails analyzed, under normal feeding conditions. For the study 138 of intestinal morphometry, a completely randomized design used, in a factorial4 139 scheme: four experimental diets x three segments of the intestine (4x3), with five 140 repetitions. For the study of the microbiome, a completely randomized design (CRD) 141 used, with four treatments (control, zinc bacitracin and ESOL of M. piperita and M. 142 alternifolia), with eight replications of seven birds totaling 224 birds in the phase from 143 one to 42 days. The use of M. alternifolia (50 mg / kg of feed) in the diet of broiler quail 144 promoted better results for intestinal morphometry, equivalent to the use of zinc 145 bacitracin. The use of M. piperita and M. alternifolia altered the gastrointestinal 146 microbiome of the cut quails in a negative way in relation to the pathogenic bacteria, 147 but reduced the pathogenic bacterial diversity in relation to the control. In the fifth study, 148 this study aimed to evaluate the effect of using ESOL of M. piperita and M. alternifolia 149 on performance, meat quality and lipidemia of meat quails. For the study of 150 performance and meat quality, CRD used, with four treatments with eight repetitions 151 of seven birds. For the study of lipidemia, the CRD was used in a factorial scheme: 152 4x2, with four treatments (Control, Zinc Bacitracin, M. piperita and M. alternifolia), and 153 two collection conditions (with and without a 12-hour fast), with eight repetitions, one 154 bird per repetition. The use of phytogenic additives based on ESOL of M. piperita and 155 M. alternifolia in the diet of meat quails, can provide zootechnical performances, hot 156 and cooled carcass yields, relative weights of the organs, as well as meat quality 157 characteristics comparable to use of growth-promoting antibiotics. The zinc bacitracin 158 and the ESOL of M. piperita and M. alternifolia did not alter the serum level of total 159 cholesterol, triglycerides and the weight of the birds. There was a reduction in HDL in 160 birds treated with zinc bacitracin and with ESOL of M. piperita and M. alternifolia, in 161 8.12, 16.52 and 3.36% respectively. The use of zinc Bacitracin, M. piperita and M. 162 alternifolia associated with different collection conditions did not increase serum LDL 163 and VLDL values. The coefficients of variation of the condition after 12 hours of 164 fasting were 86% lower than the condition without fasting.

Handling milking as a risk factor in the occurrence of microorganisms in raw milk / Manejo de ordenha como fator de risco na ocorrência de microorganismos em leite cru

Milk is naturally a good provider of a whole range of nutrients, however an inadequate milking may significantly interfere on its nutritional and microbiological quality. The main purpose of this study was to isolate and identify microorganisms from bulk tanks of southern Rio Grande do Sul state, Brazil and establish a correlation between animal management and presence of pathogens in the milk. To this end, raw milk samples were collected from different dairy herds and submitted to microbiological analyses. Mean bacterial counts were Staphylococcus sp. (5,32x106 CFU/mL), S. aureus (1,33x105 CFU/mL) and enterobacteria (1,82x107 CFU/mL). The major pathogens isolated and their respective frequency were Escherichia coli (27.8%), Streptococcus agalactiae (6.2%), S. dysgalactiae (37.2%), S. uberis (16.8%), Candida sp. (15.7%), Aspergillus sp. (5.8%), Trichosporum sp. (3.6%) and Cryptococcus sp. (1.5%). In addition, it was identified an Odds Ratio of 3.2 for S. agalactiae regarding manual milking and 3.1 when a single cloth towel was used for drying the udder. For S. bovis the Odds Ratio was 2.8 in properties milking their animals in stalls wood. Somatic cell count (SCC) was significantly higher (p=0,003) in milk samples manually extracted in comparison with machine milking. Likewise, manual milking resulted in the increase in S. aureus counts (p=0.04). Pre-dipping practice have contributed fora significant reduction (p=0.04) in the Staphylococcus sp. counts. Taken together, our results show thatthe adoption of poor management practices can negatively interfere in the microbiological quality ofmilk increasing the risks of occurrence of pathogens and their counts.

O leite é um alimento natural e rico em nutrientes, porém a forma como muitas vezes é obtido interfere na sua qualidade microbiológica e nutricional. E a qualidade dos produtos é uma exigência cada vez maior do mercado consumidor. Assim, objetivou-se identificar micro-organismos presentes no leite de tanques resfriadores, na região sul do Rio Grande do Sul, e estabelecer uma correlação entre o manejo dos animais e sua presença no tanque. Foram coletadas amostras de leite em propriedades de seis municípios e realizadas análises microbiológicas para identificação microbiana. As médias das contagens foram: Staphylococcus sp. 5,32x106 UFC/mL, S. aureus 1,33x105 UFC/mL, enterobactérias 1,82x107 UFC/ mL. Houve presença de Escherichia coli (27,8% das propriedades), Streptococcus agalactiae (6,2%), S. dysgalactiae (37,2%), S. uberis (16,8%), Candida sp. (15,7%), Aspergillus sp. (5,8%), Trichosporum sp. (3,6%) e Cryptococcus sp. (1,5%). Identificou-se uma Odds Ratio de 3,2 para S. agalactiae com relação à ordenha manual e de 3,1 quando um único pano era usado para secagem dos tetos. Para S. dysgalactiae houve 55,8% de probabilidade da ocorrência em caso de não secagem dos tetos. Para S. bovis, uma Odds Ratio de 2,8 em propriedades que ordenham seus animais em estábulos de madeira. Houve aumento significativo (p=0,003) na contagem de células somáticas (CCS) de propriedades que realizam ordenha manual em relação àquelas mecanizadas. A ordenha manual aumentou as contagens deS. aureus (p=0,04). A realização de pré-dipping contribuiu para a redução da contagem de Staphylococcussp. e houve diferença significativa em relação ao grupo que não realizava esta prática (p=0,04). Conclui-seque as técnicas de manejo mais precárias influenciam negativamente na qualidade microbiológica do leite,aumentando os riscos de ocorrência de agentes infecciosos e elevando as contagens de micro-organismos.

