Inhibitory activities of propolis, nisin, melittin and essential oil compounds on Paenibacillus alvei and Bacillus subtilis

Background: Natural products represent important sources of antimicrobial compounds. Propolis and compounds from essential oils comprise good examples of such substances because of their inhibitory effects on bacterial spores, including bee pathogens. Methods: Ethanol extracts of propolis (EEP) from Apis mellifera were prepared using different methods: double ultrasonication, double maceration and maceration associated with ultrasonication. Together with the antimicrobial peptides nisin and melittin, and compounds present in the essential oils of clove (Syzygium aromaticum) and cinnamon (Cinnamomum zeylanicum), assays were carried out on one Bacillus subtilis isolate and Paenibacillus alvei (ATCC 6344) against vegetative and sporulated forms, using the resazurin microtiter assay. Synergism with all the antimicrobials in association with tetracycline was verified by the time-kill curve method. Potassium and phosphate efflux, release of proteins and nucleic acids were investigated. Results: EEPs showed the same MIC, 156.25 µg/mL against B. subtilis and 78.12 µg/mL against P. alvei. The peptides showed better activities against B. subtilis (MIC of 12 µg/ mL for melittin and 37.50 µg/mL for nisin). Antimicrobials showed similar inhibitory effects, but cinnamaldehyde (39.06 µg/mL) showed the best action against P. alvei. Melittin and nisin showed the greatest capacity to reduce spores, regarding B. subtilis there was a 100% reduction at 6.25 and 0.78 µg/mL, respectively. Concerning P. alvei, the reduction was 93 and 98% at concentrations of 80 µg/mL of melittin and 15 µg/ mL of nisin. EEPs showed the highest effects on the protein release against B. subtilis and P. alvei. Nucleic acid release, phosphate and potassium efflux assays indicated bacterial cell membrane damage. Synergism between antimicrobials and tetracycline was demonstrated against both bacteria. Conclusion: All antimicrobials tested showed antibacterial activities against vegetative and sporulated forms of P. alvei and B. subtilis, especially nisin and melittin. Synergism with tetracycline and damage on bacterial cell membrane also occurred.(AU)

Estudo da conservação de material biológico com a tecnologia Fta-card® / Study on the conservation of biological material with Fta-card® technology / Estudio de conservación de material biológico con la tecnología Fta-card®

O Whatman FTA-Card® é um papel-filtro quimicamente tratado, destinado à coleta, transporte, armazenamento de amostras para posterior extração de ácidos nucléicos. A tecnologia FTA-Card® é utilizada para manter estável DNA e RNA em temperatura ambiente, podendo ser utilizados para fixação de uma ampla variedade de material orgânico ou tecidos. Foram realizados testes para certificar sua eficiência na conservação do material a ser analisado com o intuito de eliminar a cadeia fria de conservação, agilizando o processo e diminuindo os custos da execução de exames moleculares associados ao diagnóstico de patologias. Foram testadas oito amostras de felinos na forma de sangue total e soro, para a extração utilizou-se o kit Magazorb RNA Total mini-prep kit (Promega®, EUA), para o diagnóstico foi utilizada a técnica de PCR em tempo real para amplificar o gene CI2 de mamíferos, a fim de visualizar a eficácia na conservação de ácidos nucleicos. A utilização desse método torna possível que o material biológico seja enviado por serviços de transporte postais, reduzindo os custos e viabilizando diagnósticos provenientes de áreas mais remotas.(AU)

Whatman FTA-Card® is a chemically treated filter paper intended for the collection, transport, and storage of samples for later extraction of nucleic acids. FTA-Card® technology is used to keep DNA and RNA stable at room temperature and can be used to fix a wide variety of organic material or tissues. Tests were carried out to certify its efficiency in the conservation of the material to be analyzed in order to eliminate the cold conservation chain, speeding up the process and decreasing the costs of performing molecular tests associated with the diagnosis of pathologies. By using this method, biological material can be sent by postal transport services, reducing costs and making diagnoses from more remote areas feasible. Samples of feline specimens were tested in the form of whole blood and serum, using the Magazorb RNA Total mini-prep kit (Promega®, USA) for the extraction. Diagnosis was performed using real-time PCR technique to amplify the mammalian CI2 gene in order to visualize the effectiveness in conserving nucleic acids.(AU)

Whatman FTA-Card® es un papel de filtro tratado químicamente, destinado a la recogida, transporte, almacenamiento de muestras para su posterior extracción de ácidos nucleicos. La tecnología FTA-Card® se usa para mantener el ADN y el ARN estables a la temperatura ambiente y se puede usar para la fijación de una amplia variedad de materiales o tejidos orgánicos. Se realizaron pruebas para certificar su eficiencia en la conservación del material a analizar con el fin de eliminar la cadena de frío de conservación, agilizando el proceso y reduciendo los costos de realización de pruebas moleculares asociadas al diagnóstico de patologías. Se analizaron ocho muestras felinas en forma de sangre total y suero, para la extracción se utilizó el mini-prep kit Magazorb RNA Total (Promega®, USA), para el diagnóstico se utilizó la técnica de PCR en tiempo real para amplificar el CI2 de mamífero gen, con el fin de visualizar la efectividad en la conservación de ácidos nucleicos. El uso de ese método permite el envío de material biológico por los servicios de transporte postal, lo que reduce los costes y permite realizar diagnósticos desde zonas más remotas.(AU)

Estudo da conservação de material biológico com a tecnologia Fta-card® / Study on the conservation of biological material with Fta-card® technology / Estudio de conservación de material biológico con la tecnología Fta-card®

O Whatman FTA-Card® é um papel-filtro quimicamente tratado, destinado à coleta, transporte, armazenamento de amostras para posterior extração de ácidos nucléicos. A tecnologia FTA-Card® é utilizada para manter estável DNA e RNA em temperatura ambiente, podendo ser utilizados para fixação de uma ampla variedade de material orgânico ou tecidos. Foram realizados testes para certificar sua eficiência na conservação do material a ser analisado com o intuito de eliminar a cadeia fria de conservação, agilizando o processo e diminuindo os custos da execução de exames moleculares associados ao diagnóstico de patologias. Foram testadas oito amostras de felinos na forma de sangue total e soro, para a extração utilizou-se o kit Magazorb RNA Total mini-prep kit (Promega®, EUA), para o diagnóstico foi utilizada a técnica de PCR em tempo real para amplificar o gene CI2 de mamíferos, a fim de visualizar a eficácia na conservação de ácidos nucleicos. A utilização desse método torna possível que o material biológico seja enviado por serviços de transporte postais, reduzindo os custos e viabilizando diagnósticos provenientes de áreas mais remotas.(AU)

