Cultivo associado de Leuconostoc mesenteroides lb10. 4 e Lactococcus lactis l4a8: propriedades antimicrobianas e potencial aplicação / Associated culture of Leuconostoc mesenteroides lb10. 4 and Lactococcus lactis l4a8: antimicrobial properties and potential application / Cultivo asociado de Leuconostoc mesenteroides lb10. 4 y Lactococcus lactis l4a8: propiedades antimicrobianas y aplicación potencial

O interesse por produtos lácteos funcionais tem motivado o estudo e a prospecção de novas bactérias lácticas. Neste contexto o objetivo deste trabalho foi explorar a potencial associação de Leuconostoc mesenteroides LB10.4 e Lactococcus lactis L4A8 isolados de leite de búfala e identificar aplicações em matriz alimentar. Foram realizados testes de atividade antimicrobiana, influência das bacteriocinas e avaliação da eficiência das bactérias ácido lácticas (BAL) individualmente e associadas frente a espécie de Listeria monocytogenes ATCC 7644 aplicadas em caldo Tryptic Soy Broth e em matriz láctea. Na avaliação da atividade antimicrobiana, Leuconostoc mesenteroides LB 10.4 e Lactococcus lactis L4A8 foram capazes de inibir Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Listeria monocytogenes ATCC 7644 com halos de inibição variando de 8 a 16 mm e 6 a 18 mm, respectivamente, pelos dois métodos testados. Na avaliação do efeito das bacteriocinas, os resultados demonstraram melhor controle inibitório dos patógenos pela nisina nas concentrações de 1% e 2%, com halos de inibição entre 14 a 24 mm. A avaliação da eficiência das BAL individualmente e associadas frente a espécie de Listeria monocytogenes ATCC 7644, demonstrou que os isolados em associação são capazes de inibir com mais efetividade a bactéria patogênica, sendo observada uma redução na contagem de L. monocytogenes de 2,67x107 UFC/g para 1,35x104 UFC/g após 240 horas, em matriz alimentar. As bactérias lácticas Leuconostoc mesenteroides LB10.4 e Lactococcus lactis L4A8 apresentaram características promissoras quanto ao seu potencial inibitório, não sendo inibidas pela pediocina. Destaca-se com esses resultados, a importância de estudar o leite de búfala como fonte de novos candidatos de bactérias lácticas autóctones para aplicação em alimentos.(AU)

The interest in functional dairy products has motivated the study and prospection of new lactic bacteria. In this context, the aim of this study was to explore the potential association of Leuconostoc mesenteroides LB10.4 and Lactococcus lactis L4A8 isolated from buffalo milk and to identify applications in food matrix. Tests of antimicrobial activity, influence of bacteriocins and evaluation of the efficiency of lactic acid bacteria (LAB) individually and associated against the species of Listeria monocytogenes ATCC 7644 applied in Tryptic Soy Broth and in milk matrix were performed. In the evaluation of antimicrobial activity, Leuconostoc mesenteroides LB 10.4 and Lactococcus lactis L4A8 were able to inhibit Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Listeria monocytogenes ATCC 7644 with inhibition halos ranging from 8 to 16 mm and 6 to 18 mm, respectively, by the two methods tested. In evaluating the effect of bacteriocins, the results showed better inhibitory control of pathogens by nisin at concentrations of 1% and 2%, with inhibition halos between 14 and 24 mm. The evaluation of the efficiency of LAB individually and associated against the species of Listeria monocytogenes ATCC 7644, showed that the isolates in association are able to more effectively inhibit the pathogenic bacteria, with a reduction in the L. monocytogenes count of 2.67x107 CFU /g to 1.35x104 CFU/g after 240 hours, in food matrix. The lactic acid bacteria Leuconostoc mesenteroides LB10.4 and Lactococcus lactis L4A8 showed promising characteristics regarding their inhibitory potential, not being inhibited by pediocin. With these results, attract attention the importance of studying buffalo milk as a source of new candid ates of autochthonous lactic acid bacteria for application in food.(AU)

El interés por los productos lácteos funcionales ha motivado el estudio y prospección de nuevas bacterias ácido lácticas. En este contexto, el objetivo de este trabajo fue explorar la asociación potencial de Leuconostoc mesenteroides LB10.4 y Lactococcus lactis L4A8 aislados de leche de búfala e identificar aplicaciones en matriz alimentaria. Se realizaron pruebas de actividad antimicrobiana, influencia de bacteriocinas y evaluación de la eficiencia de bacterias ácido lácticas (BAL) individualmente y asociadas frente a las especies de Listeria monocytogenes ATCC 7644 aplicadas en caldo Tryptic Soy Broth y en matriz de leche. En la evaluación de la actividad antimicrobiana, Leuconostoc mesenteroides LB10.4 y Lactococcus lactis L4A8 fueron capaces de inhibir Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Listeria monocytogenes ATCC 7644 con halos de inhibición de 8 a 16 mm y de 6 a 18 mm, respectivamente, por los dos métodos probados. Al evaluar el efecto de las bacteriocinas, los resultados mostraron un mejor control inhibitorio de patógenos por parte de la nisina a concentraciones de 1% y 2%, con halos de inhibición entre 14 y 24 mm. La evaluación de la eficiencia de las BAL de forma individual y asociada frente a la especie de Listeria monocytogenes ATCC 7644, mostró que los aislados en asociación son capaces de inhibir más eficazmente las bacterias patógenas, con una reducción del recuento de L. monocytogenes de 2,67x107 UFC/g a 1,35x104 UFC/g después de 240 horas, en matriz alimentaria. Las bacterias del ácido láctico Leuconostoc mesenteroides LB10.4 y Lactococcus lactis L4A8 mostraron características promisorias en cuanto a su potencial inhibidor, no siendo inhibidas por la pediocina. Con estos resultados, se destaca la importancia de estudiar la leche de búfala como fuente de nuevos candidatos de bacterias ácido lácticas autóctonas para su aplicación en alimentos.(AU)

In vitro evaluation of probiotic and technological properties of lactic acid bacteria isolated from artisanal cheese produced in the Serra Geral - Minas Gerais - Brazil / Avaliação in vitro de propriedades probióticas e tecnológicas de bactérias ácido-láticas isoladas de queijo artesanal da Serra Geral (MG)

O presente estudo avaliou o potencial probiótico in vitro de bactérias ácido-láticas (BAL) isoladas de queijo artesanal da Serra Geral (MG), com 14 e 21 dias de maturação, leite cru e pingo, utilizados em sua elaboração, e de bancadas de produção. As bactérias foram submetidas aos testes de antibiograma, à tolerância a ácido gástrico artificial e a sais biliares e ao antagonismo contra micro-organismos indicadores. Levilactobacillus brevis (Q521) e Lactococcus lactis (LLSG) apresentaram os melhores resultados e foram selecionados para a produção de leite fermentado. Apenas LLSG foi capaz de fermentar o leite. O produto apresentou qualidade microbiológica e físico-química adequada, exceto para os teores de proteína, segundo a legislação vigente para leites fermentados, demonstrando potencial tecnológico. A partir dos resultados apresentados, sugere-se que testes in vivo sejam realizados para que LLSG possa vir a ser utilizado como probiótico.

Microbial diversity in artisanal cheese produced and commercialized in Vale do Taquari in southern Brazil / Diversidade microbiana encontrada em queijos artesanais produzidos e comercializados no Vale do Taquari no sul do Brasil

Researchers have been utilizing matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) to identify bacteria and fungi directly from isolates obtained on culture plates; the resulting mass spectrum is then compared with spectra stored in the instrument software. Hence, a fast analytical response is obtained, and the more spectra are known to compare, the safer and more reliable the interpretation of the method will be. Thus, this study sought to identify the diversity of strains found in 10 samples of artisan cheese produced and commercialized in Vale do Taquari (Rio Grande do Sul State, Brazil) using MALDI-TOF MS. From the analyzed cheese, 22 strains were identified at the species level; one sample presented the pathogen Staphylococcus aureus, two showed the presence of lactic acid bacteria (Lactococcus lactis), and the vast majority (68.18%) of strains were composed of species of the Enterobacteriaceae family, with the prevalence of the genera Escherichia, Enterobacter, and Klebsiella. Escherichia coli was present in 50% of the samples analyzed. This demonstrates the need for greater control during all stages of artisanal cheese production and evaluation of the raw material, including safe practices during milking, so that the product meets the identity and quality parameters suitable for human consumption.

