Use of antioxidants and time of cold storage: effects over viability parameters and enzymatic levels in semen of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792)

Abstract The cold storage of milt implies potentials alterations in its quality because the storage generates as main process, free radicals that produce spermatozoa membrane lipids damage with the consequent motility and fertilising capacity disruptions. To decrease the damage generated by free radicals the cells have antioxidant defences (proteins, enzymes, and low molecular weight substances). The objective of the present study evaluated the time storage effect and different antioxidants prepared in spermatic diluents on sperm viability of O. mykiss milt stored at 4°C. The two-way ANOVA denoted that the time storage and antioxidant influence have significant effects separated or combined on viability parameters (sperm motility and viability, proteins concentrations and superoxide dismutase enzymatic activity in seminal plasma). In contrast, only the storage time affected the fertilising capacity and catalase enzymatic activity in seminal plasma. The resulting analysis can conclude that the antioxidant presence improves the viability of cold stored milt, especially the transport conditions and the antioxidants allow the fecundity despite motility decrease.

Resumo O armazenamento a frio de leite implica potenciais alterações em sua qualidade, pois gera como processo principal radicais livres que provocam danos aos lipídios da membrana dos espermatozoides, com as consequentes alterações na motilidade e na capacidade de fertilização. Para diminuir os danos causados pelos radicais livres, as células têm defesas antioxidantes (proteínas, enzimas e substâncias de baixo peso molecular). O presente estudo avaliou o efeito do tempo de armazenamento e diferentes antioxidantes preparados em diluentes espermáticos no armazenamento de viabilidade de O. mykiss milt a 4°C. A ANOVA de duas vias denotou que o armazenamento no tempo e a influência antioxidante têm efeitos significativos separados ou combinados nos parâmetros de viabilidade (motilidade espermática, viabilidade espermática, concentrações de proteínas e atividade enzimática da superóxido dismutase no plasma seminal), enquanto apenas o tempo de armazenamento afetou a capacidade de fertilização e atividade enzimática da catalase no plasma seminal. A análise resultante pode concluir que a presença de antioxidante melhora a viabilidade do leite frio, especialmente as condições de transporte, e os antioxidantes permitem a fecundidade apesar da diminuição da motilidade.

Use of antioxidants and time of cold storage: effects over viability parameters and enzymatic levels in semen of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792) / Uso de antioxidantes e tempo de armazenamento a frio: efeitos sobre parâmetros de viabilidade e níveis enzimáticos no sêmen da truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792)

Abstract The cold storage of milt implies potentials alterations in its quality because the storage generates as main process, free radicals that produce spermatozoa membrane lipids damage with the consequent motility and fertilising capacity disruptions. To decrease the damage generated by free radicals the cells have antioxidant defences (proteins, enzymes, and low molecular weight substances). The objective of the present study evaluated the time storage effect and different antioxidants prepared in spermatic diluents on sperm viability of O. mykiss milt stored at 4°C. The two-way ANOVA denoted that the time storage and antioxidant influence have significant effects separated or combined on viability parameters (sperm motility and viability, proteins concentrations and superoxide dismutase enzymatic activity in seminal plasma). In contrast, only the storage time affected the fertilising capacity and catalase enzymatic activity in seminal plasma. The resulting analysis can conclude that the antioxidant presence improves the viability of cold stored milt, especially the transport conditions and the antioxidants allow the fecundity despite motility decrease.

Resumo O armazenamento a frio de leite implica potenciais alterações em sua qualidade, pois gera como processo principal radicais livres que provocam danos aos lipídios da membrana dos espermatozoides, com as consequentes alterações na motilidade e na capacidade de fertilização. Para diminuir os danos causados pelos radicais livres, as células têm defesas antioxidantes (proteínas, enzimas e substâncias de baixo peso molecular). O presente estudo avaliou o efeito do tempo de armazenamento e diferentes antioxidantes preparados em diluentes espermáticos no armazenamento de viabilidade de O. mykiss milt a 4°C. A ANOVA de duas vias denotou que o armazenamento no tempo e a influência antioxidante têm efeitos significativos separados ou combinados nos parâmetros de viabilidade (motilidade espermática, viabilidade espermática, concentrações de proteínas e atividade enzimática da superóxido dismutase no plasma seminal), enquanto apenas o tempo de armazenamento afetou a capacidade de fertilização e atividade enzimática da catalase no plasma seminal. A análise resultante pode concluir que a presença de antioxidante melhora a viabilidade do leite frio, especialmente as condições de transporte, e os antioxidantes permitem a fecundidade apesar da diminuição da motilidade.