Handling milking as a risk factor in the occurrence of microorganisms in raw milk / Manejo de ordenha como fator de risco na ocorrência de microorganismos em leite cru

Milk is naturally a good provider of a whole range of nutrients, however an inadequate milking may significantly interfere on its nutritional and microbiological quality. The main purpose of this study was to isolate and identify microorganisms from bulk tanks of southern Rio Grande do Sul state, Brazil and establish a correlation between animal management and presence of pathogens in the milk. To this end, raw milk samples were collected from different dairy herds and submitted to microbiological analyses. Mean bacterial counts were Staphylococcus sp. (5,32x106 CFU/mL), S. aureus (1,33x105 CFU/mL) and enterobacteria (1,82x107 CFU/mL). The major pathogens isolated and their respective frequency were Escherichia coli (27.8%), Streptococcus agalactiae (6.2%), S. dysgalactiae (37.2%), S. uberis (16.8%), Candida sp. (15.7%), Aspergillus sp. (5.8%), Trichosporum sp. (3.6%) and Cryptococcus sp. (1.5%). In addition, it was identified an Odds Ratio of 3.2 for S. agalactiae regarding manual milking and 3.1 when a single cloth towel was used for drying the udder. For S. bovis the Odds Ratio was 2.8 in properties milking their animals in stalls wood. Somatic cell count (SCC) was significantly higher (p=0,003) in milk samples manually extracted in comparison with machine milking. Likewise, manual milking resulted in the increase in S. aureus counts (p=0.04). Pre-dipping practice have contributed fora significant reduction (p=0.04) in the Staphylococcus sp. counts. Taken together, our results show thatthe adoption of poor management practices can negatively interfere in the microbiological quality ofmilk increasing the risks of occurrence of pathogens and their counts.(AU)

O leite é um alimento natural e rico em nutrientes, porém a forma como muitas vezes é obtido interfere na sua qualidade microbiológica e nutricional. E a qualidade dos produtos é uma exigência cada vez maior do mercado consumidor. Assim, objetivou-se identificar micro-organismos presentes no leite de tanques resfriadores, na região sul do Rio Grande do Sul, e estabelecer uma correlação entre o manejo dos animais e sua presença no tanque. Foram coletadas amostras de leite em propriedades de seis municípios e realizadas análises microbiológicas para identificação microbiana. As médias das contagens foram: Staphylococcus sp. 5,32x106 UFC/mL, S. aureus 1,33x105 UFC/mL, enterobactérias 1,82x107 UFC/ mL. Houve presença de Escherichia coli (27,8% das propriedades), Streptococcus agalactiae (6,2%), S. dysgalactiae (37,2%), S. uberis (16,8%), Candida sp. (15,7%), Aspergillus sp. (5,8%), Trichosporum sp. (3,6%) e Cryptococcus sp. (1,5%). Identificou-se uma Odds Ratio de 3,2 para S. agalactiae com relação à ordenha manual e de 3,1 quando um único pano era usado para secagem dos tetos. Para S. dysgalactiae houve 55,8% de probabilidade da ocorrência em caso de não secagem dos tetos. Para S. bovis, uma Odds Ratio de 2,8 em propriedades que ordenham seus animais em estábulos de madeira. Houve aumento significativo (p=0,003) na contagem de células somáticas (CCS) de propriedades que realizam ordenha manual em relação àquelas mecanizadas. A ordenha manual aumentou as contagens deS. aureus (p=0,04). A realização de pré-dipping contribuiu para a redução da contagem de Staphylococcussp. e houve diferença significativa em relação ao grupo que não realizava esta prática (p=0,04). Conclui-seque as técnicas de manejo mais precárias influenciam negativamente na qualidade microbiológica do leite,aumentando os riscos de ocorrência de agentes infecciosos e elevando as contagens de micro-organismos.(AU)

CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS E MICROBIOLÓGICAS DE CÃES EM SEPSE EM UM HOSPITAL ESCOLA DO NORTE DO PARANÁ

