Resveratrol-Tempeh reduce micronucleus frequencies bone marrow cells and stimulate osteocyte proliferation in aluminum chloride-induced mice / Redução de frequências de micronúcleos células da medula óssea e estímulo proliferação de osteócitos em camundongos induzidos por cloreto de alumínio através do uso de Resveratrol-Tempeh

Aluminum (Al) is widely used for water purification, cooking pots, cosmetic and pharmaceutical preparations, toothpaste tubes, and food processing industries. Although the transport in the digestive tract is very poor but if the load is high, it can be absorbed and accumulated. About 50-70% of Al accumulates in the bones and can have an impact on human health. Resveratrol (RES), isolated from tempeh as an Indonesian food ingredient, can increase cell viability and has promising cytoprotective effects. RES has the capacity to interact with oxidative stress, so it has the potential as a therapy in bone repair. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of RES on the number of osteocytes and bone marrow cells in Al-induced mice. Swiss Webster mice were divided into four groups: (1) untreated groups, (2) AlCl3 -treated groups, (3) Al+Res5 treated groups, and (4) Al+Res10 treated groups. Al dose 200 mg/kg body weight was administered intraperitoneally. RES was given one hour after administration of Al, with doses of 5 and 10 mg/kg Body Weight. Al and RES administration is carried out for one month. All mice were sacrificed, and mouse bones were isolated for histological preparations and a half for genotoxic assays. Bone marrow cells were collected and stained with My Grunwald. The number of micronuclei polychromatic erythrocytes (MNPCE) was examined in 1,000 PCEs per animal. The number of PCEs is counted by at least 200 erythrocytes (PCE + NCE) per animal. The results showed that the administration of Al significantly increased the number of micronuclei (MN) but after administration of RES at doses of 5 and 10 mg/kg Body Weight significantly reduced the number of MN in bone marrow cells. A dose of RES 10 mg/kg BW stimulates proliferation and increases the number of osteocytes in bone significantly. It can be concluded that Al can cause genotoxicity in bone marrow cells and RES is anti-genotoxic and can stimulate osteocyte proliferation.

O alumínio (Al) é amplamente utilizado para purificação de água, panelas, preparações cosméticas e farmacêuticas, tubos de pasta de dente e indústrias de processamento de alimentos. Embora o transporte no trato digestivo seja escasso, se a carga for alta, pode ser, todavia, absorvida e acumulada. Cerca de 50-70% do Al se acumula nos ossos e pode ter impacto na saúde humana. O resveratrol (RES), isolado do tempê indonésio como ingrediente alimentar, pode aumentar a viabilidade celular e tem efeitos citoprotetores promissores. O RES possui a capacidade de interagir com o estresse oxidativo, e por essa razão pode ser utilizado como terapia no reparo ósseo. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do RES no número de osteócitos e células da medula óssea em camundongos induzidos por Al. Camundongos Swiss Webster (SW) foram divididos em quatro grupos: (1) grupos não tratados, (2) grupos tratados com AlCl3 , (3) grupos tratados com Al+Res5 e (4) grupos tratados com Al+Res10. Uma dose de 200 mg/kg de peso corporal foi administrada por via intraperitoneal. O RES foi administrado uma hora após a administração do Al, nas doses de 5 e 10 mg/kg de peso corporal. A administração de Al e RES foi realizada por um mês. Todos os camundongos foram sacrificados, e os ossos dos camundongos foram isolados para preparações histológicas e meio para ensaios genotóxicos. As células da medula óssea foram coletadas e coradas com My Grunwald. O número de eritrócitos policromáticos micronúcleos (MNPCE) foi examinado em 1.000 PCEs por animal. O número de PCEs foi contado por pelo menos 200 eritrócitos (PCE + NCE) por animal. Os resultados mostraram que a administração de Al aumentou significativamente o número de micronúcleos (MN), mas após a administração de RES nas doses de 5 e 10 mg/kg de peso corporal reduziu significativamente o número de MN nas células da medula óssea. Uma dose de RES de 10 mg/kg BW estimula a proliferação e aumenta significativamente o número de osteócitos no osso. Dessa forma, pôde-se concluir que o Al pode causar genotoxicidade em células da medula óssea e o RES é antigenotóxico e pode estimular a proliferação de osteócitos.

Decrease of the DXR-induced genotoxicity and nongenotoxic effects of Theobroma cacao revealed by micronucleus assay / Diminuição da genotoxicidade induzida por DXR e efeitos não genotóxicos de Theobroma cacao revelados pelo ensaio de micronúcleo

This study evaluated the genotoxicity of lyophilized glycolic extract of Theobroma cacao Linné seeds (TCL), using the micronucleus assay in bone marrow of mice. The interaction between TCL and doxorubicin (DXR) was also analyzed. Experimental groups were evaluated 24-48 h after treatment with N-Nitroso-N-ethylurea (NEU: 50 mg/kg), DXR (5 mg/kg), NaCl (145 mM), TCL (0.5-2 g/kg), and TCL (2 g/kg) in combination with DXR (antigenotoxic assays). Analysis of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCEs) showed no significant differences between all the treatment doses of TCL and NaCl control. Mice experimentally treated with DXR and NEU significantly induced MNPCEs. However, a significant reduction of MNPCEs was also observed when TCL was administered in combination with the chemotherapeutic agent DXR. The analysis of the PCE/NCE ratio revealed no significant differences between the NaCl control, all doses of TCL, and DXR. However, there were significant differences in the PCE/NCE ratio between positive NEU control and all other treatments. The PCE/NCE ratio observed after treatment with TCL and DXR showed significant differences and intermediate values to controls (NaCl and NEU). This study suggests absence of genotoxicity and cytotoxicity of TCL, regardless of dose, sex, and time. TCL reduced genotoxic effects induced by DXR, suggesting potential antigenotoxic effects.(AU)

Este estudo avaliou a genotoxicidade do extrato glicólico liofilizado de sementes de Theobroma cacao Linné (TCL), usando o ensaio do micronúcleo em medula óssea de camundongos. A interação entre TCL e doxorrubicina (DXR) foi também analisada. Grupos experimentais foram avaliados 24-48 h após tratamento com N-Nitroso-N-etilureia (NEU: 50 mg/kg), DXR (5 mg/kg), NaCl (145 mM), TCL (0,5-2 g/kg), e TCL (2 g/kg) em combinação com DXR (ensaio antigenotóxico). As análises de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMNs) não mostraram diferenças significantes entre todas as doses de tratamento do TCL e o controle NaCl. Camundongos experimentalmente tratados com DXR e NEU induziram significativamente EPCMNs. Contudo, uma redução significante de EPCMNs foi também observada quando TCL foi administrada em combinação com o agente quimioterapêutico DXR. As análises da relação EPC/ENC (eritrócito policromático/eritrócito normocromático) revelaram ausência de diferenças significantes entre o controle NaCl, todas as doses de TCL e DXR. Contudo, houve diferenças significantes na relação EPC/ENC entre o controle positivo NEU e todos os outros tratamento. A relação ECP/ENC observada após o tratamento com TCL e DXR mostrou diferenças significantes e valores intermediários aos controles (NaCl e NEU). Este estudo sugere ausência de genotoxicidade e citotoxicidade de TCL, independentemente da dose, sexo e tempo. TCL reduziu os efeitos genotóxicos induzidos por DXR, sugerindo potencial efeitos antigenotóxicos.(AU)

Decrease of the DXR-induced genotoxicity and nongenotoxic effects of Theobroma cacao revealed by micronucleus assay / Diminuição da genotoxicidade induzida por DXR e efeitos não genotóxicos de Theobroma cacao revelados pelo ensaio de micronúcleo

This study evaluated the genotoxicity of lyophilized glycolic extract of Theobroma cacao Linné seeds (TCL), using the micronucleus assay in bone marrow of mice. The interaction between TCL and doxorubicin (DXR) was also analyzed. Experimental groups were evaluated 24-48 h after treatment with N-Nitroso-N-ethylurea (NEU: 50 mg/kg), DXR (5 mg/kg), NaCl (145 mM), TCL (0.5-2 g/kg), and TCL (2 g/kg) in combination with DXR (antigenotoxic assays). Analysis of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCEs) showed no significant differences between all the treatment doses of TCL and NaCl control. Mice experimentally treated with DXR and NEU significantly induced MNPCEs. However, a significant reduction of MNPCEs was also observed when TCL was administered in combination with the chemotherapeutic agent DXR. The analysis of the PCE/NCE ratio revealed no significant differences between the NaCl control, all doses of TCL, and DXR. However, there were significant differences in the PCE/NCE ratio between positive NEU control and all other treatments. The PCE/NCE ratio observed after treatment with TCL and DXR showed significant differences and intermediate values to controls (NaCl and NEU). This study suggests absence of genotoxicity and cytotoxicity of TCL, regardless of dose, sex, and time. TCL reduced genotoxic effects induced by DXR, suggesting potential antigenotoxic effects.