MALDI-TOF MS vendo sendo utilizado em laboratórios para identificar bactérias e fungos diretamente de isolados obtidos em placas de cultura. O espectro de massa resultante é então comparado com espectros armazenados no software do equipamento. Assim, obtém-se uma resposta analítica rápida, sendo que, quanto mais espectros forem conhecidos para comparar, mais seguro e confiável será a interpretação do método. Desta maneira, o presente trabalho teve por objetivo, identificar por MALDI-TOF MS, a diversidade de cepas encontrados em 10 amostras de queijos artesanais produzidos e comercializados no Vale do Taquari, Rio Grande do Sul, Brasil. Dos queijos analisados, 22 cepas foram identificadas a nível de espécie, sendo uma (1) amostra apresentou o patógeno Staphylococcus aureus, duas a presença da bactéria ácido láctica (Lactococcus lactis) e a grande maioria (68,18%) das cepas era composta por espécies da família Enterobacteriaceae, com prevalência dos gêneros Escherichia, Enterobacter e Klebsiella. E. coli estava presente em 50% das amostras analisadas. Isso demonstra a necessidade de um maior controle durante todas as etapas de produção do queijo artesanal, bem como a avaliação da matéria-prima, incluindo práticas seguras durante a ordenha para que o produto atenda aos parâmetros de identidade e qualidade, sendo apto ao consumo humano.

Atypical mandibular osteomyelitis in an ewe caused by coinfection of Pseudomonas aeruginosa and Lactococcus raffinolactis

Background: Osteomyelitis is defined as a bone inflammation involving the cortical and medullary regions, usually caused by the local invasion of opportunistic microorganisms. The inflammatory reaction of bone may extend to the periosteum and soft tissues, compromising adjacent structures far from the initially infected foci. Different classifications of transmission routes, gravity levels, and tissues involved in animal and human osteomyelitis are available. In humans, the infection can reach bone tissue by exogenous or hematogenous pathways. This paper reports an atypical case of mandibular pyogranulomatous osteomyelitis in an ewe caused by concomitant Pseudomonas aeruginosa and Lactococcus raffinolactis infection. Case: The animal presented a 1-month history of progressive mandibular enlargement refractory to conventional therapy. In a physical examination, an increased volume located in the ventrolateral region of the right ramus of the mandible was observed. Fine-needle aspiration of the lesion enabled isolation in bacteriological culture of Pseudomonas aeruginosa and Lactococcus raffinolactis using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDITOF MS). Besides support care procedures and antimicrobial treatment approaches for the sheep based on in vitro tests, the animal died due to the severity of the clinical signs and the progressive worsening of the general health status. The radiographic image examination of the mandibular region revealed a severe and infiltrative periodontal reaction, with a predominance of a great number of neutrophils and macrophages, necrotic areas, and bone destruction, characterized histologically as a pyogranulomatous rection. At post mortem examination, a large pyogranuloma was observed in the entire horizontal branch of the mandible as well, showing a dark yellowish content of coarse consistency, caseous appearance, and bone fragmentation. Discussion: Ovine mandibular osteomyelitis is a well-established bone inflammation involving the cortical and medullary regions, characterized clinically by local enlargement, asymmetry, pain sensitivity, edema, hyperthermia, infiltrate caseous or suppurative material, and bone rarefaction. In the current report, 1-month history of progressive enlargement of the mandibular region, prostration, and weight loss in an ewe were referred. Where clinical and epidemiological features, bacteriological, cytological, histological, and mass spectrometry diagnostic approaches were assessed to diagnostic. Most reports involving the etiology of ovine mandibular osteomyelitis have been diagnosed based on classical phenotypic tests. Here, the concomitant identification of P. aeruginosa and L. raffinolactis infection was possible using mass spectrometry (MALDI-TOF), highlighting the importance of molecular methods in the diagnosis of animal diseases. In addition, the differentiation between Lactococcus and Enterococcus species is difficult, which could underestimate the diagnosis of Lactococcus species as a primary pathogen from animal diseases. We report, for the first time, a fatal case of mandibular pyogranulomatous osteomyelitis in a sheep caused by Pseudomonas aeruginosa and Lactococcus raffinolactis coinfection.

Antibacterial effects of seven essential plant oils on fish pathogens / Efeitos antibacterianos de sete óleos de plantas essenciais em patógenos de peixe

The use of natural products which have the least harmful effects on the environment has recently been taken as a novel approach against fish diseases. References on in vitro studies have demonstrated antibacterial activity of essential oils (EOs) against certain fish pathogens. The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of some plant essential oils against fish pathogenic bacteria in vitro conditions. Seven plant EOs: lavender (Lavandula angustifolia), clove (Eugenia caryophyllus), peppermint (Mentha piperitae), basil (Ocimum sanctum), rosemary (Rosmarinus officinalis), cinnamon (Cinnamomum zeylanicum) and black cumin (Nigella sativa) were used to identify their antibacterial properties against Yersinia ruckeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Lactococcus garvieae and Vagococcus salmoninarum at five concentrations using disc diffusion method. Especially the EOs of clove, cinnamon and rosemary showed the strongest antibacterial activities than other oils against the three most susceptible bacterial strains (Y. ruckeri, A. hydrophila and V. salmoninarum). Besides, the EOs of clove, rosemary, cinnamon and black cumin showed similar inhibition zones with OTC against A. hydrophila. The minimum inhibitory concentrations of the used EOs found between 500 and 62.5 µl mL-1. As a result, three of the EOs used in this study were...

A utilização de produtos naturais com menos efeitos nocivos para o ambiente foi recentemente considerada uma nova abordagem contra as doenças dos peixes. Referências em estudos in vitro demonstraram atividade antibacteriana de óleos essenciais (OE) contra certos patógenos de peixes. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano de alguns óleos essenciais de plantas contra bactérias patogênicas de peixes em condições in vitro. Sete EOs de plantas: alfazema (Lavandula angustifolia), cravo (Eugenia caryophyllus), hortelã-pimenta (Mentha piperitae), manjericão (Ocimum sanctum), alecrim (Rosmarinus officinalis), canela (Cinnamomum zeylanicum) e cominho preto (Nigella sativa) foram usados para identificar suas propriedades antibacterianas contra Yersinia ruckeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Lactococcus garvieae e Vagococcus salmoninarum em cinco concentrações usando o método de difusão em disco. Especialmente os OEs de cravo, canela e alecrim mostraram as atividades antibacterianas mais fortes do que outros óleos contra as três cepas bacterianas mais suscetíveis (Y. ruckeri, A. hydrophila e V. salmoninarum). Além disso, os OEs de cravo, alecrim, canela e cominho preto mostraram zonas de inibição semelhantes com OTC contra A. hydrophila. As concentrações inibitórias mínimas dos OE usados encontradas entre 500 e 62.5 µl mL-1...

Antibacterial effects of seven essential plant oils on fish pathogens / Efeitos antibacterianos de sete óleos de plantas essenciais em patógenos de peixe

The use of natural products which have the least harmful effects on the environment has recently been taken as a novel approach against fish diseases. References on in vitro studies have demonstrated antibacterial activity of essential oils (EOs) against certain fish pathogens. The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of some plant essential oils against fish pathogenic bacteria in vitro conditions. Seven plant EOs: lavender (Lavandula angustifolia), clove (Eugenia caryophyllus), peppermint (Mentha piperitae), basil (Ocimum sanctum), rosemary (Rosmarinus officinalis), cinnamon (Cinnamomum zeylanicum) and black cumin (Nigella sativa) were used to identify their antibacterial properties against Yersinia ruckeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Lactococcus garvieae and Vagococcus salmoninarum at five concentrations using disc diffusion method. Especially the EOs of clove, cinnamon and rosemary showed the strongest antibacterial activities than other oils against the three most susceptible bacterial strains (Y. ruckeri, A. hydrophila and V. salmoninarum). Besides, the EOs of clove, rosemary, cinnamon and black cumin showed similar inhibition zones with OTC against A. hydrophila. The minimum inhibitory concentrations of the used EOs found between 500 and 62.5 µl mL-1. As a result, three of the EOs used in this study were...(AU)

