Antifungal effect of (R) and (S)-citronellal enantiomers and their predictive mechanism of action on Candida albicans from voriconazole-resistant onychomycoses / Efeito antifúngico dos enantiômeros (R) e (S)-citronelal e seu mecanismo de ação preditivo sobre Candida albicans de onicomicoses resistentes ao voriconazol

Onychomycosis is the most common disease affecting the nail unit and accounts for at least 50% of all nail diseases. In addition, Candida albicans is responsible for approximately 70% of onychomycoses caused by yeasts. This study investigated the antifungal effect of (R) and (S)-citronellal enantiomers, as well as its predictive mechanism of action on C. albicans from voriconazole-resistant onychomycoses. For this purpose, in vitro broth microdilution and molecular docking techniques were applied in a predictive and complementary manner to the mechanisms of action. The main results of this study indicate that C. albicans was resistant to voriconazole and sensitive to the enantiomers (R) and (S)-citronellal at a dose of 256 and 32 µg/mL respectively. In addition, there was an increase in the minimum inhibitory concentration (MIC) of the enantiomers in the presence of sorbitol and ergosterol, indicating that these molecules possibly affect the integrity of the cell wall and cell membrane of C. albicans. Molecular docking with key biosynthesis proteins and maintenance of the fungal cell wall and plasma membrane demonstrated the possibility of (R) and (S)-citronellal interacting with two important enzymes: 1,3-ß-glucan synthase and lanosterol 14α-demethylase. Therefore, the findings of this study indicate that the (R) and (S)-citronellal enantiomers are fungicidal on C. albicans from onychomycoses and probably these substances cause damage to the cell wall and cell membrane of these micro-organisms possibly by interacting with enzymes in the biosynthesis of these fungal structures.

A onicomicose é a doença mais comum que afeta a unidade ungueal e representa pelo menos 50% de todas as doenças ungueais. Além disso, a Candida albicans é responsável por aproximadamente 70% das onicomicoses causadas por leveduras. Nesse estudo, foi investigado o efeito antifúngico dos enantiômeros (R) e (S)-citronelal, bem como seu mecanismo de ação preditivo sobre C. albicans de onicomicoses resistentes ao voriconazol. Para este propósito, foram aplicadas técnicas in vitro de microdiluição em caldo e docking molecular de forma preditiva e complementar para os mecanismos de ação. Os principais resultados deste estudo indicam que C. albicans foi resistente ao voriconazol e sensível aos enantiômeros (R) e (S)-citronelal na dose de 256 e 32 µg/mL respectivamente. Além disso, houve aumento da concentração inibitória mínima (CIM) dos enantiômeros na presença do sorbitol e do ergosterol, indicando que estas moléculas possivelmente afetem a integridade da parede e da membrana celular de C. albicans. O docking molecular com proteínas chave da biossíntese e manutenção da parede celular e da membrana plasmática fúngica, demonstraram a possibilidade do (R) e (S)-citronelal interagir com duas importantes enzimas: 1,3-ß-glucan sintase e lanosterol 14α-demetilase. Portanto, os achados desse estudo indicam que os enantiômeros (R) e (S)-citronelal são fungicidas sobre C. albicans de onicomicoses e provavelmente essas substâncias causem danos a parede e a membrana celular desses microrganismos possivelmente por interagir com as enzimas da biossíntese destas estruturas fúngicas.

Eficacia de aditivo a base de pared celular de levadura en la dieta de cerdas jóvenes expuestas a zearalenona / Effectiveness of additives based on yeast cell wall in diets of gilts intoxicated by zearalenone / Eficácia de aditivo à base de parede celular de levedura na dieta de leitoas intoxicadas com zearalenona

Las micotoxinas determinan pérdidas económicas significativas a la ganadería porcina y los adsorbentes de pared celular de levadura son una alternativa para reducir este problema. Considerando que la efectividad de estos tipos de adsorbentes son dependientes de la cepa, con variabilidad de la respuesta como una función de la composición de la pared celular de levadura utilizada, es necesario revisar cada nuevo producto antes de su comercialización. Así, el objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia de un aditivo anti-micotoxinas (AAM) basado en la pared celular de Saccharomyces cerevisiae, Safmannan® , en la prevención de micotoxicosis como resultado de la ingestión de zearalenona (ZEA). Fueron utilizadas 36 cerdas jóvenes, cuyas dietas tenían dos niveles de inclusión de AAM (0,0 y 0,2%) y tres niveles de inclusión de ZEA (0,0, 0,25 y 0,6 6 mg kg-1 o ppm). El ensayo tuvo duración total de 21 días, y se llevaran a cabo evaluaciones semanales de: peso corporal, ganancia de peso, consumo de alimento y el volumen de la vulva, también se calcularon los pesos relativos de hígado, tracto reproductivo total y conjunto útero-ovário vagina. La adición de 0.0% de AAM con 0,6 o 0,25 ppm ZEA en las dietas de las cerdas prepúberes causó signos clínicos de hiperestrogenismo. La adición de AAM en las dietas que contienen ZEA demostró ser una buena alternativa para reducir los efectos tóxicos de esta micotoxina.(AU)

Mycotoxins determine important economic losses to the swine and adsorbents based on yeast cell wall are an alternative to reduce this problem. Whereas the effectiveness of these types of adsorbents is strain-dependent, with response variability depending on the composition of the yeast cell wall used, it becomes necessary assessment of each new product prior to its commercialization. Thus, the aim of this study was to evaluate the efficacy of an anti-mycotoxin additives (AMA) based on the yeast cell wall of Saccharomyces cerevisiae, Safmannan® , in preventing mycotoxicosis caused by ingestion of zearalenone (ZEA). A total of 36 pre-pubertal gilts, whose diets had two levels of AAM (0.0 and 0.2 %) and three inclusion levels of ZEA (0.0, 0.25 and 0.6 mg kg-1 or ppm). The experimental period extended to 21 days and weekly, was measured the parameters: live weight, weight gain, feed intake and vulvar volume; relative weights of liver, total reproductive tract and the set uterus-ovaryvagina were also calculated. The addition of 0.0% AMA with 0.6 or 0.25 mg kg-1 ZEA in the diet of pre-pubertal gilts caused clinical signs of hyperestrogenic. The addition of the AMA in diets containing ZEA proved to be a good alternative for reducing the toxic effects of this mycotoxin.(AU)

As micotoxinas determinam perdas econômicas importantes para suinocultura e os adsorventes à base de parede celular de leveduras são uma alternativa para reduzir este problema. Considerando que a eficácia desses tipos de adsorventes são linhagemdependentes, apresentando variabilidade de resposta em função da composição da parede celular da levedura utilizada, torna-se necessária a avaliação de cada novo produto antes de sua comercialização. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia de um aditivo anti-micotoxina (AAM) à base de parede celular de Saccharomyces cerevisiae, Safmannan® , na prevenção da micotoxicose decorrente da ingestão de zearalenona (ZEA). Foram utilizadas 36 leitoas pré-púberes cujas dietas apresentaram dois níveis de inclusão de AAM (0,0 e 0,2%) e três níveis de inclusão de ZEA (0,0; 0,25 e 0,6 mg kg-1 ou ppm). O período experimental teve duração total de 21 dias, sendo realizadas avaliações semanais de: peso vivo, ganho de peso, consumo de ração e volume vulvar; pesos relativos de fígado, trato reprodutivo total e o conjunto útero-ovário-vagina também foram calculados. A adição de 0,0% AAM com 0,6 ou 0,25 ppm ZEA na dieta de leitoas pré-púberes causou sinais clínicos de hiperestrogenismo. A adição do AAM nas dietas contendo ZEA demonstrou ser uma alternativa estatisticamente significativa para redução dos efeitos tóxicos desta micotoxina.(AU)

