Effects of 48-hour feed deprivation on acute-phase response in horses / Efeitos da privação alimentar de 48 horas na resposta de fase aguda em cavalos

The objective of this study was to evaluate the effect of feed restriction on acute-phase response in horses. Twenty horses were deprived of food for 48 h and others 12 animals (control) had free access to water and hay. They were closely monitored and examined, and blood samples were taken at the beginning (0) of the study and 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42 and 48 hours afterward. Data were submitted to two-way analysis of variance with repeated measures and statistical significance was P ≤ 0.05. The horses tolerated feed restriction without serious clinical complications. Feed restriction induced an increase in the acute-phase response by elevating serum concentrations of α2-macroglobulin (24-38 h), ceruloplasmin (36-48 h), α1-antitrypsin (30-48 h), α1-acid glycoprotein (42-48 h) and haptoglobin (42-48 h). Nutrient deprivation raised the levels of circulating cortisol, which acts on the innate immune system, which then induces the acute-phase response. In conclusion, food restriction is a physical stressor for horses, capable of inducing an acute-phase protein reaction, characterized by increased production of α2-macroglobulin, ceruloplasmin, α1- antitrypsin, α1-acid glycoprotein and haptoglobin.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da restrição alimentar na resposta de fase aguda em equinos. Vinte cavalos foram submetidos à restrição alimentar por 48 h enquanto outros 12 animais (controle) tiveram livre acesso à água e alimento. Os animais foram monitorados, examinados e amostras de sangue foram coletadas no início (0) do estudo e com 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42 e 48 horas de restrição alimentar. Os dados foram submetidos à análise de variância bidirecional com medidas repetidas e a significância estatística foi P ≤ 0,05. Os cavalos toleraram a restrição alimentar sem complicações clínicas relevantes. A restrição alimentar induziu uma resposta de fase aguda caracterizada pela elevação das concentrações séricas de α2-macroglobulina (24-38 h), ceruloplasmina (36-48 h), α1-antitripsina (30-48 h), α1-glicoproteína ácida (42-48 h) e haptoglobina (42-48 h). A privação de nutrientes eleva os níveis de cortisol circulante, que atua no sistema imunológico inato o qual, então induz a resposta de fase aguda. Em conclusão, a restrição alimentar é um fator estressor físico para equinos, capaz de induzir uma reação proteica de fase aguda, caracterizada pelo aumento na produção de α2-macroglobulina, ceruloplasmina, α1-antitripsina, α1-glicoproteína ácida e haptoglobina.

Acute phase protein and vitamin D concentration in dogs with multicentric lymphoma / Concentração de proteínas de fase aguda e vitamina D em cães com linfoma multicêntrico

This study aimed to evaluate the serum concentration of vitamin D (25-Hydroxyvitamin D) and acute phase proteins (APPs; alpha-1 acid glycoprotein, haptoglobin, transferrin, ceruloplasmin, albumin, IgA, IgG and alpha-1 - antitrypsin) as potential biomarkers for prognostic and therapy response in dogs with multicentric lymphoma submitted to the CHOP (Cyclophosphamide, Doxorubicin, Vincristine and Prednisone) chemotherapy protocol. Thirteen dogs with multicentric lymphoma classified as high grade by cytology were included in the treatment group (GL), while ten healthy dogs were included in the control group (GC). Serum was collected in the weeks T0, T5 and T10 of CHOP chemotherapy protocol, for the GL group, and in a single collection, for the GC group. All the collected samples were evaluated for the APPs and vitamin D concentrations through electrophoresis and chemiluminescence methods, respectively. Diagnostic and staging tests were performed for all the dogs in the GL group, and included cytopathology, histopathology and immunohistochemistry of the affected lymph node. Of these dogs, 9 achieved a complete response and 4 a partial response to the treatment. Data analysis was performed with the R software. The results demonstrated that serum concentrations of IgA, haptoglobin and α1-acid glycoprotein were significantly different between the groups and also between the different chemotherapy times analyzed (p<0.05), indicating that these proteins can be considered as sensitive biomarkers for lymphoma in dogs. Furthermore, the α1-acid glycoprotein showed prognostic value for the disease, with 63% specificity. However, vitamin D concentration was not correlated with prognosis of the dogs with lymphoma.

Objetivou-se caracterizar a concentração sérica da vitamina D e das PFAs (Proteínas de Fase Aguda) (alfa-1 glicoproteína ácida, haptoglobina, transferrina, ceruloplasmina, albumina, IgA, IgG e alfa-1 ­ antitripsina) em cães com linfoma multicêntrico, submetidos ao tratamento quimioterápico com protocolo CHOP (Ciclofosfamida, Doxorrubicina, Vincristina e Prednisona), determinando o valor prognóstico desses marcadores para a doença. Foram avaliadas as concentrações séricas das PFAs, através do método da eletroforese e as concentrações da vitamina D, através da quimioluminescência em dois grupos experimentais, um grupo de 13 cães com linfoma multicêntrico classificados como alto grau pela citologia (GL) durante as semanas T0, T5 e T10 do tratamento com protocolo quimioterápico antineoplásico e em um grupo de 10 animais saudáveis para compor o grupo controle (GC), em coleta única. Para isso, foi realizado o diagnóstico, estadiamento e avaliação de resposta terapêutica dos 13 pacientes com linfoma multicêntrico através de técnicas de citopatologia, histopatologia, imuno-histoquímica do linfonodo periférico acometido. Foi observado que 9 pacientes tiveram resposta completa e 4 pacientes tiveram resposta parcial ao tratamento. Os dados foram analisados através do software R. Os resultados indicam que as diferenças entre as variáveis IgA, haptoglobina e α1-glicoproteína ácida foram significativas entre os grupos, e entre os diferentes momentos da quimioterapia (p< 0,05), indicando que podem ser marcadores sensíveis ao linfoma em cães. A α1-glicoproteína ácida apresentou valor prognóstico para o linfoma, com 63% de especificidade. Porém a vitamina D não apresentou valor prognóstico para o linfoma multicêntrico em cães.

Hematologic response and serum and peritoneal fluid proteinogram of cattle affected by intestinal diseases and traumatic reticuloperitonitis / Resposta hematológica e proteinograma sérico e do líquido peritoneal de bovinos acometidos com enfermidades intestinais e reticuloperitonite traumática