A utilização de produtos naturais com menos efeitos nocivos para o ambiente foi recentemente considerada uma nova abordagem contra as doenças dos peixes. Referências em estudos in vitro demonstraram atividade antibacteriana de óleos essenciais (OE) contra certos patógenos de peixes. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano de alguns óleos essenciais de plantas contra bactérias patogênicas de peixes em condições in vitro. Sete EOs de plantas: alfazema (Lavandula angustifolia), cravo (Eugenia caryophyllus), hortelã-pimenta (Mentha piperitae), manjericão (Ocimum sanctum), alecrim (Rosmarinus officinalis), canela (Cinnamomum zeylanicum) e cominho preto (Nigella sativa) foram usados para identificar suas propriedades antibacterianas contra Yersinia ruckeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Lactococcus garvieae e Vagococcus salmoninarum em cinco concentrações usando o método de difusão em disco. Especialmente os OEs de cravo, canela e alecrim mostraram as atividades antibacterianas mais fortes do que outros óleos contra as três cepas bacterianas mais suscetíveis (Y. ruckeri, A. hydrophila e V. salmoninarum). Além disso, os OEs de cravo, alecrim, canela e cominho preto mostraram zonas de inibição semelhantes com OTC contra A. hydrophila. As concentrações inibitórias mínimas dos OE usados encontradas entre 500 e 62.5 µl mL-1...(AU)

Ação in vivo de Lactococcus lactis subsp. lactis com potencial probiótico na estabilização de células cancerígenas no epitélio colorretal / In vivo action of Lactococcus lactis subsp. lactis with probiotic potential in the stabilization of cancer cells in the colorectal epithelium

Na última década, a ciência contribuiu significativamente para inúmeros avanços em relação ao tratamento e prevenção do câncer colorretal (CCR), porém, a prevalência global e a taxa de mortalidade permanecem elevadas. Há relatos sobre efeitos benéficos de espécies de Bifidobacterium e Lactobacillus com potencial probiótico na prevenção de CCR. No entanto, a bactéria probiótica Lactococcus lactis subps. lactis é comumente utilizada para fins industriais, não havendo comprovações in vivo sobre seu potencial anticarcinogênico. Visto o interesse emergente dos efeitos benéficos dos probióticos a fim de prevenir ou tratar o CCR, o presente estudo objetivou explorar os efeitos de L. lactis subsp. lactis sobre o CCR. Ratos Wistar receberam doses subcutâneas de 1,2 dimetilhidrazina (DMH) e suspensão de L. lactis subsp. lactis por via oral. Após 20 semanas, os tecidos intestinais foram analisados e de acordo com o resultado, o isolado demonstrou potencial anticarcinogênico contra CCR.(AU)

Ação in vivo de Lactococcus lactis subsp. lactis com potencial probiótico na estabilização de células cancerígenas no epitélio colorretal / In vivo action of Lactococcus lactis subsp. lactis with probiotic potential in the stabilization of cancer cells in the colorectal epithelium

Na última década, a ciência contribuiu significativamente para inúmeros avanços em relação ao tratamento e prevenção do câncer colorretal (CCR), porém, a prevalência global e a taxa de mortalidade permanecem elevadas. Há relatos sobre efeitos benéficos de espécies de Bifidobacterium e Lactobacillus com potencial probiótico na prevenção de CCR. No entanto, a bactéria probiótica Lactococcus lactis subps. lactis é comumente utilizada para fins industriais, não havendo comprovações in vivo sobre seu potencial anticarcinogênico. Visto o interesse emergente dos efeitos benéficos dos probióticos a fim de prevenir ou tratar o CCR, o presente estudo objetivou explorar os efeitos de L. lactis subsp. lactis sobre o CCR. Ratos Wistar receberam doses subcutâneas de 1,2 dimetilhidrazina (DMH) e suspensão de L. lactis subsp. lactis por via oral. Após 20 semanas, os tecidos intestinais foram analisados e de acordo com o resultado, o isolado demonstrou potencial anticarcinogênico contra CCR.

Technology and safety assessment for lactic acid bacteria isolated from traditional Bulgarian fermented meat product "lukanka"

The present work discusses the technological and new selection criteria that should be included for selecting lactic acid bacteria for production of fermented meat. Lactic acid bacteria isolated from Bulgarian traditional fermented "lulanka" salami was studied regarding some positive technological parameters (growth at different temperature, pH, and proteolytic activity). The presence of genes related to the virulence factors, production of biogenic amines, and vancomycin resistance were presented in low frequency in the studied lactic acid bacteria. On the other hand, production of antimicrobial peptides and high spread of bacteriocin genes were broadly presented. Very strong activity against L. monocytogenes was detected in some of the studied lactic acid bacteria. In addition, the studied strains did not present any antimicrobial activity against tested closely related bacteria such as Lactobacillus spp., Lactococcus spp., Enterococcus spp. or Pediococcus spp. To our knowledge this is the first study on the safety and antimicrobial properties of lactic acid bacteria isolated from Bulgarian lukanka obtained by spontaneous fermentation.(AU)

ESTUDO DA MICROBIOTA LÁTICA DE QUEIJOS TIPO PRATO PRODUZIDOS A PARTIR DE LEITE CRU E PASTEURIZADO

O queijo tipo Prato é amplamente conhecido e difundido em todo o Brasil. Sua formulação industrial foi influenciada pelos queijos europeus e hoje é um dos tipos mais consumidos do país. Sua produção tradicional é feita com leite pasteurizado, com adição de cultura lática indicadora composta por Lactococcus lactis sub lactis e Lactococcus lactis sub cremosis seguido por um processo de maturação para adquirir características próprias. Neste trabalho foram produzidos queijos tipo Prato a partir de leite cru (QPC1/QPC2) e leite pasteurizado (QPP1/QPP2) com tamanho reduzido (6,5 x 4,5 x 2,5 cm) a fim de acompanhar a microbiota lática durante a maturação dos queijos nos tempos de 0, 5, 15, 25, 35, 45 e 60 dias. Contagens iniciais de 5,78 e 5,56 log1o UFC mL1 foram encontradas nas duas avaliações dos queijos QPP1/QPP2 e 6,36 e 6,19log1o UFC mL1 para QPC1/QPC2. Os valores máximos de contagens foram observados entre os dias 5 e 15 com posterior queda. Também foram realizadas análises físico-químicas como pH e atividade de água (AA) e outros estudos microbiológicos como a pesquisa de Staphylococcus, enterobactérias e leveduras. Valores iniciais de pH de 5,98 e 5,80 no dia 0 foram observados com redução à medida que a maturação avançava com oscilações. Para a AA, a variação inicial foi de 0,975 a 0,979 para QPP1/QPP2 e 0,974 para QPC1/QPC2 também com oscilações e ao final dos 60 dias foi de 0,969 para QPP1/QPP2 e 0,964 e 0,973 QPC1/QPC2 respectivamente. Para enterobactérias e Staphyloccocus, ambos os grupos apresentaram altas contagens iniciais. Logo ao final dos 25 dias, QPP1/QPP2 apresentaram contagens menores de Staphylococcus e QPC1/QPC2 persistiram com contagens elevadas. As enterobactérias reduziram durante toda a maturação em todos os grupos. As leveduras apresentaram baixas contagens durante o processo e bolores foram ausentes.