Eficiência de três diluidores inespecíficos na refrigeração do sêmen de coelho (Oryctolagus cuniculus f. domesticus) / Efficiency of three unspecific diluents in refrigeration of rabbit (Oryctolagus cuniculus f. domesticus) semen / Eficiencia de tres diluyentes inespecíficos en la refrigeración de semen de conejo (Oryctolagus cuniculus f. domesticus)

Objetivou-se com este trabalho avaliar a viabilidade seminal de coelhos após refrigeração a 5°C utilizando três diluentes comerciais, indicados para refrigeração de sêmen de outras espécies monogástricas. Foram realizadas dez colheitas de sêmen de cada reprodutor. Os ejaculados de cada coelho eram misturados, obtendo-se um pool de sêmen. Em seguida, o pool heterospérmico foi dividido em três tratamentos, de acordo com o diluente utilizado: BotuDogⓇ (cães); BotuSemen® (equinos); e Beltsville Thawing Solution - BTS (suínos). As amostras foram avaliadas quanto aos parâmetros macroscópicos, microscópicos e funcionais em quatro momentos: sêmen fresco (0 h) e refrigerado (16, 24 e 48 h). Os valores médios de motilidade, vigor e defeitos totais do sêmen fresco foram de 86,0%, 3,05 e 11,5%, respectivamente. Após o início do resfriamento, observou-se comportamento linear decrescente para a motilidade e vigor espermático do sêmen em função do tempo, diferindo (P < 0,05) entre os tratamentos. Destaca-se que o tratamento diluído em BTS apresentou redução na manutenção dos parâmetros avaliados de forma mais pronunciada (P < 0.05) ao longo do tempo, apresentando os menores valores para motilidade e vigor espermático dentro de cada tempo avaliado: 16h [20,6 ± 7,28 e 0,75 (0,375 1,5)], 24h [12,0 ± 6,80 e 0 (0 - 1,0)] e 48h [3,0 ± 2,13 e 0 (0 - 0,125)]. Após 48 h de resfriamento, o BotuDogⓇ foi o que apresentou maior valor para motilidade espermática (71,0 ± 2,08) e, juntamente, com o BotuSemenⓇ apresentaram maior valor para vigor espermático (2,5). De acordo com os dados obtidos os diluentes BotuDogⓇ e BotuSemenⓇ mostraram-se eficientes em manter parâmetros espermáticos adequados, apresentando boa viabilidade espermática em até 48h pós refrigeração a 5°C. Foram obtidos, resultados inéditos quanto a parâmetros espermáticos do sêmen de coelho refrigerado que podem ser utilizados como valores de referência para o manejo reprodutivo e processamento do semen desses animais, visto a inexistênca dessas recomendações técnicas.

The objective of this work was to evaluate the seminal viability of rabbits after refrigeration at 5°C using three commercial diluents, indicated for refrigeration of semen from other monogastric species. Ten semen collections were performed from each breeder. The ejaculates of each rabbit were mixed, obtaining a pool of semen. Then, the heterospermic pool was divided into three treatments, according to the diluent used: BotuDog (dogs); BotuSemenⓇ (horses); and Beltsville Thawing Solution - BTS (pigs). The samples were evaluated for macroscopic, microscopic, and functional parameters in four moments: fresh (0 h) and refrigerated (16, 24, and 48 h) semen. The average values of motility, vigor, and total defects of fresh semen were 86.0%, 3.05 and 11.5%, respectively. After the beginning of cooling, a decreasing linear behavior was observed for motility and sperm vigor of semen as a function of time, differing (P < 0.05) between treatments. It is noteworthy that the treatment diluted in BTS® showed a more pronounced reduction in the maintenance of the evaluated parameters (P < 0.05) over time, with the lowest values for sperm motility and vigor within each evaluated time: 16h [20.6 +7.28 and 0.75 (0.375 - 1.5)], 24h [12.0± 6.80 and 0 (0 - 1.0)] and 48h [3.0±2.13 and 0 (0 - 0.125)]. After 48 h of cooling, BotuDog presented the highest value for sperm motility (71.0 ± 2.08) and, together with BotuSemenⓇ, presented the highest value for sperm vigor (2.5). According to the data obtained, BotuDog and BotuSemenⓇ diluents were efficient in maintaining adequate sperm parameters, showing good sperm viability in up to 48 hours after refrigeration at 5°C. Through this work, unpublished results were obtained regarding spermatic parameters of refrigerated rabbit semen that can be used as reference values for reproductive management and semen processing of these animals, given the lack of these technical recommendations.