Eficacia de aditivo a base de pared celular de levadura en la dieta de cerdas jóvenes expuestas a zearalenona / Effectiveness of additives based on yeast cell wall in diets of gilts intoxicated by zearalenone / Eficácia de aditivo à base de parede celular de levedura na dieta de leitoas intoxicadas com zearalenona

Las micotoxinas determinan pérdidas económicas significativas a la ganadería porcina y los adsorbentes de pared celular de levadura son una alternativa para reducir este problema. Considerando que la efectividad de estos tipos de adsorbentes son dependientes de la cepa, con variabilidad de la respuesta como una función de la composición de la pared celular de levadura utilizada, es necesario revisar cada nuevo producto antes de su comercialización. Así, el objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia de un aditivo anti-micotoxinas (AAM) basado en la pared celular de Saccharomyces cerevisiae, Safmannan® , en la prevención de micotoxicosis como resultado de la ingestión de zearalenona (ZEA). Fueron utilizadas 36 cerdas jóvenes, cuyas dietas tenían dos niveles de inclusión de AAM (0,0 y 0,2%) y tres niveles de inclusión de ZEA (0,0, 0,25 y 0,6 6 mg kg-1 o ppm). El ensayo tuvo duración total de 21 días, y se llevaran a cabo evaluaciones semanales de: peso corporal, ganancia de peso, consumo de alimento y el volumen de la vulva, también se calcularon los pesos relativos de hígado, tracto reproductivo total y conjunto útero-ovário vagina. La adición de 0.0% de AAM con 0,6 o 0,25 ppm ZEA en las dietas de las cerdas prepúberes causó signos clínicos de hiperestrogenismo. La adición de AAM en las dietas que contienen ZEA demostró ser una buena alternativa para reducir los efectos tóxicos de esta micotoxina.

Mycotoxins determine important economic losses to the swine and adsorbents based on yeast cell wall are an alternative to reduce this problem. Whereas the effectiveness of these types of adsorbents is strain-dependent, with response variability depending on the composition of the yeast cell wall used, it becomes necessary assessment of each new product prior to its commercialization. Thus, the aim of this study was to evaluate the efficacy of an anti-mycotoxin additives (AMA) based on the yeast cell wall of Saccharomyces cerevisiae, Safmannan® , in preventing mycotoxicosis caused by ingestion of zearalenone (ZEA). A total of 36 pre-pubertal gilts, whose diets had two levels of AAM (0.0 and 0.2 %) and three inclusion levels of ZEA (0.0, 0.25 and 0.6 mg kg-1 or ppm). The experimental period extended to 21 days and weekly, was measured the parameters: live weight, weight gain, feed intake and vulvar volume; relative weights of liver, total reproductive tract and the set uterus-ovaryvagina were also calculated. The addition of 0.0% AMA with 0.6 or 0.25 mg kg-1 ZEA in the diet of pre-pubertal gilts caused clinical signs of hyperestrogenic. The addition of the AMA in diets containing ZEA proved to be a good alternative for reducing the toxic effects of this mycotoxin.

As micotoxinas determinam perdas econômicas importantes para suinocultura e os adsorventes à base de parede celular de leveduras são uma alternativa para reduzir este problema. Considerando que a eficácia desses tipos de adsorventes são linhagemdependentes, apresentando variabilidade de resposta em função da composição da parede celular da levedura utilizada, torna-se necessária a avaliação de cada novo produto antes de sua comercialização. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia de um aditivo anti-micotoxina (AAM) à base de parede celular de Saccharomyces cerevisiae, Safmannan® , na prevenção da micotoxicose decorrente da ingestão de zearalenona (ZEA). Foram utilizadas 36 leitoas pré-púberes cujas dietas apresentaram dois níveis de inclusão de AAM (0,0 e 0,2%) e três níveis de inclusão de ZEA (0,0; 0,25 e 0,6 mg kg-1 ou ppm). O período experimental teve duração total de 21 dias, sendo realizadas avaliações semanais de: peso vivo, ganho de peso, consumo de ração e volume vulvar; pesos relativos de fígado, trato reprodutivo total e o conjunto útero-ovário-vagina também foram calculados. A adição de 0,0% AAM com 0,6 ou 0,25 ppm ZEA na dieta de leitoas pré-púberes causou sinais clínicos de hiperestrogenismo. A adição do AAM nas dietas contendo ZEA demonstrou ser uma alternativa estatisticamente significativa para redução dos efeitos tóxicos desta micotoxina.

DIGESTIBILIDADE E BALANÇO DE NITROGÊNIO EM CORDEIROS SUPLEMENTADOS COM CEPAS FÚNGICAS AUTÓCTONES DO TRATO DIGESTÓRIO

As gramíneas tropicais no período de seca reduzem a oferta de nutrientes solúveis no conteúdo celular e possuem maior proporção de carboidratos fibrosos da parede celular lignificada. A utilização de aditivos microbianos na alimentação de ruminantes, com o propósito de estimular a digestão no rúmen e a eficiência alimentar poderia contribuir para melhorar a produtividade dos ruminantes alimentados com essas gramíneas. Nesta pesquisa, objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação cepas autóctones de Trichoderma longibrachiatum e Rhodotorula mucilaginosa do trato gastrointestinal de ovinos, em dieta para cordeiros alimentados com feno de Urochloa decumbens sobre o consumo, a digestibilidade de nutrientes, a síntese de proteína microbiana, o balanço de nitrogênio e excreção de ureia. O experimento teve duração de 75 dias, sendo os 12 primeiros dias de adaptação às dietas e baias e 63 dias de coleta de dados. Foram utilizados 21 ovinos, mestiços da raça Santa Inês x Dorper, machos, não castrados com idade média de quatro meses e peso corporal médio inicial de (18,80 ± 2,34 kg), distribuídos aleatoriamente em um delineamento inteiramente casualizado (DIC). A relação volumoso concentrado foi 30:70, foi utilizada uma dieta padrão suplementada ou não com a cepa fúngica; sem aditivo microbiano (controle); com o fungo (Trichoderma); e levedura (Rhodotorula). O consumo e digestibilidade de nutrientes, a síntese de proteína microbiana e a retenção de nitrogênio corporal não foram influenciados pela adição dos probióticos (P > 0,05). A eficiência microbiana foi menor (P < 0,05) com o uso da levedura Rhodotorula mucilaginosa. A alta proporção de concentrado na dieta poderia interferir nos possíveis efeitos dos probióticos sobre a utilização da fibra da forragem.