The Prato type cheese is widely known and widespread throughout Brazil. Its industrial formulation was inspired by the European cheese kinds and nowadays it is one of the most consumed in the country. Its traditional production is made with pasteurized milk with the addition of an indicator lactic culture composed of Lactococcus lactis sub lactis and Lactococcus lactis sub cremosis, followed by a maturation process to acquire its own characteristics. In this work, Prato type cheeses were produced from raw milk and pasteurized milk with reduced size (6.5 x 4.5 x 2.5 cm) in order to monitor the lactic microbiota during cheese maturation in times of 0, 5, 15, 25, 35, 45 and 60 days.nitial counts of 5.78 and 5.56 log1o CFU mL1 were found in the two evaluations of QPP1/QPP2 and 6.36 and 6.19 log1o CFU mL1 cheeses for QPC1/QPC2. The maximum count values were observed between days 5 and 15 with a subsequent decrease. Physical-defined analysis such as pH, water activity (AA) and other microbiological studies such as a survey of Staphylococcus, enterobacteria and yeasts were also carried out.Initial pH values of 5.98 and 5.80 on day 0 were observed with reduction as maturation carried on with fluctuations. For AA, the initial variation was 0.975 to 0.979 for QPP1/QPP2 and 0.974 for QPC1/QPC2 also with fluctuations. By the end of 60 days it was 0.969 for QPP1/QPP2 and 0.964 and 0.973 for QPC1/QPC2 respectively. For Enterobacteriaceae and Staphylococcus, both groups had high initial counts. At the end of 25 days, QPP1/QPP2 showed lower Staphylococcus numbers and QPC1/QPC2 persisted with high counts. Enterobacteria decreased throughout maturation in all groups. Yeasts had low counts during the process and molds were absent

Mastite bovina no estado do Piauí: ocorrência, análise do perfil de resistência bacteriana e avaliação do efeito antimicrobiano e modulador do extrato etanólico de Cnidoscolus urens (L.) Arthur

Objetivou-se realizar um estudo etio-epidemiológico da mastite em vacas na bacia leiteira do estado Piauí e avaliar o perfil de resistência bacteriana a antimicrobianos e a atividade antimicrobiana e moduladora dos extratos etanólicos de Cnidoscolus urens (L.) Arthur. Inicialmente, realizou-se o teste do California Mastitis Test (CMT) em 321 amostras de leite provenientes de 170 vacas de 17 fazendas leiteiras. As amostras positivas nos escores com duas (++) ou três (+++) cruzes foram coletadas e cultivadas. Para a identificação das espécies bacterianas, empregou-se a técnica de Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight (MALDI-TOF MS). A resistência aos antimicrobianos foi avaliada na técnica de disco-difusão seguida pela pesquisa dos genes blaZ, tetL, tetM, vanA e vanB para todos os isolados bacterianos e os genes mecA e mecC para Staphylococcus spp. por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Neste estudo, 57,63% das amostras positivas no CMT (185/321) também foram positivas no exame microbiológico com 59,45% (110/185) para o gênero Staphylococcus, 38,9% (72/185) para bactérias emergentes e 1,62% (3/185) para o gênero Corynebacterium. Staphylococcus aureus (68,1%; 75/110) foi a espécie mais prevalente entre os Staphylococcus spp. e Enterococcus faecalis (26,3%; 19/72) dentre bactérias emergentes. Quanto ao perfil de resistência fenotípico, a maior frequência foi de 75,2% (137/182) para os isolados resistentes à penicilina e menor frequência de 15,3% (28/182) para vancomicina. O gene blaZ foi detectado em 47,2% (86/182) dos isolados, seguido de 29,1% (53/182) para o gene tetM e 24,7% (45/182) para tetL, os genes mecA e vanB em 0,5% (1/182) cada. A atividade antimicrobiana e o teste de modulação dos extratos de Cnidoscolus urens foi realizado empregando a técnica de microdiluição em caldo. A concentração inibitória mínima para os extratos etanólicos das folhas, caules e raízes de Cnidoscolus urens obtidos na concentração inibitória mínima foi 1024 g/mL para todos os isolados. O extrato das folhas apresentou melhor efeito modulador para gentamicina com destaque na redução da concentração inibitória mínima para Escherichia coli (128 g/mL para 4 g/mL), Lactococcus garviae (128 g/mL para 4 g/mL) e Staphylococcus sciuri (128 g/mL para 4 g/mL) e eritromicina com redução de 64 g/mL para 2 g/mL nas cepas de Lactococcus garviae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Streptococcus agalactiae. Os resultados permitem concluir que bactérias multirresistentes e com potencial zoonótico, além de bactérias emergentes ocorrem na bacia leiteira do estado do Piauí, além desta ser a primeira ocorrência do gene vanB em um isolado bacteriano na mastite bovina no Brasil, sendo isto um alerta para saúde pública. Ainda, que o extrato etanólico das folhas de Cnidoscolus urens apresenta importante efeito modulador na resistência em bactérias multirresistentes da mastite bovina para a gentamicina e eritromicina.

This research aimed to perform an etho-epidemiological study of bovine mastitis in the dairy region of Piauí state, to evaluate the bacterial antimicrobial resistance profile, and the antimicrobial and modulating ability of the ethanolic extracts of Cnidoscolus urens (L.) Arthur. Initially the Californian Mastitis test was performed in 312 milk samples from 170 cows of 17 dairy farms. Positive samples with scores of two (++) or three (+++) crosses were collected and cultivated. Bacterium species were identified by employment of the Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight (MALDI-TOF MS) technique. Antimicrobial resistance was evaluated by disk-diffusion technique followed by the search of the blaZ, tetL, tetM, vanA, and vanB genes in all isolated bacteria, and the mecA and mecC genes in Staphylococcus spp. by Polymerase Chain Reaction (PCR). In this study 57.63% of the positive samples in CMT (185/321) were also positive in the microbiological examination, with 59.5% (110/185) for the Staphylococcus genus, 38.9% (72/185) of emerging bacteria, and 1.6% (3/185) for the Corynebacterium genus. Staphylococcus aureus was the most prevalent species among the Staphylococcus spp. (68.1%; 75/110), and Enterococcus faecalis the most prevalent among the emerging bacteria (26.3%; 19/72). Regarding the phenotypical resistance profile, the highest frequency observed was of 75.2% (137/182) for the penicillin resistant isolates and the lowest frequency of 15.3% (28/182) for vancomycin resistant isolates. The blaZ was detected in 47.2% (86/182) of the isolates, followed by 29.1% (53/182) for tetM gene, 24.7% (45/182) for the tetL gene, and 0.5% (1/182) for both the genes mecA and vanB. The antimicrobial activity and extract modulation testo of Cnidoscolus urens was performed by employment of the microdilution in broth. The minimal inhibitory concentration (MIC) for the ethanolic extracts of leaves, stalk and roots of Cnidoscolus urens obtained was >1024 g/mL for all isolates. The leaf extract presented better modulation effect for gentamicin, with highlights to its effect in reducing the minimal inhibitory concentration for Escherichia coli (128 g/mL to 4 g/mL), Lactococcus garviae (128 g/mL to 4 g/mL) and Staphylococcus sciuri (128 g/mL to 4 g/mL), and erythromycin with a reduticon of 64 g/mL to 2 g/mL in strains of Lactococcus garviae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, and Streptococcus agalactiae. These results allow to conclude that multi-resistant bacteria with zoonotic potential and emerging bacteria occur in the Dairy region of the Piauí state. This is the first occurrence of the vanB gene in a bacterial isolate from bovine mastitis in Brazil, this presenting an alarm for public health. Also the ethanolic extract of leaves from Cnidoscolus urens has an important modulating effect in resistance of multi-resistant bacteria from bovine mastitis in the antimicrobials gentamicin and erythromycin.

CARACTERIZAÇÃO FÍSICO-QUÍMICA, MICROBIOLÓGICA E DE PERFIS DE AMINOÁCIDOS E DE AMINAS BIOATIVAS LIVRES DO QUEIJO ARTESANAL DA SERRA GERAL-MG

O conhecimento sobre a qualidade do queijo artesanal da Serra Geral-MG é escasso. Devido à sua relevância regional, objetivou-se com este estudo investigar as características físico-químicas e microbiológicas, bem como, a identificação de bactérias láticas (BAL) no leite, pingo, queijo fresco e maturado por até 60 dias. A qualidade físico-química e microbiológica da água utilizada nas queijarias, a presença de microrganismos na superfície das bancadas de produção, a proteólise e os teores de aminoácidos livres e aminas bioativas também foram investigados. Foram selecionadas 12 queijarias, sendo seis cadastradas no Serviço de Inspeção Municipal (PSIM) e seis que não possuíam cadastro em órgão fiscalizador (NSIM). Os queijos PSIM apresentaram melhores características higiênico-sanitárias em relação ao NSIM. A segurança microbiológica foi alcançada com 21 dias de maturação para os queijos PSIM, entretanto, os queijos NSIM, não alcançaram os limites microbiológicos, ao longo dos 60 dias de maturação. Os queijos, a partir de 21 dias, foram classificados como gordos, com baixo teor de umidade, secos e de massa dura. Por outro lado, os queijos frescos foram enquadrados como gordos e de alta umidade, para ambos os grupos de produtores, contudo, apresentaram risco de consumo, associado à qualidade microbiológica deficiente. A água que abastece as queijarias e o leite cru utilizado como matéria-prima na produção dos queijos PSIM não apresentaram diferenças significativas, quando comparadas às propriedades NSIM. Porém, a qualidade microbiológica, encontrada para essas matrizes não foi satisfatória, indicando contaminação. As superfícies das bancadas das queijarias continham coliformes totais, Staphylococcus spp. e BAL, podendo servir de fonte de propagação de microrganismos durante a produção do queijo. O leite da Serra Geral-MG foi caracterizado com baixo teor de aminoácidos e aminas livres (principalmente histamina, putrescina e tiramina). Durante a maturação, houve aumento nos índices de proteólise, aminoácidos e aminas livres. Os teores de tiramina e histamina atingiram valores que podem causar efeitos adversos em indivíduos sensíveis. Lactococcus lactis foi a espécie das bactérias ácido-láticas mais frequente no queijo durante a etapa inicial da maturação. Essa pesquisa permitiu também conhecer a situação da Serra Geral-MG quanto a produção do queijo artesanal mineiro. A região é constituída por produtores em potencial, com expertises na elaboração de queijos que assemelham ao queijo Minas artesanal (QMA)