El objetivo de este trabajo fue evaluar la viabilidad seminal de conejos después de refrigeración a 5°C utilizando tres diluyentes comerciales, indicados para la refrigeración de semen de otras especies monogástricas. Se realizaron diez colectas de semen de cada reproductora. Se mezclaron los eyaculados de cada conejo, obteniendo un pool de semen. Luego, el pool heterospérmico se dividió en tres tratamientos, según el diluyente utilizado: BotuDogⓇ (perros); BotuSemenⓇ (caballos); y Beltsville Thawing Solution - BTS® (cerdos). Las muestras fueron evaluadas para parámetros macroscópicos, microscópicos y funcionales en cuatro momentos: semen fresco (0 h) y refrigerado (16, 24 y 48 h). Los valores promedio de motilidad, vigor y defectos totales del semen fresco fueron 86,0%, 3,05 y 11,5%, respectivamente. Después del inicio del enfriamiento, se observó un comportamiento lineal decreciente para la motilidad y el vigor espermático del semen en función del tiempo, difiriendo (P < 0.05) entre tratamientos. Cabe destacar que el tratamiento diluido en BTS® mostró una reducción más pronunciada en el mantenimiento de los parámetros evaluados (P<0,05) a lo largo del tiempo, con los valores más bajos de motilidad espermática y vigor dentro de cada tiempo evaluado: 16h [20,6 ± 7,28 y 0,75 (0,375 -1.5)], 24h [12,0 ± 6,80 y 0 (0 - 1,0)] y 48h [3,0±2,13 y 0 (0 - 0,125)]. Después de 48 h de enfriamiento, BotuDogⓇ presentó el valor más alto de motilidad espermática (71,0 +2,08) y, junto con BotuSemenⓇ, presentó el valor más alto de vigor espermático (2,5). De acuerdo con los datos obtenidos, los diluyentes BotuDogⓇ y BotuSemenⓇ fueron eficientes en mantener parámetros espermáticos adecuados, mostrando buena viabilidad espermática hasta 48 horas después de la refrigeración a 5°C. A través de este trabajo se obtuvieron resultados inéditos respecto a parámetros espermáticos de semen de conejo refrigerado que pueden ser utilizados como valores de referencia para el manejo reproductivo y procesamiento de semen de estos animales, dada la falta de estas recomendaciones técnicas.

Use of antioxidants and time of cold storage: effects over viability parameters and enzymatic levels in semen of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792) / Uso de antioxidantes e tempo de armazenamento a frio: efeitos sobre parâmetros de viabilidade e níveis enzimáticos no sêmen da truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792)

The cold storage of milt implies potentials alterations in its quality because the storage generates as main process, free radicals that produce spermatozoa membrane lipids damage with the consequent motility and fertilising capacity disruptions. To decrease the damage generated by free radicals the cells have antioxidant defences (proteins, enzymes, and low molecular weight substances). The objective of the present study evaluated the time storage effect and different antioxidants prepared in spermatic diluents on sperm viability of O. mykiss milt stored at 4°C. The two-way ANOVA denoted that the time storage and antioxidant influence have significant effects separated or combined on viability parameters (sperm motility and viability, proteins concentrations and superoxide dismutase enzymatic activity in seminal plasma). In contrast, only the storage time affected the fertilising capacity and catalase enzymatic activity in seminal plasma. The resulting analysis can conclude that the antioxidant presence improves the viability of cold stored milt, especially the transport conditions and the antioxidants allow the fecundity despite motility decrease.

O armazenamento a frio de leite implica potenciais alterações em sua qualidade, pois gera como processo principal radicais livres que provocam danos aos lipídios da membrana dos espermatozoides, com as consequentes alterações na motilidade e na capacidade de fertilização. Para diminuir os danos causados pelos radicais livres, as células têm defesas antioxidantes (proteínas, enzimas e substâncias de baixo peso molecular). O presente estudo avaliou o efeito do tempo de armazenamento e diferentes antioxidantes preparados em diluentes espermáticos no armazenamento de viabilidade de O. mykiss milt a 4°C. A ANOVA de duas vias denotou que o armazenamento no tempo e a influência antioxidante têm efeitos significativos separados ou combinados nos parâmetros de viabilidade (motilidade espermática, viabilidade espermática, concentrações de proteínas e atividade enzimática da superóxido dismutase no plasma seminal), enquanto apenas o tempo de armazenamento afetou a capacidade de fertilização e atividade enzimática da catalase no plasma seminal. A análise resultante pode concluir que a presença de antioxidante melhora a viabilidade do leite frio, especialmente as condições de transporte, e os antioxidantes permitem a fecundidade apesar da diminuição da motilidade.