This study aimed to evaluate the hematologic response and the serum and peritoneal fluid (PF) proteinogram of cattle affected by digestive diseases. Twenty-seven animals were distributed in two groups: GI (intestinal diseases) and GII (traumatic reticuloperitonitis, TRP). The animals were previously submitted to a physical exam. Subsequently, blood samples were collected to perform the complete blood count, determine the plasma protein and fibrinogen, and obtain the serum for proteinogram in polyacrylamide gel (SDS-PAGE). Simultaneously, PF was collected to perform physical and chemical evaluation and the electrophoretic profile (SDS-PAGE). ANOVA at the 5% probability level was used to compare the groups. The animals showed signs of apathy, dehydration, and gastrointestinal hypomotility in both groups. However, GI animals showed more significant clinical changes. The blood count of both groups (P > 0.05) showed leukocytosis due to neutrophilia and a regenerative left shift with hyperfibrinogenemia. The proteinogram of both body fluids allowed the identification of proteins albumin (ALB), transferrin (TRF), ceruloplasmin, haptoglobin, α1-acid glycoprotein (α1-AGP), MW 23000 Da, α1-antitrypsin, IgA, and IgG. The [PT] PF/[PT] blood serum ratio of each of the identified proteins increased, showing statistical differences between groups (P < 0.05) regarding PT, ALB, TRF, α1-AGP, and IgG values, with GI animals showing the highest ratio. Intestinal diseases and TRP triggered a systemic and local response characterized by clinical, hematological, and serum and PF proteinogram alterations. The proteins α1-GPA, haptoglobin, and TRF measured in PF were good inflammation biomarkers and useful as an auxiliary tool for the diagnosis and prognosis of digestive diseases in cattle.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta hematológica e o proteinograma sérico e do líquido peritoneal (LP) de bovinos acometidos com doenças digestivas. Foram avaliados 27 bovinos distribuídos em dois grupos, GI (enfermidades intestinais) e GII (reticuloperitonite traumática-RPT). Os animais foram previamente submetidos ao exame físico. Posteriormente foram colhidas amostras de sangue para realização do hemograma, determinação plasmática da proteína e do fibrinogênio e obtenção do soro para realização do proteinograma em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Simultaneamente foi colhido o LP para avaliação física e química, assim como a realização do perfil eletroforético (SDS-PAGE). Empregou-se a análise de variância ao nível de 5% de probabilidade visando à comparação entre os grupos. Em ambos os grupos os animais demonstraram sinais de apatia, desidratação e hipomotilidade gastrointestinal, no entanto, os animais do GI apresentaram alterações clínicas mais expressivas. No hemograma observou-se em ambos os grupos (P > 0,05) leucocitose por neutrofilia e desvio à esquerda regenerativo com hiperfibrinogenia. O proteinograma de ambos os fluidos corpóreos permitiu a identificação das proteínas albumina (ALB), transferrina (TRF), ceruloplasmina, haptoglobina, α-1 glicoproteína ácida (α1-GPA), PM 23.000 Da, α-1 anti-tripsina, IgA e IgG. Os valores da relação [PT] LP / [PT] soro sanguíneo de cada uma das proteínas identificadas demonstrou elevação dos mesmos, bem como diferença estatística entre grupos (P < 0,05) nos valores da PT, ALB, TRF, α1-GPA e IgG, nos quais a relação foi mais elevada nos animais do GI. As enfermidades intestinais e a RPT desencadearam resposta sistêmica e local caracterizada pelas alterações clínicas, hematológicas, e do proteinograma sérico e do LP. A α1-GPA, a haptoglobina e a TRF, mensuradas no LP se mostraram bons biomarcadores de inflamação, sendo úteis como recurso auxiliar de diagnóstico e prognóstico das doenças digestivas dos bovinos.(AU)

Acute-phase protein concentration in bronchoalveolar lavage fluid from healthy horses / Proteínas de fase aguda do lavado broncoalveolar de equinos hígidos

Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was analyzed to obtain information on leakage of acute-phase proteins from the blood into the respiratory lumen and about local synthesis. Ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitripsin, immunoglobulin G heavy, immunoglobulin G light, immunoglobulin A, haptoglobin, acidic glycoprotein, and P23 were measured in BALF from 30 horses without inflammatory disease by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In serum, the same proteins were identified except for α1-antitrypsin. In conclusion, this study demonstrated that polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) can be used for the determination of acute-phase proteins in BALF samples from horses. In healthy horses, the values are very low, but they can be compared with reference values to assist in the diagnosis of animals with respiratory diseases.(AU)

O líquido obtido através da lavagem broncoalveolar (LBA) foi analisado para obter informações sobre as proteínas da fase aguda. Ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, imunoglobulina G pesada, imunoglobulina G leve, imunoglobulina A, haptoglobina, glicoproteína ácida e P23 foram medidas nos LBA de 30 cavalos sem doença inflamatória por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE). No soro, as mesmas proteínas foram identificadas, exceto a α1-antitripsina. Em conclusão, este estudo demonstra que a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) pode ser usada para a determinação de proteínas de fase aguda em amostras de LBA em cavalos. Em cavalos saudáveis, os valores são muito baixos, no entanto, podem ser comparados e auxiliar no diagnóstico de animais com doenças respiratórias.(AU)

Acute-phase protein concentration in bronchoalveolar lavage fluid from healthy horses / Proteínas de fase aguda do lavado broncoalveolar de equinos hígidos

Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was analyzed to obtain information on leakage of acute-phase proteins from the blood into the respiratory lumen and about local synthesis. Ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitripsin, immunoglobulin G heavy, immunoglobulin G light, immunoglobulin A, haptoglobin, acidic glycoprotein, and P23 were measured in BALF from 30 horses without inflammatory disease by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In serum, the same proteins were identified except for α1-antitrypsin. In conclusion, this study demonstrated that polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) can be used for the determination of acute-phase proteins in BALF samples from horses. In healthy horses, the values are very low, but they can be compared with reference values to assist in the diagnosis of animals with respiratory diseases.(AU)

O líquido obtido através da lavagem broncoalveolar (LBA) foi analisado para obter informações sobre as proteínas da fase aguda. Ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, imunoglobulina G pesada, imunoglobulina G leve, imunoglobulina A, haptoglobina, glicoproteína ácida e P23 foram medidas nos LBA de 30 cavalos sem doença inflamatória por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE). No soro, as mesmas proteínas foram identificadas, exceto a α1-antitripsina. Em conclusão, este estudo demonstra que a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) pode ser usada para a determinação de proteínas de fase aguda em amostras de LBA em cavalos. Em cavalos saudáveis, os valores são muito baixos, no entanto, podem ser comparados e auxiliar no diagnóstico de animais com doenças respiratórias.(AU)

Concentrations of acute-phase proteins and immunoglobulins in serum and synovial fluid in clinically healthy heifers and steers / Concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas no soro e no líquido sinovial de bovinos clinicamente saudáveis

The aim of the study was to determine the concentration pattern of intra-articular acute phase proteins (APPs) and immunoglobulins in healthy crossbred cattle. Synovial fluid (SF) samples were collected from the radiocarpal joint of 25 heifers and 25 steers. Concentrations of APPs were measured by SDS-PAGE. The results were submitted to analysis of variance using the SAS statistical program, and means were compared by the Student-Newman-Keuls test (P<0.05). Thirty-seven proteins with molecular weights ranging from 7 to 37kDa were identified in SF of all animals. Eight were nominally identified with immunoglobulin A (IgA) and G (IgG), ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), albumin (Ab), α1-antitripsin (AAT), α1-acid glycoprotein (AGP), and haptoglobin (Hp). The α1-antitripsin was only identified in the Sf of the heifers. The SF values of Cp, Hp, AGP and IgA were significantly higher in heifers than in steers. In sera, 34 proteins with molecular weights between 7 and 244kDa were identified in heifers and steers. Similar proteins were nominally identified in the sera, however the α1-antitrypsin was identified only in SF. The serum values Tf, AGP and IgG were significantly higher in heifers compared with steers. In conclusion, the physiological acute-phase proteins concentrations in synovial fluid of healthy ruminants can be useful in the interpretation of samples from animals with joint diseases. The SF electrophoretic profile of healthy ruminants differs depending on gender. Similar proteins were nominally identified in the sera, but only the SF of α1-antitrypsin.(AU)