A sepse é uma causa importante de mortalidade no homem e em diversas espécies, mas existem poucos estudos que avaliem sua ocorrência natural em cães, com base no segundo consenso de classificação dessa afecção. Assim, os objetivos do presente estudo foram aplicar esse instrumento de avaliação em pacientes caninos com suspeita de infecção e/ou Síndrome da Resposta Inflamatória Sistêmica e/ou disfunção orgânica, classificá-los em sepse, sepse grave ou choque séptico, e identificar os agentes infecciosos bem como seu perfil de resistência a antimicrobianos no foco de infecção, na corrente sanguínea e colonizando a mucosa retal. Dos 37/42 cães que se enquadraram nos critérios de sepse, 26 (70,2%) apresentaram pelo menos dois sinais de SIRS, e a sepse grave foi diagnosticada em 27 (73%) animais. As principais disfunções orgânicas verificadas foram a diminuição do nível de consciência 21/37 (56,8%), hiperlactatemia 19/37 (51,4%) e hipoalbuminemia 18/37 (48,6%). A presença de dois ou mais sinais de SIRS associadas com hipotensão e hipoalbuminemia estiveram relacionadas com mais da metade dos óbitos. O foco infeccioso mais frequente foi pele e partes moles 20/37 (54%) seguido por órgãos e cavidades 8/37 (21,6%). A taxa de sobrevivência foi de 56,7% a animais em choque séptico apresentaram maior mortalidade. Na hemocultura confirmou-se bacteremia em nove pacientes (24,3%), com predominância de microrganismos gram-positivos em 66,6% (Staphylococcus intermedius (grupo), Streptococcus spp.) e uma levedura (Candida glabrata). As bactérias mais frequentes no foco de infecção foram as gram-negativas (46,2%) principalmente, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa, com 19,5%, 14,6% e 12,1%, respectivamente. Da mesma forma, a maioria dos cães estava colonizado por bactérias gram-negativas como E.coli -ESBL (31,5%), K. pneumoniae-ESBL (15,7%) e P. aeruginosa (15,7%), sendo que a colonização de cães por bactérias ESBL foi associada ao óbito quando comparada com outros microrganismos. Foram também isolados da mucosa retal Enterococcus resistentes a vancomicina (VRE) de quatro cães. A maioria dos microrganismos foram resistentes aos antimicrobianos fluorquinolonas, sulfonamidas, tetraciclinas e cefalosporinas. Pode-se concluir que a frequência de sepse e mortalidade foi elevada entre os cães avaliados. A presença de dois ou mais sinais de SIRS, hipotensão e hipoalbuminemia foram bons preditores de óbito. Os microrganismos gram-negativos foram os mais frequentes, tanto nas infecções quanto nas colonizações, mas não nas hemoculturas, sendo que a maioria apresentava resistência à fluorquinolonas, sulfonamidas, tetraciclinas e cefalosporinas.

Sepsis is an important cause of mortality in man and several species, but there are few studies that evaluate its natural occurrence in dogs, based on the second classification consensus of this disease. Thus, the objectives of the present study were to apply this evaluation instrument in canine patients with suspected infection and / or Systemic Inflammatory Response Syndrome and / or organic dysfunction, to classify them in sepsis, severe sepsis or septic shock, and to identify the agents infectious as well as its profile of antimicrobial resistance in the focus of infection, in the bloodstream and colonizing the rectal mucosa. Of the 37/42 dogs that met the criteria for sepsis, 26 (70.2%) presented at least two signs of SIRS, and severe sepsis was diagnosed in 27 (73%) animals. The main organic dysfunctions were the decrease in the level of consciousness 21/37 (56.8%), hyperlactatemia 19/37 (51.4%) and hypoalbuminemia 18/37 (48.6%). The presence of two or more signs of SIRS associated with hypotension and hypoalbuminemia were related to more than half of the deaths. The most frequent infectious focus was skin and soft parts 20/37 (54%) followed by organs and cavities 8/37 (21.6%). The survival rate was 56.7% in the animals in septic shock showed higher mortality. In the blood culture, bacteremia was confirmed in nine patients (24.3%), with a predominance of gram-positive microorganisms in 66.6% (Staphylococcus intermedius (group), Streptococcus spp.) And a yeast (Candida glabrata). The most frequent bacteria in the focus of infection were gram-negative (46.2%), mainly Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa, with 19.5%, 14.6% and 12.1%, respectively. Likewise, most dogs were colonized by gram-negative bacteria such as E. coli-ESBL (31.5%), K. pneumoniae-ESBL (15.7%) and P. aeruginosa (15.7%), being that the colonization of dogs by ESBL bacteria was associated to death when compared to other microorganisms. Vancomycin resistant Enterococcus (VRE) strains were also isolated from four dogs. Most of the microorganisms were resistant to the antimicrobials fluoroquinolones, sulfonamides, tetracyclines and cephalosporins. It can be concluded that the frequency of sepsis and mortality was high among the evaluated dogs. The presence of two or more signs of SIRS, hypotension and hypoalbuminemia were good predictors of death. Gram-negative microorganisms were the most frequent in both infections and colonization, but not in blood cultures. Most of them had resistance to fluorquinolones, sulfonamides, tetracyclines and cephalosporins