Este estudo avaliou a genotoxicidade do extrato glicólico liofilizado de sementes de Theobroma cacao Linné (TCL), usando o ensaio do micronúcleo em medula óssea de camundongos. A interação entre TCL e doxorrubicina (DXR) foi também analisada. Grupos experimentais foram avaliados 24-48 h após tratamento com N-Nitroso-N-etilureia (NEU: 50 mg/kg), DXR (5 mg/kg), NaCl (145 mM), TCL (0,5-2 g/kg), e TCL (2 g/kg) em combinação com DXR (ensaio antigenotóxico). As análises de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMNs) não mostraram diferenças significantes entre todas as doses de tratamento do TCL e o controle NaCl. Camundongos experimentalmente tratados com DXR e NEU induziram significativamente EPCMNs. Contudo, uma redução significante de EPCMNs foi também observada quando TCL foi administrada em combinação com o agente quimioterapêutico DXR. As análises da relação EPC/ENC (eritrócito policromático/eritrócito normocromático) revelaram ausência de diferenças significantes entre o controle NaCl, todas as doses de TCL e DXR. Contudo, houve diferenças significantes na relação EPC/ENC entre o controle positivo NEU e todos os outros tratamento. A relação ECP/ENC observada após o tratamento com TCL e DXR mostrou diferenças significantes e valores intermediários aos controles (NaCl e NEU). Este estudo sugere ausência de genotoxicidade e citotoxicidade de TCL, independentemente da dose, sexo e tempo. TCL reduziu os efeitos genotóxicos induzidos por DXR, sugerindo potencial efeitos antigenotóxicos.

Leukocyte profile of the helmeted manakin, Antilophia galeata (Passeriformes: Pipridae) in a Cerrado forest fragment

Changes in the amounts and proportions of leukocytes, known as leucocyte profiles, have been documented for several bird species and have been used to measure stress levels in these animals. The present work ascertained the biological and ecological attributes that influence the leukocyte profile of Antilophia galeata (Lichtenstein, 1823), the helmeted manakin. This species has been deemed useful in ecological studies because it responds to environmental changes. Blood samples drawn from 89 individuals of A. galeata captured in a Cerrado forest fragment were subjected to analysis under optical microscopy to identify and quantify leukocytes and micronuclei. The number of lymphocytes was greater for males, non-reproductive individuals and individuals infected with ticks. None of the leukocyte components differed in relation to age, molting or body condition index. The amount of micronuclei was correlated with values for total leukocytes, H/L ratio, heterophils, basophils and monocytes. The results suggest that reproduction may be an immunosuppressive factor for the species, producing sexual differences in lymphocyte availability. In addition, biomarkers of genotoxic damage (micronuclei) were related to the amount of leukocytes, indicating that individuals may be sensitive to environmental disturbances. Leukocyte profiles can be considered a useful tool for addressing ecological questions that are relevant to the conservation of species in degraded environments.

Leukocyte profile of the helmeted manakin, Antilophia galeata (Passeriformes: Pipridae) in a Cerrado forest fragment

Changes in the amounts and proportions of leukocytes, known as leucocyte profiles, have been documented for several bird species and have been used to measure stress levels in these animals. The present work ascertained the biological and ecological attributes that influence the leukocyte profile of Antilophia galeata (Lichtenstein, 1823), the helmeted manakin. This species has been deemed useful in ecological studies because it responds to environmental changes. Blood samples drawn from 89 individuals of A. galeata captured in a Cerrado forest fragment were subjected to analysis under optical microscopy to identify and quantify leukocytes and micronuclei. The number of lymphocytes was greater for males, non-reproductive individuals and individuals infected with ticks. None of the leukocyte components differed in relation to age, molting or body condition index. The amount of micronuclei was correlated with values for total leukocytes, H/L ratio, heterophils, basophils and monocytes. The results suggest that reproduction may be an immunosuppressive factor for the species, producing sexual differences in lymphocyte availability. In addition, biomarkers of genotoxic damage (micronuclei) were related to the amount of leukocytes, indicating that individuals may be sensitive to environmental disturbances. Leukocyte profiles can be considered a useful tool for addressing ecological questions that are relevant to the conservation of species in degraded environments.(AU)

Genotoxicity effects on Geophagus brasiliensis fish exposed to Doce River water after the environmental disaster in the city of Mariana, MG, Brazil / Efeitos da genotoxicidade em peixes da espécie Geophagus brasiliensis expostos a água do Rio Doce após o desastre ambiental na cidade de Marina, MG, Brasil

The Doce River basin has suffered the largest environmental accident ever occurred in Brazil with the influx of tailings from Fundão and Santarém, belonging to Samarco mining company, due to the disaster in Mariana. A spill between 50 and 60 million m3 of tailings was estimated by the company. According to Samarco, the wastewater was composed mainly of clay, silt and heavy metals like iron, copper and manganese. Thereby, the objective of the present study was evaluated the genotoxic damage in juvenile of Geophagus brasiliensis (Quoy e Gaimard, 1824) exposed to Doce river water before (DRWBA Doce River water before acident) and after (DRWAA Doce River water after acident) the influx of tailings from the Germano and Santarém Dam disasters in Mariana, MG, Brazil. For this, 24 individuals of the species G. brasiliensis (obtained on IFES/ALEGRE fish culture) were submitted to a bioassay with three treatments and eight replicates. The treatments were: 1) Control water (water from the urban water supply system, filtered with a 0.45 µm membrane), 2) DRBA and 3) DRAA. After 96 h, these fishes were anesthetized to remove blood for evaluation of genotoxic damage (micronucleus and comet). For the bioassay, a total of 80 L of The Doce River water were collected before the influx of tailings and after the influx and then submitted to metal quantification analysis. Fish exposed to DRWBA and DRWAA treatments showed a significant increase in both the number of erythrocyte micronuclei and the DNA damage index in relation to the control fish; however, they did not present any differences between the two treatments. The results demonstrate that the DRWBA treatment was already genotoxic for the fish, mainly due to dissolved Cu concentrations in the water. The DRWAA treatment probably presented genotoxicity due to the increase in the dissolved fraction and synergistic effects of several metals found in the tailings of the Mariana accident.(AU)