Whatman FTA-Card® is a chemically treated filter paper intended for the collection, transport, and storage of samples for later extraction of nucleic acids. FTA-Card® technology is used to keep DNA and RNA stable at room temperature and can be used to fix a wide variety of organic material or tissues. Tests were carried out to certify its efficiency in the conservation of the material to be analyzed in order to eliminate the cold conservation chain, speeding up the process and decreasing the costs of performing molecular tests associated with the diagnosis of pathologies. By using this method, biological material can be sent by postal transport services, reducing costs and making diagnoses from more remote areas feasible. Samples of feline specimens were tested in the form of whole blood and serum, using the Magazorb RNA Total mini-prep kit (Promega®, USA) for the extraction. Diagnosis was performed using real-time PCR technique to amplify the mammalian CI2 gene in order to visualize the effectiveness in conserving nucleic acids.(AU)

Whatman FTA-Card® es un papel de filtro tratado químicamente, destinado a la recogida, transporte, almacenamiento de muestras para su posterior extracción de ácidos nucleicos. La tecnología FTA-Card® se usa para mantener el ADN y el ARN estables a la temperatura ambiente y se puede usar para la fijación de una amplia variedad de materiales o tejidos orgánicos. Se realizaron pruebas para certificar su eficiencia en la conservación del material a analizar con el fin de eliminar la cadena de frío de conservación, agilizando el proceso y reduciendo los costos de realización de pruebas moleculares asociadas al diagnóstico de patologías. Se analizaron ocho muestras felinas en forma de sangre total y suero, para la extracción se utilizó el mini-prep kit Magazorb RNA Total (Promega®, USA), para el diagnóstico se utilizó la técnica de PCR en tiempo real para amplificar el CI2 de mamífero gen, con el fin de visualizar la efectividad en la conservación de ácidos nucleicos. El uso de ese método permite el envío de material biológico por los servicios de transporte postal, lo que reduce los costes y permite realizar diagnósticos desde zonas más remotas.(AU)

Estudo da conservação de material biológico com a tecnologia Fta-card® / Study on the conservation of biological material with Fta-card® technology / Estudio de conservación de material biológico con la tecnología Fta-card®

O Whatman FTA-Card® é um papel-filtro quimicamente tratado, destinado à coleta, transporte, armazenamento de amostras para posterior extração de ácidos nucléicos. A tecnologia FTA-Card® é utilizada para manter estável DNA e RNA em temperatura ambiente, podendo ser utilizados para fixação de uma ampla variedade de material orgânico ou tecidos. Foram realizados testes para certificar sua eficiência na conservação do material a ser analisado com o intuito de eliminar a cadeia fria de conservação, agilizando o processo e diminuindo os custos da execução de exames moleculares associados ao diagnóstico de patologias. Foram testadas oito amostras de felinos na forma de sangue total e soro, para a extração utilizou-se o kit Magazorb RNA Total mini-prep kit (Promega®, EUA), para o diagnóstico foi utilizada a técnica de PCR em tempo real para amplificar o gene CI2 de mamíferos, a fim de visualizar a eficácia na conservação de ácidos nucleicos. A utilização desse método torna possível que o material biológico seja enviado por serviços de transporte postais, reduzindo os custos e viabilizando diagnósticos provenientes de áreas mais remotas.(AU)

Whatman FTA-Card® is a chemically treated filter paper intended for the collection, transport, and storage of samples for later extraction of nucleic acids. FTA-Card® technology is used to keep DNA and RNA stable at room temperature and can be used to fix a wide variety of organic material or tissues. Tests were carried out to certify its efficiency in the conservation of the material to be analyzed in order to eliminate the cold conservation chain, speeding up the process and decreasing the costs of performing molecular tests associated with the diagnosis of pathologies. By using this method, biological material can be sent by postal transport services, reducing costs and making diagnoses from more remote areas feasible. Samples of feline specimens were tested in the form of whole blood and serum, using the Magazorb RNA Total mini-prep kit (Promega®, USA) for the extraction. Diagnosis was performed using real-time PCR technique to amplify the mammalian CI2 gene in order to visualize the effectiveness in conserving nucleic acids.(AU)

Whatman FTA-Card® es un papel de filtro tratado químicamente, destinado a la recogida, transporte, almacenamiento de muestras para su posterior extracción de ácidos nucleicos. La tecnología FTA-Card® se usa para mantener el ADN y el ARN estables a la temperatura ambiente y se puede usar para la fijación de una amplia variedad de materiales o tejidos orgánicos. Se realizaron pruebas para certificar su eficiencia en la conservación del material a analizar con el fin de eliminar la cadena de frío de conservación, agilizando el proceso y reduciendo los costos de realización de pruebas moleculares asociadas al diagnóstico de patologías. Se analizaron ocho muestras felinas en forma de sangre total y suero, para la extracción se utilizó el mini-prep kit Magazorb RNA Total (Promega®, USA), para el diagnóstico se utilizó la técnica de PCR en tiempo real para amplificar el CI2 de mamífero gen, con el fin de visualizar la efectividad en la conservación de ácidos nucleicos. El uso de ese método permite el envío de material biológico por los servicios de transporte postal, lo que reduce los costes y permite realizar diagnósticos desde zonas más remotas.(AU)

Fighting COVID-19

Abstract The current COVID-19 pandemic caused by the novel coronavirus (SARS-CoV2) poses a threat to global health owing to its high rate of spread and severe forms of respiratory infection. The lack of vaccines and antivirals prevents clinical strategies against the disease, creating an emerging need for the development of safe and effective treatments. Strategies for vaccine development include complete vaccines against viruses, subunits, and nucleic acids, but are still in their early stages. Studies carried out to date on possible SARS-CoV2 drug targets highlight glycoprotein S, Mpro (main protease or protease type 3C), and a member of the transmembrane serine protease II families (TMPRSS2). However, due to the pandemic state, priority is given to marketed drugs. These include chloroquine (CQ), hydroxychloroquine (HCQ), nitazoxanide, remdesivir, Lopinavir/ritonavir (LPV / r), in addition to treatment with convalescent plasma. But, therapeutic specific effects against SARS-CoV2 have not yet been verified. Most of the information obtained about treatment is based on preliminary and limited studies. We conclude that, at this time of emergency, the search for new therapies is more urgent due to the need to save lives. Thus, we point out as interesting targets for future more specific research: glycoprotein S, Mpro, and TMPRSS2.