Use of antioxidants and time of cold storage: effects over viability parameters and enzymatic levels in semen of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792) / Uso de antioxidantes e tempo de armazenamento a frio: efeitos sobre parâmetros de viabilidade e níveis enzimáticos no sêmen da truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792)

The cold storage of milt implies potentials alterations in its quality because the storage generates as main process, free radicals that produce spermatozoa membrane lipids damage with the consequent motility and fertilising capacity disruptions. To decrease the damage generated by free radicals the cells have antioxidant defences (proteins, enzymes, and low molecular weight substances). The objective of the present study evaluated the time storage effect and different antioxidants prepared in spermatic diluents on sperm viability of O. mykiss milt stored at 4°C. The two-way ANOVA denoted that the time storage and antioxidant influence have significant effects separated or combined on viability parameters (sperm motility and viability, proteins concentrations and superoxide dismutase enzymatic activity in seminal plasma). In contrast, only the storage time affected the fertilising capacity and catalase enzymatic activity in seminal plasma. The resulting analysis can conclude that the antioxidant presence improves the viability of cold stored milt, especially the transport conditions and the antioxidants allow the fecundity despite motility decrease.(AU)

O armazenamento a frio de leite implica potenciais alterações em sua qualidade, pois gera como processo principal radicais livres que provocam danos aos lipídios da membrana dos espermatozoides, com as consequentes alterações na motilidade e na capacidade de fertilização. Para diminuir os danos causados pelos radicais livres, as células têm defesas antioxidantes (proteínas, enzimas e substâncias de baixo peso molecular). O presente estudo avaliou o efeito do tempo de armazenamento e diferentes antioxidantes preparados em diluentes espermáticos no armazenamento de viabilidade de O. mykiss milt a 4°C. A ANOVA de duas vias denotou que o armazenamento no tempo e a influência antioxidante têm efeitos significativos separados ou combinados nos parâmetros de viabilidade (motilidade espermática, viabilidade espermática, concentrações de proteínas e atividade enzimática da superóxido dismutase no plasma seminal), enquanto apenas o tempo de armazenamento afetou a capacidade de fertilização e atividade enzimática da catalase no plasma seminal. A análise resultante pode concluir que a presença de antioxidante melhora a viabilidade do leite frio, especialmente as condições de transporte, e os antioxidantes permitem a fecundidade apesar da diminuição da motilidade.(AU)

Supplementation of two sources of selenium at different levels in diet of boars and this effect on the seminal quality / Suplementação de duas fontes de selênio em diferentes níveis na dieta de cachaços e seu efeito sobre a qualidade seminal

The spermatic membrane is rich in polyunsaturated fatty acids, which makes it sensitive to the action of reative species of oxygen, which can damage the seminal quality of the scraps. The purpose of this study was to evaluate the effect of the supplementation of two selenium sources at different doses. Third five scraps were allocated in four groups: (INOR30) 0.30 ppm sodium selenite; (COMP30) 0.30 ppm selenium metal-amino acid; (MIXED15+15) 0.15 ppm sodium selenite + 0.15 ppm selenium metal-amino acid and (COMP15) 0.15 ppm selenium metal-amino acid. The ejaculates of the scraps were evaluated over 22 weeks, resulting in 210 samples evaluated for volume, motility, pH, presence of agglutination and morphological changes, and 140 samples for spermatic concentration. The data was analyzed with repeated measures in time in a mixed model with type of selenium supplementation, periods of evaluation (one period of two weeks + five periods of four weeks) and their interactions as fixed effects, and animal and the worker that collected the ejaculates as random effects. Results showed no difference in selenium supplementation with the sources and doses used. In this way, it was possible to verify that the metal amino acid of selenium at the dose of 0.15 ppm promotes the same effect as the diets formulated with 0.30 ppm of sodium selenite.(AU)

