Incidence and multiplex PCR based detection of trichothecene chemotypes of Fusarium culmorum isolates collected from freshly harvested Maize kernels in Southern India

Hundred Fusarium culmorum strains, isolated from freshly harvested maize grain samples from Southern parts of India, were incubated in czapek-dox medium and analyzed for trichothecene (DON/NIV) production. The mPCR assay was standardized targeting trichothecene metabolic pathway genes viz., Tri6, Tri7, Tri13 for detection of trichothecene (DON/NIV) chemotypes and rDNA gene for specific detection of F. culmorum species. Primers for targeted genes were designed and used to predict whether these isolates could produce deoxynivalenol/nivalenol, 94 isolates were able to produce DON/NIV by mPCR assay. Chemical analysis of DON/NIV was carried out for mPCR positive isolates by high performance-thin layer chromatography (HPTLC). To check the practical usefulness of developed mPCR assay, 150 field samples of maize were evaluated and results were compared with conventional HPTLC method. Out of 150 samples, 34% samples stayed as a positive for NIV contamination whereas 44% were found to have deoxynivalenol contamination. Moreover, mPCR results are equivocally matched with the HPTLC chemical analysis for field samples. Chemotyping of F. culmorum isolates were reported for the first time from India, and highlights the important potential of F. culmorum to contaminate maize with DON/NIV.(AU)

Emprego de casca de arroz como adsorvente para execução de técnica de MSPD para determinar aflatoxinas em cebolas / Use of rice husk as an adsorbent for performing MSPS technique for determining the aflatoxins occurrence in onion

Foi estudada a extração simultânea de aflatoxinas (AFLAs) B1, B2, G1 e G2 em cebolas por meio de técnica de dispersão da matriz em fase sólida (MSPD), utilizando-se a casca de arroz como adsorvente. A identificação e quantificação das aflatoxinas foram realizadas empregando-se cromatografia em camada delgada de alta eficiência (CCDAE) e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao detector de fluorescência (CLAE-FL). O melhor adsorvente foi constituído de mistura de casca de arroz: terra diatomácea (1:1) (p/p), empregado na proporção de 1:1 (p/p) com a massa de amostra e a mistura clorofórmio:metanol (5:25) (v/v) como eluente. A metodologia mostrou limites de detecção que variaram de 0,05 a 1 µg.kg-1, de exatidão entre 78 e 93%, e coeficientes de variação compreendidos entre 11 e 14%. Após a validação, a metodologia foi testada quanto à sua aplicabilidade para determinar a ocorrência das aflatoxinas em amostras de cebola, as quais foram classificadas segundo a norma do MAPA. A contaminação com aflatoxina foi verificada em 43% das amostras analisadas com teor máximo de 90µg.kg-1 de AFLAB2.(AU)

The simultaneous determination of aflatoxins (AFLA) B1, B2, G1 and G2 was investigated in onions by means of matrix solid-phase dispersion (MSPD) extraction methodology, and using rice husk as adsorbent element. The AFLA identification and quantification were carried out by using high efficiency thin layer chromatography (HPTLC) and high efficiency liquid chromatography coupled to a fluorescence detector (HPLC-FD). The best adsorbent was the compound constituted by the rice husk:celite mixture (1:1) in a 1:1 ratio with the mass of the sample, and employing the mixture chloroform:methanol (5:25) as eluent. The methodology showed the limit of detection ranging from 0.05 to 1 µg.kg-1, and of the accuracy from 78 to 93%; and variation coefficients ranged from 11 to 14%. After being validated, the methodology was tested on its applicability in determining the aflatoxins occurrence in onion samples, which were classified according to the standard MAPA. Aflatoxin contamination was found in 43% of analyzed samples with a maximum content of 90 µg.kg-1 of AFLAB2.(AU)

Determination of isoflavones in pharmaceutical formulations / Determinação de isoflavonas em formulações farmacêuticas

Phytoestrogens are natural compounds of plants with estrogenic activity. They are being widely investigated in the prevention of chronic coronary diseases, in prostate and breast cancer, in the reduction of osteoporosis risk and relief of menopause symptoms. Among phytoestrogens already in use are daidzein, genistein and glycitein and they are present in complex matrix such as phytopharmaceuticals, plant extracts, capsules and tablets. These preparations require development and validation of methodologies for quantitative determination of isoflavones. The proposed methodologies include high performance thin layer chromatography (HPTLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). The HPTLC coupled with densitometry can be used for quantitative analysis. The mobile phase constituted of ethyl acetate:hexane (8:2 v/v) was used to determine chromatographic profiles of isoflavone aglycones, daidzein, glycitein and genistein. The mobile phase constituted of ethyl acetate:toluene:formic acid (8:1:1 v/v/v) was used for determination of isoflavones glycosides and non-glycosides. For the quantitative determination of isoflavone glycosides with HPLC, an acid hydrolysis with 3M HCl and heating in water-bath for an hour was proposed as sample pretreatment step. The analytic determination of isoflavones daidzein, genistein, formononetin and biochanin A using HPLC was accomplished. The

Apresenta resumo em inglês.