O objetivo do estudo foi determinar o padrão de concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas intra-articulares (APPs) em bovinos mestiços saudáveis. As amostras de fluido sinovial (SF) foram coletadas da articulação radiocárpica de 25 novilhas e 25 novilhos. As concentrações de APPs foram mensuradas por SDS-PAGE. Os resultados foram submetidos à análise de variância usando o programa estatístico SAS, e os meios foram comparados pelo teste Student-Newman-Keuls (P<0,05). Trinta e sete proteínas com pesos moleculares variando de 7 a 37kDa foram identificadas no SF de todos os animais. Oito foram nominalmente identificadas como imunoglobulina A (IgA) e G (IgG), ceruloplasmina (Cp), transferrina (Tf), albumina (Ab), a1-antitripsina (AAT), glicoproteína a1-ácido (AGP) e haptoglobina (Hp). A α1-antitripsina foi identificada apenas no SF das novilhas. Os valores de Cp, Hp, AGP e IgA no SF foram significativamente maiores em novilhas do que em novilhos. No soro, 34 proteínas com pesos moleculares entre 7 e 244kDa foram identificadas nas novilhas e novilhos. Proteínas similares foram identificadas nos soros, mas apenas o SF das novilhas apresentou a α1-antitripsina. Os valores séricos de Tf, AGP e IgG foram significativamente maiores em novilhas em relação aos novilhos. Conclui-se que a mensuração das concentrações das proteínas da fase aguda no líquido sinovial de animais saudáveis pode ser útil na avaliação de amostras oriundas de bovinos com afecções articulares. O perfil eletroforético do SF de ruminantes saudáveis difere em função do gênero e as diferenças devem ser levadas em consideração na interpretação dos achados.(AU)

Concentrations of acute-phase proteins and immunoglobulins in serum and synovial fluid in clinically healthy heifers and steers / Concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas no soro e no líquido sinovial de bovinos clinicamente saudáveis

The aim of the study was to determine the concentration pattern of intra-articular acute phase proteins (APPs) and immunoglobulins in healthy crossbred cattle. Synovial fluid (SF) samples were collected from the radiocarpal joint of 25 heifers and 25 steers. Concentrations of APPs were measured by SDS-PAGE. The results were submitted to analysis of variance using the SAS statistical program, and means were compared by the Student-Newman-Keuls test (P<0.05). Thirty-seven proteins with molecular weights ranging from 7 to 37kDa were identified in SF of all animals. Eight were nominally identified with immunoglobulin A (IgA) and G (IgG), ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), albumin (Ab), α1-antitripsin (AAT), α1-acid glycoprotein (AGP), and haptoglobin (Hp). The α1-antitripsin was only identified in the Sf of the heifers. The SF values of Cp, Hp, AGP and IgA were significantly higher in heifers than in steers. In sera, 34 proteins with molecular weights between 7 and 244kDa were identified in heifers and steers. Similar proteins were nominally identified in the sera, however the α1-antitrypsin was identified only in SF. The serum values Tf, AGP and IgG were significantly higher in heifers compared with steers. In conclusion, the physiological acute-phase proteins concentrations in synovial fluid of healthy ruminants can be useful in the interpretation of samples from animals with joint diseases. The SF electrophoretic profile of healthy ruminants differs depending on gender. Similar proteins were nominally identified in the sera, but only the SF of α1-antitrypsin.(AU)

O objetivo do estudo foi determinar o padrão de concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas intra-articulares (APPs) em bovinos mestiços saudáveis. As amostras de fluido sinovial (SF) foram coletadas da articulação radiocárpica de 25 novilhas e 25 novilhos. As concentrações de APPs foram mensuradas por SDS-PAGE. Os resultados foram submetidos à análise de variância usando o programa estatístico SAS, e os meios foram comparados pelo teste Student-Newman-Keuls (P<0,05). Trinta e sete proteínas com pesos moleculares variando de 7 a 37kDa foram identificadas no SF de todos os animais. Oito foram nominalmente identificadas como imunoglobulina A (IgA) e G (IgG), ceruloplasmina (Cp), transferrina (Tf), albumina (Ab), a1-antitripsina (AAT), glicoproteína a1-ácido (AGP) e haptoglobina (Hp). A α1-antitripsina foi identificada apenas no SF das novilhas. Os valores de Cp, Hp, AGP e IgA no SF foram significativamente maiores em novilhas do que em novilhos. No soro, 34 proteínas com pesos moleculares entre 7 e 244kDa foram identificadas nas novilhas e novilhos. Proteínas similares foram identificadas nos soros, mas apenas o SF das novilhas apresentou a α1-antitripsina. Os valores séricos de Tf, AGP e IgG foram significativamente maiores em novilhas em relação aos novilhos. Conclui-se que a mensuração das concentrações das proteínas da fase aguda no líquido sinovial de animais saudáveis pode ser útil na avaliação de amostras oriundas de bovinos com afecções articulares. O perfil eletroforético do SF de ruminantes saudáveis difere em função do gênero e as diferenças devem ser levadas em consideração na interpretação dos achados.(AU)

The differential expression and snp analysis of the ovoinhibitor gene in the ovaries of laying duck breeds (Anas platyrhynchos)

Ovoinhibitor (OIH) is the main proteinase inhibitor in the egg white. In the present study, real-time quantitative PCR and Western-Blot were used to analyze different expression pattern of OIH in ovaries as a candidate gene of reproductive traits in Jingjiang ducks (JJ ducks) and Shaoxing ducks (SX ducks) during three laying stages. To study the polymorphism of the OIH gene in those two duck populations, we designed five pairs of primers to detect SNPs of exon 3-5, 5-6, 14-16 and intron 7, 9 of the OIH gene by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and DNA pool sequencing methods. The results showed that OIH expression increased during the laying stage in the ovaries of both duck breeds. The relative expression levels of OIH in the egg at hatch and 180days of age were lower in JJ ducks than in SX ducks, but higher in JJ ducks than SX ducks at 500 days of age. Only exon 5-6 locus had a novel SNP. One variation (389G>A) was detected in the two tested duck populations and it was associated with some laying traits, such as body weight of hatch, age at first egg, weight at first egg, egg number at 72weeks of age. The AG genotype was associated with inferior body weight of hatch and superior weight at first egg, age at first egg and egg number at 72weeks of age. Therefore, these results suggest that OIH may be a strong candidate gene related to some laying traits in ducks.(AU)

The differential expression and snp analysis of the ovoinhibitor gene in the ovaries of laying duck breeds (Anas platyrhynchos)

Ovoinhibitor (OIH) is the main proteinase inhibitor in the egg white. In the present study, real-time quantitative PCR and Western-Blot were used to analyze different expression pattern of OIH in ovaries as a candidate gene of reproductive traits in Jingjiang ducks (JJ ducks) and Shaoxing ducks (SX ducks) during three laying stages. To study the polymorphism of the OIH gene in those two duck populations, we designed five pairs of primers to detect SNPs of exon 3-5, 5-6, 14-16 and intron 7, 9 of the OIH gene by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and DNA pool sequencing methods. The results showed that OIH expression increased during the laying stage in the ovaries of both duck breeds. The relative expression levels of OIH in the egg at hatch and 180days of age were lower in JJ ducks than in SX ducks, but higher in JJ ducks than SX ducks at 500 days of age. Only exon 5-6 locus had a novel SNP. One variation (389G>A) was detected in the two tested duck populations and it was associated with some laying traits, such as body weight of hatch, age at first egg, weight at first egg, egg number at 72weeks of age. The AG genotype was associated with inferior body weight of hatch and superior weight at first egg, age at first egg and egg number at 72weeks of age. Therefore, these results suggest that OIH may be a strong candidate gene related to some laying traits in ducks.