In the dry season, tropical grasses decrease the supply of soluble nutrients in cell content and have a higher proportion of lignified cell wall fibrous carbohydrates. The use of microbial feed additives in ruminants to stimulate rumen digestion and feed efficiency could play the role of improving the productivity of ruminants fed on these grasses. The goal of this study was to evaluate the effects of supplementing autochthonous strains of Trichoderma longibrachiatum and Rhodotorula mucilaginosa from the gastrointestinal tract of sheep on diets fed with Urochloa decumbens hay(on intake), nutrient digestibility, microbial protein synthesis, diet. nitrogen balance and urea excretion. The experiment lasted 75 days, with the first 12 days of adaptation to diets and stalls and 63 days of data collection. Twenty-one male Santa Inês x Dorper crossbred sheep, male, uncastrated, with an average age of four months and initial body weight (18.80 ± 2.34 kg) were randomly distributed in a completely randomized design (IHD). Concentrated forage ratio was 30:70, a standard diet was used supplemented or not with the fungal strain; without microbial additive (control); with the fungus (Trichoderma); and yeast (Rhodotorula). Nutrient intake, digestibility, microbial protein synthesis, and body nitrogen retention were not influenced by adding probiotics (P> 0.05). Microbial efficiency was lower (P <0.05) with the use of Rhodotorula mucilaginosa yeast. High proportions of concentrate in the diet could interfere with the probable effects of probiotics on forage fiber utilization.

Uso promissor do óleo essencial de Rosmarinus officinalis L. e Origanum majorana L. na esporotricose cutânea experimental por Sporothrix brasiliensis resistente ao itraconazol, e susceptibilidade de isolados aos óleos vegetais

O itraconazol é o fármaco de eleição no tratamento da esporotricose humana e animal, entretanto, o surgimento de Sporothrix brasiliensis com resistência in vitro tem incentivado os estudos com plantas da família Lamiaceae como fontes promissoras de moléculas antifúngicas. Dessa família, os óleos essenciais de alecrim (Rosmarinus officinalis L.) e manjerona (Origanum majorana L.) têm se destacados pela atividade antifúngica e baixa citotoxicidade. Essa tese objetivou avaliar a atividade dos óleos essenciais de plantas da família Lamiaceae em isolados clínicos de Sporothrix spp. e na esporotricose cutânea experimental por S. brasiliensis resistente ao itraconazol. Quarenta ratos Wistar adultos machos foram inoculados via subcutânea no coxim plantar esquerdo (2×105 células/mL) e, dez dias após, receberam tratamento oral (1 mL) por 30 dias nos seguintes grupos experimentais (n=10): controle com solução salina com propilenoglicol 1% (CONT); itraconazol a 10 mg/kg (ITRA); óleos essenciais de alecrim a 90 mg/ml (ALEC) e manjerona a 30 mg/ml (MANJ). Semanalmente, a evolução clínica era acompanhada e a eutanásia realizada para histopatologia e contagem fúngica (retro-isolamento). Ainda, os óleos foram avaliados por cromatografia gasosa com espectrometria de massas, e o mecanismo de ação pelos ensaios de proteção do sorbitol e efeito do ergosterol. Os resultados revelaram que os animais dos grupos ALEC e MANJ apresentaram remissão dos sinais clínicos, com ausência de edema e exsudato no membro inoculado, ao passo que CONT e ITRA mantiveram os sinais da doença. Ainda, a disseminação do S. brasiliensis para os órgãos foi menos observada no fígado, baço, linfonodos, rins e testículos dos grupos ALEC e MANJ em comparação ao CONT e ITRA (P < 0.05), revelando uma proteção sistêmica a partir da infecção subcutânea. Essa observação foi relacionada com a composição química, cujos compostos prevalentes foram terpineol-4 (34,09%) e -terpineno (14,28%) em manjerona, e 1,8-cineol (47,91%) e cânfora (12,47%) em alecrim. Não houve alteração nos valores da concentração inibitória mínima (CIM) quando adicionado o protetor osmótico, demonstrando ausência de atividade à nível de parede celular, ao passo que o uso do ergosterol elevou os valores de CIM, revelando que ambos óleos apresentaram atividade a nível de complexação com o ergosterol. Esse estudo demonstrou a eficácia do uso oral de alecrim e manjerona no tratamento da esporotricose cutânea experimental, sendo promissores como antifúngicos. Palavras-ch

Itraconazole is the drug of choice for the treatment of sporotrichosis, however, the emergence of Sporothrix brasiliensis with in vitro resistance has encouraged studies with plants of the family Lamiaceae as promising sources of antifungal molecules. From this family, essential oils of rosemary (Rosmarinus officinalis L.) and marjoram (Origanum majorana L.) have been highlighted for their antifungal activities and low cytotoxicity. This thesis aimed to evaluate the effectiveness of the essential oils of the plants from Lamiaceae family in clinical isolates of Sporothrix spp. and in the experimental cutaneous sporotrichosis by itraconazole-resistant S. brasiliensis. Forty male adult Wistar rats were inoculated subcutaneously in the left footpad (2×105 cells/mL) and, ten days later, received oral treatment (1 mL) for 30 days in the following experimental groups (n=10): control with solution saline with 1% propylene glycol (CONT); itraconazole at 10 mg/kg (ITRA); essential oils of rosemary at 90 mg/mL (ROSM) and marjoram at 30 mg/mL (MARJ). The clinical follow-up was done weekly, as well as the euthanasia for histopathology and fungal burden (retro-isolation). Furthermore, the oils were evaluated by gas chromatography with mass spectrometry, and the mechanism of action by the assays of sorbitol protection and ergosterol effect. The results showed that the animals from ALEC and MANJ groups presented remission of the clinical signs, with no edema and exudate in the inoculated limb, whereas CONT and ITRA maintained the signs of the disease. Also, the dissemination of S. brasiliensis to the organs was less observed in the liver, spleen, lymph nodes, kidneys and testicles of the ALEC and MANJ groups compared to the CONT and ITRA (P <0.05), revealing systemic protection from the subcutaneous infection. This observation was related to the chemical composition, whose prevalent compounds were terpineol-4 (34.09%) and -terpinene (14.28%) in marjoram, and 1,8-cineole (47.91%) and camphor (12.47%) in rosemary. There was no change in minimum inhibitory concentration (MIC) values when the osmotic protector was added, showing an absence of activity at the cell wall level, whereas the use of ergosterol increased MIC values, revealing that both oils presented activity at the level of complexion with ergosterol. This study demonstrated the effectiveness of the oral use of rosemary and marjoram in the treatment of experimental cutaneous sporotrichosis, being promising as antifungal.