ÓLEO ESSENCIAL DE ALHO, ISOTIOCIANATO DE ALILA E NISINA Z COMO CONSERVANTES NATURAIS EM LINGUIÇA MISTA FRESCAL

O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana sobre bactérias patogênicas e deteriorantes da associação de compostos naturais (óleo essencial de alho - OA, isotiocianato de alila - ITA e nisina Z pura - NI) in vitro e sua aplicação na estabilidade de linguiça mista frescal. Na avaliação in vitro foram determinadas a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM) dos compostos em combinação sobre E. coli O157:H7 e Lactobacillus plantarum. Para avaliação do efeito dos compostos naturais em linguiça foram produzidos 5 lotes divididos nos seguintes tratamentos: T1 = 20 mg/kg NI, T2 = 125 µL/kg OA + 62,5 µL/kg ITA + 20 mg/kg NI e T3 = 62,5 µL/kg OA + 125 µL/kg ITA + 20 mg/kg NI. Nesses tratamentos, as massas de linguiça foram inoculadas com E. coli O157:H7. Além desses, foram produzidos dois lotes controle, sendo um controle positivo (CP), inoculado apenas com E. coli O157:H7 e um controle negativo (CN), sem inoculação bacteriana. As linguiças foram armazenadas a 6ºC durante 20 dias e a cada 5 dias, amostras foram avaliadas quanto a parâmetros microbiológicos (contagem de E. coli O157:H7, E. coli autóctones, aeróbios psicrotróficos e bactérias lácticas) e físico-químicos (pH e cor). Posteriormente, o lote controle negativo e os tratamentos T2 e T3, sem a inoculação de E. coli O 157:H7 foram submetidos à avaliação sensorial de aceitabilidade. Os resultados foram analisados por ANOVA e teste de Tukey (P>0,05). Na associação in vitro de NI com AO e ITA verificou-se redução significativa de E. coli O157:H7 nas concentrações de 0,0125 µL/mL AO + 0,00625 µL/mL ITA + 0,24 mg/mL NI e de L. plantarum nas concentrações de 0,00625 µL/mL AO + 0,0125 µL/mL ITA + 0,24 mg/mL NI. Em linguiça, as reduções na contagem de E. coli O 157:H7, ao final da estocagem, nos T2 e T3 foram de 2,06 e 2,12 log UFC/g, respectivamente, em comparação ao CP. Para a contagem de E. coli autóctone verificou-se que os tratamentos T2 e T3 apresentaram reduções do patógeno a níveis indetectáveis a partir do 10º dia de armazenamento. Em relação à contagem de bactérias lácticas, todos os tratamentos (T1, T2 e T3) apresentaram redução significativa em comparação aos lotes controle (CP e CN), a partir do 5º dia de estocagem (P<0,05). Para os microrganismos psicrotróficos, nenhum dos tratamentos apresentou efeito inibitório significativo. Com relação à cor instrumental, verificaram-se menores valores de chroma (C*) para as linguiças dos T2 e T3 (P<0,05) ao final da estocagem. Contudo, as linguiças adicionadas de antimicrobianos (T1, T2 e T3) apresentaram menor descoloração (hue) e maior valor para cor vermelha (a*) em comparação aos lotes controle. As linguiças tratadas com a combinação dos antimicrobianos (T2 e T3) apresentaram menor pH em comparação aos controles. Quanto à análise sensorial, as linguiças adicionadas dos antimicrobianos naturais apresentaram diferença significativa para o controle para os atributos avaliados. Contudo, apresentaram índice de aceitabilidade acima de 70% para a maioria dos atributos. As combinações de óleos essenciais e nisina Z testadas foram eficientes para a redução significativa da população de E. coli O 157:H7 em linguiça mista frescal em comparação aos grupos controles. As combinações desses antimicrobianos também se mostraram efetivas em manter a estabilidade da linguiça mista frescal pelo controle do crescimento de bactérias lácticas deteriorantes e pela manutenção da cor vermelha e do pH das linguiças, apresentando-se sensorialmente aceitas pelos provadores.