A bacia do Rio Doce sofreu o maior acidente ambiental com o influxo de rejeitos de Fundão e Santarém, pertencentes à empresa de mineração Samarco, devido ao desastre em Mariana. Um derramamento entre 50 e 60 milhões de m3 de rejeitos foi estimado pela empresa. De acordo com a Samarco, o rejeito despejado era composto principalmente de argila, silte e alguns metais pesados como ferro, cobre e manganês. Com isso, o presente estudo teve como objetivo avaliar os danos genotóxicos em juvenis de Geophagus brasilienses expostos a água do rio Doce antes (DRWAA água do Rio Doce antes do acidente) e depois (DRWBA- água do Rio Doce depois do acidente) da chegada dos rejeitos do rompimento das barragens de Germano e Santarém em Mariana, MG, Brasil. Para isso, 24 indivíduos da espécie G. brasilienses (obtidos na piscicultura do IFES/ALEGRE) foram submetidos a um bioensaio com três tratamentos e oito réplicas. Os tratamentos eram: 1) Controle (com água do abastecimento urbano, filtrada com filtro analítico de 0,45 µm); 2) DRWBA e 3) DRWAA. Após um período de 96 h, esses peixes foram anestesiados para retirada de sangue para avaliação dos danos genotóxicos (micronúcleo e cometa). Para a realização do bioensaio, um total de 80 L de água do Rio Doce foram coletados antes da chegada dos rejeitos e outros 80 L foram coletados depois da chegada dos rejeitos e ambas foram submetidas a análises de quantificação de metal. Os peixes expostos ao DRWBA e ao DRWAA apresentaram um aumento significativo na quantidade de micronúcleos eritrocitários e no índice de danos do DNA em relação aos peixes controle, no entanto não apresentaram diferenças entre si. Os resultados obtidos demonstram que a DRWBA já era genotóxica para os peixes, principalmente, em função das concentrações de Cu dissolvido na água. A DRWAA apresentou genotixicidade, provavelmente, em função do aumento da fração dissolvida e do efeito sinérgico de diversos metais presentes nos rejeitos do acidente de Mariana.(AU)

Evaluation of antimutagenic and cytotoxic activity of skin secretion extract of Rhinella marina and Rhaebo guttatus (Anura, Bufonidae) / Avaliação da atividade antimutagênica e citotóxica da secreção cutânea de Rhinella marina e Rhaebo guttatus (Anura, Bufonidae)

The skin secretion from toads of the Bufonidae family has great potential in the search for new active compounds to be used as drug candidates in treating some diseases, among them cancer. In this context, this study aimed to evaluate the cytotoxic and antimutagenic activity of the parotoid gland secretion extracts of Rhinella marina and Rhaebo guttatus, as well as biochemically analyze transaminases and serum creatinine for liver and renal damage, respectively. Cytotoxicity was performed by the colorimetric method based on MTT (3- [4, 5-dimethyl-2-thiazolyl]-2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) with different concentrations of the extracts in Walker or splenic tumor cell cultures from rats and mice. The micronucleus test was performed with male Swiss mice treated orally with the extracts for 15 days, and then intraperitoneally with N-ethyl-N-nitrosurea (50 mg kg-1). Micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) were evaluated in bone marrow. The extracts showed cytotoxic activity in the evaluated cells. There was a significant reduction in the frequency of MNPCE (R. marina = 56% and R. guttatus = 75%, p < 0.001), indicating antimutagenic potential of the extracts. The groups treated only with extract showed an increase in MNPCE frequency, evidencing mutagenic potential. Biochemical analyzes showed no significant difference between treatments. Thus, under our experimental conditions, the extracts of R. marina and R. guttatus skin secretions presented chemopreventive potential for cancer.(AU)

A secreção cutânea de anuros da família Bufonidae tem grande potencial na busca de novos compostos ativos para utilização como fármacos candidatos no tratamento de algumas doenças, entre elas o câncer. Neste contexto, este estudo teve como objetivo avaliar a atividade citotóxica e antimutagênica dos extratos da secreção da glândula parótida de Rhinella marina e Rhaebo guttatus, bem como a análise bioquímica de transaminases e creatinina séricas, para avaliar dano hepático e renal, respectivamente. A avaliação de citotoxicidade foi realizada pelo método colorimétrico baseado no MTT (3-[4, 5-dimethyl-2-thiazolyl]-2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide), com diferentes concentrações dos extratos em culturas de células do Tumor de Walker ou células esplênicas de rato e camundongo. O teste do micronúcleo foi realizado com camundongos Swiss machos que receberam tratamento oral com os extratos durante 15 dias, seguido de tratamento intraperitoneal com N-etil-N-nitrosuréia (50 mg kg-1). A frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados (PCEMN) foi determinada em medula óssea. Os extratos apresentaram ação citotóxica nas células avaliadas. Houve uma redução significativa na frequência de PCEMN (R. marina = 56% e R. guttatus = 75%, p < 0,001), observando-se um potencial antimutagênico dos extratos. Os grupos tratados somente com os extratos apresentaram um aumento na frequência de PCEMNs, evidenciando um potencial mutagênico. As análises bioquímicas não apresentaram diferença significativa entre os tratamentos. Assim, nas condições experimentais testadas, as secreções cutâneas de R. marina e R. guttatus apresentaram potencial quimiopreventivo para câncer.(AU)

Evaluation of antimutagenic and cytotoxic activity of skin secretion extract of Rhinella marina and Rhaebo guttatus (Anura, Bufonidae) / Avaliação da atividade antimutagênica e citotóxica da secreção cutânea de Rhinella marina e Rhaebo guttatus (Anura, Bufonidae)

The skin secretion from toads of the Bufonidae family has great potential in the search for new active compounds to be used as drug candidates in treating some diseases, among them cancer. In this context, this study aimed to evaluate the cytotoxic and antimutagenic activity of the parotoid gland secretion extracts of Rhinella marina and Rhaebo guttatus, as well as biochemically analyze transaminases and serum creatinine for liver and renal damage, respectively. Cytotoxicity was performed by the colorimetric method based on MTT (3- [4, 5-dimethyl-2-thiazolyl]-2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) with different concentrations of the extracts in Walker or splenic tumor cell cultures from rats and mice. The micronucleus test was performed with male Swiss mice treated orally with the extracts for 15 days, and then intraperitoneally with N-ethyl-N-nitrosurea (50 mg kg-1). Micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) were evaluated in bone marrow. The extracts showed cytotoxic activity in the evaluated cells. There was a significant reduction in the frequency of MNPCE (R. marina = 56% and R. guttatus = 75%, p < 0.001), indicating antimutagenic potential of the extracts. The groups treated only with extract showed an increase in MNPCE frequency, evidencing mutagenic potential. Biochemical analyzes showed no significant difference between treatments. Thus, under our experimental conditions, the extracts of R. marina and R. guttatus skin secretions presented chemopreventive potential for cancer. (AU)

A secreção cutânea de anuros da família Bufonidae tem grande potencial na busca de novos compostos ativos para utilização como fármacos candidatos no tratamento de algumas doenças, entre elas o câncer. Neste contexto, este estudo teve como objetivo avaliar a atividade citotóxica e antimutagênica dos extratos da secreção da glândula parótida de Rhinella marina e Rhaebo guttatus, bem como a análise bioquímica de transaminases e creatinina séricas, para avaliar dano hepático e renal, respectivamente. A avaliação de citotoxicidade foi realizada pelo método colorimétrico baseado no MTT (3-[4, 5-dimethyl-2-thiazolyl]-2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide), com diferentes concentrações dos extratos em culturas de células do Tumor de Walker ou células esplênicas de rato e camundongo. O teste do micronúcleo foi realizado com camundongos Swiss machos que receberam tratamento oral com os extratos durante 15 dias, seguido de tratamento intraperitoneal com N-etil-N-nitrosuréia (50 mg kg-1). A frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados (PCEMN) foi determinada em medula óssea. Os extratos apresentaram ação citotóxica nas células avaliadas. Houve uma redução significativa na frequência de PCEMN (R. marina = 56% e R. guttatus = 75%, p < 0,001), observando-se um potencial antimutagênico dos extratos. Os grupos tratados somente com os extratos apresentaram um aumento na frequência de PCEMNs, evidenciando um potencial mutagênico. As análises bioquímicas não apresentaram diferença significativa entre os tratamentos. Assim, nas condições experimentais testadas, as secreções cutâneas de R. marina e R. guttatus apresentaram potencial quimiopreventivo para câncer.(AU)

Reduction of doxorubicin-induced genotoxicity by Handroanthus impetiginosus in mouse bone marrow revealed by micronucleus assay / Redução da genotoxicidade induzida pela doxorrubicina por Handroanthus impetiginosus na medula óssea de camundongos revelada pelo ensaio do micronúcleo