Feohifomicose cutânea causada por Curvularia sp. em um equino / Cutaneous phaeohyphomycosis caused by Curvularia sp. in an equine

As feohifomicoses são doenças cutâneas, subcutâneas e sistêmicas que acometem humanos e animais. São causadas por fungos que possuem melanina em sua parede celular (dematiáceos) e estão geralmente associadas com imunocomprometimento do hospedeiro. Este trabalho descreve alterações clínicas e histopatológicas de feohifomicose cutânea em um equino, macho, da raça crioula, de 6 anos de idade. O animal apresentou dois nódulos cutâneos com aproximadamente 4 a 5 cm de diâmetro, nas regiões laterais direita e esquerda do abdômen, que foram removidos cirurgicamente e encaminhados para exame histopatológico. Macroscopicamente, as lesões consistiam em nódulos cutâneos, um ulcerado, apresentando ao corte múltiplas áreas circunscritas e esbranquiçadas contendo em seu interior grânulos enegrecidos. Na histopatologia, as lesões se caracterizavam por dermatite ulcerativa piogranulomatosa com hifas septadas intralesionais apresentando parede pigmentada. No cultivo micológico, observou-se crescimento fúngico de Curvularia sp. O diagnóstico de dermatite fúngica por Curvularia sp. foi baseado nos achados histológicos associados com o isolamento fúngico. O tratamento se restringiu à retirada cirúrgica completa das lesões; entretanto, um ano após a excisão, novas lesões surgiram nas proximidades das lesões prévias no abdômen.

Phaeohyphomycosis include cutaneous, subcutaneous, and systemic diseases that affect humans and animals. The diseases are usually associated with immunocompromised hosts and are caused by fungi whose wall cell contains melanin (dematiaceous). This communication describes clinical, histopathological, and microbiological aspects observed in a case of phaeohyphomycosis affecting a 6-year-old male Crioulo horse. Animal showed two cutaneous nodules with about 4-5 cm of diameter located in the lateral abdominal walls (one in the right, the other in the left). Nodules were excised and submitted to the pathological laboratory SPV-UFRGS. Grossly, one of the cutaneous nodules was ulcerated and had, at the cut surface, multiple circumscript whitish areas containing blackish granules. Microscopically, nodules had piogranulomatous ulcerative dermatitis associated with intralesional septate and pigmented hyphae. Mycological culture, performed at the Mycology Laboratory-UFRGS, yielded fungal growth of Curvularia sp. Those findings support the diagnosis of fungal dermatitis by Curvularia sp. Treatment was complete surgical excision of lesions; however, one year after the procedure, recurrence of lesions was observed in the areas close to that where the previous lesions were.

Feohifomicose cutânea causada por Curvularia sp. em um equino / Cutaneous phaeohyphomycosis caused by Curvularia sp. in an equine

As feohifomicoses são doenças cutâneas, subcutâneas e sistêmicas que acometem humanos e animais. São causadas por fungos que possuem melanina em sua parede celular (dematiáceos) e estão geralmente associadas com imunocomprometimento do hospedeiro. Este trabalho descreve alterações clínicas e histopatológicas de feohifomicose cutânea em um equino, macho, da raça crioula, de 6 anos de idade. O animal apresentou dois nódulos cutâneos com aproximadamente 4 a 5 cm de diâmetro, nas regiões laterais direita e esquerda do abdômen, que foram removidos cirurgicamente e encaminhados para exame histopatológico. Macroscopicamente, as lesões consistiam em nódulos cutâneos, um ulcerado, apresentando ao corte múltiplas áreas circunscritas e esbranquiçadas contendo em seu interior grânulos enegrecidos. Na histopatologia, as lesões se caracterizavam por dermatite ulcerativa piogranulomatosa com hifas septadas intralesionais apresentando parede pigmentada. No cultivo micológico, observou-se crescimento fúngico de Curvularia sp. O diagnóstico de dermatite fúngica por Curvularia sp. foi baseado nos achados histológicos associados com o isolamento fúngico. O tratamento se restringiu à retirada cirúrgica completa das lesões; entretanto, um ano após a excisão, novas lesões surgiram nas proximidades das lesões prévias no abdômen.(AU)

Phaeohyphomycosis include cutaneous, subcutaneous, and systemic diseases that affect humans and animals. The diseases are usually associated with immunocompromised hosts and are caused by fungi whose wall cell contains melanin (dematiaceous). This communication describes clinical, histopathological, and microbiological aspects observed in a case of phaeohyphomycosis affecting a 6-year-old male Crioulo horse. Animal showed two cutaneous nodules with about 4-5 cm of diameter located in the lateral abdominal walls (one in the right, the other in the left). Nodules were excised and submitted to the pathological laboratory SPV-UFRGS. Grossly, one of the cutaneous nodules was ulcerated and had, at the cut surface, multiple circumscript whitish areas containing blackish granules. Microscopically, nodules had piogranulomatous ulcerative dermatitis associated with intralesional septate and pigmented hyphae. Mycological culture, performed at the Mycology Laboratory-UFRGS, yielded fungal growth of Curvularia sp. Those findings support the diagnosis of fungal dermatitis by Curvularia sp. Treatment was complete surgical excision of lesions; however, one year after the procedure, recurrence of lesions was observed in the areas close to that where the previous lesions were.(AU)

Effect of cinnamomum zeylanicum blume essential oil on the rowth and morphogenesis of some potentially pathogenic Aspergillus species

Cinnamomum zeylanicum Blume is known for a wide range of medicinal properties. This study aimed to assess the interference of C. zeylanicum essential oil on the growth and morphogenesis of some potentially pathogenic Aspergillus species. The essential oil presented strong antifungal effect causing the growth inhibition of the assayed strains and development of large growth inhibition zones. MIC50 and MIC90 values were 40 and 80 µL/mL, respectively. 80, 40 and 20 µL/mL of the oil strongly inhibited the radial mycelial growth of A. niger, A. flavus and A. fumigatus along 14 days. 80 and 40 µL/mL of the oil caused a 100% inhibition of the fungal spore germination. Main morphological changes observed under light microscopy provided by the essential oil in the fungal strains were decreased conidiation, leakage of cytoplasm, loss of pigmentation and disrupted cell structure indicating fungal wall degeneration. It is concluded that C. zeylanicum essential oil could be known as potential antifungal compound, particularly, to protect against the growth of Aspergillus species.

Cinnamomum zeylanicum Blume é uma planta conhecida por apresentar ampla variedade de propriedades medicinais. Portanto, este estudo teve por objetivo avaliar a interferência do óleo essencial C. zeylanicum sobre o crescimento e morfogênese de algumas espécies de Aspergillus potencialmente patogênicas. O óleo essencial testado apresentou potente efeito antifúngico demonstrado pela visualização de grandes zonas de inibição de crescimento de todas as linhagens testadas. Os valores de CIM50 e de CIM90 foram 40 e 80 µL/mL, respectivamente. Nas concentrações de 80, 40 e 20 µL/mL o óleo demonstrou um potente efeito fumigante, inibindo o crescimento micelial radial de A. niger, A. flavus e A. fumigatus ao longo de 14 dias de exposição. A 80 e 40 µL/mL o óleo essencial promoveu inibição de 100% da germinação de esporos, das três espécies de Aspergillus citadas anteriormente. Além disso, alterações morfológicas no crescimento fúngico foram observadas sob microscopia óptica após exposição ao óleo essencial, como diminuição da conidiação, perda citoplasmática, perda de pigmentação e rompimento da estrutura fúngica (hifa) indicando degeneração da parede celular. Diante do exposto, conclui-se que o óleo essencial de C. zeylanicum poderia ser empregado como potente composto antifúngico, particularmente, prevenindo crescimento de espécies de Aspergillus.