Resposta inflamatória peritoneal de asininos (Equus asinus) submetidos à ovariectomia por laparotomia e laparoscopia / Peritoneal inflammatory response of the donkeys (Equus asinus) submitted ovariectomy by laparotomy and laparoscopy

Objetivou-se avaliar resposta inflamatória e concentrações de proteínas em líquido peritonealde asininas submetidas à ovariectomia por laparotomia e laparoscopia. Foram utilizadas 18 fêmeas adultas, pesando em média 100kg, as quais foram divididas em dois grupos, de nove animais cada: o grupo I, em que foram ovariectomizadas por laparotomia, e o grupo II por laparoscopia. Após as cirurgias, em ambos os grupos foram avaliadas as seguintes variáveis no líquido peritoneal: pH, densidade, número de hemácias, leucócitos e proteínas de fase aguda (fibrinogênio, haptoglobina, albumina, antitripsina, alfa-1 glicoproteína ácida, ceruloplasmina, transferrina, imunoglobulinas A e G). Todas as variáveis foram analisadas antes das cirurgias, 12, 24, 48, 72 horas, oito e 16 dias após os procedimentos cirúrgicos. O número de hemácias e leucócitos aumentou 24 horas depois das cirurgias nos dois grupos. Haptoglobina, alfa-1 glicoproteína ácida,albumina, transferrina, gamaglobulinas A, G e proteínas totais aumentaram nos dois grupos. As concentrações de ceruloplasmina não variaram enquanto a antitripsina não foi detectada no líquido peritoneal de asininos.Foi identificada uma proteína com23.000kD, que não tem denominação nem descrição no líquido peritoneal de asininos.(AU)

The aim of this study was to evaluate the inflammatory response and protein concentrations in the peritoneal fluid of donkeys submitted to laparotomy and laparoscopic ovariectomy. Eighteen adult females, weighing on average 100kg, were divided into two groups, of 09 animals each, where in group I, they were ovariectomized by laparotomy and group II by laparoscopy. Following the surgeries, the following variables were evaluated in the peritoneal fluid: pH, density, number of red cells, leukocytes and acute phase proteins (fibrinogen, haptoglobin, albumin, antitrypsin, alpha-1 acid glycoprotein, ceruloplasmin, transferrin, Immunoglobulins A and G). All variables were analyzed before the surgeries, 12, 24, 48, 72 hours, 8 and 16 days after the surgical procedures. The number of red cells and leukocytes increased 24 hours after the surgeries in both groups. Haptoglobin, alpha-1 acid glycoprotein, albumin, transferrin, gammaglobulins A and G, and total proteins increased in both groups. Concentrations of ceruloplasmin did not change while antitrypsin was not detected in the asinine peritoneal fluid. A protein of 23,000kD, which has no name or description in the peritoneal liquid of donkeys, has been identified.(AU)

Resposta inflamatória peritoneal de asininos (Equus asinus) submetidos à ovariectomia por laparotomia e laparoscopia / Peritoneal inflammatory response of the donkeys (Equus asinus) submitted ovariectomy by laparotomy and laparoscopy

Objetivou-se avaliar resposta inflamatória e concentrações de proteínas em líquido peritonealde asininas submetidas à ovariectomia por laparotomia e laparoscopia. Foram utilizadas 18 fêmeas adultas, pesando em média 100kg, as quais foram divididas em dois grupos, de nove animais cada: o grupo I, em que foram ovariectomizadas por laparotomia, e o grupo II por laparoscopia. Após as cirurgias, em ambos os grupos foram avaliadas as seguintes variáveis no líquido peritoneal: pH, densidade, número de hemácias, leucócitos e proteínas de fase aguda (fibrinogênio, haptoglobina, albumina, antitripsina, alfa-1 glicoproteína ácida, ceruloplasmina, transferrina, imunoglobulinas A e G). Todas as variáveis foram analisadas antes das cirurgias, 12, 24, 48, 72 horas, oito e 16 dias após os procedimentos cirúrgicos. O número de hemácias e leucócitos aumentou 24 horas depois das cirurgias nos dois grupos. Haptoglobina, alfa-1 glicoproteína ácida,albumina, transferrina, gamaglobulinas A, G e proteínas totais aumentaram nos dois grupos. As concentrações de ceruloplasmina não variaram enquanto a antitripsina não foi detectada no líquido peritoneal de asininos.Foi identificada uma proteína com23.000kD, que não tem denominação nem descrição no líquido peritoneal de asininos.(AU)

The aim of this study was to evaluate the inflammatory response and protein concentrations in the peritoneal fluid of donkeys submitted to laparotomy and laparoscopic ovariectomy. Eighteen adult females, weighing on average 100kg, were divided into two groups, of 09 animals each, where in group I, they were ovariectomized by laparotomy and group II by laparoscopy. Following the surgeries, the following variables were evaluated in the peritoneal fluid: pH, density, number of red cells, leukocytes and acute phase proteins (fibrinogen, haptoglobin, albumin, antitrypsin, alpha-1 acid glycoprotein, ceruloplasmin, transferrin, Immunoglobulins A and G). All variables were analyzed before the surgeries, 12, 24, 48, 72 hours, 8 and 16 days after the surgical procedures. The number of red cells and leukocytes increased 24 hours after the surgeries in both groups. Haptoglobin, alpha-1 acid glycoprotein, albumin, transferrin, gammaglobulins A and G, and total proteins increased in both groups. Concentrations of ceruloplasmin did not change while antitrypsin was not detected in the asinine peritoneal fluid. A protein of 23,000kD, which has no name or description in the peritoneal liquid of donkeys, has been identified.(AU)

Immunocytochemical characterization of primary cell culture in canine transmissible venereal tumor / Caracterização imunocitoquímica de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino

Immunochemistry with anti-vimentin, anti-lysozyme, anti-alpha 1 antitrypsin, anti-CD3 and anti-CD79α antibodies has been used for characterization of primary cell culture in the transmissible venereal tumor (TVT). Samples for primary cell culture and immunohistochemistry assays were taken from eight dogs with cytological and clinical diagnosis of TVT. To validate the immunochemical results in the primary cell culture of TVT, a chromosome count was performed. For the statistical analysis, the Mann-Whitney test with p<0.05 was used. TVT tissues and culture cells showed intense anti-vimentin immunoreactivity, lightly to moderate immunoreactivity for anti-lysozyme, and mild for anti-alpha-antitrypsin. No marking was achieved for CD3 and CD79α. All culture cells showed chromosomes variable number of 56 to 68. This is the first report on the use of immunocytochemical characterization in cell culture of TVT. Significant statistic difference between immunochemistry in tissue and culture cell was not established, what suggests that the use of this technique may provide greater certainty for the confirmation of tumors in the primary culture. This fact is particularly important because in vitro culture of tumor tissues has been increasingly used to provide quick access to drug efficacy and presents relevant information to identify potential response to anticancer medicine; so it is possible to understand the behavior of the tumor.(AU)