Resumo A pandemia de COVID-19 causada pelo novo Coronavírus (SARS-CoV2) representa uma ameaça à saúde global devido à alta taxa de disseminação e formas graves de infecção respiratória. A falta de vacinas e antivirais específicos dificultam as estratégias clínicas de controle da doença, criando a necessidade urgente do desenvolvimento de tratamentos seguros e eficazes. Com relação as estratégias para o desenvolvimento de vacinas, incluem-se: aquelas com o vírus completo, subunidades e ácidos nucléicos, mas estas ainda estão em estágios iniciais. Já sobre os estudos realizados até o momento buscando novos alvos terapêuticos contra o SARS-CoV2, destacam a glicoproteína S; Mpro (principal protease ou protease tipo 3C) e um membro da família transmembrana serina protease II (TMPRSS2). No entanto, devido ao estado pandêmico, tem sido dada prioridade aos medicamentos comercializados. Estes incluem a cloroquina (CQ); hidroxicloroquina (HCQ); nitazoxanida; remdesivir; Lopinavir / ritonavir (LPV/r); além do tratamento com plasma de pacientes curados. Porém, ainda não há uma estratégia terapêutica contra o SARS-CoV2 totalmente eficaz, e a maioria das informações obtidas sobre o tratamento é baseada em estudos preliminares e limitados. Concluímos então que, neste momento de emergência, a busca por novas terapias é algo urgente devido à necessidade de salvar vidas. Assim finalizamos sugerindo como alvos interessantes para futuras pesquisas específicas: a glicoproteína S, Mpro e o TMPRSS2.

Fighting COVID-19 / Combatendo a COVID-19

The current COVID-19 pandemic caused by the novel coronavirus (SARS-CoV2) poses a threat to global health owing to its high rate of spread and severe forms of respiratory infection. The lack of vaccines and antivirals prevents clinical strategies against the disease, creating an emerging need for the development of safe and effective treatments. Strategies for vaccine development include complete vaccines against viruses, subunits, and nucleic acids, but are still in their early stages. Studies carried out to date on possible SARS-CoV2 drug targets highlight glycoprotein S, Mpro (main protease or protease type 3C), and a member of the transmembrane serine protease II families (TMPRSS2). However, due to the pandemic state, priority is given to marketed drugs. These include chloroquine (CQ), hydroxychloroquine (HCQ), nitazoxanide, remdesivir, Lopinavir/ritonavir (LPV / r), in addition to treatment with convalescent plasma. But, therapeutic specific effects against SARS-CoV2 have not yet been verified. Most of the information obtained about treatment is based on preliminary and limited studies. We conclude that, at this time of emergency, the search for new therapies is more urgent due to the need to save lives. Thus, we point out as interesting targets for future more specific research: glycoprotein S, Mpro, and TMPRSS2.(AU)

A pandemia de COVID-19 causada pelo novo Coronavírus (SARS-CoV2) representa uma ameaça à saúde global devido à alta taxa de disseminação e formas graves de infecção respiratória. A falta de vacinas e antivirais específicos dificultam as estratégias clínicas de controle da doença, criando a necessidade urgente do desenvolvimento de tratamentos seguros e eficazes. Com relação as estratégias para o desenvolvimento de vacinas, incluem-se: aquelas com o vírus completo, subunidades e ácidos nucléicos, mas estas ainda estão em estágios iniciais. Já sobre os estudos realizados até o momento buscando novos alvos terapêuticos contra o SARS-CoV2, destacam a glicoproteína S; Mpro (principal protease ou protease tipo 3C) e um membro da família transmembrana serina protease II (TMPRSS2). No entanto, devido ao estado pandêmico, tem sido dada prioridade aos medicamentos comercializados. Estes incluem a cloroquina (CQ); hidroxicloroquina (HCQ); nitazoxanida; remdesivir; Lopinavir / ritonavir (LPV/r); além do tratamento com plasma de pacientes curados. Porém, ainda não há uma estratégia terapêutica contra o SARS-CoV2 totalmente eficaz, e a maioria das informações obtidas sobre o tratamento é baseada em estudos preliminares e limitados. Concluímos então que, neste momento de emergência, a busca por novas terapias é algo urgente devido à necessidade de salvar vidas. Assim finalizamos sugerindo como alvos interessantes para futuras pesquisas específicas: a glicoproteína S, Mpro e o TMPRSS2.(AU)

O papel das nucleases no laboratório de biologia molecular: vilãs ou aliadas? / The role of nucleases in the molecular biology laboratory: villains or allies?

Em laboratório de biologia molecular existem normas para prevenir que nucleases destruam os ácidos nucleicos em análise. Rígida adesão a estas normas é primordial, principalmente em laboratórios de análises clínicas e ao se lidar com amostras com número restrito de cópias do genoma-alvo. Em contraposição, diversas nucleases têm tido importância fundamental, por exemplo, na identificação do ácido nucleico de vírus, investigação de RNA mensageiro, purificação de vírus em abordagem metagenômica, edição de genomas com o sistema CRISPR/Cas e descoberta de enzimas. O conhecimento de como nucleases podem ser tanto vilãs quanto aliadas é essencial na formação de todos que trabalham no campo de biologia molecular.

In a molecular biology laboratory there are standards to prevent nucleases from destroying the nucleic acids under analysis. Strict adherence to these standards is paramount, mainly in clinical analysis laboratories and when dealing with samples with a limited number of copies of the target genome. In contrast, several nucleases have been of fundamental importance, for example, in the identification of the type of viral nucleic acid, investigation of messenger RNA, virus purification in metagenomic approach, genome editing with the CRISPR/Cas system, and enzyme discovery. Knowledge of how nucleases can be both villains and allies is essential in the training of all working in the field of molecular biology.

O papel das nucleases no laboratório de biologia molecular: vilãs ou aliadas? / The role of nucleases in the molecular biology laboratory: villains or allies?

Em laboratório de biologia molecular existem normas para prevenir que nucleases destruam os ácidos nucleicos em análise. Rígida adesão a estas normas é primordial, principalmente em laboratórios de análises clínicas e ao se lidar com amostras com número restrito de cópias do genoma-alvo. Em contraposição, diversas nucleases têm tido importância fundamental, por exemplo, na identificação do ácido nucleico de vírus, investigação de RNA mensageiro, purificação de vírus em abordagem metagenômica, edição de genomas com o sistema CRISPR/Cas e descoberta de enzimas. O conhecimento de como nucleases podem ser tanto vilãs quanto aliadas é essencial na formação de todos que trabalham no campo de biologia molecular.(AU)

In a molecular biology laboratory there are standards to prevent nucleases from destroying the nucleic acids under analysis. Strict adherence to these standards is paramount, mainly in clinical analysis laboratories and when dealing with samples with a limited number of copies of the target genome. In contrast, several nucleases have been of fundamental importance, for example, in the identification of the type of viral nucleic acid, investigation of messenger RNA, virus purification in metagenomic approach, genome editing with the CRISPR/Cas system, and enzyme discovery. Knowledge of how nucleases can be both villains and allies is essential in the training of all working in the field of molecular biology.(AU)

CspB of an arctic bacterium, Polaribacter irgensii KOPRI 22228, confers extraordinary freeze-tolerance