Desempenho zootécnico e inflamação aguda em tilápias do Nilo alimentadas com dieta suplementada com carboquelato de cromo e parede celular de Saccharomyces cerevisiae

A piscicultura intensiva utiliza o sistema de tanques-rede para obter maior produtividade, porém o estresse torna os peixes mais susceptíveis a doenças. O emprego de nutracêuticos visa auxiliar mecanismos de defesa e está se tornando frequente. Assim, este projeto teve por objetivos avaliar a resposta inflamatória e determinar a cinética de seus componentes em tilápias do Nilo, alimentadas com dietas suplementadas com carboquelato de cromo e com parede celular da levedura Saccharomyces cerevisiae, utilizando estas suplementações como moduladoras da reação inflamatória. Portanto, tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus), criadas em sistema de tanques-rede foram distribuídas em cinco tratamentos: Não suplementadas e injetadas com salina 0,65% (T1), não suplementadas e inoculadas com Streptococcus agalactiae inativado (T2), suplementada com parede celular da levedura S. cerevisiae 0,3% e inoculadas com S. agalactiae inativada (T3), suplementada com carboquelato de cromo 18 mg/kg e inoculadas com S. agalactiae inativado (T4) e suplementada com a associação de parede celular da levedura S. cerevisiae 0,3% e carboquelato de cromo 18 mg/kg e inoculadas com S. agalactiae inativado (T5). Após 12, 24 e 48 horas foi colhido e avaliado o exsudato inflamatório da bexiga natatória: quantitativa e qualitativamente quanto às células acumuladas, mensurada a atividade respiratória dos fagócitos presentes no sangue e a concentração sérica de lisozima. Além disso, foi investigada a possível interação do incremento da resposta inflamatória com o desempenho, os níveis de cortisol plasmático e glicemia. Os resultados demonstram que o (T4) incrementou a resposta inflamatória após 12 horas, sendo observado maior acúmulo de linfócitos, trombócitos, macrófagos e granulócitos. Houve redução da glicemia e do cortisol plasmático...

Intensive aquaculture system uses cages to obtain higher productivity, but stress makes fish more susceptible to disease. The use of nutraceuticals intended to assist defense mechanisms and is becoming frequent. This project aimed to evaluate the inflammatory response and determine the kinetics of cellular components in Nile tilapia fed diets supplemented with chromium carboquelate and the cell wall of yeast Saccharomyces cerevisiae, using these supplements as modulators of inflammation. Fish were distributed in a completely randomized split plot. The Nile tilapias were divided into five treatments. Nile tilapia fed supplemented diet and injected with saline 0.65% (T1), supplemented inoculated with inactivated S. agalactiae (T2), supplemented with the cell wall of yeast S. cerevisiae 0.3% and inoculated with inactivated S. agalactiae (T3), supplemented with chromium carboquelate 18 mg / kg and inoculated with inactivated S. agalactiae (T4) and supplemented the association of the yeast cell wall S. cerevisiae 0.3% and chromium carboquelate 18 mg / kg and inoculated with inactivated S. agalactiae (T5). After 12, 24 and 48 hours the inflammatory exudate was collected and evaluated, both quantitatively and qualitatively as to accumulating cells, the respiratory activity of phagocytes in the blood and serum lysozyme were measured. In addition, we investigated the possible interaction of the inflammatory response with growth performance, plasma cortisol levels and blood glucose. Results demonstrate that the (T4) increased inflammatory response after 12 hours and higher accumulation of lymphocytes, thrombocytes, macrophages and granulocytes. There was a reduction of blood glucose and plasma cortisol, because of interaction of chromium with insulin providing more energy facilitating intracellular events that make up the...

Diagnosis of histoplasmosis

Endemic mycoses can be challenging to diagnose and accurate interpretation of laboratory data is important to ensure the most appropriate treatment for the patients. Although the definitive diagnosis of histoplasmosis (HP), one of the most frequent endemic mycoses in the world, is achieved by direct diagnosis performed by micro and/or macroscopic observation of Histoplasma capsulatum (H. capsulatum), serologic evidence of this fungal infection is important since the isolation of the etiologic agents is time-consuming and insensitive. A variety of immunoassays have been used to detect specific antibodies to H. capsulatum. The most applied technique for antibody detection is immunodiffusion with sensitivity between 70 to 100 % and specificity of 100%, depending on the clinical form. The complement fixation (CF) test, a methodology extensively used on the past, is less specific (60 to 90%). Detecting fungal antigens by immunoassays is valuable in immunocompromised individuals where such assays achieve positive predictive values of 96-98%. Most current tests in diagnostic laboratories still utilize unpurified antigenic complexes from either whole fungal cells or their culture filtrates. Emphasis has shifted, however, to clinical immunoassays using highly purified and well-characterized antigens including recombinant antigens. In this paper, we review the current conventional diagnostic tools, such as complement fixation and immunodiffusion, outline the development of novel diagnostic reagents and methods, and discuss their relative merits and disadvantages to the immunodiagnostic of this mycosis.

As micoses endêmicas podem ser um desafio com relação ao diagnóstico e a interpretação acurada dos dados laboratoriais é importante para garantir um tratamento mais apropriado para os pacientes. Embora o diagnóstico definitivo da histoplasmose (HP), uma das micoses endêmicas no mundo, seja determinado pelo exame direto com a observação de micro e macroconídeos do Histoplasma capsulatum (H. capsulatum), evidências sorológicas da infecção fúngica se torna importante uma vez que o isolamento dos agentes etiológicos é um procedimento demorado e com baixa sensibilidade. Uma variedade de imunoensaios tem sido usada para detectar anticorpos específicos contra o H. capsulatum. A técnica mais aplicada para a detecção de anticorpos é a imunodifusão, apresentando uma sensibilidade entre 70 a 100% e especificidade de dependendo da forma clínica. A fixação de complemento (CF), uma metodologia que foi extensivamente usada no passado, apresenta uma menor especificidade (60 to 90%). A detecção de antígenos fúngicos pelos imunoensaios é valiosa para indivíduos imunocomprometidos onde cada ensaio garante valores preditivos positivos variando de 96-98%. A maioria dos testes atual ainda utiliza antígenos complexos não-purificados obtidos de parede celular fúngica ou filtrados de cultura. Contudo, importância tem sido dada a imunoensaios clínicos utilizando antígenos altamente purificados e caracterizados, incluindo antígenos recombinantes. Neste manuscrito, nós revisamos as ferramentas atuais utilizadas no diagnóstico, como fixação de complemento e imunodifusão, sumarizando o desenvolvimento de novas tecnologias, reagentes e métodos, e discutiremos aqui os seus méritos relativos e desvantagens no imunodiagnóstico desta micose.

Fungal cell wall polysaccharides: purification and characterization / Polissacarídeos de parede celular fúngica: purificação e caracterização

The cell wall is a rigid structure essential for the survival of fungi. A knowledge of its composition is therefore useful for the development of novel anti-fungal drugs. In this context, polysaccharides as main components of the fungal cell wall have been the subject of intense scientific study over the years. The information gained from the knowledge of the structure of these macrobiomolecules could therefore be valuable in elucidating the mechanisms of their biosynthesis in the cell walls of pathogenic fungi infecting plants and animals alike. Determination of the chemical structures of these polysaccharides (endo) is preceded by their extraction and purification. The extractions, generally lead to neutral and/ or alkaline soluble biopolymers in groups according to their solubilities. Mixtures of polysaccharides in these extracts can then be purified by a combination of chemical and chromatographic methods. Following purification, the polysaccharides, considered homogeneous, can be characterized structurally using conventional techniques of carbohydrate chemistry, such as hydrolysis, methylation analysis, and FT-IR, 13C- and 1H- NMR spectroscopy. This review surveys the main scientific literature that characterizes polysaccharides constituting the fungal cell wall.