Os anticorpos anti-vimentina, anti-lisozima, anti-alfa 1 antitripsina, anti-CD3 e anti-CD79α foram empregados para a caracterização de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino (TVT). Amostras para cultura primária e imuno-histoquímica foram coletadas de oito cães com diagnóstico clínico e citológico de TVT. Para validar o resultado inmunocitoquímico nas culturas de TVT foi realizada a contagem de cromossomos. Para a análise estatística o teste de Mann-Whitney foi empregado a um nível de significância de p<0.05. As culturas e os tecidos de TVT apresentaram intensa reatividade para vimentina, moderada a leve para Lisozima, moderada para alfa-antitripsina e não houve marcação para CD3 e CD79α. Finalmente, todas as culturas apresentaram números de cromossomos que variaram de 56 a 68. Este é o primeiro relato que apresenta o uso da immunocitoquímica para a caracterização de culturas de TVT. Assim, e devido ao fato de se observar semelhança entre a imunomarcação em células e tecidos, sugere-se que o uso desta técnica possa auxiliar na confirmação de culturas primárias do tumor, fato muito importante porque a utilização da cultura do tumor pode permitir o acesso a informação relevante sobre resposta potencial a um tratamento e conhecimento do comportamento biológico do tumor.(AU)

Immunocytochemical characterization of primary cell culture in canine transmissible venereal tumor / Caracterização imunocitoquímica de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino

Immunochemistry with anti-vimentin, anti-lysozyme, anti-alpha 1 antitrypsin, anti-CD3 and anti-CD79 antibodies has been used for characterization of primary cell culture in the transmissible venereal tumor (TVT). Samples for primary cell culture and immunohistochemistry assays were taken from eight dogs with cytological and clinical diagnosis of TVT. To validate the immunochemical results in the primary cell culture of TVT, a chromosome count was performed. For the statistical analysis, the Mann-Whitney test with p 0.05 was used. TVT tissues and culture cells showed intense anti-vimentin immunoreactivity, lightly to moderate immunoreactivity for anti-lysozyme, and mild for anti-alpha-antitrypsin. No marking was achieved for CD3 and CD79. All culture cells showed chromosomes variable number of 56 to 68. This is the first report on the use of immunocytochemical characterization in cell culture of TVT. Significant statistic difference between immunochemistry in tissue and culture cell was not established, what suggests that the use of this technique may provide greater certainty for the confirmation of tumors in the primary culture. This fact is particularly important because in vitro culture of tumor tissues has been increasingly used to provide quick access to drug efficacy and presents relevant information to identify potential response to anticancer medicine; so it is possible to understand the behavior of the tumor.(AU)

Os anticorpos anti-vimentina, anti-lisozima, anti-alfa 1 antitripsina, anti-CD3 e anti-CD79 foram empregados para a caracterização de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino (TVT). Amostras para cultura primária e imuno-histoquímica foram coletadas de oito cães com diagnóstico clínico e citológico de TVT. Para validar o resultado inmunocitoquímico nas culturas de TVT foi realizada a contagem de cromossomos. Para a análise estatística o teste de Mann-Whitney foi empregado a um nível de significância de p 0.05. As culturas e os tecidos de TVT apresentaram intensa reatividade para vimentina, moderada a leve para Lisozima, moderada para alfa-antitripsina e não houve marcação para CD3 e CD79. Finalmente, todas as culturas apresentaram números de cromossomos que variaram de 56 a 68. Este é o primeiro relato que apresenta o uso da immunocitoquímica para a caracterização de culturas de TVT. Assim, e devido ao fato de se observar semelhança entre a imunomarcação em células e tecidos, sugere-se que o uso desta técnica possa auxiliar na confirmação de culturas primárias do tumor, fato muito importante porque a utilização da cultura do tumor pode permitir o acesso a informação relevante sobre resposta potencial a um tratamento e conhecimento do comportamento biológico do tumor.(AU)

AVALIAÇÃO PROGNÓSTICA DE PROTEÍNAS DE FASE AGUDA E DOSAGEM DE VITAMINA D DE CÃES COM LINFOMA MULTICÊNTRICO SUBMETIDOS AO TRATAMENTO QUIMIOTERÁPICO

O linfoma é um tumor linfóide que se origina principalmente em órgãos linfohematopoiéticos sólidos, porém também pode se originar em órgãos não hematopoiéticos, sendo considerado o tumor de origem hematopoiética mais importante em caninos. Os biomarcadores mais pesquisados em linfoma multicêntrico são as Proteínas de Fase Aguda,(PFA), que participam da resposta inflamatória inicial e são mediadas pela interleucina-1 (IL- 1), fator de necrose tumoral (FNT) e interleucina-6 (IL-6). Neste trabalho, objetivou-se determinar a concentração sérica da Vitamina D, (25- Hidroxivitamina D) e das PFAs (Alfa-1 glicoproteína ácida, haptoglobina, trasferrina, ceruloplasmina, albumina, IgA, IgG e Alfa-1 Antitripsina) como fatores prognósticos em cães com linfoma multicêntrico e monitorar a remissão em cães com linfoma em tratamento quimioterápico antineoplásico através das dosagens destes marcadores, realizadas em três momentos do tratamento (T0,T5 e T10). Foi feito o diagnóstico e estadiamento de 13 pacientes com linfoma multicêntrico através de citologia e histopatologia do linfonodo periférico afetado, obtido por biópsia excisional. Foram coletadas também, amostras de soro dos pacientes nas semanas T0, T5 e T10 do tratamento com protocolo quimioterápico antineoplásico CHOP e de 10 cães saudáveis para o grupo controle. As análises do proteinograma sérico foram feitas por eletroforese e a dosagem de vitamina D por quimioluminescência. Os dados obtidos foram analisados através do software R e para a comparação entre os grupos foi usado o teste ANOVA. O valor prognóstico das variáveis foi determinado através da curva ROC e posteriormente esses resultados foram comparados através da curva de sobrevivência de Kaplan- Meier. Os resultados indicam que a vitamina D foi insuficiente em 86% de todos os pacientes, sendo deficiente em 23,07% no grupo GL na semana T0, logo não houve diferença significativa entre os grupos, e não apresentou valor prognóstico para o linfoma multicêntricoem cães. As diferenças entre as variáveis: IGA, haptoglobina e 1-glicoproteína ácida foram significativas entre os grupos, e entre os diferentes momentos da quimioterapia (p< 0,05), indicando que podem ser marcadores sensíveis para o linfoma em cães. A 1-glicoproteína ácida demonstrou-se com valor prognóstico para o linfoma, com 63% de especificidade.

Lymphoma is a lymphoid tumor that originates mainly in solid lymphohematopoietic organs, but it can also originate in non-lymphohematopoietic organs and is considered the most important hematopoietic tumor in canines. The most researched biomarkers in multicentric lymphoma are Acute Phase Proteins (PFA), which participate in the initial inflammatory response and are mediated by interleukin-1 (IL-1), tumor necrosis factor (FNT) and interleukin-6 ( IL-6). In this work, the objective was to determine the serum concentration of Vitamin D, (25-Hydroxyvitamin D) and PFAs (Alpha-1 acid glycoprotein, haptoglobin, trasferrine, ceruloplasmin, albumin, IgA, IgG and Alpha-1 - Antitrypsin) as factors prognosis in dogs with multicentric lymphoma and to monitor remission in dogs with lymphoma undergoing antineoplastic chemotherapeutic treatment through the dosages of these markers, performed at three moments of treatment (T0, T5 and T10). The diagnosis and staging of 13 patients with multicentric lymphoma was made through cytology and histopathology of the affected peripheral lymph node, obtained by excisional biopsy. Serum samples were also collected from patients at weeks T0, T5 and T10 of treatment with CHOP antineoplastic chemotherapy protocol and from 10 healthy dogs for the control group. Serum proteinogram analyzes were performed by electrophoresis and vitamin D dosage by chemiluminescence. The data obtained were analyzed using the R software and the ANOVA test was used to compare the groups. The prognostic value of the variables was determined using the ROC curve and later these results were compared using the Kaplan-Meier survival curve. The results indicate that vitamin D was insufficient in 86% of all patients, being deficient in 23.07% in the GL group at week T0, so there was no significant difference between the groups, and did not show a prognostic value for multicentric lymphoma in dogs. The statistical differences between the variables: IGA, haptoglobin and 1-acid glycoprotein were significant between the groups, and between the different moments of chemotherapy (p<0.05), indicating that they may be sensitive markers for lymphoma in dogs. 1-acid glycoprotein proved to be of prognostic value for lymphoma, with 63% specificity.