Freezing temperatures are a major challenge for life at the poles. Decreased membrane fluidity, uninvited secondary structure formation in nucleic acids, and protein cold-denaturation all occur at cold temperatures. Organisms adapted to polar regions possess distinct mechanisms that enable them to survive in extremely cold environments. Among the cold-induced proteins, cold shock protein (Csp) family proteins are the most prominent. A gene coding for a Csp-family protein, cspB, was cloned from an arctic bacterium, Polaribacter irgensii KOPRI 22228, and overexpression of cspB greatly increased the freeze-survival rates of Escherichia coli hosts, to a greater level than any previously reported Csp. It also suppressed the cold-sensitivity of an E. coli csp-quadruple deletion strain, BX04. Sequence analysis showed that this protein consists of a unique domain at its N-terminal end and a well conserved cold shock domain at its C-terminal end. The most common mechanism of Csp function in cold adaption is melting of the secondary structures in RNA and DNA molecules, thus facilitating transcription and translation at low temperatures. P. irgensii CspB bound to oligo(dT)-cellulose resins, suggesting single-stranded nucleic acid-binding activity. The unprecedented level of freeze-tolerance conferred by P. irgensii CspB suggests a crucial role for this protein in survival in polar environments.(AU)

Antimicrobial activity of species Zingiber officinale Roscoe and Alpinia purpurata (Vieill.) K. Schum. (Zingiberaceae) - Review / Atividade antimicrobiana das espécies Zingiber officinale Roscoe e Alpinia purpurata (Vieill.) K. Schum. (Zingiberaceae) - Revisão

The functionality of nutraceutical foods is attributed to their bioactive compounds. These compounds are widely produced by plants, such as phenolic compounds, which have antioxidant activity and/or antimicrobial activity, acting against damage to macromolecules such as lipids, proteins, and nucleic acids. Secondary plant metabolites, including classes such as phenolic compounds, alkaloids, and terpenoids, have a wide variety of biological activities with medicinal potential. These secondary metabolites are considered bioactive compounds. The Zingiberaceae family received special attention for their large bioactive compound production. Such compounds are useful in foods as herbs, spices, flavorings, and seasonings and in the pharmaceutical and cosmetic industries as antioxidants and antimicrobials. Gingers are recognized as safe by the American Food and Drug Administration (FDA), resulting in no side effects when consumed in moderate amounts. Recent studies show that, in addition to rhizomes, the leaves and flowers of some ginger species have antioxidant activity and consequent medicinal potential. Studies have demonstrated that in vitro and in vivo research is needed to evaluate the efficacy of ginger extracts and understand their role in the modulation of biological and molecular pathways, thus enabling the development of new therapeutic strategies. Thereby, the present work aims to provide a bibliographic review on the antimicrobial activity of Zingiber officinale Roscoe and Alpinia purpurata (Vieill.) K. Schum. (Zingiberaceae), popularly known as ginger and red ginger respectively, and their potential use in the One Health initiative.(AU)

A funcionalidade dos alimentos nutracêuticos é atribuída aos seus compostos bioativos. Estes compostos são amplamente produzidos pelos vegetais, tais como os compostos fenólicos, que possuem atividade antioxidante e/ou atividade antimicrobiana entre outras, agindo contra danos em macromoléculas como lipídeos, proteínas e ácidos nucléicos. Os metabólitos secundários das plantas, incluindo algumas classes como compostos fenólicos, alcaloides e terpenóides, possuem uma ampla variedade de atividades biológicas com potencial medicinal. Esses metabólitos secundários são considerados compostos bioativos. A família Zingiberaceae tem recebido atenção especial, por produzir muitos compostos bioativos que são úteis em alimentos como ervas e especiarias; aromatizantes e temperos; nas indústrias farmacêutica e cosmética como agentes antioxidantes e antimicrobianos. Os gengibres são reconhecidos como seguros pela American Food and Drug Administration (FDA) e não possuem efeitos colaterais quando consumidos em quantidades moderadas. Estudos recentes demonstram que além dos rizomas, as folhas e flores de algumas espécies de gengibres possuem atividade antioxidante e consequentemente um potencial medicinal. Estudos demonstram que são necessárias pesquisas in vitro e in vivo para avaliar a eficácia dos extratos do gengibre e compreender o seu papel na modulação das vias biológicas e moleculares, possibilitando assim, novas estratégias terapêuticas. Dessa forma, o presente trabalho tem como objetivo, uma revisão bibliográfica sobre a atividade antimicrobiana de Zingiber officinale Roscoe e Alpinia purpurata (Vieill.) K. Schum. (Zingiberaceae), conhecidos popularmente como gengibre e gengibre-vermelho respectivamente e seu uso na Saúde Única.(AU)

Fighting COVID-19

Abstract The current COVID-19 pandemic caused by the novel coronavirus (SARS-CoV2) poses a threat to global health owing to its high rate of spread and severe forms of respiratory infection. The lack of vaccines and antivirals prevents clinical strategies against the disease, creating an emerging need for the development of safe and effective treatments. Strategies for vaccine development include complete vaccines against viruses, subunits, and nucleic acids, but are still in their early stages. Studies carried out to date on possible SARS-CoV2 drug targets highlight glycoprotein S, Mpro (main protease or protease type 3C), and a member of the transmembrane serine protease II families (TMPRSS2). However, due to the pandemic state, priority is given to marketed drugs. These include chloroquine (CQ), hydroxychloroquine (HCQ), nitazoxanide, remdesivir, Lopinavir/ritonavir (LPV / r), in addition to treatment with convalescent plasma. But, therapeutic specific effects against SARS-CoV2 have not yet been verified. Most of the information obtained about treatment is based on preliminary and limited studies. We conclude that, at this time of emergency, the search for new therapies is more urgent due to the need to save lives. Thus, we point out as interesting targets for future more specific research: glycoprotein S, Mpro, and TMPRSS2.

Resumo A pandemia de COVID-19 causada pelo novo Coronavírus (SARS-CoV2) representa uma ameaça à saúde global devido à alta taxa de disseminação e formas graves de infecção respiratória. A falta de vacinas e antivirais específicos dificultam as estratégias clínicas de controle da doença, criando a necessidade urgente do desenvolvimento de tratamentos seguros e eficazes. Com relação as estratégias para o desenvolvimento de vacinas, incluem-se: aquelas com o vírus completo, subunidades e ácidos nucléicos, mas estas ainda estão em estágios iniciais. Já sobre os estudos realizados até o momento buscando novos alvos terapêuticos contra o SARS-CoV2, destacam a glicoproteína S; Mpro (principal protease ou protease tipo 3C) e um membro da família transmembrana serina protease II (TMPRSS2). No entanto, devido ao estado pandêmico, tem sido dada prioridade aos medicamentos comercializados. Estes incluem a cloroquina (CQ); hidroxicloroquina (HCQ); nitazoxanida; remdesivir; Lopinavir / ritonavir (LPV/r); além do tratamento com plasma de pacientes curados. Porém, ainda não há uma estratégia terapêutica contra o SARS-CoV2 totalmente eficaz, e a maioria das informações obtidas sobre o tratamento é baseada em estudos preliminares e limitados. Concluímos então que, neste momento de emergência, a busca por novas terapias é algo urgente devido à necessidade de salvar vidas. Assim finalizamos sugerindo como alvos interessantes para futuras pesquisas específicas: a glicoproteína S, Mpro e o TMPRSS2.