A parede celular é uma estrutura rígida, essencial para a sobrevivência dos fungos, e o conhecimento de sua composição poderá ser útil para o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas. Neste contexto, os polissacarídeos estão entre os seus principais componentes que têm sido alvos de intensa investigação científica. As informações, provenientes do conhecimento da estrutura dessas macromoléculas, poderão ser valiosas para o entendimento dos mecanismos de síntese da parede celular de fungos causadores de patologias, tanto em plantas quanto em animais. A determinação da estrutura química de um endopolissacarídeo deve ser precedida por experimentos de extração e purificação. As extrações, geralmente conduzidas em soluções aquosas neutras e/ou alcalinas, separaram as biomoléculas em grupos, de acordo com suas solubilidades. Os extratos, contendo mistura de polissacarídeos, podem ser purificados pela combinação de métodos químicos e cromatográficos. Após purificação, os polissacarídeos considerados homogêneos são caracterizados estruturalmente com as técnicas convencionais em química de carboidratos tais como hidrólise, metilação, FT-IR e RMN-13C e 1H. Esta revisão tem como proposta efetuar um levantamento das principais investigações científicas conduzidas com o objetivo de caracterizar polissacarídeos da parede celular fúngica.

Fungal cell wall polysaccharides: purification and characterization / Polissacarídeos de parede celular fúngica: purificação e caracterização

The cell wall is a rigid structure essential for the survival of fungi. A knowledge of its composition is therefore useful for the development of novel anti-fungal drugs. In this context, polysaccharides as main components of the fungal cell wall have been the subject of intense scientific study over the years. The information gained from the knowledge of the structure of these macrobiomolecules could therefore be valuable in elucidating the mechanisms of their biosynthesis in the cell walls of pathogenic fungi infecting plants and animals alike. Determination of the chemical structures of these polysaccharides (endo) is preceded by their extraction and purification. The extractions, generally lead to neutral and/ or alkaline soluble biopolymers in groups according to their solubilities. Mixtures of polysaccharides in these extracts can then be purified by a combination of chemical and chromatographic methods. Following purification, the polysaccharides, considered homogeneous, can be characterized structurally using conventional techniques of carbohydrate chemistry, such as hydrolysis, methylation analysis, and FT-IR, 13C- and 1H- NMR spectroscopy. This review surveys the main scientific literature that characterizes polysaccharides constituting the fungal cell wall.

A parede celular é uma estrutura rígida, essencial para a sobrevivência dos fungos, e o conhecimento de sua composição poderá ser útil para o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas. Neste contexto, os polissacarídeos estão entre os seus principais componentes que têm sido alvos de intensa investigação científica. As informações, provenientes do conhecimento da estrutura dessas macromoléculas, poderão ser valiosas para o entendimento dos mecanismos de síntese da parede celular de fungos causadores de patologias, tanto em plantas quanto em animais. A determinação da estrutura química de um endopolissacarídeo deve ser precedida por experimentos de extração e purificação. As extrações, geralmente conduzidas em soluções aquosas neutras e/ou alcalinas, separaram as biomoléculas em grupos, de acordo com suas solubilidades. Os extratos, contendo mistura de polissacarídeos, podem ser purificados pela combinação de métodos químicos e cromatográficos. Após purificação, os polissacarídeos considerados homogêneos são caracterizados estruturalmente com as técnicas convencionais em química de carboidratos tais como hidrólise, metilação, FT-IR e RMN-13C e 1H. Esta revisão tem como proposta efetuar um levantamento das principais investigações científicas conduzidas com o objetivo de caracterizar polissacarídeos da parede celular fúngica.

Feohifomicose cutânea causada por Curvularia sp. em um equino

As feohifomicoses são doenças cutâneas, subcutâneas e sistêmicas que acometem humanos e animais. São causadas por fungos que possuem melanina em sua parede celular (dematiáceos) e estão geralmente associadas com imunocomprometimento do hospedeiro. Este trabalho descreve alterações clínicas e histopatológicas de feohifomicose cutânea em um equino, macho, da raça crioula, de 6 anos de idade. O animal apresentou dois nódulos cutâneos com aproximadamente 4 a 5 cm de diâmetro, nas regiões laterais direita e esquerda do abdômen, que foram removidos cirurgicamente e encaminhados para exame histopatológico. Macroscopicamente, as lesões consistiam em nódulos cutâneos, um ulcerado, apresentando ao corte múltiplas áreas circunscritas e esbranquiçadas contendo em seu interior grânulos enegrecidos. Na histopatologia, as lesões se caracterizavam por dermatite ulcerativa piogranulomatosa com hifas septadas intralesionais apresentando parede pigmentada. No cultivo micológico, observou-se crescimento fúngico de  Curvularia sp. O diagnóstico de dermatite fúngica por Curvularia sp. foi baseado nos achados histológicos associados com o isolamento fúngico. O tratamento se restringiu à retirada cirúrgica completa das lesões; entretanto, um ano após a excisão, novas lesões surgiram nas proximidades das lesões prévias no abdômen.

Feohifomicose cutânea causada por Curvularia sp. em um equino

As feohifomicoses são doenças cutâneas, subcutâneas e sistêmicas que acometem humanos e animais. São causadas por fungos que possuem melanina em sua parede celular (dematiáceos) e estão geralmente associadas com imunocomprometimento do hospedeiro. Este trabalho descreve alterações clínicas e histopatológicas de feohifomicose cutânea em um equino, macho, da raça crioula, de 6 anos de idade. O animal apresentou dois nódulos cutâneos com aproximadamente 4 a 5 cm de diâmetro, nas regiões laterais direita e esquerda do abdômen, que foram removidos cirurgicamente e encaminhados para exame histopatológico. Macroscopicamente, as lesões consistiam em nódulos cutâneos, um ulcerado, apresentando ao corte múltiplas áreas circunscritas e esbranquiçadas contendo em seu interior grânulos enegrecidos. Na histopatologia, as lesões se caracterizavam por dermatite ulcerativa piogranulomatosa com hifas septadas intralesionais apresentando parede pigmentada. No cultivo micológico, observou-se crescimento fúngico de  Curvularia sp. O diagnóstico de dermatite fúngica por Curvularia sp. foi baseado nos achados histológicos associados com o isolamento fúngico. O tratamento se restringiu à retirada cirúrgica completa das lesões; entretanto, um ano após a excisão, novas lesões surgiram nas proximidades das lesões prévias no abdômen.