Handroanthus impetiginosus has long been used in traditional medicine and various studies have determined the presence of bioactive chemical compounds and potential phytotherapeutics. In this study, the genotoxicity of the lyophilized tincture of H. impetiginosus bark (THI) was evaluated in mouse bone marrow using micronucleus assays. The interaction between THI and genotoxic effects induced by the chemotherapeutic agent, doxorubicin (DXR), was also analyzed. Experimental groups were evaluated 24 to 48 h after treatment with N-nitroso-N-ethylurea (NEU; 50 mg/kg), DXR (5 mg/kg), sodium chloride (NaCl; 150 mM), and THI (0.5-2 g/kg). Antigenotoxic assays were carried out using THI (0.5 g/kg) in combination with NEU or DXR. Analysis of the micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCEs) indicated no significant differences between treatment doses of THI (0.5-2 g/kg) and NaCl. Polychromatic erythrocyte (PCE) to normochromatic erythrocyte (NCE) ratios did not indicate any statistical differences between DXR and THI or NaCl, but there were differences between THI and NaCl. A significant reduction in MNPCEs and PCE/NCE ratios was observed when THI was administered in combination with DXR. This study suggested the absence of THI genotoxicity that was dose-, time-, and gender-independent and the presence of moderate systemic toxicity that was dose-independent, but time- and gender-dependent. The combination of THI and DXR also suggested antigenotoxic effects, indicating that THI reduced genotoxic effects induced by chemotherapeutic agents.(AU)

Handroanthus impetiginosus tem sido usada durante um longo período pela medicina tradicional e vários estudos têm demonstrados a presença de compostos químicos e potencial fitoterapêutico. Esta pesquisa avaliou a genotoxicidade da tintura da casca liofilizada de H. impetiginosus (THI) usando o ensaio do micronúcleo em medula óssea de camundongos. A interação entre THI e os efeitos genotóxicos induzidos pelo quimioterápico doxorrubicina (DXR) também foram analisados. Grupos experimentais foram analisados a 24-48 h após o tratamento com N-Nitroso-N-etiluréia (NEU; 50 mg/kg), DXR (5 mg/kg), NaCl (150 mM) e THI (0,5-2 g/kg). O ensaio antigenotóxico foi conduzido utilizando THI (0,5 g/kg) em combinação com NEU ou DXR. A análise de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMNs) não mostrou diferenças significativas entre as doses de tratamento (0,5-2 g/kg) e NaCl. As proporções de eritrócitos policromáticos (EPC)/eritrócitos normocromáticos (ENC) não revelaram diferenças estatísticas entre DXR e THI ou NaCl, porém houve diferenças entre THI e NaCl. Uma redução significativa em EPCMNs e na razão EPC/ENC foi observada quando THI foi administrado em combinação com DXR. Essa pesquisa sugere ausência de genotoxicidade de THI, dose-, tempo- e sexo-independente, e moderada toxicidade sistêmica dose-independente, mas tempo- e sexo-dependente. A associação do THI e DXR também sugere efeitos antigenotóxicos. Por conseguinte, THI pode reduzir os efeitos genotóxicos induzidos pelo quimioterapêutico.(AU)

First phytochemical and biological study of the ethanolic extract from leaves of Capirona decorticans (Rubiaceae) / Primeiro estudo fitoquímico e biológico do extrato etanólico de folhas de Capirona decorticans (Rubiaceae)

Capirona decorticans (Rubiaceae) is popularly used to treat warts, wounds, mycoses and scabies, and is also a component of the Ayahuasca tea. Despite its popular use, the phytochemical and pharmacological research on this species is limited. Therefore, this work quantified phenolic compounds in the ethanolic extract (EE) and hydromethanolic fraction (FM) (406, 293 mgEAG g-1, respectively) from leaves of C. decorticans. We identified flavonoids by LC-MS/MS-MMR-ESI (apigenin, rutin, luteolin, miricetin, quercetin, quercetin-3--D-glucoside, quercetrin), and evaluated oxidative stress and mutagenic/antimutagenic effect of EE and FM through an in vivo experiment using Swiss mice and cyclophosphamide (CP) as an inducer of DNA damage and oxidative stress. Mice were pretreated for 15 consecutive days with EE or FM (250 mg kg-1) and then intraperitoneally injected with CP (25 mg kg-1). Carbonylated proteins, ascorbic acid, catalase and thiobarbituric acid-reactive substances were measured in hepatic and renal tissues. The mutagenic/antimutagenic effect was evaluated through the Micronucleus Test. Protein carbonylation in the liver of animals exposed to CP was reduced by FM. There was no significant effect on other markers of oxidative stress. The groups treated with the extracts showed a significant percentage reduction (EE = 96% and FM = 71%) in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes induced by CP. EE showed mutagenicity when used alone. The EE and FM of C. decorticans leaves showed antioxidant potential equivalent to that observed in other species, did not cause oxidative stress, nor toxicity, and had a protective and antimutagenic effect, although the EE showed signs of mutagenicity.

Capirona decorticans (Rubiaceae) é popularmente usada para tratar verrugas, feridas, micoses e sarna, e como um componente do chá de Ayahuasca. Apesar do uso popular, são limitadas as pesquisas fitoquímicas e farmacológicas sobre a espécie. Portanto, este estudo quantificou compostos fenólicos no extrato etanólico (EE) e na fração hidrometanólica (FM) (406 e 293 mgEAG g-1, respectivamente) de folhas de C. decorticans. Identificamos flavonoides por LC-MS / MS-MMR-ESI (apigenina, rutina, luteolina, miricetina, quercetina, quercetina-3--D-glicosídeo, quercetrina), e avaliamos o estresse oxidativo e o efeito mutagênico/antimutagênico de EE e FM em um experimento in vivo utilizando camundongos Swiss e ciclofosfamida (CP) como um indutor de danos no DNA e estresse oxidativo. Os camundongos foram pré-tratados por 15 dias consecutivos com EE ou FM (250 mg kg-1) e injetados intraperitonealmente com CP (25 mg kg-1). Proteínas carboniladas, ácido ascórbico, catalase e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico foram dosadas em tecidos hepáticos e renais. O efeito mutagênico/antimutagênico foi avaliado através do Teste de Micronúcleo. Houve carbonilação protéica no fígado de animais expostos à CP, que foi reduzida pela FM. Não houve efeito significativo sobre outros marcadores de estresse oxidativo. Os grupos tratados com os extratos apresentaram uma redução percentual significativa (EE = 96% e FM = 71%) na frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados induzidos pela PC. O EE também apresentou mutagenicidade quando utilizado isoladamente. O EE e FM das folhas de C. decorticans apresentaram potencial antioxidante equivalente ao observado em outras espécies, não causaram estresse oxidativo, nem toxicidade, e tiveram efeito protetor e antimutagênico, embora a EE tenha apresentado mutagenicidade.