Bovine respiratory disease associated with Histophilus somni and bovine respiratory syncytial virus in a beef cattle feedlot from Southeastern Brazil / Doença respiratória bovina associada a Histophilus somni e vírus respiratório sincicial bovino em um confinamento de bovinos de corte na região sudeste do Brasil

Bovine respiratory disease (BRD) is a complex multifactorial and multi-etiological disease entity that is responsible for the morbidity and mortality particularly in feedlot cattle from North America. Information relative to the occurrence of BRD in Brazil and the associated infectious agents are lacking. This study investigated the participation of infectious agents of BRD in a beef cattle feedlot from Southeastern Brazil. Nasopharyngeal swabs of 11% (10/90) of cattle (n, 450) with clinical manifestations of respiratory distress were analyzed by targeting specific genes of the principal infectious pathogens of BRD. In addition, pulmonary fragments of one the animals that died were collected for histopathological and molecular diagnoses. The nucleic acids of Histophilus somni and bovine respiratory syncytial virus (BRSV) were identified in 20% (2/10) of the nasopharyngeal swabs of the animals with respiratory distress; another contained only BRSV RNA. Moreover, the nucleic acids of both infectious agents were amplified from the pulmonary fragments of the animal that died with histopathological evidence of bronchopneumonia and interstitial pneumonia; the nasopharyngeal swab of this animal also contained the nucleic acids of both pathogens. Additionally, all PCR and/or RT-PCR assays designed to detect the specific genes of Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida, Mycoplasma bovis, bovine viral diarrhea virus, bovine herpesvirus -1, bovine parainfluenza virus-3, and bovine coronavirus yielded negative results. Phylogenetic analyses suggest that the isolates of H. somni circulating in Brazil are similar to those identified elsewhere, while there seem to be diversity between the isolates of BRSV within cattle herds from different geographical locations of Brazil.(AU)

A Doença Respiratória Bovina (DRB) é uma infecção multifatorial e multietiológica que ocasiona aumento nas taxas de morbidade e mortalidade em confinamentos bovinos. As informações disponíveis com relação à ocorrência de DRB no Brasil e sua associação com agentes infecciosos são ainda ocasionais. Esse estudo avaliou a participação de agentes infecciosos relacionados à DRB em um confinamento de bovinos na região sudeste do Brasil. Swabs nasofaríngeos de 11% (n=10) dos bovinos (n=90) com sinais clínicos de DRB em um lote de 450 animais foram analisados por técnicas moleculares para amplificação de genes específicos dos principais patógenos relacionados à DRB. Adicionalmente, fragmentos de pulmão de um dos animais, que morreu por DRB foi coletado para diagnóstico histopatológico e molecular. O ácido nucleico de Histophilus somni e do vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) foi identificado em 20% (2/10) dos swabs nasofaríngeos. Em outro animal foi possível amplificar apenas o RNA do BRSV. O ácido nucleico de ambos os patógenos foi amplificado a partir de fragmentos pulmonares, que na histopatologia apresentou evidências de broncopneumonia e pneumonia intersticial. A partir do swab nasofaríngeo desse animal também foi possível amplificar o ácido nucleico de ambos os patógenos. Adicionalmente, todas as reações de PCR e RT-PCR realizadas para amplificar genes específicos de Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida, Mycoplasma bovis, vírus da diarreia viral bovina, herpesvírus bovino 1, vírus parainfluenza bovino 3 e coronavírus bovino foram negativas. Esses resultados confirmam a participação do H. somni e do BRSV no desenvolvimento de DRB em bovinos confinados no Brasil e abrem a perspectiva da realização de estudos mais amplos com o objetivo de identificar os principais agentes etiológicos da DRB no Brasil.(AU)

In-house quantitative real-time PCR for the diagnosis of hepatitis B virus and hepatitis C virus infections

The quantification of viral nucleic acids in serum by real-time PCR plays an important role in diagnosing hepatitis B virus and hepatitis C virus infection. In this study, we developed an assay using specific primers and probes to quantify hepatitis B virus DNA or hepatitis C virus RNA in serum from infected patients. For standardization and validation of the assay, an international panel of hepatitis B virus/hepatitis C virus and standard plasmids was used. A correlation coefficient of 0.983 and 0.963 for hepatitis B virus and hepatitis C virus, respectively, was obtained based on cycle threshold values and concentrations of DNA or RNA. The standard curve showed a linear relationship from 19 IU/mL to 1.9 × 109 IU/mL of serum, with a coefficient of determination (r2) of 0.99. In sera from patients infected with hepatitis B virus or hepatitis C virus viral loads (19 IU/mL and 1.9 × 109 IU/mL), we quantified viral loads with a detection limit of 1.9 × 102 IU/mL. The real-time quantitative PCR assay developed in this study provides an ideal system for routine diagnosis and confirmation of indeterminate serological results, especially in immunosuppressed patients.(AU)

Aplicações das técnicas de PCR no diagnóstico de doenças infecciosas dos animais

A reação em cadeia da polimerase (PCR Polymerase Chain Reaction) é uma técnica de biologia molecular revolucionária, pois permitiu o rápido desenvolvimento do estudo de sequências de ácidos nucléicos, proporcionando grandes avanços em diversas áreas do conhecimento. O diagnóstico de doenças infecciosas dos animais é realizado, historicamente, com técnicas que avaliam características fenotípicas do patógeno. No entanto, o estado da arte do diagnóstico de doenças infecciosas sofreu mudanças significativas nessas últimas décadas após o advento da PCR. Possui capacidade de detectar agentes infecciosos com alta sensibilidade e especificidade, sem necessidade de encontrar microrganismos viáveis na amostra biológica. (AU)

The polymerase chain reaction (PCR - Polymerase Chain Reaction) is a revolutionary molecular biology technique, because it allowed the rapid development of the study of nucleic acid sequences, providing great advances in many areas of knowledge. The diagnosis of infectious animal diseases is done historically with techniques that assess phenotypic characteristics of the pathogen. However, the state of the art diagnosis of infectious diseases has undergone significant changes in recent decades after the advent of PCR. It is capable of detecting infectious agents with high sensitivity and specificity without need for viable microorganisms in the biological sample. (AU)

Aplicações das técnicas de PCR no diagnóstico de doenças infecciosas dos animais

A reação em cadeia da polimerase (PCR – Polymerase Chain Reaction) é uma técnica de biologia molecular revolucionária, pois permitiu o rápido desenvolvimento do estudo de sequências de ácidos nucléicos, proporcionando grandes avanços em diversas áreas do conhecimento. O diagnóstico de doenças infecciosas dos animais é realizado, historicamente, com técnicas que avaliam características fenotípicas do patógeno. No entanto, o estado da arte do diagnóstico de doenças infecciosas sofreu mudanças significativas nessas últimas décadas após o advento da PCR. Possui capacidade de detectar agentes infecciosos com alta sensibilidade e especificidade, sem necessidade de encontrar microrganismos viáveis na amostra biológica.