Knowledge about the quality of artisanal cheese from Serra Geral-MG, Brazil, is scarce. Due to its regional relevance, the objective of this study was to investigate the physico-chemical and microbiological characteristics, as well as, the identification of lactic acid bacteria (LAB) in milk, whey-starter, fresh and aged cheese for up to 60 days. The physico-chemical and microbiological quality of the water used, the presence of microorganisms on the cheese making surfaces, the proteolysis and the contents of free amino acids and bioactive amines were also investigated. Twelve cheesemakers were selected, six registered under the Municipal Inspection Service (PSIM) and six with no registration (NSIM). PSIM cheeses had better hygienic-sanitary characteristics compared to NSIM. Microbiological safety was achieved at 21 days ripening for PSIM cheeses, whereas NSIM cheeses did not reach microbiological safety even with 60 aging. Cheeses, after 21 days aging, were classified as fat, with low moisture content, dry and hard. The fresh cheeses were classified as fat and of high moisture, for both groups of producers; however, they presented risk of consumption, associated with the deficient microbiological quality. The water supplied to the cheese factories and the raw milk used as raw material in the production of PSIM cheeses did not show significant differences when compared to the ones from NSIM properties. However, the microbiological quality found for these matrices was not satisfactory, indicating contamination. Cheese making surfaces contained total coliforms, Staphylococcus spp. and BAL, which can serve as a source of microorganisms propagation during cheese production. The milk from Serra Geral-MG was characterized by a low content of free amino acids and free amines (mainly histamine, putrescine and tyramine). During aging, there was an increase in proteolysis, and the contens of free amino acids and amines. The levels of tyramine and histamine reached levels which could cause adverse effects in sensitive individuals. Lactococcus lactis was the LAB most frequent in cheese during the initial stage of aging. Results were provided regarding the the production of artisanal cheese from Serra Geral, Minas Gerais. Potential producers have been identified, with expertise in making cheese that resembles artisanal Minas cheese. Cheese factories inspection was relevant to warrant microbiological safety of 21 days aged cheese

PROBIOTICS FOR BROILERS EXPOSED TO HEAT STRESS FROM 15 DAYS OF AGE

O setor avícola demanda aditivos alternativos à antibióticos que possam ser utilizados como melhoradores de desempenho. Portanto, um experimento foi conduzido para avaliar os efeitos de probióticos sobre o desempenho, saúde intestinal e status redox de frangos de corte expostos a estresse por calor a partir dos 15 dias de idade. Foram utilizados 720 frangos Cobb-500 distribuídos em oito tratamentos (dietas), avaliados em seis repetições de 15 frangos cada, sendo: dieta basal (DB) sem antibiótico e probiótico (T1); DB suplementada com bacitracina de zinco (T2), DB suplementada com probiótico comercial de Bacillus subtilis DSM 17299 (T3); DB suplementada com probióticos não-comerciais de Lactococcus lactis NCDO 2118, Lactobacillus delbrueckii CNRZ 327, Escherichia coli CEC15 ou Saccharomyces boulardii (T4, T5, T6 e T7, respectivamente) e DB suplementada com a associação dos quatro probióticos não-comerciais (T8). O consumo de ração (CR), ganho de peso (GP) e conversão alimentar (CA) foram determinados no período de 1 a 42 dias de idade dos frangos. Aos 42 dias de idade avaliou-se: rendimento de carcaça e cortes, deposição de gordura abdominal, temperatura cloacal, peso e comprimento do intestino, atividade das enzimas mieloperoxidase e peroxidase eosinofílica no jejuno, histomorfometria do jejuno, expressão gênica no jejuno (ocludina, zonulina, interleucina-8, colecistoquinina, grelina e proteína de choque térmico-70) e fígado (proteína de choque térmico-70), além da mensuração do teor de malondialdeído (MDA) e atividade da superóxido dismutase (SOD) no intestino, fígado e sangue. Os frangos alimentados com a dieta T1 exibiram menor (P < 0,05) GP e peso vivo ao abate, além de pior CA (P < 0,05). Entretanto, as dietas contendo um ou o blend de probióticos resultaram em melhor GP, CA e peso vivo ao abate, semelhante ao observado para os frangos do grupo T2. A maior (P < 0,05) temperatura cloacal foi determinada nos frangos do grupo T6. Houve maior produção (P < 0,05) de MDA no fígado dos frangos dos grupos T1 e T7 e menor (P < 0,05) no grupo T3. No sangue, o teor de MDA foi maior (P < 0,05) nos frangos do T4 e menor (P < 0,05) no grupo T5. A dieta T8 resultou em maior (P < 0,05) atividade sérica da SOD, enquanto que as dietas T1 e T5 resultaram em menor (P < 0,05). Não houve efeito (P > 0,05) das dietas experimentais para os demais parâmetros avaliados. Conclui-se que frangos de corte desafiados por estresse por calor a partir dos 15 dias de idade e alimentados com dieta basal sem antibiótico e probiótico exibem pior desempenho. Entretanto, todos os probióticos não- comerciais avaliados, suplementados isoladamente ou como blend, mostraram-se eficientes em melhorar o desempenho dos frangos em magnitude semelhante ao observado quando a dieta contém o antibiótico bacitracina de zinco ou o probiótico comercial Bacillus subtilis DSM17299.

The poultry sector demands alternative additives to antibiotics that can be used as performance enhancers. Therefore, an experiment was conducted to evaluate the effects of probiotics on performance, intestinal health and redox status of broilers exposed to heat stress from 15 days of age. A total of 720 Cobb-500 broilers were distributed in eight treatments (diets), evaluated in six replicates of 15 broilers, as follows: basal diet (BD) without antibiotic and probiotic (T1); BD supplemented with zinc bacitracin (T2), BD supplemented with a commercial probiotic of Bacillus subtilis DSM 17299 (T3); BD supplemented with non-commercial probiotic of Lactococcus lactis NCDO 2118, Lactobacillus delbrueckii CNRZ 327, Escherichia coli CEC15 or Saccharomyces boulardii (T4, T5, T6 and T7, respectively), and BD supplemented with the association of the four non-commercial probiotics (T8). Feed intake (FI), weight gain (WG) and feed conversion (FC) were determined in the period from 1 to 42 days of age. Carcass and cuts yield, abdominal fat deposition, cloacal temperature, weight and length of intestine, activity of myeloperoxidase and eosinophilic peroxidase enzymes in the jejunum, jejunal histomorphometry, gene expression in the jejunum (occludin, zonulin, interleukin-8, cholecystokinin, ghrelin and heat shock protein-70) and liver (heat shock protein-70), in addition to malondialdehyde (MDA) level and superoxide dismutase (SOD) activity were measured in the intestine, liver and blood of broilers at 42 days old. Broilers fed diet T1 exhibited lower (P < 0.05) WG and live weight at slaughter, in addition to worse FC (P < 0.05). However, diets containing one or the probiotics blend resulted in better WG, FC and live weight at slaughter, similar to that observed for broilers of the T2 group. The highest (P < 0.05) cloacal temperature was determined in broilers of the T6 group. There was higher (P < 0.05) hepatic MDA concentration in the broilers of the T1 and T7 groups, and lower concentration (P < 0.05) in group T3. In blood, the MDA content was higher (P < 0.05) in the T4 group and lower (P < 0.05) in the T5 group. The T8 diet resulted in higher (P < 0.05) serum SOD activity, while diets T1 and T5 resulted in lower (P < 0.05). There was no effect (P > 0.05) of the experimental diets for the other evaluated parameters. It is concluded that broilers challenged by heat stress from 15 days of age and fed diet without antibiotic and probiotic exhibit worse performance. However, all non- commercial probiotics evaluated, supplemented alone or as a blend, were shown to be efficient in improving broiler performance in a similar magnitude to that observed when the diet contains the antibiotic zinc bacitracin or the commercial probiotic of Bacillus subtilis DSM17299.