First phytochemical and biological study of the ethanolic extract from leaves of Capirona decorticans (Rubiaceae) / Primeiro estudo fitoquímico e biológico do extrato etanólico de folhas de Capirona decorticans (Rubiaceae)

Capirona decorticans (Rubiaceae) is popularly used to treat warts, wounds, mycoses and scabies, and is also a component of the Ayahuasca tea. Despite its popular use, the phytochemical and pharmacological research on this species is limited. Therefore, this work quantified phenolic compounds in the ethanolic extract (EE) and hydromethanolic fraction (FM) (406, 293 mgEAG g-1, respectively) from leaves of C. decorticans. We identified flavonoids by LC-MS/MS-MMR-ESI (apigenin, rutin, luteolin, miricetin, quercetin, quercetin-3--D-glucoside, quercetrin), and evaluated oxidative stress and mutagenic/antimutagenic effect of EE and FM through an in vivo experiment using Swiss mice and cyclophosphamide (CP) as an inducer of DNA damage and oxidative stress. Mice were pretreated for 15 consecutive days with EE or FM (250 mg kg-1) and then intraperitoneally injected with CP (25 mg kg-1). Carbonylated proteins, ascorbic acid, catalase and thiobarbituric acid-reactive substances were measured in hepatic and renal tissues. The mutagenic/antimutagenic effect was evaluated through the Micronucleus Test. Protein carbonylation in the liver of animals exposed to CP was reduced by FM. There was no significant effect on other markers of oxidative stress. The groups treated with the extracts showed a significant percentage reduction (EE = 96% and FM = 71%) in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes induced by CP. EE showed mutagenicity when used alone. The EE and FM of C. decorticans leaves showed antioxidant potential equivalent to that observed in other species, did not cause oxidative stress, nor toxicity, and had a protective and antimutagenic effect, although the EE showed signs of mutagenicity.(AU)

Capirona decorticans (Rubiaceae) é popularmente usada para tratar verrugas, feridas, micoses e sarna, e como um componente do chá de Ayahuasca. Apesar do uso popular, são limitadas as pesquisas fitoquímicas e farmacológicas sobre a espécie. Portanto, este estudo quantificou compostos fenólicos no extrato etanólico (EE) e na fração hidrometanólica (FM) (406 e 293 mgEAG g-1, respectivamente) de folhas de C. decorticans. Identificamos flavonoides por LC-MS / MS-MMR-ESI (apigenina, rutina, luteolina, miricetina, quercetina, quercetina-3--D-glicosídeo, quercetrina), e avaliamos o estresse oxidativo e o efeito mutagênico/antimutagênico de EE e FM em um experimento in vivo utilizando camundongos Swiss e ciclofosfamida (CP) como um indutor de danos no DNA e estresse oxidativo. Os camundongos foram pré-tratados por 15 dias consecutivos com EE ou FM (250 mg kg-1) e injetados intraperitonealmente com CP (25 mg kg-1). Proteínas carboniladas, ácido ascórbico, catalase e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico foram dosadas em tecidos hepáticos e renais. O efeito mutagênico/antimutagênico foi avaliado através do Teste de Micronúcleo. Houve carbonilação protéica no fígado de animais expostos à CP, que foi reduzida pela FM. Não houve efeito significativo sobre outros marcadores de estresse oxidativo. Os grupos tratados com os extratos apresentaram uma redução percentual significativa (EE = 96% e FM = 71%) na frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados induzidos pela PC. O EE também apresentou mutagenicidade quando utilizado isoladamente. O EE e FM das folhas de C. decorticans apresentaram potencial antioxidante equivalente ao observado em outras espécies, não causaram estresse oxidativo, nem toxicidade, e tiveram efeito protetor e antimutagênico, embora a EE tenha apresentado mutagenicidade.(AU)

Genetic stability in synthetic wheat accessions: cytogenetic evaluation as a support in breeding programs / Estabilidade genética em acessos de trigos sintéticos: avaliação citogenética como apoio em programas de melhoramento genético

Synthetic wheat is developed by crossing tetraploid species (Triticum turgidum, AABB) with a diploid species (Aegilops tauschii, DD), followed by chromosome duplication through the use of colchicine to restore the resultant sterile hybrid to a fertile hexaploid plant. The main importance of producing synthetically improved wheat is to increase their genetic variability and to incorporate genes that code for resistance to biotic and abiotic stressors. This study aimed to evaluate the presence of micronuclei (MN) and the meiotic index (MI) in the tetrad phase in synthetic wheat accessions and cultivars (Triticum aestivum) stored at the Germplasm Bank of Embrapa Trigo (Brazil), in order to identify and select genetically stable accessions for plant improvement. Five plants were collected by genotype, prior to anthesis, and the tissues were fixed in Carnoy solution. Cytological slides were prepared by the smash method, and the cells were dyed with 1% acetocarmine and observed under an optical microscope. Presence of MN was observed in all genotypes analyzed, and variability of genetic stability was reported in the two years of analysis. In 2014, the highest MI of synthetic wheat accessions was 96.86% and the lowest was 46.32%. In 2015, the highest MI was 96.60% and the lowest was 47.96%. Based on the results, some genotypes were considered meiotically stable and suitable for use in wheat breeding programs.

Trigos sintéticos são resultados do cruzamento entre uma espécie tetraploide (Triticum turgidum, AABB) e uma espécie diploide (Aegilops tauschii, DD) originando um híbrido estéril, seguido por duplicação cromossômica, por meio de colchicina, para restabelecer um trigo hexaploide fértil. A principal importância do uso de trigos sintéticos no melhoramento é que possibilitam aumentar a variabilidade genética, bem como introgredir genes de resistência a estresses bióticos e abióticos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a presença de micronúcleos (MCN) e índice meiótico (IM) na fase de tétrades, em acessos de trigos sintéticos e cultivares testemunhas (T. aestivum), armazenadas no Banco de Germoplasma da Embrapa Trigo, a fim de selecionar os acessos estáveis geneticamente e disponibilizar ao melhoramento. Cinco plantas por genótipos, na fase anterior à antese, foram coletadas e fixadas em solução Carnoy. As lâminas citológicas foram preparadas pelo método de maceração e a coloração das células com carmim acético 1%. As observações foram em microscópio óptico. Observou-se a presença de micronúcleos em todos os genótipos analisados e foi encontrado variabilidade quanto à estabilidade genética nos dois anos de análises. Em 2014, o percentual máximo de IM dos acessos de trigos sintéticos foi de 96,86% e o mínimo de 46,32%. Em 2015, o percentual de IM máximo foi de 96,60% e o mínimo de 47,96%. Com base nos resultados, alguns genótipos foram considerados meioticamenteestáveis e, poderão ser utilizados em programas de melhoramento genético de trigo.

Genetic stability in synthetic wheat accessions: cytogenetic evaluation as a support in breeding programs / Estabilidade genética em acessos de trigos sintéticos: avaliação citogenética como apoio em programas de melhoramento genético

Synthetic wheat is developed by crossing tetraploid species (Triticum turgidum, AABB) with a diploid species (Aegilops tauschii, DD), followed by chromosome duplication through the use of colchicine to restore the resultant sterile hybrid to a fertile hexaploid plant. The main importance of producing synthetically improved wheat is to increase their genetic variability and to incorporate genes that code for resistance to biotic and abiotic stressors. This study aimed to evaluate the presence of micronuclei (MN) and the meiotic index (MI) in the tetrad phase in synthetic wheat accessions and cultivars (Triticum aestivum) stored at the Germplasm Bank of Embrapa Trigo (Brazil), in order to identify and select genetically stable accessions for plant improvement. Five plants were collected by genotype, prior to anthesis, and the tissues were fixed in Carnoy solution. Cytological slides were prepared by the smash method, and the cells were dyed with 1% acetocarmine and observed under an optical microscope. Presence of MN was observed in all genotypes analyzed, and variability of genetic stability was reported in the two years of analysis. In 2014, the highest MI of synthetic wheat accessions was 96.86% and the lowest was 46.32%. In 2015, the highest MI was 96.60% and the lowest was 47.96%. Based on the results, some genotypes were considered meiotically stable and suitable for use in wheat breeding programs.(AU)