INFLUÊNCIA DE DIFERENTES DISTÂNCIAS DO TRANSPORTE DE EQUINOS SOBRE PROTEÍNAS DE FASE AGUDA, ESTRESSE OXIDATIVO E COMPONENTES HEMATOLÓGICOS

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do transporte rodoviário de equinos sobre proteínas de fase aguda (PFA), estresse oxidativo e componentes hematológicos. Foram utilizados 11 equinos, mestiços Quarto de Milha, idade média de 8,5±1,4 anos e peso de 447,1±21,2 quilos. O experimento foi conduzido no município de Araruama, RJ, com amplitude térmica local variando de 15 a 34°C (21,4±5,4), umidade relativa do ar entre 58 e 93% (78±11,4). Os animais foram submetidos a duas viagens, a primeira de 50 km, que teve duração de uma hora e 40 minutos, com velocidade média de 30 km por hora. Após 21 dias, realizou-se a segunda jornada, desta vez, de 300 km com duração de cinco horas e 30 minutos e velocidade média de 54,5 km por hora. Para analisar as variáveis, foi coletado sangue em nove momentos em cada viagem: TAnVi (imediatamente antes do início da viagem), TTeVi (imediatamente após o término do percurso) e com seis (T6h), 24 (T24h), 48 (T48h), 72 (T72h), 96 (T96h), 120 (T120h) e 144 horas (T144h) após o término da viagem. Foram avaliados o hematócrito, proteínas totais, plaquetas, contagem global e diferencial de leucócitos; as proteínas de fase aguda: macroglobulina alfa 2 (ALF 2), ceruloplasmina (CP), transferrina (TRF), antitripsina alfa 1 (ALF 1), haptoglobina (HP), apolipoproteína alfa 1 (APO-A1), 1 glicoproteína ácida (GPA); marcadores de estresse oxidativo: óxido nítrico (NO), capacidade de redução férrica do plasma (FRAP), superóxido dismutase (SOD) e malondialdeído (MAD); atividade muscular: creatinoquinase (CK), aspartato aminotransferase (AST) e atividade metabólica glicose (GLI) e lactato (LAC). A estatística utilizou ANOVA, comparações pelo teste de Tukey e não paramétricos por Kruskal-Wallis com post hoc de Dunn, significância considerada quando p<0,05. Houve incremento de neutrófilos de TTeVi a T48h após os dois trajetos e dos leucócitos totais de TTeVi a T24h após os 300 km. A GLI não apresentou alteração entre as distâncias, porém apresentou depleção em TTeVi dos 300 km. Houve incremento do lactato após os 50 km em relação aos 300, bem como TTeVi dos 50 km. A AST apresentou incremento em TTeVi dos 300 km em relação aos 50. As PFAs permaneceram sem alteração em todos os momentos. O estresse oxidativo foi percebido com depleção do SOD e incremento do MAD nos 300 km em relação aos 50. O percurso de 300 km ocasionou alterações mais acentuadas nas enzimas musculares, marcadores metabólicos e estresse oxidativo, sinalizando que o t

The aim of this study was to evaluate the effect of road transport of horses on acute phase proteins (APP), oxidative stress and hematological components. Eleven horses, crossbred Quarter Horses, mean age of 8.5±1.4 years and weight of 447.1±21.2 kg were used. The experiment was carried out in the city of Araruama, RJ, with local thermal amplitude ranging from 15 to 34°C (21.4±5.4), relative humidity between 58 and 93% (78±11.4). The animals were submitted to two trips, the first of 50 km, which lasted one hour and 40 minutes, with an average speed of 30 km per hour. After 21 days, the second journey took place, this time of 300 km lasting five hours and 30 minutes and an average speed of 54.5 km per hour. To analyze the variables, blood was collected at nine moments in each trip: TAnVi (immediately before the beginning of the trip), TTeVi (immediately after the end of the trip) and with six (T6h), 24 (T24h), 48 (T48h), 72 (T72h), 96 (T96h), 120 (T120h) and 144 hours (T144h) after the end of the trip. Hematocrit, total proteins, platelets, global and differential leukocyte counts were evaluated; acute phase proteins: macroglobulin alpha 2 (ALF 2), ceruloplasmin (CP), transferrin (TRF), antitrypsin alpha 1 (ALF 1), haptoglobin (HP), apolipoprotein alpha 1 (APO-A1), 1 acid glycoprotein ( GPA); oxidative stress markers: nitric oxide (NO), ferric reducing ability of plasma (FRAP), superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MAD); muscle activity: creatine kinase (CK), aspartate aminotransferase (AST) and metabolic activity glucose (GLI) and lactate (LAC). The statistics used ANOVA, comparisons by Tukey's test and nonparametric comparisons by Kruskal-Wallis with Dunn's post hoc, significance considered when p<0.05. There was an increase in neutrophils from TAfTr to T48h after both paths and in total leukocytes from TAfTr to T24h after 300 km. The GLU also did not change between distances, but showed depletion in TAfTr of 300 km. Lactate increment after 50 km compared to 300, as well as TAfTr after 50 km. The AST showed an increase in TTeVi from 300 km compared to 50 km. The PFAs remained unchanged at all times. Oxidative stress was perceived with SOD depletion and MAD increase at 300 km compared to 50 km. The 300 km route caused more pronounced changes in muscle enzymes, metabolic markers and oxidative stress, indicating that long-distance transport causes important physiological variations.

Establishment of peritoneal liquid electrophoretogram from healthy horses and horses submitted to experimentally induced intestinal obstruction / Estabelecimento do eletroforetograma do líquido peritoneal de equinos hígidos e daqueles submetidos à obstrução intestinal experimental

The initial inflammatory stages of the colic syndrome include changes known as acute phase response. The aim of this study was to contribute with the establishment of reference values concerning the electrophoretogram of peritoneal liquid from healthy horses and horses submitted to experimentally induced intestinal obstruction. Twenty-one horses were allotted in four groups: duodenal obstruction (DG), ileum obstruction (IG), left-dorsal colon obstruction (MG), and control group (CG). Peritoneal liquid was sampled before obtruction (T0), with 3 hours of obstruction (T3) and 6, 30, 102 and 174 hours after desobstructing (T6, T30, T102 and T174, respectively). Total protein levels were determined by the biuret method and protein fractions were obtained by SDS-PAGE electrophoresis. The acute phase proteins (APP) identified were Immunoglobulin-A, ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitrypsin, heavy and light chains of immunoglobulin-G, haptoglobin, α1-acid glycoprotein and a still unnamed protein, which was called P24. There was no difference (P>0.3) in protein levels among groups, although a significant difference (P>0.05) was observed between distinct experimental moments in each group evidencing a higher response of the APP in the obstructed groups. The APP fractioning of the peritoneal liquid was standardized to establish a standard curve for healthy equines and those submitted to induced intestinal obstruction. Moreover, it was verified that the SDS-PAGE electrophoresis was sensitive and effective to help diagnose abdominal inflammatory processes.(AU)