The polymerase chain reaction (PCR - Polymerase Chain Reaction) is a revolutionary molecular biology technique, because it allowed the rapid development of the study of nucleic acid sequences, providing great advances in many areas of knowledge. The diagnosis of infectious animal diseases is done historically with techniques that assess phenotypic characteristics of the pathogen. However, the state of the art diagnosis of infectious diseases has undergone significant changes in recent decades after the advent of PCR. It is capable of detecting infectious agents with high sensitivity and specificity without need for viable microorganisms in the biological sample.

Momento de aplicação do nitrogênio e algumas variáveis estruturais e bromatológicas do capim-massai / Time of nitrogen application and some structural and bromatologic variables of massaigrass

As plantas forrageiras tropicais apresentam alto potencial de produção de massa de forragem, condicionada às condições edafoclimáticas, principalmente à adubação nitrogenada. A magnitude da resposta depende do sincronismo entre a disponibilidade de nutrientes e as necessidades da planta forrageira na rebrotação, e os resultados encontrados na literatura são contrastantes. Assim, este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar características estruturais e bromatológicas de Panicum maximum Jacq cv. Massai submetido a quatro doses de nitrogênio (0, 40, 80 e 120mg/dm3) e três momentos de aplicação após o corte (um, três e sete dias), divididos em três cortes, em um esquema fatorial 4 x 3 e delineado inteiramente ao acaso, com quatro repetições. O experimento foi conduzido em casa de vegetação. O incremento na taxa de aparecimento de perfilhos, na densidade populacional de perfilhos, na produção de massa seca de folha total e nos teores de proteína bruta foi de 42%, 65%, 770% e 35%, respectivamente, para a dose de 120mg/dm³ em relação à ausência de adubação nitrogenada. As fibras em detergente neutro e em detergente ácido decresceram cerca de 6% e 9%, respectivamente, com a adição de nitrogênio. Apenas a massa seca de folha total respondeu às épocas de aplicação de nitrogênio após o corte, com valores pouco expressivos. A adubação nitrogenada exerce efeito positivo sobre as variáveis estudadas, porém novos estudos devem ser conduzidos para a definição da época de adubação de nitrogênio após o corte, para a melhor utilização do nutriente pelas plantas.(AU)

Tropical forage plants have a high potential for mass production of fodder, subject to soil and climatic conditions, especially with nitrogen fertilization. The magnitude of the response depends on the timing of availability of nutrients and forage plant needs in the regrowth. Thus, this work was carried out to evaluate structural and bromatologic characteristics of the Panicum maximum Jacq cv. Massai in response to four nitrogen doses (0, 40, 80 and 120mg/dm3) and with three application times after cutting (one, three and seven days) in a 4 x 3 factorial treatment combination, in a completely randomized design, with four replicates. The experiment was conducted in a greenhouse. The increase in the rate of tillering, tiller population density, dry mass total leaf production and crude protein levels was 42%, 65%, 770% and 35%, respectively for the dose of 120mg / dm³ regarding the absence of fertilization. The neutral detergent and acid detergent fibers showed a decrease of 6% and 9% with nitrogen addition. Dry mass total leaf production responded to times of nitrogen application after cutting, with little significant values. Nitrogen fertilization has a positive effect on the variables studied, but new studies should be conducted to define the timing of nitrogen fertilization after cutting, for better utilization of this nutrient by plants.(AU)

Momento de aplicação do nitrogênio e algumas variáveis estruturais e bromatológicas do capim-massai / Time of nitrogen application and some structural and bromatologic variables of massaigrass

As plantas forrageiras tropicais apresentam alto potencial de produção de massa de forragem, condicionada às condições edafoclimáticas, principalmente à adubação nitrogenada. A magnitude da resposta depende do sincronismo entre a disponibilidade de nutrientes e as necessidades da planta forrageira na rebrotação, e os resultados encontrados na literatura são contrastantes. Assim, este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar características estruturais e bromatológicas de Panicum maximum Jacq cv. Massai submetido a quatro doses de nitrogênio (0, 40, 80 e 120mg/dm3) e três momentos de aplicação após o corte (um, três e sete dias), divididos em três cortes, em um esquema fatorial 4 x 3 e delineado inteiramente ao acaso, com quatro repetições. O experimento foi conduzido em casa de vegetação. O incremento na taxa de aparecimento de perfilhos, na densidade populacional de perfilhos, na produção de massa seca de folha total e nos teores de proteína bruta foi de 42%, 65%, 770% e 35%, respectivamente, para a dose de 120mg/dm³ em relação à ausência de adubação nitrogenada. As fibras em detergente neutro e em detergente ácido decresceram cerca de 6% e 9%, respectivamente, com a adição de nitrogênio. Apenas a massa seca de folha total respondeu às épocas de aplicação de nitrogênio após o corte, com valores pouco expressivos. A adubação nitrogenada exerce efeito positivo sobre as variáveis estudadas, porém novos estudos devem ser conduzidos para a definição da época de adubação de nitrogênio após o corte, para a melhor utilização do nutriente pelas plantas.(AU)

Tropical forage plants have a high potential for mass production of fodder, subject to soil and climatic conditions, especially with nitrogen fertilization. The magnitude of the response depends on the timing of availability of nutrients and forage plant needs in the regrowth. Thus, this work was carried out to evaluate structural and bromatologic characteristics of the Panicum maximum Jacq cv. Massai in response to four nitrogen doses (0, 40, 80 and 120mg/dm3) and with three application times after cutting (one, three and seven days) in a 4 x 3 factorial treatment combination, in a completely randomized design, with four replicates. The experiment was conducted in a greenhouse. The increase in the rate of tillering, tiller population density, dry mass total leaf production and crude protein levels was 42%, 65%, 770% and 35%, respectively for the dose of 120mg / dm³ regarding the absence of fertilization. The neutral detergent and acid detergent fibers showed a decrease of 6% and 9% with nitrogen addition. Dry mass total leaf production responded to times of nitrogen application after cutting, with little significant values. Nitrogen fertilization has a positive effect on the variables studied, but new studies should be conducted to define the timing of nitrogen fertilization after cutting, for better utilization of this nutrient by plants.(AU)