Composição química de Baccharis dracunculifolia, fonte botânica das própolis dos estados de São Paulo e Minas Gerais

Propolis is a resinous hive product COLLected by honeybees from plant sources. The composition of the propolis depends upon the season, vegetation, and the area of COLLection. Phytochemical analyses of propolis produced from Baccharis dracunculifolia (alecrim-do-campo) in the states of São Paulo and Minas Gerais by africanized - were done by RP-HPTLC, RP-HPLC and GC-MS, and the absorption spectra was measured by UV-visible spectrophotometry. A distinctive characteristic of propolis and B. dracunculifolia was that both had a high proportion of the phenolic compounds artepillin C and others dihydrocinnamic acid derivatives. Based on phytochemical evidence, B. dracunculifolia was found to be the main source of propolis produced in the states of São Paulo and Minas Gerais.

A própolis é uma substância resinosa coletada pelas abelhas de diversas partes das plantas. Sua composição depende da época, vegetação e local de coleta. Análises fitoquímicas de própolis produzidas de Baccharis dracunculioflia (alecrim-do-campo) por abelhas Apis mellifera africanizada nos estados de São Paulo e Minas Gerais foram feitas por espectrofotometria na região U.V.-Visível, CCDAE-FR, CLAE-FR e CG-EM. Uma característica dos compostos fenólicos das própolis analisadas e da espécie vegetal de B. dracunculiofolia foi a alta proporção de artepilin C e outros derivados do ácido cinâmico. Com base nas evidências fitoquímicas, B. dracunculifolia foi identificada como a principal fonte vegetal das própolis produzidas nos estados de São Paulo e Minas Gerais.

Composição química de Baccharis dracunculifolia, fonte botânica das própolis dos estados de São Paulo e Minas Gerais

Propolis is a resinous hive product COLLected by honeybees from plant sources. The composition of the propolis depends upon the season, vegetation, and the area of COLLection. Phytochemical analyses of propolis produced from Baccharis dracunculifolia (alecrim-do-campo) in the states of São Paulo and Minas Gerais by africanized - were done by RP-HPTLC, RP-HPLC and GC-MS, and the absorption spectra was measured by UV-visible spectrophotometry. A distinctive characteristic of propolis and B. dracunculifolia was that both had a high proportion of the phenolic compounds artepillin C and others dihydrocinnamic acid derivatives. Based on phytochemical evidence, B. dracunculifolia was found to be the main source of propolis produced in the states of São Paulo and Minas Gerais.

A própolis é uma substância resinosa coletada pelas abelhas de diversas partes das plantas. Sua composição depende da época, vegetação e local de coleta. Análises fitoquímicas de própolis produzidas de Baccharis dracunculioflia (alecrim-do-campo) por abelhas Apis mellifera africanizada nos estados de São Paulo e Minas Gerais foram feitas por espectrofotometria na região U.V.-Visível, CCDAE-FR, CLAE-FR e CG-EM. Uma característica dos compostos fenólicos das própolis analisadas e da espécie vegetal de B. dracunculiofolia foi a alta proporção de artepilin C e outros derivados do ácido cinâmico. Com base nas evidências fitoquímicas, B. dracunculifolia foi identificada como a principal fonte vegetal das própolis produzidas nos estados de São Paulo e Minas Gerais.

Determination of isoflavones in pharmaceutical formulations / Determinação de isoflavonas em formulações farmacêuticas

Phytoestrogens are natural compounds of plants with estrogenic activity. They are being widely investigated in the prevention of chronic coronary diseases, in prostate and breast cancer, in the reduction of osteoporosis risk and relief of menopause symptoms. Among phytoestrogens already in use are daidzein, genistein and glycitein and they are present in complex matrix such as phytopharmaceuticals, plant extracts, capsules and tablets. These preparations require development and validation of methodologies for quantitative determination of isoflavones. The proposed methodologies include high performance thin layer chromatography (HPTLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). The HPTLC coupled with densitometry can be used for quantitative analysis. The mobile phase constituted of ethyl acetate:hexane (8:2 v/v) was used to determine chromatographic profiles of isoflavone aglycones, daidzein, glycitein and genistein. The mobile phase constituted of ethyl acetate:toluene:formic acid (8:1:1 v/v/v) was used for determination of isoflavones glycosides and non-glycosides. For the quantitative determination of isoflavone glycosides with HPLC, an acid hydrolysis with 3M HCl and heating in water-bath for an hour was proposed as sample pretreatment step. The analytic determination of isoflavones daidzein, genistein, formononetin and biochanin A using HPLC was accomplished. The

Apresenta resumo em inglês.