Na cólica equina, os estágios iniciais da inflamação incluem alterações denominadas resposta de fase aguda. O objetivo deste estudo foi contribuir para o estabelecimento de valores de referência do proteinograma do líquido peritoneal de equinos hígidos e daqueles submetidos à obstrução intestinal experimental. Vinte e um animais foram distribuídos nos grupos: obstrução de duodeno (GD), íleo (GI), cólon dorsal esquerdo (GM) e controle instrumentado (GC). As colheitas das amostras de líquido peritoneal foram realizadas antes (T0), durante as obstruções (T3) e após as desobstruções (T6, T30, T102 e T174 horas). A proteína total foi determinada pelo método do biureto, e as frações proteicas obtidas por eletroforese em SDS-PAGE. Identificaram-se as proteínas de fase aguda (PFA): IgA, ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, cadeias pesada e leve de imunoglobulina-G, haptoglobina, alfa-1-glicoproteína ácida e uma proteína nominalmente não identificada, que foi chamada P24. Não houve diferença (P>0.3) nas concentrações proteicas entre os grupos, somente entre tempos dentro de cada grupo (P>0.05), evidenciando uma resposta maior das PFA dos grupos obstruídos. O fracionamento eletroforético das PFA, presentes no líquido peritoneal, foi padronizado de modo a estabelecer a curva-padrão para equinos hígidos e para aqueles submetidos à obstrução intestinal; ademais, verificou-se que o referido fracionamento proteico mostrou-se sensível e eficaz no auxílio ao diagnóstico de processos inflamatórios abdominais.(AU)

PROTEINOGRAMA SÉRICO DE EQUINOS SADIOS E ACOMETIDOS NATURALMENTE PELA SÍNDROME CÓLICA

A síndrome cólica é uma das maiores causadoras de óbito na espécie equina. A busca por marcadores precoces da inflamação, como as proteínas de fase aguda (PFAs), a fim de auxiliar no diagnóstico e prognóstico é de suma importância. O objetivo desse estudo foi avaliar e comparar o proteinograma sérico, identificando e quantificando as proteínas de fase aguda de equinos sadios e acometidos naturalmente pela síndrome cólica. Foram colhidas amostras de sangue em nove animais hígidos e 17 animais com cólica clínica (G1) ou cirúrgica (G2), no momento da chegada ao Hospital Veterinário (M0) e 24 (M1), 48 (M2) e 72 (M3) horas após o início do tratamento. As PFAs foram separadas por meio da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. A identificação das PFAs foi feita por meio da espectrometria de massa MALDI-TOF/TOF e os resultados obtidos foram confrontados com o banco de dados de proteínas dos táxons Equidae e Metazoa depositados no UNIPROT, usando o aplicativo MASCOT. Foram identificadas onze proteínas: 2macroglobulina (182 kD), ceruloplasmina (157 kD), transferrina (89 kD), albumina (66 kD), 1-antitripsina (60 kD), IgG de cadeia pesada (54 kD), haptoglobina (45 kD), 1-glicoproteína ácida (42 kD), IgG de cadeia leve (30 kD), apolipoproteína A1 (27 kD) e amilóide sérica A (14 kD), com elevação das concentrações da 2macroglobulina, ceruloplasmina (Cp) e amilóide sérica A (ASA) no grupo dos animais doentes (GD). A Cp apresentou elevação no M0 do G2 em relação ao G1 e grupo controle (GC). A ASA apresentou elevação com diferença estatística no M3 do G1 e G2 quando comparados ao GC. Na comparação feita entre os momentos dentro de cada grupo (G1 e G2), foi evidenciado o aumento da ASA no G2 com diferença estatística nos M1, M2 e M3. Apesar da ASA não apresentar diferença estatística nos momentos analisados dentro de cada grupo (M0-M3), manteve-se mais elevada no G2 em relação ao G1. O comportamento das PFAs encontradas nesse estudo foi variável. A elevação da concentração de algumas proteínas no GD indica que houve ix uma resposta das PFAs induzida pelo processo inflamatório. A Cp e a ASA foram favoráveis na avaliação da resposta de fase aguda em cavalos com cólica. A Cp foi um indicador de cólica com resolução cirúrgica e a ASA apresentou comportamento favorável para sua utilização como biomarcador para estabelecer prognóstico em cavalos com cólica. A mensuração seriada dessas proteínas foi útil na diferenciação do tratamento clínico ou cirúrgico e prognóstico de cavalos com esta enfermidade.

Colic syndrome is one of the major causes of death in the equine species. The search for early markers of inflammation, such as the acute phase proteins (APPs), in order to support in diagnosis and prognosis is a matter of great importance. The aim of this study was to evaluate and compare the serum proteinogram, identifying and quantifying the acute phase proteins of healthy horses and naturally affected by the colic syndrome. Blood samples were collected in nine healthy animals and 17 animals with clinical (G1) or surgical (G2) colic at moment of arrival at the Veterinary Hospital (M0) and 24 (M1), 48 (M2) and 72 (M3) hours after initiation of treatment. The APPs were separated by polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE) and their concentrations determined by computerized densitometry. The APPs were identified using MALDI-TOF / TOF mass spectrometry and the results obtained were compared to the Equidae and Metazoa taxa database deposited at UNIPROT using the MASCOT application. Eleven proteins were identified: 2macroglobulin (182 kD), ceruloplasmin (157 kD), transferrin (89 kD), albumin (66 kD), 1-antitrypsin (60 kD), heavy chain IgG (54 kD), haptoglobin (45 kD), 1-acid glycoprotein (42 kD), light chain IgG (30 kD), apolipoprotein A1 (27 kD) and serum amyloid A (14 kD), with increased concentrations of 2-macroglobulin, ceruloplasmin (Cp) and serum amyloid A (ASA) in the sick animals (GD) group. The Cp increased in M0 of G2 in relation to G1 and GC. The ASA increased with statistical difference in M3 of G1 and G2 when compared with the control (GC). In the comparison made between the moments within each group (G1 and G2), it was verified the increase of ASA in G2 with statistical difference in M1, M2 and M3. Although the ASA did not present statistical difference at the moments it was analyzed within each group (M0-M3), it remained higher in G2 than in G1. The behavior of APPs found in this study was variable. The increase of the concentration of some proteins in the GD indicates that there was a response of the PFAs induced by the inflammatory process. The Cp and ASA were favorable in the evaluation of xi the acute phase response in horses with colic. The Cp was an indicator of colic with surgical resolution and the ASA presented favorable behavior for its use as a biomarker to establish prognosis in horses with colic. The serial measurement of these proteins was useful in differentiating the clinical or surgical treatment and prognosis of horses with this disease.