The objective of the present study was to evaluate the antimicrobial activity of pathogenic and spoilage bacteria using the association of natural compounds (garlic essential oil - OA, allyl isothiocyanate - ITA and pure nisin Z - NI) in vitro and its application in stability of fresh sausage. In the evaluation in vitro were determined the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of the compounds in combination against E. coli O157: H7 and L. plantarum. To evaluate the effect of natural compounds in sausage, five lots were produced and divided into the following treatments: T1 = 20 mg/kg NI, T2 = 125 µL/kg OA + 62.5 µL/kg ITA + 20 mg/kg NI and T3 = 62.5 µL/kg OA + 125 µL/kg ITA + 20 mg/kg NI. In these treatments, sausage mixtures were inoculated with E. coli O157: H7. In addition, two control sausages were produced - a positive control (CP) inoculated only with E. coli O157: H7 and a negative control (CN) without bacterial inoculation. Sausages were stored at 6 °C for 20 days and samples were evaluated for microbiological (E. coli O157:H7, native E. col, aerobic psychrotrophic and lactic acid bacteria) and physico-chemical parameters (pH and color) every 5 days. Subsequently, the negative control, T2 and T3 without inoculation of E. coli O157:H7 were subjected to sensory evaluation acceptability. Results were analyzed by ANOVA and Tukey's test (P>0.05). In association of NI with AO and ITA, E. coli O157: H7 in vitro was significantly reduced at concentrations of 0.0125 µL/mL AO + 0.00625 µL/mL ITA + 0.24 mg/mL NI and L. plantarum at concentrations of 0.00625 µL / ml AO + 0.0125 µL / mL ITA + 0.24 mg/mL NI. E. coli O157:H7 reduction in sausage, at the end of storage was 2.06 and 2.12 log CFU/g on T2 and T3 when compared to CP. Native E. coli count on T2 and T3 showed undetectable reduction levels from the 10th day of storage. All treatments (T1, T2 and T3) showed significant reduction on lactic acid bacteria levels when compared to the control groups (CP and CN), from the 5th day of storage (P <0.05). None of the treatments had an effect on psychrotrophic bacteria. Smaller C * values for instrumental color were detected on sausages of T2 and T3 (P <0.05) at end of storage. However, the treatments (T1, T2 and T3) showed less discoloration (hue) and larger value for red color (a *) in comparison to the control groups. Sausages treated with combination of antimicrobials (T2 and T3) showed lower pH when compared to controls. On the sensory analysis, the natural antimicrobial added sausages showed a significant difference to the control for the evaluated attributes. However, they showed acceptability index above 70% for most of the attributes. The combinations of essential oils and nisin Z were efficient to reduce significantly the population of E. coli O157:H7 in fresh sausage compared to control groups. The combinations of these antimicrobials were also proven effective in maintaining the stability of the fresh sausage for controlling the growth of spoilage lactic acid bacteria and for maintaining the red color and the pH of the sausages, being wellaccepted by the panelists.

Fate of non O157 Shiga toxigenic Escherichia coli in composted cattle manure / Eliminação de Escherichia coli Shigatoxigênica não-O157 em compostagem de esterco bovino

To determine the fate of Shiga toxigenic Escherichia coli (STEC) non-O 157 in composted manure from naturally colonized cattle, fresh manure was obtained from three cows carrying non-O157 STEC strains possessing the stx2 gene. Two composting systems were used: a 0.6m deep cave opened in the soil and an one meter high solid manure heap in a pyramidal architecture. Every day, for the 10 first days, and every five days for a month, one manure sample from three different points in both systems was collected and cultured to determine the presence of E. coli and the presence of the stx 2 gene in the cells. The temperature was verified at each sampling. STEC non-O157 E. coli cells survived for 8, 25 and 30 days at 42, 40 and 38ºC, respectively, in the deep cave and 4, 4 and 7 days at 65, 58 and 52ºC, respectively, in the heap, during the composting manure. Temperature and indigenous microorganisms appear to contribute to pathogen disappearance in the composting system. It is concluded that both composting systems were efficient to eliminate STEC cells. Land application of composted manure should minimize environmental risk associated with the dissemination of the pathogen (AU)

Determinou-se o tempo necessário para a eliminação de Escherichia coli Shigatoxigênica (STEC) não-O157 em esterco bovino composto, obtido de fezes frescas de três vacas portadoras de cepas STEC não-O157 que apresentavam o gene stx 2. Foram utilizados dois sistemas de compostagem, o primeiro foi um buraco de 0,6m escavado no solo e o segundo um monte apresentando uma arquitetura piramidal com um metro de altura. Todos os dias, durante os primeiros 10 dias e a cada cinco dias durante um mês, uma amostra de três pontos diferentes dos dois sistemas de compostagem foram coletadas e semeadas para determinar a presença de E. coli e a presença do gene stx 2 nas células, sendo que em cada coleta a temperatura do sistema de compostagem foi determinada. Células de STEC não-O157 sobreviveram por 8, 25 e 30 dias nas temperaturas de 42, 40 e 38ºC, respectivamente, no sistema enterrado no solo, enquanto que no sistema de monte as células foram detectadas por 4, 4 e 7 dias em temperaturas de 65, 58 e 52ºC, respectivamente. A temperatura e os microrganismos presentes na microbiota do sistema de compostagem parecem ser os responsáveis pela eliminação do patógeno. Pode-se concluir que os dois sistemas de compostagem utilizados mostraram-se eficientes na eliminação de células de STEC. A aplicação de esterco após compostagem deve diminuir o risco de contaminação ambiental e a disseminação do patógeno (AU)

Enterobacteria isolation in broiler carcasses from commercial establishments in fortaleza, ceará state, brazil

ABSTRACT Processing of poultry products requires a severe microbiological quality control, considering they are one of the main sources of foodborne infections. The objective of this research was to perform the isolation of enterobacteria in broiler carcasses from commercial establishments in the Metropolitan Region of Fortaleza in Ceará State, Brazil. Broiler carcasses were collected and selected as fresh (n = 14), refrigerated (n = 18) and frozen (n = 19). Carcasses were submitted to a rinsing method, followed by pre-enrichment and enrichment with Rappaport-Vassiliadis and Selenite-Cystine, streaked on plates with Brilliant Green, MacConkey and Salmonella-Shigella agars, and to a presumptive biochemical identification. It was verified that all broiler carcasses categories presented enterobacteria contamination, with the following frequency of isolation: Proteus sp., 66.7%; Enterobacter sp., 15.7%; Citrobacter sp., 2%; Escherichia coli, 47.1%; Klebsiella sp., 11.8%; Shigella sp., 5.9%, and Salmonella sp. 11.8%. It was observed that no combination of culture media was able to detect all enterobacteria contamination in the broiler carcasses. Thus, it may be necessary the use of several combinations of culture media to determine the real microbiological quality of broiler carcasses.