Altura do epitélio folicular da tireóide na triagem para detecção de resíduos de antitireoidianos em bovinos

The height of the follicular epithelium of the bovine thyroid gland was tested as a sorting method for antithyroid drug residues detection in 53 bovine thyroids. Five glands with residues, tested for high performance thin layer chromatography (HPTLC), were collected from five steers treated with oral suspension of methylthiouracil (MTU) for 20 days (5g/animal/day), interrupted five days before slaughter. The other glands without residues were collected from six experimental control animals and from 42 animals slaughtered in an industrial slagthterhouses of Minas Gerais (n=25) and Goiás States (n=17), Brazil. All positive glands were severely hyperplastic and the follicular epithelium height was statistically greater as compared with negative glands, although 42 negative thyroids showed also moderate hyperplasia. The typical individual responses of 47 hyperplasic glands and six normal glands determined a follicular epithelium height limit of 16 micrometers above which all glands should be considered suspect of containing residues and should be submitted to chemical analysis. The correlation between follicular epithelium height and other indirect traits used for residues detection was made. The follicular epithelium height was considered a good sorting method for the official control of antithyroid drug residues in meat.

A altura do epitélio folicular da tireóide, mensurada em secções histológicas coradas pela hematoxilina e eosina, foi testada como característica de triagem para a pesquisa química de resíduos de antitireoidianos em 53 bovinos. Cinco glândulas, contendo resíduos detectados por cromatografia de camada delgada de alta resolução (HPTLC), eram provenientes de cinco novilhos experimentalmente tratados com suspensão oral de metiltiouracil (5g/animal/dia), durante 20 dias, interrompido cinco dias antes do abate. As demais glândulas, sem resíduos detectados por HPTLC, provinham de seis controle experimentais que receberam apenas placebo e de 42 animais abatidos em matadouros industriais de Minas Gerais (n=25) e Goiás (n=17). Todas as glândulas positivas apresentaram hiperplasia intensa e a altura do epitélio folicular foi significativamente maior, embora as 42 glândulas negativas também se mostrassem moderadamente hiperplásicas. Com base nas respostas típicas individuais de 47 tireóides com bócio parenquimatoso e de seis histologicamente normais, ficou estabelecido o limite de 16mim para a altura do epitélio, acima do qual toda glândula deverá ser considerada suspeita e testada quimicamente. Foi determinada a correlação entre a altura do epitélio folicular e outras características indiretas de detecção de resíduos, concluindo-se que a altura do epitélio presta-se para a triagem de programas oficiais de controle de resíduos de drogas antitireoidianas na carne.

Própolis produzida no sul do Brasil, Argentina e Uruguai: evidências fitoquímicas de sua origem vegetal

Propolis is a resinous hive product collected by honeybees from plant source. The composition of the propolis depends upon the time, vegetation and the area of collection. Propolis produced by africanized Apis mellifera from south Brazil, Argentine and Uruguay have been investigated using chromatographic techniques. In accordance with results RP-HPTLC, RP-HPLC, and GC-MS, propolis from south Brazil were classified IN 5 groups. Based on chemical evidence Populus alba was shown to be the main propolis source of group 3 from south Brazil, Argentine and Uruguay.

A própolis é uma substância resinosa coletada pelas abelhas de diversas partes da planta. Sua composição depende da época, vegetação e área de coleta. Própolis produzida por abelhas Apis mellifera africanizada do sul do Brasil, Argentina e Uruguai foram investigadas por meio de técnicas cromatográficas. De acordo com os resultados obtidos por CCDAE-FR, CLAE-FR e CG-EM, as própolis do sul do Brasil foram classificadas em 5 grupos distintos. Com base nas evidências fitoquímicas, Populus alba foi identificada como a principal fonte da própolis do grupo 3 do sul do Brasil, Argentina e Uruguai.