PREVALÊNCIA DA TUBERCULOSE BOVINA NO ESTADO DE SÃO PAULO COM BASE NA INSPEÇÃO SANITÁRIA DE CARCAÇAS EM ABATEDOUROS

A tuberculose bovina é uma doença de grande importância em saúde animal e saúde pública, pois determina quadros de infecção crônica nos animais e humanos, redução da produtividade de leite e carne, e embargos de comercialização de produtos dos rebanhos acometidos. O Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose do Brasil classifica os estados da Federação conforme o grau de risco para brucelose e tuberculose bovinas, baseado nas prevalências de focos dessas doenças. Neste cenário, o presente estudo objetivou determinar a prevalência de focos e de bovinos com tuberculose, localizar as procedências dos animais (com base na Guia de Trânsito Animal GTA) com diagnóstico microbiológico e molecular de Mycobacterium bovis, efetuar o diagnóstico microbiológico diferencial em linfonodos, pulmões e fígado com lesões inflamatórias na linha de abate e descrever características dos municípios de localidade das propriedades rurais com focos da doença no estado de São Paulo. O território foi dividido em 15 regiões administrativas e o plano amostral calculado conforme a população total de bovinos, estratificada por região, utilizando-se o pacote samplinbook do Programa R, com precisão estatística de 1,3%. Foram visitados 27 abatedouros para coleta de tecidos e órgãos de 301 bovinos com lesões, que foram submetidas ao cultivo microbiológico em meio seletivo de Stonebrink-Leslie, visando o isolamento de M. bovis, e nos meios convencionais de ágar sangue e MacConkey, para diagnóstico de outras bactérias. Colônias isoladas nos meios convencionais foram submetidas à espectrometria de massas (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization - MALDI-TOF MS) para diagnóstico dos micro- organismos em nível de espécies. Colônias isoladas em Stonebrink-Leslie foram submetidas à Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), com iniciadores da Região de Diferença 4 (RD4) para confirmação de M. bovis. Amostras de oito bovinos (2,65%) resultaram em isolamento de micobactérias no meio de Stonebrink-Leslie e confirmação de M. bovis. As prevalências de tuberculose obtidas dos bovinos e das propriedades rurais focos no estado de São Paulo foram de 2,65% e 5,94%, respectivamente. A espectrometria de massas identificou com maior ocorrência Trueperella pyogenes (10/301=3,32%), Macrococcus caseolyticus (9/301=2,99%), Escherichia coli (8/301=2,65%), Macrococcus canis (5/301=1,66%), Moraxella osloensis (4/301=1,32%), Lactococcus garvieae (3/301=0,99%) e Proteus hauseri (3/301=0,99%). As GTAs dos bovinos com detecção de M. bovis possibilitaram a localização das propriedades rurais focos nos municípios de Brejo Alegre, Tarabaí, São José dos Campos, Caçapava, Buri e Itapetininga, cujas características gerais predominantes são criação de bovinos, baixa concentração de animais por hectare, baixa tecnificação, sem assistência técnica e bom nível de escolaridade do produtor rural. A identificação de M. bovis e outros patógenos em órgãos e tecidos de bovinos reforçam a importância estratégica dos abatedouros na vigilância e rastreabilidade de doenças infecciosas, visando salvaguardar a qualidade dos produtos de origem animal destinados à população, bem como do planejamento de ações contínuas de controle, profilaxia e educação sanitária, em virtude do potencial zoonótico desses micro- organismos.

Bovine tuberculosis is a disease of great relevance in animal and public health, as it causes chronic infection in animals and humans, reduced productivity of milk and meat, and embargoes on the sale of products from affected herds. The National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis in Brazil classifies the states of the Federation according to the degree of risk for bovine brucellosis and tuberculosis, based on the prevalence of these diseases. In this scenario, the present study aimed to determine the prevalence of outbreaks and cattle with tuberculosis, investigating the origins of animals (based on Animal Transit Guides - ATGs) with microbiological and molecular diagnosis of Mycobacterium bovis, as well as perform the differential microbiological diagnosis in lymph nodes, lungs, and liver with inflammatory lesions in the slaughter line, and describe characteristics of the municipalities in the rural properties with outbreaks of the disease in the state of São Paulo. The territory was divided into 15 administrative regions and the sampling plan was calculated according to the total cattle population stratified by region, using the samplinbook package of Program R, with statistical precision to 1.3%. Twenty-seven abattoirs were visited to collect samples of lesions of tissues and organs from 301 cattle, which were subjected for microbiological culture in a selective Stonebrink-Leslie medium, aiming at the isolation of M. bovis, and in conventional bovine blood agar and MacConkey media, for differential diagnosis from other bacteria. Colonies isolated in conventional media were submitted to mass spectrometry (Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization - MALDI-TOF MS) for the diagnosis of microorganisms at the species level. Colonies compatible with mycobacteria in Stonebrink-Leslie were subjected to Polymerase Chain Reaction (PCR) using Region of Difference 4 (RD4) primers to confirm M. bovis. Samples from eight cattle (2.65%) resulted in theisolation of mycobacteria in Stonebrink-Leslie medium and were confirmed as M. bovis. The prevalence of tuberculosis obtained from cattle and rural properties in the state of São Paulo were 2.65% and 5.94%, respectively. Mass spectrometry identified with the highest occurrence Trueperella pyogenes (10/301= 3.32%), Macrococcus caseolyticus (9/301=2.99%), Escherichia coli (8/301=2.65%), Macrococcus canis (5/301=1.66%), Moraxella osloensis (4/301=1,32%), Lactococcus garvieae (3/301=0.99%), and Proteus hauseri (3/301=0.99%) as the most frequent microorganisms. The ATGs of cattle enabled to locate rural properties with M. bovis PCR-positive animals, as follows: Brejo Alegre, Tarabaí, São José dos Campos, Caçapava, Buri, and Itapetininga. These cities revealed predominantly some general characteristics, e.g., cattle raising, low concentration of animals/hectare, low technology, no technical assistance, and a good level of education of the rural producer. The identification of M. bovis and other pathogens in bovine organs and tissues reinforces the strategic importance of slaughterhouses in the epidemiological studies and traceability of infectious diseases aiming to safeguard the quality of animal products destined for the population as well as the planning of continuous actions of control, prophylaxis, and health education, due to the zoonotic potential of microorganisms.

Bacteriocinogenic Lactococcus lactis subsp. lactis DF04Mi isolated from goat milk: Application in the control of Listeria monocytogenes in fresh Minas-type goat cheese

Listeria monocytogenes is a pathogen frequently found in dairy products. Its control in fresh cheeses is difficult, due to the psychrotrophic properties and salt tolerance. Bacteriocinogenic lactic acid bacteria (LAB) with proven in vitro antilisterial activity can be an innovative technological approach but their application needs to be evaluated by means of in situ tests. In this study, a novel bacteriocinogenic Lactococcus lactis strain (Lc. lactis DF4Mi), isolated from raw goat milk, was tested for control of growth of L. monocytogenes in artificially contaminated fresh Minas type goat cheese during storage under refrigeration. A bacteriostatic effect was achieved, and counts after 10 days were 3 log lower than in control cheeses with no added LAB. However, this effect did not differ significantly from that obtained with a non-bacteriocinogenic Lc. lactis strain. Addition of nisin (12.5 mg/kg) caused a rapid decrease in the number of viable L. monocytogenes in the cheeses, suggesting that further studies with the purified bacteriocin DF4Mi may open new possibilities for this strain as biopreservative in dairy products.(AU)

POTENCIAL ANTAGONISTA DE BACTÉRIAS DO ÁCIDO LÁTICO ISOLADAS DO LEITE CRU CONTRA Staphylococcus aureus e Listeria monocytogenes

Esta dissertação foi dividida em duas partes, sendo elas: capítulo 1, que é uma breve revisão bibliográfica abordando a microbiologia do leite cru e os microorganismos utilizados neste estudo (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus e as bactérias do ácido lático - BAL); e capítulo 2, o qual descreve o estudo realizado com Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus e BALs isoladas do leite cru oriundos de propriedades leiteiras da Região Metropolitana de Curitiba, avaliando o potencial antagonista das BALs frente aos patógenos utilizando a metodologia de sobreposição dupla. As espécies láticas de Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactis, Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis e Lactobacillus brevis isoladas mostraram capacidade em inibir L. monocytogenes in vitro e L. plantarum demonstrou o melhor potencial inibitório; na análise envolvendo a habilidade de Staphylococcus aureus, cepas testadas de Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis, Lactococcus lactis, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum demonstraram capacidade de inibir a multiplicação do patógeno in vitro, sendo que L. paracasei alcançou os melhores resultados. Os dados encontrados neste estudo podem evidenciar sobre a influência das cepas de BAL nativas do leite cru no desenvolvimento dos patógenos estudados presentes no ambiente de ordenha e em leite e seus derivados.