DIAGNÓSTICO DE VÍRUS DE IMPACTO REPRODUTIVO EM SUÍNOS: APLICABILIDADE DA ESPECTROSCOPIA RAMAN

De grande relevância para a medicina veterinária preventiva, o parvovírus suíno (PPV) é uma das principais causas infecciosas de falha reprodutiva em granjas suínas, responsável por importantes perdas econômicas, principalmente em co-infecção com o circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Até o momento, as ferramentas de detecção mais utilizadas são baseadas na Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), bastante sensível e específica, porém complexa, com altos custos associados, além de exigir de horas a dias para oferecer os resultados. Além disso, a recente pandemia mostrou o quanto a saúde pública demanda estratégias diagnósticas inovadoras e simples, mais adequadas para aplicações em larga escala. O objetivo do presente estudo foi identificar biomarcadores moleculares de infecção de PPV ou PCV2 através da Microespectroscopia Raman (RMS), a fim de fortalecer a base de dados da literatura científica, contribuindo para sua aplicação no diagnóstico em virologia no mundo todo. Para tanto, células de testículo de suíno (ST) foram inoculadas com PPV ou PCV2 e cultivadas in vitro (37 ºC, 5% CO2) por quatro dias. As células fixadas foram então submetidas à investigação RMS usando um laser de 633 nm. Um total de 225 espectros foi obtido para cada grupo experimental: PPV+, PCV2+ e controle negativo (NC). O ajuste teórico dos espectros obtidos foi realizado para o cálculo da Razão de Intensidade de Pico (PIR), a partir da qual os biomarcadores foram identificados. Os biomarcadores que separaram com precisão os três grupos foram, dos mais impactantes aos menos: ácidos nucleicos, proteínas e Arginina, enquanto os biomarcadores de infecção, i. e., picos capazes de diferenciar o controle negativo (NC) contra outros grupos foram principalmente proteínas. Curiosamente, o PPV apresentou resultados de assinaturas específicas, sendo lipídios e ácidos nucleicos os mais impactantes, embora também proteínas. Esses resultados contribuíram para a construção de bases promissoras para a aplicação de RMS em ciências biomédicas, como uma abordagem diagnóstica alternativa.

Of great relevance for preventive veterinary medicine, porcine parvovirus (PPV) is one of the major infectious causes of reproductive failure in swine, responsible for important economic losses, specially along with Porcine Circovirus type 2 (PCV2). To date, the most useful detection tool is PCR-based, which is quite sensitive and specific, but laborious, costly and time-demanding. Moreover, the recent pandemic has shown how much public health demands innovative and simple diagnostic strategies that are more suitable for large scale applications. Our goal was to identify molecular biomarkers of PPV or PCV2 infection by Raman Microspectroscopy (RMS), in order to strength the Raman database and to contribute to its application on viral diagnostic worldwide. For this intent, swine testis (ST) cells were inoculated with PPV or PCV2 and in vitro cultured (37 ºC, 5% CO2) for four days. Fixed cells were then subdjected to RMS investigation using a 633 nm laser. A total of 225 spectra was obtained for each experimental group (PPV+, PCV2+ and negative control). Theoretical fitting of obtained spectra was performed for Peak Intensity Ratios (PIR) calculation, from which biomarkers were derived. Biomarkers which accurately separated all three groups were, from the most to the least impactful: nucleic acids, proteins and Arginine, while infection biomarkers, i. e., peaks able to differentiate negative control (NC) against other groups were mostly proteins. Interestingly, PPV show specific biomarkers assignments, being lipids and nucleic acids the most impactful ones, although proteins too. These results built a promising bases for RMS, as an alternative diagnostic approach for biomedical applications.

PERFIL TRANSCRIPTÔMICO DO MÚSCULO Longissimus thoracis ASSOCIADO A CONCENTRAÇÃO DE ÁCIDOS GRAXOS EM BOVINOS NELORE TERMINADOS EM CONFINAMENTO

A carne bovina possui alto valor nutricional por fornecer nutrientes fundamentais como os ácidos graxos (AG), unidades básicas dos lipídios, que participam de vias enzimáticas e regulatórias, do armazenamento energético e de funções estruturais, além de serem fatores importantes à aceitação do produto cárneo. Os ácidos graxos saturados (AGS) estão ligados a fatores de risco associados a cardiopatias e quadros inflamatórios, já os ácidos graxos mono- (AGMI) e poli-insaturados (AGPI), como os ácidos graxos essenciais (AGE) ácidos linoleico (AL) e alfa-linolênico (ALA), condicionam proteção. O perfil de AG na carne bovina possui caráter complexo e poligênico. A partir do sequenciamento de ácidos nucléicos foi possível identificar genes diferencialmente expressos (GDE) em regiões genômicas associados à composição de AG na carne bovina. Contudo, poucas regiões genômicas explicaram grande parte das variâncias genéticas, e os GDE quando avaliados de forma isolada, não foram capazes de explicar totalmente o fenótipo e os mecanismos relacionados. Neste sentido, estudos de co-expressão (COE) e co-expressão diferencial (DCO) auxiliam nas análises de GDE, bem como os estudos de associação genômica ampla (GWAS). A análise de DCO é capaz de apontar genes e fatores de transcrição (FT) melhores conectados ao fenótipo, que, em associação com GDE e COE, fomentam o conhecimento relacionado à característica estudada. Desta forma, objetivou-se identificar e mensurar o perfil transcriptômico do perfil de AG no músculo Longissimus thoracis em bovinos da raça Nelore terminados em confinamento sob as abordagens de GDE, COE e DCO. Para a análise de COE foram utilizados dados de 44 touros, e destes, 30 com valores extremos para cada AG. Somas e razões (totalizando 14 fenótipos) foram utilizados nas análises de GDE e DCO. Para a análise de DCO, utilizou-se duas metodologias: (i) weighted gene co-expression network analysis (WGCNA) para cálculo da medida de conectividade diferencial (Kdiff) e (ii) partial correlation and information theory (PCIT). A metodologia PCIT foi utilizada somente para os grupos dos AGE com objetivo de identificar differential hubbing (DH) genes e FT com maior magnitude de regulatory impact factor. Um total de 912 GDE foram identificados, e os grupos de somas de AGPI (n=563) e -3 (n=346) foram os mais representativos. A análise de COE apontou três módulos, dos quais o módulo blue (n=1.776) foi correlacionado com oito dos 14 fenótipos de AG. Além disso, foram listados 759 genes DCO (WGCNA), com destaque para o ácido oleico (n=358) e a soma dos AGMI (n=120). Por meio da análise que combinou PCIT+WGCNA (DCO), os DH genes ASB5 e ERLIN1 e o FT NFIA se sobressaíram por impactarem ambos os AGE (AL e ALA). Além disso, os genes ELOVL5, FADS2, FASN e PPARG e os FT NFYA, NFYB e RORA foram atrelados a pelo menos um dos AGE. Ao confluir os resultados de GDE+COE+DCO (WGCNA) para todas os fenótipos, os genes ACSL3, ECI1, DECR2, FITM1 e SDHB foram sinalizados em pelo menos duas análises. Estes genes, relacionados ao metabolismo lipídico foram, até então, pouco explorados em estudos com bovinos. Estes achados contribuem para a melhor compreensão dos mecanismos genéticos subjacentes ao perfil de AG da carne em bovinos Nelore terminados em confinamento.