Trigos sintéticos são resultados do cruzamento entre uma espécie tetraploide (Triticum turgidum, AABB) e uma espécie diploide (Aegilops tauschii, DD) originando um híbrido estéril, seguido por duplicação cromossômica, por meio de colchicina, para restabelecer um trigo hexaploide fértil. A principal importância do uso de trigos sintéticos no melhoramento é que possibilitam aumentar a variabilidade genética, bem como introgredir genes de resistência a estresses bióticos e abióticos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a presença de micronúcleos (MCN) e índice meiótico (IM) na fase de tétrades, em acessos de trigos sintéticos e cultivares testemunhas (T. aestivum), armazenadas no Banco de Germoplasma da Embrapa Trigo, a fim de selecionar os acessos estáveis geneticamente e disponibilizar ao melhoramento. Cinco plantas por genótipos, na fase anterior à antese, foram coletadas e fixadas em solução Carnoy. As lâminas citológicas foram preparadas pelo método de maceração e a coloração das células com carmim acético 1%. As observações foram em microscópio óptico. Observou-se a presença de micronúcleos em todos os genótipos analisados e foi encontrado variabilidade quanto à estabilidade genética nos dois anos de análises. Em 2014, o percentual máximo de IM dos acessos de trigos sintéticos foi de 96,86% e o mínimo de 46,32%. Em 2015, o percentual de IM máximo foi de 96,60% e o mínimo de 47,96%. Com base nos resultados, alguns genótipos foram considerados meioticamenteestáveis e, poderão ser utilizados em programas de melhoramento genético de trigo.(AU)

Influence of natural radon and metal contamination on surface water quality from a Brazilian Semiarid Region / Influência da contaminação natural pelo radônio e metais na qualidade das águassuperficiais da Região Semiárida Brasileira

The Brazilian semiarid region presents some adverse environmental conditions for the settled population such as a restricted water availability and the presence of radon and metal natural sources that can contaminate the water reservoirs and consequently become a concern for human health. The present study evaluated the water quality of the Riacho das Cachoeiras Dam located in the urban area of Lajes Pintadas (state of Rio Grande do Norte, Brazil) as source for human consumption. An analysis of Physicochemical parameters, heavy metal content and Radon in water samples was performed along with the assessment of the water mutagenic potential through Micronucleus Test (MN) on Tradescantia pallida and Oreochromis niloticus. The content of metals in water for Al, Cd, and Ni were above water quality guidelines for human consumption. Moreover, high levels of Pb along with dissolved Radon were found. An acute and chronic mutagenic water capability was observed. These findings demonstrated that the water quality is unsuitable for human consumption due to the presence of high levels of contaminants mainly from geogenic origin and its deleterious effect on living systems.(AU)

A região semiárida brasileira apresenta condições ambientais adversas para população local, como a escassez na disponibilidade de água e a presença de fontes naturais de radônio e de metais que podem contaminar os reservatórios de água e, consequentemente, tornar-se um problema de saúde humana. O estudo avaliou a qualidade da água do Açude do Riacho das Cachoeiras localizado na área urbana de Lajes Pintadas (Rio Grande do Norte, Brasil) como fonte para o consumo humano. Foram realizadas análises físico-químicas, de conteúdo de metais e de radônio em amostras de água em conjunto com a avaliação do potencial mutagênico da água por meio do teste de micronúcleos (MN) em Tradescantia pallida e Oreochromis niloticus. Os metais Al, Cd, e Ni estavam acima das diretrizes de qualidade da água para o consumo humano. Além disso, foram encontrados altos níveis de Pb dissolvido, juntamente com o radônio. Observou-se um potencial de indução de efeito mutagênico nas amostras de água testadas, tanto na exposição aguda quanto na crônica. Estes resultados demonstram que a qualidade da água do Açude está imprópria para o consumo humano devido à presença de elevados níveis de contaminantes de origem geogênica, com capacidade de exercer efeito deletério sobre os organismos.(AU)

Feeding suplementation with selenium in the diets of catfish / Suplementação de selênio na dieta alimentar de jundiá

The study objectified evaluated the effects of oxidizing effects of feeding supplement with diphenyl diselenide at a concentration of 3ppm in the catfish diet. For this, 80 fishes were distributed in eight experimental units composed by eight water tanks. The two groups were denominated: T1 - control group and T2 - a group treated with supplemented ration with selenium. Each treatment had four replicates. It have been evaluated the activities of Superoxide Dismutase (SOD) enzymes and Catalase (CAT), in the liver tissue, the lipid peroxidation levels (TBARS levels) from muscle and liver tissue and evaluation toxicological Selenium testing through the Fish micronucleus (MN) assay. The addition of diphenyl diselenide has not appreciably changed the development of these animals, nor the enzymatic activities from SOD and CAT or yet in the TBARS levels. The tested concentration has not been toxic to the animals, as evidenced by the counting micronucleus test.(AU)

O estudo objetivou avaliar os efeitos antioxidantes da suplementação de disseleneto de difenila na concentração de 3,0 ppm na dieta alimentar de jundiás (Rhamdia quelen). Para isso, 80 peixes foram distribuídos em oito unidades experimentais compostas por oito caixas dágua. Dois grupos de peixes foram constituídos, sendo denominados: T1 Grupo controle e T2 Grupo tratado com ração aditivada com selênio, com quatro réplicas de cada tratamento. Foram avaliadas as atividades específicas das enzimas Superóxido Dismutase (SOD) e Catalase (CAT) no tecido hepático; os níveis de Peroxidação Lipídica (Níveis de TBARS) nos tecidos musculares e hepáticos; e a toxicidade do selênio através do teste de Micronúcleo Písceo (MN). A adição de disseleneto de difenila não alterou significativamente o crescimento dos animais, nem as atividades enzimáticas da SOD e da CAT ou, ainda, os níveis de TBARS. A concentração testada não se mostrou tóxica para os animais, como evidenciado pelo teste da contagem de micronúcleos.(AU)

Feeding suplementation with selenium in the diets of catfish / Suplementação de selênio na dieta alimentar de jundiá

The study objectified evaluated the effects of oxidizing effects of feeding supplement with diphenyl diselenide at a concentration of 3ppm in the catfish diet. For this, 80 fishes were distributed in eight experimental units composed by eight water tanks. The two groups were denominated: T1 - control group and T2 - a group treated with supplemented ration with selenium. Each treatment had four replicates. It have been evaluated the activities of Superoxide Dismutase (SOD) enzymes and Catalase (CAT), in the liver tissue, the lipid peroxidation levels (TBARS levels) from muscle and liver tissue and evaluation toxicological Selenium testing through the Fish micronucleus (MN) assay. The addition of diphenyl diselenide has not appreciably changed the development of these animals, nor the enzymatic activities from SOD and CAT or yet in the TBARS levels. The tested concentration has not been toxic to the animals, as evidenced by the counting micronucleus test.

O estudo objetivou avaliar os efeitos antioxidantes da suplementação de disseleneto de difenila na concentração de 3,0 ppm na dieta alimentar de jundiás (Rhamdia quelen). Para isso, 80 peixes foram distribuídos em oito unidades experimentais compostas por oito caixas dágua. Dois grupos de peixes foram constituídos, sendo denominados: T1 Grupo controle e T2 Grupo tratado com ração aditivada com selênio, com quatro réplicas de cada tratamento. Foram avaliadas as atividades específicas das enzimas Superóxido Dismutase (SOD) e Catalase (CAT) no tecido hepático; os níveis de Peroxidação Lipídica (Níveis de TBARS) nos tecidos musculares e hepáticos; e a toxicidade do selênio através do teste de Micronúcleo Písceo (MN). A adição de disseleneto de difenila não alterou significativamente o crescimento dos animais, nem as atividades enzimáticas da SOD e da CAT ou, ainda, os níveis de TBARS. A concentração testada não se mostrou tóxica para os animais, como evidenciado pelo teste da contagem de micronúcleos.