The potential use of ozone as antifungal and antiaflatoxigenic agent in nuts and its effect on nutritional quality / O potencial uso do ozônio como agente antifúngico e antiaflatoxigênico em castanhas e seu efeito na qualidade nutricional

Ozone gas is considered as a safe antimicrobial agent in food industries. Here, we evaluated the antifungal and antiaflatoxigenic activities of ozone against fungal contamination in nuts. The most predominant fungal genera in nuts were Aspergillus, Penicillium, Fusarium, and Rhizopus. Ozone (4 ppm) significantly reduced the fungal sporulation of A. flavus and their aflatoxin production. Interestingly, ozone treatment of nuts reduced the total fungal count and increased aflatoxins degradation by approximately 95% and 85%, respectively. Ozone displayed high efficiency to increase the permeability of cell membrane and injury of cell wall of fungi. Increasing the exposure time of ozone in nuts up to 180 minutes showed to reduce the total lipid, carbohydrates, and protein by around 41.2%, 42.7% and 38.4% respectively, in pistachio, almond and peanuts. In conclusion, ozonation is a suitable decontaminating approach for reducing the microbial load in nuts, when used with suitable exposure time.

O gás ozônio é considerado um agente antimicrobiano seguro em indústrias alimentícias. Aqui, avaliamos as atividades antifúngicas e antiaflatoxigênicas do ozônio contra a contaminação fúngica em nozes. Os gêneros fúngicos mais predominantes em nozes foram Aspergillus, Penicillium, Fusarium e Rhizopus. O ozônio (4 ppm) reduziu significativamente a esporulação fúngica de A. flavus e sua produção de aflatoxinas. Curiosamente, o tratamento de nozes com ozônio reduziu a contagem total de fungos e aumentou a degradação de aflatoxinas em aproximadamente 95% e 85%, respectivamente. O ozônio apresentou alta eficiência para aumentar a permeabilidade da membrana celular e a lesão da parede celular dos fungos. O aumento do tempo de exposição do ozônio em nozes em até 180 minutos levou à redução do total de lipídios, carboidratos e proteínas em 41,2%, 42,7% e 38,4%, respectivamente, em pistache, amêndoa e amendoim. Em conclusão, a ozonização é uma abordagem de descontaminação adequada para reduzir a carga microbiana em nozes, quando usada com tempo de exposição adequado.

Antifungal activity of 2-chloro-N-phenylacetamide: a new molecule with fungicidal and antibiofilm activity against fluconazole-resistant Candida spp

Abstract In the current context of emerging drug-resistant fungal pathogens such as Candida albicans and Candida parapsilosis, discovery of new antifungal agents is an urgent matter. This research aimed to evaluate the antifungal potential of 2-chloro-N-phenylacetamide against fluconazole-resistant clinical strains of C. albicans and C. parapsilosis. The antifungal activity of 2-chloro-N-phenylacetamide was evaluated in vitro by the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum fungicidal concentration (MFC), inhibition of biofilm formation and its rupture, sorbitol and ergosterol assays, and association between this molecule and common antifungal drugs, amphotericin B and fluconazole. The test product inhibited all strains of C. albicans and C. parapsilosis, with a MIC ranging from 128 to 256 µg.mL-1, and a MFC of 512-1,024 µg.mL-1. It also inhibited up to 92% of biofilm formation and rupture of up to 87% of preformed biofilm. 2-chloro-N-phenylacetamide did not promote antifungal activity through binding to cellular membrane ergosterol nor it damages the fungal cell wall. Antagonism was observed when combining this substance with amphotericin B and fluconazole. The substance exhibited significant antifungal activity by inhibiting both planktonic cells and biofilm of fluconazole-resistant strains. Its combination with other antifungals should be avoided and its mechanism of action remains to be established.

Resumo No atual contexto de patógenos fúngicos resistentes emergentes tais como Candida albicans e Candida parapsilosis, a descoberta de novos agentes antifúngicos é uma questão urgente. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar o potencial antifúngico da 2-cloro-N-fenilacetamida contra cepas clínicas de C. albicans e C. parapsilosis resistentes a fluconazol. A atividade antifúngica da substância foi avaliada in vitro através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), concentração fungicida mínima (CFM), ruptura e inibição da formação de biofilme, ensaios de sorbitol e ergosterol, e associação entre esta molécula e antifúngicos comuns, anfotericina B e fluconazol. O produto teste inibiu todas as cepas de C. albicans e C. parapsilosis, com uma CIM variando de 128 a 256 µg.mL-1, e uma CFM de 512-1,024 µg.mL-1. Também inibiu até 92% da formação de biofilme e causou a ruptura de até 87% de biofilme pré-formado. A 2-cloro-N-fenilacetamida não promoveu atividade antifúngica pela ligação ao ergosterol da membrana celular fúngica, tampouco danificou a parede celular. Antagonismo foi observado ao combinar esta substância com anfotericina B e fluconazol. A substância exibiu atividade antifúngica significativa ao inibir tanto as células planctônicas quanto o biofilme das cepas resistentes ao fluconazol. Sua combinação com outros antifúngicos deve ser evitada e seu mecanismo de ação deve ser estabelecido.

Antagonism of Trichoderma species on Cladosporium herbarum and their enzimatic characterization

The verrucose caused by Cladosporium herbarum reduces production and quality of Passion fruit (Passiflora edulis Sims.), a largely consumed tropical fruit. This work aimed to investigate the antagonism of Trichoderma species (T. polysporum, T. koningii, T. viride and T. harzianum) against Cladosporium herbarum, and to study the production of extracellular hydrolytic enzymes by the pathogen and the antagonists. The results showed considerable antagonistic potential for the biocontrol of C. herbarum isolates by all Trichoderma species, except T. koningii. The most distinguished effect was observed for T. polysporum. In relation to the pattern of esterase obtained by electrophoresis in poliacrylamyde gel, the major activity presented by the isolates was observed after five days of incubation. The C. herbarum isolates produced extracellular enzymes, lipase, pectinase, cellulase, and protease, all possibly related to the infection process. Amylase excretion, not known to be associated with phytopathogens, was detected in Trichoderma species, but not in C. herbarum. In addition to amylase, all Trichoderma species tested produced also extracellular cellulase and pectinase, except T. koningii in relation to the latter enzyme. The demonstration of various esterase isoenzymes in zymograms of the Trichoderma species and C. herbarum isolates was markedly improved by washing the mycelia with detergents or EDTA. This fact suggested that a major fraction of extracelular enzymes may remain attached to outside fungal cell wall after being excreted.

O maracujá (Passiflora edulis Sims.), um fruto tropical amplamente consumido, tem sua produção e a qualidade dos seus frutos reduzidos pela verrugose causada por Cladosporium herbarum. Este trabalho objetivou investigar o antagonismo de espécies de Trichoderma (T. polysporum, T.koningii, T. viride e T. harzianum) contra C. herbarum, e estudar a produção de enzimas hidrolíticas extracelulares pelo fitopatógeno e antagonistas. Os resultados mostraram considerável potencial antagônico para o biocontrole dos isolados de C. herbarum por todas as espécies de Trichoderma, exceto T. koningii. O efeito mais promissor foi observado para T. polysporum. Em relação ao padrão de esterase obtido por eletroforese em gel de poliacrilamida, a maior atividade apresentada pelos isolados foi observada cinco dias após a incubação. Os isolados de C. herbarum produziram enzimas extracelulares, lipase, pectinase, cellulase e protease, todas possivelmente relacionadas ao processo de infecção do hospedeiro. A excreção de amilase que parece não estar associada com fitopatógenos foi detectada nas espécies de Trichoderma, mas não em C. herbarum. Além disso, todas as espécies de Trichoderma testadas produziram também celulase e pectinase, exceto T. koningii com relação a esta última enzima. A demonstração de várias isoesterases no zimograma das espécies de Trichoderma e isolados de C. herbarum, foi notavelmente melhorada através da lavagem do micélio com detergentes ou EDTA. Este fato sugere que uma grande fração de enzimas extracelulares pode permanecer presa externamente na parede celular fúngica após excreção.