RESUMO A carne de frango requer um rígido controle de qualidade microbiológica em seu processamento, uma vez que é uma das principais fontes de infecção alimentar para o homem. Desta forma, a presente pesquisa teve como objetivo realizar o isolamento de enterobactérias em carcaças de frango de corte obtidas em estabelecimentos comerciais na região metropolitana de Fortaleza no Estado do Ceará, Brasil. As carcaças foram coletadas e agrupadas em três categorias: frescas (n = 14), refrigeradas (n = 18) e congeladas (n = 19). As amostras foram submetidas a um método de enxaguadura, seguido por pré-eriquecimento e enriquecimento seletivo com os meios Rappaport-Vassiliadis e Selenito-Cistina, plaqueamento nos meios sólidos Verde Brilhante, MacConkey e Salmonella-Shigella e, posteriormente, a provas bioquímicas de identificação. Foram realizadas diversas combinações entre os meios para o processamento das amostras. Todas as categorias de carcaças apresentaram contaminação por enterobactérias, com as seguintes freqüências de isolamentos Proteus sp., 66,7%; Enterobacter sp., 15,7%; Citrobacter sp., 2%; Escherichia coli, 47,1%; Klebsiella sp., 11,8%; Shigella sp., 5,9% e Salmonella sp., 11,8%. Nenhuma combinação dos meios de cultura empregados foi capaz de isolar todas as contaminações por enterobactérias nas carcaças. Desta forma, é necessário o uso de várias combinações de meios de cultura para determinação real da qualidade microbiológica de carcaças de frango.

Isolamento e identificação de patógenos em leite cru produzido nas microrregiões do triângulo mineiro, mg

Na região do Triângulo Mineiro, MG, é comum o consumo de leite não pasteurizado, in natura. Este trabalho tevepor objetivo identificar bactérias presentes no leite cru dessa região e avaliar a resistência a antimicrobianos de cepas deEscherichia coli e de Salmonella sp. Foram coletadas 324 amostras de leite cru no período de outubro-novembro de 2001, na Cooperativa do Vale do Rio Grande em Uberaba, MG, e, após isolamento e caracterização, foram identificadas quatorze gêneros ou espécies de bactérias. Os principais gêneros ou espécies encontrados com maior freqüência foram Escherichia coli (21,6%), seguidas por Klebsiella sp (19,7%), Pseudomonas sp (15,7%), Shigella sp (10,8%), Enterobacter sp (9,5%), Serratia sp (8,9%), Escherichia fergusoni (4,9%), Salmonella sp (1,8) Proteus sp (1,8%), Arizona sp (1,8%), Providência sp (1,2%), Citrobacter sp (1,2%), Edwardsiella sp (0,9%) e Escherichia hermannii (0,6%). Os modelos de resistência às drogas antimicrobianas foram estudados em 70 cepas de Escherichia coli e seis cepas de Salmonella sp isoladas do leite cru. O teste de sensibilidade foi realizado pelo método de difusão em ágar com discos impregnados de antimicrobianos. Foram utilizadas as seguintes drogas: gentamicina, amicacina, sulfametoxazol+trimetoprima, ceftriaxona, aztreonama,ampicilina e cefalotina para as cepas de E. coli e crescentando cloranfenicol e ácido nalidíxico par

Avaliação de tratamento Homeopático em suínos infectados por Escherichia coli / Evaluation of homeopathic treatment in swine infected by Escherichia coli