AVALIAÇÃO DA GENOTOXICIDADE AMBIENTAL UTILIZANDO Plagioscion squamosissimus (HECKEL, 1840) COMO BIOINDICADOR EM DOIS TRECHOS DE RIOS DA AMAZÔNIA, BRASIL

Os estudos de genotoxicidade em ecossistemas costeiros têm sido prioridade na Avaliação de Risco Ambiental (ERA). O presente trabalho teve como objetivo estudar a mutagenicidade e genotoxicidade do rio Murucupi (contaminado) no município de Barcarena, exposto à contaminação por indústria de mineração e no estuário Furo da Laura (controle) em Vigia, ambos no estado do Pará, Brazil, utilizando Plagioscion squamosissimus como biondicador. Para avaliar a mutagenicidade utilizou-se o teste de micronúcleo e alterações nucleares e para a genotoxicidade o ensaio cometa. Foram captadas amostras de sangue de 54 espécimes. Os indivíduos oriundos de Vigia foram estatisticamente maiores em tamanho que os de Barcarena e estes foram graficamente mais pesados que os capturados em Vigia. Não foram detectados efeitos mutagênicos significativos nas células analisadas, embora a maior ocorrência tenha sido observada em Barcarena. O percentual de danos genômicos diferiu entre os locais estudados, sendo sempre maiores também em Barcarena. Dos nucleóides analisados em Barcarena, em média 28±14,42% das células foram classificadas na classe de maior dano (4). Os peixes analisados no presente estudo estão tendo influência direta de agentes xenobiontes capazes de produzir danos ao material genético dos organismos aquáticos nos dois locais e, consequentemente, podem trazer consequências ainda pouco relatadas em estudos de alterações morfofisiológicas em humanos.

Genotoxicity studies in coastal ecosystems have been a priority in Environmental Risk Assessment (ERA). This research aimed to study the mutagenicity and genotoxicity of the Murucupi River (contaminated) in Barcarena city, exposed to contamination by mining industry and in the Furo da Laura estuary (control) in Vigia, both Pará state, Brazil, using Plagioscion squamosissimus as a biondicator. To evaluate mutagenicity and nuclear alterations were used the micronucleus test and for genotoxicity the comet assay. Blood samples were collected from 54 specimens. The individuals from Vigia were statistically larger in size than those from Barcarena and these were graphically heavier than those captured in Vigia. No significant mutagenic effects were detected in the cells analyzed, although the highest occurrence was observed in Barcarena. The percentage of genomic damage differed between the sites studied, being always higher in Barcarena as well. Of the nucleoids analyzed in Barcarena, on average 28±14.42% of the cells were classified in the highest damage class (4). The fish analyzed in the present study are having direct influence of xenobiont agents capable of producing damage to the genetic material of aquatic organisms in both sites and, consequently, may bring consequences still little reported in studies of morphophysiological alterations in humans.

Parasitos e ecotoxicologia de Leptodactylus macrosternum Miranda-Ribeiro, 1926 (Anura: Leptodactylidae) em áreas com diferenças de uso do solo no domínio morfoclimático das Caatingas: aspectos taxonômicos, ecológicos e histopatológicos

Este estudo objetivou conhecer os aspectos taxonômicos e ecológicos dos parasitos e a ecotoxicologia de Leptodactylus macrosternum no domínio morfoclimático das Caatingas, além de descrever os achados histopatológicos associados aos parasitos e/ou ao ambiente. Os animais eram provenientes de duas áreas agricultáveis (agricultura convencional e orgânica) e uma área pouco alterada de Caatinga stricto sensu, do município de Petrolina, Pernambuco. Após a captura, os animais foram pesados e mensurados o comprimento rostro-cloacal (CRC) e submetidos à coleta de ácaros e amostras de sangue para confecção de esfregaços sanguíneos para pesquisa de hemoparasitos, além de teste de micronúcleo e outras alterações nucleares. Em seguida, os animais foram eutanasiados para a coleta de helmintos e fragmentos de tecidos para histopatologia. Amostras de fígado e músculo foram submetidas à técnica de Espectrometria de Emissão Óptica por Plasma Acoplado Indutivamente (ICP OES) para quantificação dos minerais. No total, foram coletados 135 anuros fêmeas e machos, adultos e imaturos, cujo peso (massa corpórea) e CRC variaram de 1,6 a 94,2 g (58,1±18,1 g) e 26,8 a 99,1 mm (24,0±20,6 mm), respectivamente. A comunidade de parasitos de L. macrosternum esteve composta pelo ácaro Hannemania sp., seis morfotipos de hemoparasitos e 18 espécies de helmintos (12 espécies de helmintos em hospedeiros de área de agricultura convencional, 12 para Caatinga stricto sensu e 11 para agricultura orgânica). Dentre os helmintos, duas novas espécies de nematoides foram descritas. Do total de anuros coletados, 90,4% (122/135) estavam parasitados por pelo menos uma espécie de helminto, enquanto 78,5% (106/135) estavam infestados por Hannemania sp. Do total de 104 anuros que tiveram o sangue avaliado, 60% (62/104) estavam parasitados por pelo menos um morfotipo de hemoparasito. Nas três áreas de coleta, foram encontradas alterações citotóxicas (blebbed, notched, broto e binucleado) e genotóxicas (micronúcleo). Para o perfil mineral foram quantificados 11 elementos: Alumínio (Al), Cádmio (Cd), Cobalto (Co), Cromo (Cr), Cobre (Cu), Ferro (Fe), Manganês (Mn), Molibdênio (Mo), Níquel (Ni), Chumbo (Pb) e Zinco (Zn). Entre os minerais, Al, Fe e Zn foram os elementos encontrados em maior quantidade nos tecidos hepático e muscular. A área ocupada por melanomacrófagos hepáticos foi influenciada pelo peso (massa corpórea), CRC e índice hepatossomático. A comunidade de parasitos de L. macrosternum reflete sua posição na cadeia trófica e o consequente papel ecológico diversificado nos diferentes ciclos de vida de seus parasitos. Os resultados obtidos reforçam o papel dos anuros e seus parasitos como bioindicadores da qualidade do ambiente e a grande diversidade de espécies ainda oculta no domínio morfoclimático das Caatingas, com a descrição de duas espécies novas de parasitos, além da importância da implementação de medidas que visem a conservação tanto de L. macrosternum quanto deste domínio.

This study aimed to understand the taxonomic and ecological aspects of the parasites and the ecotoxicology of Leptodactylus macrosternum in the Caatinga biome, in addition to describing the histopathological findings associated with the parasites and/or the environment. The animals were collected in two arable areas (conventional and organic agriculture) and a little altered area of Caatinga stricto sensu, in the municipality of Petrolina, Pernambuco. After capture, the animals were weighed and snout-vent length (SVL) was measured, and mites and blood samples were collected to make blood smears for hemoparasites research and micronucleus test and other nuclear alterations. Then, the animals were euthanized to collect helminth and tissue fragments for histopathology. Liver and muscle samples were submitted to the Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometry (ICP OES) technique for mineral quantification. In total, 135 adult and immature female and male frogs were collected, whose weight and SVL ranged from 1.6 to 94.2 g (58.1±18.1 g) and 26.8 to 99.1 mm (24 .0±20.6 mm), respectively. The L. macrosternum parasite community was composed of a mite Hannemania sp., six hemoparasites morphotypes and 18 helminth species (12 helminth species in conventional agricultural area hosts, 12 for Caatinga stricto sensu and 11 for agriculture organic). Among the helminth, two new species of nematodes were described. Of the total number of anurans collected, 90.4% (122/135) were parasitized by at least one species of helminth, while 78.5% (106/135) were infested by Hannemania sp. Of the total of 104 anurans that had their blood evaluated, 60% (62/104) were parasitized by at least one hemoparasite morphotype. In the three sampling areas, cytotoxic (blebbed, notched, bud and binucleate) and genotoxic (micronucleus) alterations were found. For the mineral profile, 11 elements were quantified: Aluminum (Al), Cadmium (Cd), Cobalt (Co), Chromium (Cr), Copper (Cu), Iron (Fe), Manganese (Mn), Molybdenum (Mo), Nickel (Ni), Lead (Pb) and Zinc (Zn). Among the minerals, Al, Fe and Zn were the elements found in greater quantity in liver and muscle. The melanomacrophage area was influenced by weight, SVLand hepatosomatic index. The L. macrosternum parasite community reflects its position in the food chain and the consequent diversified ecological role in the different life cycles of its parasites. The results obtained reinforce the role of anurans and their parasites as bioindicators of environmental quality and the great diversity of species still hidden in the morphoclimatic domain of the Caatingas with the description of two new species of parasites, in addition to the importance of implementing measures aimed at the conservation of both L. macrosternum and this domain.