Antifungal activity of 2-chloro-N-phenylacetamide: a new molecule with fungicidal and antibiofilm activity against fluconazole-resistant Candida spp / Atividade antifúngica de 2-cloro-N-fenilacetamida: uma nova molécula com atividade fungicida e anti-biofilme contra Candida spp. resistentes a fluconazol

In the current context of emerging drug-resistant fungal pathogens such as Candida albicans and Candida parapsilosis, discovery of new antifungal agents is an urgent matter. This research aimed to evaluate the antifungal potential of 2-chloro-N-phenylacetamide against fluconazole-resistant clinical strains of C. albicans and C. parapsilosis. The antifungal activity of 2-chloro-N-phenylacetamide was evaluated in vitro by the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum fungicidal concentration (MFC), inhibition of biofilm formation and its rupture, sorbitol and ergosterol assays, and association between this molecule and common antifungal drugs, amphotericin B and fluconazole. The test product inhibited all strains of C. albicans and C. parapsilosis, with a MIC ranging from 128 to 256 µg.mL-1, and a MFC of 512-1,024 µg.mL-1. It also inhibited up to 92% of biofilm formation and rupture of up to 87% of preformed biofilm. 2-chloro-N-phenylacetamide did not promote antifungal activity through binding to cellular membrane ergosterol nor it damages the fungal cell wall. Antagonism was observed when combining this substance with amphotericin B and fluconazole. The substance exhibited significant antifungal activity by inhibiting both planktonic cells and biofilm of fluconazole-resistant strains. Its combination with other antifungals should be avoided and its mechanism of action remains to be established.

No atual contexto de patógenos fúngicos resistentes emergentes tais como Candida albicans e Candida parapsilosis, a descoberta de novos agentes antifúngicos é uma questão urgente. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar o potencial antifúngico da 2-cloro-N-fenilacetamida contra cepas clínicas de C. albicans e C. parapsilosis resistentes a fluconazol. A atividade antifúngica da substância foi avaliada in vitro através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), concentração fungicida mínima (CFM), ruptura e inibição da formação de biofilme, ensaios de sorbitol e ergosterol, e associação entre esta molécula e antifúngicos comuns, anfotericina B e fluconazol. O produto teste inibiu todas as cepas de C. albicans e C. parapsilosis, com uma CIM variando de 128 a 256 µg.mL-1, e uma CFM de 512-1,024 µg.mL-1. Também inibiu até 92% da formação de biofilme e causou a ruptura de até 87% de biofilme pré-formado. A 2-cloro-N-fenilacetamida não promoveu atividade antifúngica pela ligação ao ergosterol da membrana celular fúngica, tampouco danificou a parede celular. Antagonismo foi observado ao combinar esta substância com anfotericina B e fluconazol. A substância exibiu atividade antifúngica significativa ao inibir tanto as células planctônicas quanto o biofilme das cepas resistentes ao fluconazol. Sua combinação com outros antifúngicos deve ser evitada e seu mecanismo de ação deve ser estabelecido.

Estudo da virulência entre isolados de sporothrix schenckii

A esporotricose é uma micose subcutânea causada pelo Sporothrix schenckii que acomete o homem e uma grande variedade de animais. A melanina é considerada um importante fator de virulência e proteção da célula fúngica. O trabalho objetivou verificar: possíveis diferenças de virulência entre inóculos das fases leveduriforme e filamentosa; reações em diferentes sítios de inoculação; ocorrência da transmissão da esporotricose entre camundongos; a virulência de dois isolados clínicos através de inoculação experimental; presença de melanina nos conídios; a indução de mutantes albinos associada à sobrevivência, viabilidade, reversão para forma pigmentada, conversão para fase leveduriforme e fotorreparação das colônias albinas; e, finalmente, a virulência das colônias pigmentadas e albinas de S. schenckii. Experimento 1. Inóculos obtidos das fases filamentosa (M) e leveduriforme (Y), foram administrados por via subcutânea no coxim plantar (CP) e nas regiões das articulações escapuloumeral e coxofemural dos camundongos, mantidos em contato direto com outros não inoculados. Os inóculos Y e M induziram lesões mais evidentes e duradouras no CP. Os camundongos não inoculados permaneceram aparentemente saudáveis durante as nove semanas de observação. Experimento 2. Inóculos M, isolados de casos de esporotricose cutânea (CUT) e sistêmica (SYS) felina, foram administrados no CP de camundongos. Os grupos CUT e SYS sempre diferiram do grupo controle. A evolução clínica da esporotricose foi evidente no grupo CUT, da segunda até a quinta semana (p<0,01), com diâmetro médio do CP maior na quarta semana (p<0,01), assim como o desenvolvimento de multiplas lesões cutâneas (p<0,01). Experimento 3. Isolados obtidos de casos clínicos de esporotricose, foram cultivados em YEPD, PDA e em PDA acrescido de triciclazol. Para a obtenção de conídios mutantes albinos as placas semeadas foram expostas a 300ergs de radiação UV/mm2, e incubadas por 10 dias, para estudo da ultraestrutura, sobrevivência, viabilidade e fotorreparação. Os conídios albinos foram repicados em YEPD para se obter reversão à forma pigmentada e, em BHI, para conversão à fase leveduriforme. Os isolados de S. schenckii produziram melanina; os conídios albinos apresentaram 66% de sobrevivência e 96% de viabilidade; nos conídios pigmentados foram observados grânulos de melanina na parede celular e nos albinos ausência destes; todos os albinos reverteram à forma pigmentada, converteram à fase de levedura e ocorreu fotorreparação. Experimento 4. Os camundongos foram inoculados no CP com conídios pigmentados ou albinos de dois isolados de S. schenckii divididos nos grupos: Mel+A, Mel-A, Mel+B e Mel-B. Os albinos (especialmente Mel-B) provocaram intensa reação inflamatória no CP (p<0,01), enquanto que os pigmentados (principalmente Mel+A) a presença de múltiplas lesões cutâneas (p<0,01). Na análise histológica houve formação de granulomas com células fúngicas na área central da lesão. Os resultados obtidos permitem concluir que: não ocorreram diferenças entre inóculos obtidos das fases de levedura e filamentosa; o coxim plantar foi considerado, entre os locais testados, o sítio de inoculação preferencial no modelo murino; o contato de camundongos sadios com os infectados e com materiais contaminados não foi suficiente para causar esporotricose durante o período observado; o isolado clínico CUT de S. schenckii provocou uma evolução clínica mais intensa da esporotricose cutânea do que o isolado SYS; os c