This dissertation has two parts, the chapter 1 refers to a brief bibliographic review addressing the microorganisms studied (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus and the lactic acid bacteria - LAB). The chapter 2 describes the study carried out with Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus and LABs isolated from raw milk from dairy farms from the Metropolitan Region of Curitiba, evaluating the potential antagonist of LAB against the pathogen using the plate overlay methodology. Lactic species of Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactis, Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis and Lactobacillus brevis isolated from raw milk showed the ability to inhibit L. monocytogenes in vitro and L. plantarum demonstrated the best inhibitory potential; in the analysis involving the ability of Staphylococcus aureus, tested with strains of Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis, Lactococcus lactis, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum demonstrated the ability to inhibit the multiplication of the pathogen in vitro, with the best results of L. paracasei. The results found in this study may show the influence of LAB strains native to raw milk in the development of the studied pathogens present in the milking environment and in milk and dairy products.

Elaboração de queijo de leite cru maturado com cobertura de erva mate (Ilex paraguariensis)

Nos últimos anos, vem crescendo o interesse no uso de produtos naturais, compostos bioativos, antioxidantes e bactérias iniciadoras na produção e conservação de produtos lácteos. A indústria do queijo é um dos setores que esses produtos têm grande oportunidade de aplicação. Este trabalho teve como objetivo utilizar a erva-mate (EM) como cobertura em queijos de leite cru, com Lactococcus lactis ssp lactis FX-01, aplicada nos dias 5, 10 e 20, para avaliar seus efeitos durante 60 dias de maturação. O uso da cobertura de erva-mate aplicada como cobertura seca, fez com que os queijos absorvessem seus compostos, reduziu a perda de peso e impediu a deterioração lipídica através da sua ação antioxidante. O Lactococcus lactis ssp lactis FX-01, como cultura iniciadora, permitiu controlar o pH dos queijos, apresentando no dia 60, média de 4,46%, acelerou a conversão dos açúcares em ácido lático aumentando a acidez até o 20º dia (0,77%) apresentando estabilidade a partir do dia 40 (0,66%), característica de queijo maturado. A coalhada se tornou mais firme devido às reações químicas e microbiológicas do ambiente interno, sendo o tratamento com aplicação da erva-mate no dia 5 (T5) o que apresentou menor dureza (19,30Kg), como efeito de camada protetora da erva-mate que favoreceu a diminuição da perda de umidade para o meio, contrastando com o tratamento sem cobertura (TC) que apresentou maior perda de umidade (12,80%) e maior dureza (59,59Kg). O tratamento que recebeu a erva-mate no dia 5 (T5), foi o que apresentou maiores valores para absorção de compostos bioativos entre os tratamentos e maior coloração de b* no dia 60, características de ponto de maturação. Assim, tem-se na aplicação de erva-mate com adição de bactéria iniciadora, uma alternativa viável para melhorar os efeitos da maturação em queijos de leite cru.

In recent years, interest in the use of natural products, bioactive compounds, antioxidants and initiating bacteria in dairy products production and conservation has been growing. The cheese industry is one of the sectors in which these products have great application opportunities. This work aimed to use yerba mate (YM) as a topping on raw milk cheeses, with Lactococcus lactis ssp lactis FX-01, applied on the 5th, 10th and 20th , to evaluate its effects during 60 days of ripening. The use of the yerba mate applied as dry coating, made the cheeses absorb their compounds, reduced weight loss and prevented the lipid deterioration through its antioxidant action. Lactococcus lactis ssp lactis FX-01, as a starter culture, allowed the cheeses pH controlling, presenting an average of 4.46% on day 60, accelerated the sugars conversion into lactic acid, increasing acidity until the 20th day (0.77%) showing stability from day 40 (0.66%), characteristic of ripened cheese. The curd became firmer due to the chemical and microbiological reactions of the internal environment, and the treatment with the yerba mate application on day 5 (T5) showed the least hardness (19.30Kg), as a protective layer effect of yerba mate which favored the reduction of moisture loss to the medium, in contrast to the treatment without coating (CT), which presented greater moisture loss (12.80%) and greater hardness (59.59 kg). The treatment that received yerba mate on day 5 (T5), was the one with the highest values for bioactive compounds absorption between treatments and the greatest b * color on day 60, characteristics of ripened point. Thus, we have in the yerba mate application with the addition of starter bacteria, a viable alternative to improve the ripened effects in raw milk cheeses.

Identificação bioquímica de bactérias patogênicas isoladas de peixes ornamentais no estado do Amazonas

p>Ornamental fish in the Amazon are largely exported to the major centers of distribution and sale of ornamental fish in the world, located in the USA, Japan and Germany and at least eight species stand out as major. These species are collected in the medium and upper Rio Negro, in the municipality of Barcelos, in the state of Amazonas, which accounts for about 70% of exports of ornamental fish from Brazil and generating annual revenues of more than 6 million dollars. Because of the intense ornamental fish trade in the region, importers of fish from the Amazon have questioned the sanity of these animals about microorganisms, especially bacteria and viruses that cause disease in these animals. Bacterial and viral diseases can occur in all species of fish maintained under conditions of exploitation causing significant economic losses. Our goal was to verify the occurrence of potentially pathogenic bacteria in ornamental fishes exported from the state of Amazonas. Biochemical characterization of bacterial isolates from five species of ornamental fish allowed the identification of genus ( italic>Staphylococcus /italic>, italic>Nocardia /italic>, italic>Acinetobacter /italic> and italic>Lactococcus /italic>), with important bacterial species causing mortalities in marine and freshwater fish. While Amazon has great biodiversity, there are few studies to investigate this complexity, mainly related to the presence of pathogens causing bacterial diseases on ornamental fish. The results demonstrate the occurrence of pathogenical bacteria or with pathogenic potential in different species of ornamental fish traded from the state of Amazonas. /p>

p>Os peixes ornamentais da Amazônia são exportados em larga escala para os maiores centros de distribuição e venda de peixes ornamentais do mundo localizados nos EUA, Japão e Alemanha e pelo menos oito espécies destacam-se na aquariofilia. Estas espécies são coletadas no médio e alto rio Negro, no município de Barcelos, no Estado do Amazonas, que responde por cerca de 70% das exportações de peixes ornamentais do Brasil e gera lucros anuais de mais de 6 milhões de dólares. Devido ao intenso comércio de peixes ornamentais na região, importadores de peixes do Amazonas questionaram a sanidade dos animais frente a microrganismos, com destaque para bactérias e vírus causadores de enfermidades. As doenças bacterianas e virais podem ocorrer em todas as espécies de peixes mantidas sob condições de exploração, causando perdas econômicas significativas. Neste trabalho objetivou-se, verificar a ocorrência de bactérias potencialmente patogênicas em peixes ornamentais comercializados e exportados do estado do Amazonas. A caracterização bioquímica de bactérias isoladas em cinco espécies de peixes ornamentais permitiu indicar que os isolados pertencem a espécies de quatro gêneros ( italic>Staphylococcus /italic>, italic>Nocardia, Acinetobacter /italic>e italic>Lactococcus /italic>), cujos gêneros bacterianos englobam importantes patógenos causadores de mortalidades em peixes marinhos e de água doce. Embora a biodiversidade Amazônica seja grande, poucos são os trabalhos para investigar essa complexidade, principalmente relacionados à presença de bactérias causadoras de patogenias em peixes ornamentais. Os resultados obtidos demonstram ocorrência de bactérias patogênicas ou com potencial patogênico atuando em diferentes espécies de peixes ornamentais comercializados e exportados do estado do Amazonas. /p>