Beef has high nutritional value for providing fundamental nutrients such as fatty acids (FA), basic units of lipids, which participate in enzymatic and regulatory pathways, energy storage, and structural functions, also being important factors for meat product acceptance. Saturated fatty acids (SFA) are linked to risk factors associated with heart disease and inflammatory conditions, whereas mono- (MUFA) and polyunsaturated (PUFA) fatty acids, such as essential fatty acids (EFA) linoleic acid (LA), and alpha-linolenic (ALA), condition protection. The FA profile in beef has a complex and polygenic character. From the nucleic acids sequencing, it was possible to identify differentially expressed genes (DEG) and genomic regions associated with the FA composition in beef. However, few genomic regions explained a large part of the genetic variances, and the DEG evaluated in isolation was not able to fully explain the phenotype and the related mechanisms. In this sense, studies of co-expression (COE) and differential co-expression (DCO) help DEG analysis, as well as genomic wide association studies. DCO analysis can identify genes and transcription factors (TF) better connected to the phenotype, which, in association with DEG and COE, provide knowledge about the traits. Thus, the objective was to identify and measure the transcriptomic profile, under the DEG, COE, and DCO approach, of the FA profile in the Longissimus thoracis muscle of Nellore cattle finished in feedlot. For the COE analysis, data from 44 bulls were used, and of these, 30, with extreme values for each FA, sums, and ratios (totaling 14 phenotypes), were used in the DEG and DCO analyzes. For the DCO analysis were used two approaches, weighted gene co-expression network analysis (WGCNA) to calculate the differential connectivity measure (Kdiff) and partial correlation and information theory (PCIT) was used only for the EFA groups to identify differential hubbing (DH) genes and TF with a higher magnitude of regulatory impact factor. A total of 912 DEG were identified, and the PUFA sum (n = 563) and -3 sum (n = 346) were the most representative. The COE analysis indicated 19 modules, of which ten were related to all the traits evaluated. 759 DCO genes (WGCNA) were listed, with emphasis on oleic acid (n = 358) and MUFA sum (n = 120). On the other hand, through the analysis that combined PCIT + WGCNA (DCO), the DH genes ASB5 and ERLIN1 and TF NFIA stood out when impacting both EFA (LA and ALA), also the ELOVL5, FADS2, FASN, and PPARG genes and the TF NFYA, NFYB, and RORA linked to at least one EFA. When the results of DEG + COE + DCO (WGCNA) for all traits were combined, the ACSL3, ECI1, DECR2, FITM1 and SDHB genes were signaled in at least two analyzes. These genes, related to lipid metabolism, were, until then, little explored in cattle studies. These findings contribute to the understanding of the genetic mechanisms underlying the FA profile of Nellore cattle finished in feedlot.

Molecular detection of protozoa of the Sarcocystidae family in sheep from the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Detecção molecular de protozoários da família Sarcocystidae em ovinos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

Infections caused by protozoa belonging to the Sarcocystidae family have worldwide distribution and are common in ruminants, leading to considerable economic losses. This study evaluates Sarcocystis spp., Toxoplasma gondii and Neospora caninum infections in sheep from Southwest region of Rio Grande do Sul, Brazil. Myocardium samples of 80 sheep raised on extensive system were collected. Tissue cysts were detected by direct examination and presence of infective agents was confirmed by PCR. Macroscopic evaluation did not reveal changes, but direct microscopic examination showed cysts in 76.2% (61/80, 95% CI: 66.9 - 85.9) samples, and all cysts were morphologically similar to those caused by Sarcocystis tenella or Sarcocystis arieticanis. PCR detected Sarcocystis spp. DNA in 21.2% (17/80, CI: 12.3-30.2) of the tested samples and T. gondii DNA in 15% (12/80, CI: 7.2-22.8). Moreover, 6.2% (5/80, CI: 2.1-13.9) samples contained DNA of both protozoan. The presence of N. caninum nucleic acids was not observed in tested samples. However, all PCR-positive samples (23.7%-19/80, CI: 14.4-33.1) were also positive by direct examination (microscopic cysts). Thus, a high occurrence of microscopic tissue cysts was detected in sheep from southwest region of Rio Grande do Sul State. Although PCR did not show good sensitivity to identify the causative agents of these cysts, it revealed the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in ovine cardiac muscle samples. This may predispose the contamination of animals and humans by these protozoa.(AU)

Infecções causadas por protozoários da família Sarcocystidae apresentam distribuição mundial, sendo comuns em ruminantes, responsáveis por causar importantes perdas econômicas. Este estudo avaliou infecções de Sarcocystis spp., Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos da região sudoeste do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram coletadas amostras de miocárdio de 80 ovinos criados em sistema extensivo. Cistos teciduais foram detectados por exame direto, com a presença dos agentes confirmada por PCR. A avaliação macroscópica não revelou alterações, porém, no exame microscópico direto, foram verificados cistos em 76,2% (61/80, 95% IC: 66,9-85,9) das amostras, sendo todos morfologicamente semelhantes ao Sarcocystis tenella ou Sarcocystis arieticanis. A PCR detectou DNA de Sarcocystis spp. em 21,2% (17/80, IC: 12,3-30,2) das amostras testadas e DNA de T. gondii em 15% (12/80, IC: 7,2-22,8). Em 6,2% (5/80, IC: 2,1-13,9), foram detectados DNA de ambos os protozoários. Todas as amostras positivas no PCR (23,7%-19/80, IC: 14,4-33,1) também foram positivas no exame direto (cistos microscópicos). Assim, uma alta ocorrência de cistos teciduais microscópicos em ovinos da região sudoeste do Rio Grande do Sul foi detectada. Apesar de a PCR não ter mostrado uma boa sensibilidade na identificação dos agentes causadores desses cistos, foi possível verificar a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em amostras do músculo cardíaco de ovinos. Dessa maneira, a presença destes protozoários pode predispor a contaminação de humanos e animais.(AU)