Própolis produzida no sul do Brasil, Argentina e Uruguai: evidências fitoquímicas de sua origem vegetal

Propolis is a resinous hive product collected by honeybees from plant source. The composition of the propolis depends upon the time, vegetation and the area of collection. Propolis produced by africanized Apis mellifera from south Brazil, Argentine and Uruguay have been investigated using chromatographic techniques. In accordance with results RP-HPTLC, RP-HPLC, and GC-MS, propolis from south Brazil were classified IN 5 groups. Based on chemical evidence Populus alba was shown to be the main propolis source of group 3 from south Brazil, Argentine and Uruguay.

A própolis é uma substância resinosa coletada pelas abelhas de diversas partes da planta. Sua composição depende da época, vegetação e área de coleta. Própolis produzida por abelhas Apis mellifera africanizada do sul do Brasil, Argentina e Uruguai foram investigadas por meio de técnicas cromatográficas. De acordo com os resultados obtidos por CCDAE-FR, CLAE-FR e CG-EM, as própolis do sul do Brasil foram classificadas em 5 grupos distintos. Com base nas evidências fitoquímicas, Populus alba foi identificada como a principal fonte da própolis do grupo 3 do sul do Brasil, Argentina e Uruguai.

Resíduos de anabolizantes na produção animal: importância e métodos de detecção

With the development of the pharmaceutical industry, and consequently appearance of new substances which promote animal growth, the agricultural sector needs technologies more and more efficient and sensitive to detect possible residues left by this vast number of anabolic substances, mainly steroids with estrogenic, androgenic and progesterogenics activities. Such substances, when present in meat, fat, and eggs among others, can be detected and quantified by a series of methods, among the ones which we described the chromatographic methods, based mainly on gaseous chromatography coupled to the mass espectrometry (CG-MS), high performance liquid chromatography (HPLC), thin layer chromatography (HPTLC) and the immunological methods, as radioimmunoassay (RIA) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). These methods have as advantages the high number of samples that can be analyzed by period of time, toghether with high sensibility and accuracy to detect anabolic residues.

Com o desenvolvimento da indústria farmacêutica e o conseqüente surgimento de novas substâncias promotoras do crescimento animal, o setor agropecuário necessita de tecnologias cada vez mais eficientes e sensíveis para detectar possíveis resíduos deixados por este vasto número de substâncias anabolizantes, principalmente esteróides com atividades estrogênicas, androgênicas e progestogênicas. Tais substâncias, quando presentes na carne, gordura, ovos, entre outros, podem ser detectadas e quantificadas por uma série de métodos, dentre os quais, descrevemos os cromatográficos, baseados principalmente em cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (CG-EM), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), cromatografia em camada delgada de alta eficiência (CCDAE) e os métodos imunológicos, como radioomunoensaio (RIA) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Estes métodos têm como vantagens o elevado número de amostras que podem ser analisadas por período de tempo, aliadas à alta sensibilidade na detecção de resíduos.

Resíduos de anabolizantes na produção animal: importância e métodos de detecção

With the development of the pharmaceutical industry, and consequently appearance of new substances which promote animal growth, the agricultural sector needs technologies more and more efficient and sensitive to detect possible residues left by this vast number of anabolic substances, mainly steroids with estrogenic, androgenic and progesterogenics activities. Such substances, when present in meat, fat, and eggs among others, can be detected and quantified by a series of methods, among the ones which we described the chromatographic methods, based mainly on gaseous chromatography coupled to the mass espectrometry (CG-MS), high performance liquid chromatography (HPLC), thin layer chromatography (HPTLC) and the immunological methods, as radioimmunoassay (RIA) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). These methods have as advantages the high number of samples that can be analyzed by period of time, toghether with high sensibility and accuracy to detect anabolic residues.

Com o desenvolvimento da indústria farmacêutica e o conseqüente surgimento de novas substâncias promotoras do crescimento animal, o setor agropecuário necessita de tecnologias cada vez mais eficientes e sensíveis para detectar possíveis resíduos deixados por este vasto número de substâncias anabolizantes, principalmente esteróides com atividades estrogênicas, androgênicas e progestogênicas. Tais substâncias, quando presentes na carne, gordura, ovos, entre outros, podem ser detectadas e quantificadas por uma série de métodos, dentre os quais, descrevemos os cromatográficos, baseados principalmente em cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (CG-EM), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), cromatografia em camada delgada de alta eficiência (CCDAE) e os métodos imunológicos, como radioomunoensaio (RIA) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Estes métodos têm como vantagens o elevado número de amostras que podem ser analisadas por período de tempo, aliadas à alta sensibilidade na detecção de resíduos.