Identificação bioquímica de bactérias patogênicas isoladas de peixes ornamentais no estado do Amazonas

p>Ornamental fish in the Amazon are largely exported to the major centers of distribution and sale of ornamental fish in the world, located in the USA, Japan and Germany and at least eight species stand out as major. These species are collected in the medium and upper Rio Negro, in the municipality of Barcelos, in the state of Amazonas, which accounts for about 70% of exports of ornamental fish from Brazil and generating annual revenues of more than 6 million dollars. Because of the intense ornamental fish trade in the region, importers of fish from the Amazon have questioned the sanity of these animals about microorganisms, especially bacteria and viruses that cause disease in these animals. Bacterial and viral diseases can occur in all species of fish maintained under conditions of exploitation causing significant economic losses. Our goal was to verify the occurrence of potentially pathogenic bacteria in ornamental fishes exported from the state of Amazonas. Biochemical characterization of bacterial isolates from five species of ornamental fish allowed the identification of genus ( italic>Staphylococcus /italic>, italic>Nocardia /italic>, italic>Acinetobacter /italic> and italic>Lactococcus /italic>), with important bacterial species causing mortalities in marine and freshwater fish. While Amazon has great biodiversity, there are few studies to investigate this complexity, mainly related to the presence of pathogens causing bacterial diseases on ornamental fish. The results demonstrate the occurrence of pathogenical bacteria or with pathogenic potential in different species of ornamental fish traded from the state of Amazonas. /p>

p>Os peixes ornamentais da Amazônia são exportados em larga escala para os maiores centros de distribuição e venda de peixes ornamentais do mundo localizados nos EUA, Japão e Alemanha e pelo menos oito espécies destacam-se na aquariofilia. Estas espécies são coletadas no médio e alto rio Negro, no município de Barcelos, no Estado do Amazonas, que responde por cerca de 70% das exportações de peixes ornamentais do Brasil e gera lucros anuais de mais de 6 milhões de dólares. Devido ao intenso comércio de peixes ornamentais na região, importadores de peixes do Amazonas questionaram a sanidade dos animais frente a microrganismos, com destaque para bactérias e vírus causadores de enfermidades. As doenças bacterianas e virais podem ocorrer em todas as espécies de peixes mantidas sob condições de exploração, causando perdas econômicas significativas. Neste trabalho objetivou-se, verificar a ocorrência de bactérias potencialmente patogênicas em peixes ornamentais comercializados e exportados do estado do Amazonas. A caracterização bioquímica de bactérias isoladas em cinco espécies de peixes ornamentais permitiu indicar que os isolados pertencem a espécies de quatro gêneros ( italic>Staphylococcus /italic>, italic>Nocardia, Acinetobacter /italic>e italic>Lactococcus /italic>), cujos gêneros bacterianos englobam importantes patógenos causadores de mortalidades em peixes marinhos e de água doce. Embora a biodiversidade Amazônica seja grande, poucos são os trabalhos para investigar essa complexidade, principalmente relacionados à presença de bactérias causadoras de patogenias em peixes ornamentais. Os resultados obtidos demonstram ocorrência de bactérias patogênicas ou com potencial patogênico atuando em diferentes espécies de peixes ornamentais comercializados e exportados do estado do Amazonas. /p>

CARACTERÍSTICAS DE MANEJO E REBANHO DA BOVINOCULTURA LEITEIRA DO SUDOESTE DO PARANÁ E SUA RELAÇÃO COM O EXAME BACTERIOLÓGICO DO LEITE

A atividade leiteira no Brasil movimenta grande parte da economia e a região do Sudoeste do Paraná vem se destacando devido a sua crescente produção leiteira, porém esta atividade muitas vezes passa por entraves que comprometem a sua viabilidade. O objetivo da presente pesquisa foi conhecer as características da atividade leiteira da região Sudoeste do Paraná, obtendo-se informações sobre: o manejo empregado na linha de ordenha e período seco, monitoramento da saúde da glândula mamária, controle da mastite, qualidade do leite, características do rebanho, produção leiteira e isolamento de microrganismos presentes no tanque de refrigeração. Estas informações foram obtidas por meio da aplicação de questionário e análises laboratoriais. Foram entrevistados um total de cento e sessenta e três produtores e nessas mesmas propriedades foram coletadas amostras de leite do tanque de refrigeração de forma asséptica para realização de contagem bacteriana total (CBT), contagem de células somáticas (CCS) e exame bacteriológico, este último foi realizado pela técnica de espectrometria de massa (MALDI-TOF) ou pela metodologia convencional. Os dados obtidos foram organizados em Tabela Dinâmica do Excel e realizado uma estatística descritiva. A partir dos resultados obtidos foi possível observar que na linha de ordenha somente 18,8% dos produtores fazem uso de caneca de fundo escuro, 14,5% utilizam pré-dipping, 26,1% usam pós-dipping e 81,2% usam toalha comum a todas as vacas para a secagem dos tetos. Referente a qualidade do leite, 34,8% dos produtores tem CBT <300.000 UFC/mL e 47,8% tem CCS < 500.000 cél/mL. As principais bactérias isoladas do leite do tanque de refrigeração pela técnica de MALDI-TOF foram Macrococcus spp., Staphylococcus spp. e Lactococcus spp., entre outros. Além disso, pode-se observar que as propriedades com até 15 animais (53,2%) foram a maioria, 47,9% utilizam ordenha mecânica balde ao pé, 57,4% tem uma produção de leite diária de até 150 litros. Com relação ao exame bacteriológico convencional 61,7% das propriedades tiveram presença no leite de enterobactérias, 76,6% Staphylococcusspp., e 47,9% Streptococcus agalactiae. Pode-se concluir que na região há o predomínio de pequenos e médios produtores, apresenta deficiências de manejo durante a linha de ordenha, a qualidade do leite está aquém do esperado e existe uma grande diversidade de bactérias isoladas do leite. Portanto, é necessária adoção de medidas públicas que orientem os produtores para que estes se adequem aos valores de qualidade exigidos pelas normativas vigentes.

Dairy activity in Brazil moves a large part of the economy and the Southwestern of Paraná State region has stood out due to its growing dairy production, however the activity often goes through obstacles that compromise its viability. The objective of the present research was to know the characteristics of the dairy activity of the Southwestern of Paraná State, obtaining information on: the management used in the milking line and dry period, monitoring of the mammary gland health, mastitis control, milk quality, herd characteristics, dairy production and isolate microorganisms present in the cooling tank. This information was obtained through the application of a questionnaire and laboratory analysis. A total of one hundred and sixty-three producers were interviewed, where in these same properties samples of milk were collected from the refrigeration tank aseptically to perform total bacterial count (TBC), somatic cell count (SCC) and bacteriological examination, this the latter being carried out by the mass spectrometry technique (MALDI-TOF) or by the conventional methodology. The data obtained were organized in Excel's Dynamic Table and a descriptive statistic was performed. From the results obtained, it was observed that in the milking line, only 18.8% of the producers use a black background mug test, 14.5% use predip, 26.1% use postdip and 81.2% use common towel a all cows for drying the teat. Regarding milk quality, 34.8% of producers have TBC less 300,000 CFU / mL and 47.8% have SCC less 500,000 cells / mL. The main bacteria isolated from milk in the cooling tank by the MALDI-TOF technique were Macrococcus spp., Staphylococcus spp. and Lactococcus spp., among others. Other results obtained are that the properties have up to 15 animals (53.2%), 47.9% use milking machine bucket at the foot, 57.4% have a daily milk production of up to 150 liters. Regarding the conventional bacteriological examination, 61.7% of the properties were present in the milk of enterobacteria, 76.6% Staphylococcus spp., and 47.9% Streptococcus agalactiae. It can be concluded that the region has a predominance of small and medium producers, has management deficiencies during the milking line, the quality of the milk is below expectations and there is a great diversity of bacteria being isolated from the milk. Therefore, it is necessary to adopt public measures to guide producers so that they conform to the quality values required by current regulations.