Escherichia coli é o agente etiológico mais importante das diarréias neonatais em suínos, sendo a Enterotoxigênica (ETEC) a mais comumente isolada. Foram descritos cinco tipos principais de fímbrias: F4 (K88), F5 (K99), F6 (987P), F18 e F41 e enterotoxinas termolábeis (LT), termoestáveis (ST), e a toxina shiga-like ou verotoxina (Stx2) em isolados de origem suína envolvidas no processo de diarréia. A exigência do consumidor em busca de carnes sem resíduos químicos e a proibição do uso de antibióticos e quimioterápicos na produção de suínos, bem como o custo de tratamentos alopáticos, tem levado a suinocultura a procurar alternativas. O presente estudo foi desenvolvido em granjas de suínos no Estado de São Paulo e Mato Grosso, Brasil. Foram avaliados 157 leitões, e realizados 243 coletas de fezes. Coletas de fezes de 3 e 8 leitões com diarréia foram realizadas em cada granja, visando a pesquisa da presença de Escherichia coli para a preparação do medicamento Bioterápico. Concomitantemente uma anamnese detalhada foi feita para a escolha do medicamento homeopático ideal para cada granja (China off 30 CH, Phosphorus 30 CH e Pulsatilla 30 CH respectivamente). Formados 4 grupos de 12 leitões e suas respectivas mães (primíparas), os tratamentos foram simultâneos: controle (antimicrobiano empregado na granja), medicamento homeopático, Bioterápico de E.coli e medicamento homeopático associado com o respectivo Bioterápico. Os medicamentos foram feitos segundo a farmacotécnica homeopática brasileira. Foi realizada a pesquisa de fatores de virulência e enterotoxinas em 154 colônias de. Escherichia coli através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). No tratamento da diarréia os grupos tratados com medicamentos homeopáticos passaram de 58,3% de animais com diarréia para 5,5% ao final do tratamento, uma diferença estatisticamente significante (p< 0,05), e os grupos de medicamento e Bioterápico 30 CH associados também apresentaram significante redução de animais doentes (p< 0,05), pois passaram de 47,0% de animais com diarréia no inicio para 20,0% ao final. No ganho de peso os mesmos grupos obtiveram maiores ganhos, com resultados de forma estatisticamente significante (p< 0,05) em relação aos outros grupos. Nos animais com E.coli foram encontrados apenas o fator de virulência F41 em 10,4% dos animais e a enterotoxina Stb em 1,9% dos animais. Concluí-se que os medicamentos homeopáticos são uma alternativa eficiente para o uso em distúrbios entéricos em suínos, assim como para aumentar o ganho de peso, além de ser mais econômico

Escherichia coli is the most important aetiological agent in neonatal diarrhoea in swine, and Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is the most commonly isolated. Five main types of fimbriae were described: F4 (K88), F5 (K99), F6 (987P), F18 and F41 and thermolabile (LT) and thermostable enterotoxins (ST), and shiga-like toxin or verotoxin (Stx2) in isolates of swine origin, involved in the diarrhoea process. The consumer\'s demand for residues-free meat and the prohibition for the use of antibiotics and chemotherapy treatments in the swine production, as well as the cost of allopathic treatment have caused the pig farming to search for alternatives. This study been developed in swine farms in the states of São Paulo and Mato Grosso, Brazil. 157 piglets were studied and 243 feces collection were carried out. Feces collection from 3 to 8 piglets having diarrhoea were carried out in each swine farm, with the aim to research the presence of Escherichia coli and to prepare biotherapic medicines. Concurrently, a detailed anamnesis was made for choosing the ideal homeopathic medication for each swine farm (China off 30 CH, Phosphorus 30 CH and Pulsatilla 30 CH respectively). Four groups of 12 piglets and their respective primiparous mother pigs were formed, and the treatments happened simultaneously: control group (antimicrobial treatment, the same used in the swine farm), homeopathic medication, E. coli biotherapic and homeopathic medication associated to the respective biotherapic. The medications were made according to the Brazilian Homeopathic Pharmacopeia. The research of virulence factors and enterotoxins was carried out in 154 Escherichia coli colonies through Polymerase Chain Reaction - PCR. Regarding to the treatment of diarrhoea, the homeopathy treated groups passed from 58.3% of animals having diarrhoea to 5.5% at the end of the treatment (p<0.05); the groups treated with medication + biotherapic 30 CH associated also presented significance reduction of sick animals (p< 0.05), as they passed from 47.0% of animals having diarrhea to 20.0% at the end. The same groups got better weight gaining rates, with results statistically significant (p< 0.05), in relation to other groups. Only the F41 virulence factor was found in 10.4% of the studied animals. The enterotoxin Stb was found in only 1.9% of the animals. It is concluded that the homeopathic medications are an efficient alternative as for the use in enteric disorders in swine, as to increase the gain of weight, besides being more economical

ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE PATÓGENOS EM LEITE CRU PRODUZIDO NAS MICRORREGIÕES DO TRIÂNGULO MINEIRO, MG.

Na região do Triângulo Mineiro, MG, é comum o consumo de leite não pasteurizado, in natura. Este trabalho tevepor objetivo identificar bactérias presentes no leite cru dessa região e avaliar a resistência a antimicrobianos de cepas deEscherichia coli e de Salmonella sp. Foram coletadas 324 amostras de leite cru no período de outubro-novembro de 2001, na Cooperativa do Vale do Rio Grande em Uberaba, MG, e, após isolamento e caracterização, foram identificadas quatorze gêneros ou espécies de bactérias. Os principais gêneros ou espécies encontrados com maior freqüência foram Escherichia coli (21,6%), seguidas por Klebsiella sp (19,7%), Pseudomonas sp (15,7%), Shigella sp (10,8%), Enterobacter sp (9,5%), Serratia sp (8,9%), Escherichia fergusoni (4,9%), Salmonella sp (1,8) Proteus sp (1,8%), Arizona sp (1,8%), Providência sp (1,2%), Citrobacter sp (1,2%), Edwardsiella sp (0,9%) e Escherichia hermannii (0,6%). Os modelos de resistência às drogas antimicrobianas foram estudados em 70 cepas de Escherichia coli e seis cepas de Salmonella sp isoladas do leite cru. O teste de sensibilidade foi realizado pelo método de difusão em ágar com discos impregnados de antimicrobianos. Foram utilizadas as seguintes drogas: gentamicina, amicacina, sulfametoxazol+trimetoprima, ceftriaxona, aztreonama,ampicilina e cefalotina para as cepas de E. coli e crescentando cloranfenicol e ácido nalidíxico par

ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE PATÓGENOS EM LEITE CRU PRODUZIDO NAS MICRORREGIÕES DO TRIÂNGULO MINEIRO, MG.