EFEITO IN VITRO DO COMPLEXO DE INCLUSÃO DE -CARIOFILENO EM -CICLODEXTRINA SOBRE Leishmania infantum E SEGURANÇA TOXICOLÓGICA EM ROEDORES

O tratamento da leishmaniose visceral (LV) com drogas sintéticas nem sempre é efetivo devido à alta toxicidade que apresenta. -cariofileno (BCP), um sesquiterpeno natural já demonstrou ter efeito anti-Leishmania spp. Trata-se de um óleo volátil e hidrofóbico, o que diminui a sua biodisponibilidade. A formação de complexos de inclusão com -ciclodextrina (-CD) é uma técnica que tem sido amplamente utilizada para aumentar a solubilidade aquosa de óleos vegetais e melhorar sua estabilidade. O objetivo deste trabalho foi desenvolver complexos de inclusão de BCP em -CD (BCP/-CD) e avaliar in silico a sua adsorção para testar sua atividade contra Leishmania infantum e avaliar a sua toxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade em roedores. BCP/-CD foram preparados em razões molares de 1:2 (BCP: -CD) por spray dryer. Os complexos formados foram caracterizados usando métodos físico-químicos apropriados. O ensaio in silico foi usado para prever a adsorção de BCP quando inserido em -CD. A atividade contra promastigotas foi testada in vitro usando resazurina (Alamar Blue®), a citotoxicidade foi determinada usando a linhagem de macrófagos J774. Os possíveis efeitos tóxicos in vivo foram avaliados por meio de toxicidade aguda e subcrônica e os efeitos genototóxicos e mutagênicos foram avaliados por meio dos testes de micronúcleo em reticulócitos e cometa alcalino. Os complexos BCP/-CD apresentaram forma de blocos, tamanho médio de 141,5 nm, índice de polidispersão de 0,255 e eficiência de encapsulamento de 19,2%. Os ensaios in silico previram uma ligação não covalante relativamente forte de BCP/-CD, com elevada capacidade de -CD para nanoencapsular BCP. BCP/-CD apresentou IC50 de 34,19 g/mL sobre promastigotas demontrando ser menos efetivo que BCP livre (IC50 de 7.65 g/mL), provavelmente por não ter liberado BCP da cavidade de -CD. -CD foi atóxica sobre macrófagos J774 podendo ser utilizado como carreador para BCP, que apresentou certa toxicidade para estas células (IC50 de 176.7 g/mL). Porém este efeito tóxico foi minimizado ao ser encapsulado em -CD, já que o complexo BCP/-CD apresentou IC50 de 249,1 g/mL. A DL50 de BCP/-CD foi superior a 5.000 mg/kg, sendo considerado não tóxico. A administração oral de 125 mg/kg de BCP/-CD durante 28 dias foi bem tolerada por ratos Wistar conforme evidenciado pela ausência de alterações importantes nos parâmetros hematológicos, bioquímica sérica e histopatologia. Não foram observados qualquer efeito genotóxico e mutagênico induzidos por BCP/-CD. Estes resultados indicam que a atividade de BCP/-CD sobre promastigotas não foi efetiva, porém para células J774 não houve toxicidade, podendo ser testado sobre amastigotas, visto que um dos principais entraves é a dificuldade de permitir que a nanopartícula internalize nos macrófagos para atingir o fagolisossomo e assim agir contra o parasito. BCP/-CD é seguro e não tóxico in vitro sobre macrófagos J774 e quando testados em animais de experimentação.

The treatment of visceral leishmaniasis (VL) with synthetic drugs is not always effective due to the high toxicity it presents. -caryophyllene (BCP), a natural sesquiterpene has already been shown to have an anti-Leishmania effect. However, it is volatile and hydrophobic oil, which decreases its bioavailability. The formation of inclusion complexes with -cyclodextrin (-CD) is a technique that has been widely used to increase the aqueous solubility of vegetable oils and improve their stability. The aim of this work was to develop complexes of inclusion of BCP in -CD (BCP/-CD) and to evaluate its adsorption in silico to test its activity against Leishmania infantum and to evaluate its toxicity, genotoxicity and mutagenicity in rodents. BCP/-CD were prepared in molar ratios of 1:2 (BCP:-CD) by spray dryer. The complexes formed were characterized using appropriate physicochemical methods. The in silico test was used to predict the adsorption of BCP when inserted in -CD. The activity against promastigotes was tested in vitro using resazurin (Alamar Blue®), cytotoxicity was determined using the macrophage lineage J774. Possible toxic effects in vivo were assessed using acute and subchronic toxicity and the genototoxic and mutagenic effects were evaluated by means of micronucleus tests on reticulocytes and alkaline comet. The BCP/-CD complexes had a block shape, an average size of 141.5 nm, a polydispersity index of 0.255 and an encapsulation efficiency of 19.2%. In silico assays predicted a relatively strong non-covalent bond of BCP/-CD, with a high capacity of -CD for nanoencapsulate BCP. BCP/-CD showed an IC50 of 34.19 g/mL on promastigotes, demonstrating to be less effective than free BCP (IC50 of 7.65 g/mL), probably because the release of BCP from the -CD cavity did not occur. -CD was not toxic on J774 macrophages and can be used as a carrier for BCP, which presented a certain toxicity for these cells (IC50 176.7 g/mL). However its toxic effect was minimized when it was encapsulated in -CD, since the BCP/- CD complex had an IC50 of 249.1 g/mL. The LD50 of BCP/-CD was greater than 5,000 mg/kg, being considered non-toxic. Oral administration of 125 mg/kg BCP/-CD for 28 days was well tolerated by Wistar rats as evidenced by the absence of major changes in hematological parameters, serum biochemistry and histopathology. No genotoxic and mutagenic effects induced by BCP/-CD were observed. These results indicate that the activity of BCP/-CD on promastigotes was not effective, however for J774 cells there was no toxicity, and it can be tested on amastigotes, since one of the main obstacles is the difficulty of allowing the nanoparticle to internalize in the macrophages for reach the phagolysome and thus act against the parasite. BCP/-CD is safe and non-toxic in vitro on J774 macrophages and when tested on experimental animals.

Avaliação da mutagenicidade do indoxacarbe em ratos e gatos / Mutagenicity assessment of indoxacarb in rats and cats

Background: Pesticides are substances used for pest control. Due to their persistence in the environment, they can induce toxicity in humans and animals. Indoxacarb is an oxadiazine insecticide that acts against insects of the order Lepidoptera. Choice of rats and cats used in this study is based on factors such as these animals have a high count of micronucleated polychromatic erythrocytes and the product is intended for use in cats. Limited data in literature pertaining to the mutagenic effects of this product motivated this study. The aim of this study was to evaluate the effect of the micronucleus test on the mutagenicity of indoxacarb when administered in one and tenfold therapeutic doses in rats and cats.Materials, Methods & Results: Forty male Wistar rats aged 70 days and weighing 280 ± 10 g and 20 mixed breed male and female adult cats weighing 4 ± 0.2 kg were selected. These animals were obtained from the central animal facility and cattery, respectively, of the university of origin. Rats were reared in individual cages with a controlled temperature of 22°C ± 2°C, humidity of 55% ± 5% and 12-h light–dark cycle. Cats were reared in individual stalls with water and food ad libitum. Animals were randomly distributed into four groups comprising 10 rats and 5 cats in respective groups: negative control group, which received 0.9% sodium chloride solution as a single topical administration; positive control group, which received 50 mg/kg cyclophosphamide as a single intra-peritoneal (rats) or intravenous injection (cats); indoxacarb group, which received indoxacarb as a single topical dose according to the manufacturers recommendations; and high dose indoxacarb group, which also received indoxacarb in a single topical dose, but at a tenfold concentration. Rats were evaluated 24 h after indoxacarb administration. After euthanasia, rat femurs were obtained and their medullary canals were washed using fetal bovine serum.[...](AU)