Assessment and partial purification of serine protease inhibitors from Rhipicephalus (Boophilus) annulatus larvae / Avaliação e purificação parcial dos inibidores da serina protease de larvas do Rhipicephalus (Boophilus) annulatus

Ticks are rich sources of serine protease inhibitors, particularly those that prevent blood clotting and inflammatory responses during blood feeding. The tick Rhipicephalus (Boophlus) annulatus is an important ectoparasite of cattle. The aims of this study were to characterize and purify the serine protease inhibitors present in R. (B.) annulatus larval extract. The inhibitors were characterized by means of one and two-dimensional reverse zymography, and purified using affinity chromatography on a trypsin-Sepharose column. The analysis on one and two-dimensional reverse zymography of the larval extract showed trypsin inhibitory activity at between 13 and 40 kDa. Through non-reducing SDS-PAGE and reverse zymography for proteins purified by trypsin-Sepharose affinity chromatography, some protein bands with molecular weights between 13 and 34 kDa were detected. Western blotting showed that five protein bands at 48, 70, 110, 130 and 250 kDa reacted positively with immune serum, whereas there was no positive reaction in the range of 13-40 kDa. Serine protease inhibitors from R. (B.) annulatus have anti-trypsin activity similar to inhibitors belonging to several other hard tick species, thus suggesting that these proteins may be useful as targets in anti-tick vaccines.

Carrapatos são uma rica fonte de inibidores da serina protease, particularmente aqueles que previnem coagulação e respostas inflamatórias durante a alimentação com sangue. O carrapato Rhipicephalus (B.) annulatus é um ectoparasita importante de bovinos. O objetivo deste estudo foi caracterizar e purificar os inibidores da serina protease presentes no extrato de larva do R. (B.) annulatus. Os inibidores foram caracterizados através de zimografia reversa uni e bidimensional e purificados com cromatografia de afinidade em uma coluna de sepharose-tripsina. A análise do extrato de larva pela zimografia reversa uni e bidimensional mostrou atividade inibitória de tripsina entre 13 e 40 kDa. Através de SDS-PAGE e zimografia reversa para proteínas purificadas pela cromatografia por sepharose-tripsina, algumas bandas de proteínas com pesos moleculares entre 13 e 34 kDa foram detectadas. Western blotting mostrou que cinco bandas de proteínas a 48, 70, 110, 130 e 250 kDa reagiram positivamente com o soro imune, enquanto não houve reação positiva nas bandas 13-40 kDa. Inibidores da serina protease do R. (B.) annulatus têm atividade antitripsina semelhante àquelas dos inibidores de outras espécies de carrapatos duros, sugerindo, assim, que essas proteínas podem ser úteis como alvo de vacinas contra carrapatos.

Proteínas de fase aguda em cadelas com neoplasia mamária

Acute phase proteins (APPs) are serum proteins whose concentrations change after infectious and inflammatory disease, and cancer. The aims of this study were to evaluate changes in APPs concentration and to correlate these findings with histological classification and WBC in female dogs with mammary tumors. APPs were studied in 45 female dogs with mammary tumor distributed in the following groups: benign (n=13), malignant without tumor ulceration (n=24), and malignant with tumor ulceration (n=8). SDS-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) electrophoresis was used to measure APPs concentrations (albumin, ceruloplasmin, transferrin, haptoglobinHp, -1-acid glycoprotein and -1-antitrypsin) and ultrasensitive assay was used to evaluate serum C-reactive protein (CRP). Patients with malignant mammary neoplasia plus ulceration had significant increase of CRP and Hp, and had decreased levels of albumin (P 0.05, One-Way ANOVA and Dunn Test). Positive correlation among APPs and inflammatory leukocytosis were observed (P=0.002, Fisher test). No correlation was observed between APPs and histological subtype. In conclusion, combined changes of CRP, Hp and albumin may be used as a prediagnostic tool and prognosis in dogs with mammary tumors.

As proteínas de fase aguda (PFA) apresentam concentrações séricas alteradas mediante processos infecciosos, inflamatórios e neoplásicos. Objetivou-se com este trabalho avaliar as variações séricas das PFA em cadelas portadoras de neoplasia mamária, comparando com a avaliação histológica e leucograma. As PFA foram avaliadas em 45 cadelas com tumor de mama, distribuídas nos grupos neoplasia benigna (n=13), maligna não ulcerada (n=24) e maligna ulcerada (n=8). O grupo controle foi composto por 20 cadelas saudáveis. Foram realizados o teste de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) para identificar as PFA (albumina, ceruloplasmina, transferrina, haptoglobina Hp, -1 antitripsina e -1 glicoproteina ácida) e o teste ultrassensível para proteína C reativa (PCR). As pacientes com neoplasia mamária maligna ulcerada apresentaram elevações sérica para PCR e Hp e redução da albumina (P 0,05, One-Way ANOVA e Teste de Dunn). Nessas pacientes, foi observada correlação positiva entre o leucograma inflamatório e o aumento das PFA (P=0,002, Teste de Fisher) e não foram observadas correlações entre as PFA e os subtipos histológicos. Conclui-se que avaliações conjuntas da PCR, Hp e albumina podem ser utilizadas como ferramenta de auxílio diagnóstico e prognóstico em cadelas com neoplasia mamária.

Proteínas de fase aguda em cadelas com neoplasia mamária

Acute phase proteins (APPs) are serum proteins whose concentrations change after infectious and inflammatory disease, and cancer. The aims of this study were to evaluate changes in APPs concentration and to correlate these findings with histological classification and WBC in female dogs with mammary tumors. APPs were studied in 45 female dogs with mammary tumor distributed in the following groups: benign (n=13), malignant without tumor ulceration (n=24), and malignant with tumor ulceration (n=8). SDS-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) electrophoresis was used to measure APPs concentrations (albumin, ceruloplasmin, transferrin, haptoglobinHp, -1-acid glycoprotein and -1-antitrypsin) and ultrasensitive assay was used to evaluate serum C-reactive protein (CRP). Patients with malignant mammary neoplasia plus ulceration had significant increase of CRP and Hp, and had decreased levels of albumin (P 0.05, One-Way ANOVA and Dunn Test). Positive correlation among APPs and inflammatory leukocytosis were observed (P=0.002, Fisher test). No correlation was observed between APPs and histological subtype. In conclusion, combined changes of CRP, Hp and albumin may be used as a prediagnostic tool and prognosis in dogs with mammary tumors.

As proteínas de fase aguda (PFA) apresentam concentrações séricas alteradas mediante processos infecciosos, inflamatórios e neoplásicos. Objetivou-se com este trabalho avaliar as variações séricas das PFA em cadelas portadoras de neoplasia mamária, comparando com a avaliação histológica e leucograma. As PFA foram avaliadas em 45 cadelas com tumor de mama, distribuídas nos grupos neoplasia benigna (n=13), maligna não ulcerada (n=24) e maligna ulcerada (n=8). O grupo controle foi composto por 20 cadelas saudáveis. Foram realizados o teste de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) para identificar as PFA (albumina, ceruloplasmina, transferrina, haptoglobina Hp, -1 antitripsina e -1 glicoproteina ácida) e o teste ultrassensível para proteína C reativa (PCR). As pacientes com neoplasia mamária maligna ulcerada apresentaram elevações sérica para PCR e Hp e redução da albumina (P 0,05, One-Way ANOVA e Teste de Dunn). Nessas pacientes, foi observada correlação positiva entre o leucograma inflamatório e o aumento das PFA (P=0,002, Teste de Fisher) e não foram observadas correlações entre as PFA e os subtipos histológicos. Conclui-se que avaliações conjuntas da PCR, Hp e albumina podem ser utilizadas como ferramenta de auxílio diagnóstico e prognóstico em cadelas com neoplasia mamária.