Na região do Triângulo Mineiro, MG, é comum o consumo de leite não pasteurizado, in natura. Este trabalho tevepor objetivo identificar bactérias presentes no leite cru dessa região e avaliar a resistência a antimicrobianos de cepas deEscherichia coli e de Salmonella sp. Foram coletadas 324 amostras de leite cru no período de outubro-novembro de 2001, na Cooperativa do Vale do Rio Grande em Uberaba, MG, e, após isolamento e caracterização, foram identificadas quatorze gêneros ou espécies de bactérias. Os principais gêneros ou espécies encontrados com maior freqüência foram Escherichia coli (21,6%), seguidas por Klebsiella sp (19,7%), Pseudomonas sp (15,7%), Shigella sp (10,8%), Enterobacter sp (9,5%), Serratia sp (8,9%), Escherichia fergusoni (4,9%), Salmonella sp (1,8) Proteus sp (1,8%), Arizona sp (1,8%), Providência sp (1,2%), Citrobacter sp (1,2%), Edwardsiella sp (0,9%) e Escherichia hermannii (0,6%). Os modelos de resistência às drogas antimicrobianas foram estudados em 70 cepas de Escherichia coli e seis cepas de Salmonella sp isoladas do leite cru. O teste de sensibilidade foi realizado pelo método de difusão em ágar com discos impregnados de antimicrobianos. Foram utilizadas as seguintes drogas: gentamicina, amicacina, sulfametoxazol+trimetoprima, ceftriaxona, aztreonama,ampicilina e cefalotina para as cepas de E. coli e crescentando cloranfenicol e ácido nalidíxico par

Etiologic study of urinary tract infection in dogs / Estudo etiológico da infecção do trato urinário em cães

Urinary tract infections were documented in 51 dogs. Several factors such as etiologic agents, localization of the infection, predisposing factors, sex, age, and breed were considered. The diagnosis of urinary tract infection (UTI) was based on bacteriological investigation and it was considered positive when urine sample collected by catheterization contained more than 105 bacteria/ml. Mixed infection was found in 4 of the infected dogs, totallizing 55 isolates. Among them, Escherichia coli (35.3%) was the most frequently isolated, followed by Staphylococcus sp. (23.5%), Proteus mirabilis (15.7%), Streptococcus sp. (13.7%), Klebsiella sp. (9.8%). Pseudomonas aeruginosa (3.9%), Enterobacter cloacae (2.0%), Citrobacter freundii (2.0%) and Providencia rettgeri (2.0%). As to antimicrobial susceptibility, norfloxacin and gentamicin were successful for the treatment of gram-negative microorganisms, while the most effective drugs for gram-positive bacteria were cephalothin and nitrofurantoin. UTI was observed more frequently in Cocker Spaniel and German Shepherd; male dogs were more involved, and pyelonephritis was the predominant disease observed. Infection was seen in all ages, but the frequency was higher in middle aged dogs. Urolithiasis were observed as common predisposing or underlying factors to UTI being, cither Staphylococcus sp. or Proteus mirabilis isolated in those cases

Foram estudados 51 casos de infecção urinária, em cães, considerando-se diversos fatores, tais como: agente etiológico, localização da infecção, fatores predisponentes, sexo, idade e raça. O diagnóstico da infecção do trato urinário (ITU) foi baseado no exame bacteriológico, sendo considerado positivo quando a amostra de urina, colhida com auxílio de cateter, apresentava acima de 105 bactérias/ml. Dos animais examinados, quatro cães apresentaram infecção mista, totalizando 55 microorganismos isolados. Escherichia coli foi a mais freqüentemente isolada (35,3%), seguida de Staphylococcus sp (23,5%), Proteus mirabilis (15,7%), Streptococcus sp (13,7%), Klebsiella sp (9,8%), Pseudomonas aeruginosa (3,9%), Enterobacter cloacae (2.0%), Citrobacter freundii (2.0%) e Providencia rettgeri (2,0%). Quanto à sensibilidade dos germes isolados frente a diversos agentes antimicrobianos, a norfloxacina e a gentamicina mostraram-se eficazes no tratamento de microorganismos Gram-negativos, enquanto a cefalotina e a nitrofurantoina foram mais eficazes contra bactérias Gram-positivas. Os animais que apresentaram maior frequência de ITU pertenciam às raças Cocker Spaniel e Pastor Alemão, envolvendo mais machos do que fêmeas com predominância de pielonefrites. Embora as infecções urinárias tivessem sido observadas em todas as idades, houve um predomínio nos cães de média idade. Observou-se ainda que