A membrana espermática é rica em ácidos graxos poliinsaturados, o que a torna sensível à ação de espécies reativas de oxigênio, que podem prejudicar a qualidade seminal dos cachaços. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da suplementação de duas fontes de selênio em diferentes doses. Trinta e cinco cachaços foram distribuídos em quatro grupos: (INOR30) 0,30 ppm de selenito de sódio; (COMP30) 0,30 ppm de metal-aminoácido de selênio; (MISTO15+15) 0,15 ppm de selenito de sódio + 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio e (COMP15) 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio. Os ejaculados dos cachaços foram avaliados durante 22 semanas, resultando em 210 amostras avaliadas para volume, motilidade, pH, presença de aglutinação e alterações morfológicas, e 140 amostras para concentração espermática. Os dados foram analisados com medidas repetidas no tempo em modelo misto, em que o tipo de suplementação de selênio, os períodos de avaliação (um período de duas semanas + cinco períodos de quatro semanas) e suas interações foram os efeitos fixos, e o animal e o funcionário que coletou os ejaculados foram os efeitos aleatórios. Os resultados obtidos demonstraram não haver diferença na suplementação de selênio com as fontes e doses utilizadas. Com isso, foi possível verificar que o metal-aminoácido de selênio na dose de 0,15 ppm promove o mesmo efeito das dietas formuladas com 0,30 ppm de selenito de sódio.(AU)

Paraoxonase 1 activity in the sperm-rich portion of boar ejaculates is positively associated with sperm quality

Associations of the activity of the paraoxonase 1 (PON1) enzyme with boar sperm quality still needs to be characterized, since boar ejaculates present distinct portions with differences in sperm concentration and quality. This study evaluated PON1 activity in the serum, in the distinct portions of boar ejaculates and estimated correlations with sperm quality parameters. Ejaculates and blood samples were collected from six boars for three weeks (two per week per boar; n = 36). Serum and post-spermatic portion PON1 activities were positively correlated (P = 0.01) but were both uncorrelated with the PON1 activity in the sperm-rich portion and in the whole ejaculate (P > 0.05). Differences in PON1 activity among boars were only observed in the sperm-rich portion of the ejaculate (P < 0.05). The PON1 activity in the serum and in the post-spermatic portion was generally negatively correlated with parameters of spermatozoa kinetics (P < 0.05). In the sperm-rich portion, PON1 activity was positively correlated with sperm concentration (P < 0.0001), curvilinear distance and velocity (both P < 0.05) and DNA integrity (P < 0.05), but negatively correlated with straightness and linearity (P < 0.05). Thus, boar ejaculates with increased PON1 activity in the sperm-rich portion may present increased concentration and spermatozoa with acceptable curvilinear velocity and distance and DNA integrity, which suggests that PON1 activity may be a biomarker for potential fertility.(AU)

Incubação e conservação: efeito sobre a motilidade espermática do sêmen suíno / Incubation and conservation: effect on sperm motility of swine semen

Visando aumentar a resistência espermática ao abaixamento de temperatura, foram utilizados ejaculados de três reprodutores coletados pela técnica da mão enluvada. Após a coleta, uma alíquota de sêmen foi diluída em BTS e distribuída, em partes iguais, em cinco tratamentos que diferiam entre si quanto às temperaturas (37 e 25 °C) e aos tempos de equilíbrio (6 e 24 horas) antes da conservação a 17 °C por sete dias. Os tratamentos foram: T1: sêmen sem nenhum tempo ou temperatura de equilíbrio; T2 e T3: sêmen incubado a 37 °C por 6 e 24 horas., respectivamente; T4 e T5: sêmen incubado a 25 °C por 6 e 24 horas., respectivamente. O sêmen foi avaliado nos dias D1 a D4 e no D7 quanto ao vigor e motilidade espermática aos cinco minutos, e duas horas após reaquecimento a 37 °C. O sêmen incubado a 37 °C/24 horas apresentou valores de vigor e motilidade muito inferiores aos dos demais tratamentos (p<0,05), enquanto o sêmen submetido à temperatura de equilíbrio de 25 °C por 6 horas anteriores à diluição destacou-se ao conservar a motilidade espermática após duas horas de incubação a 37 °C (p<0,05). Concluiu-se que as diferentes temperaturas e tempos de equilíbrio utilizadas, influenciaram na conservação do sêmen. A temperatura de incubação mais elevada (37 °C) na pré-diluição, por período prolongado (24 horas), reduziu a resistência espermática ao abaixamento da temperatura. Já, a combinação temperatura/tempo de 25 °C/6 horas, favoreceu a manutenção da motilidade espermática em teste de termorresistência.

Aiming to increase the spermatic resistance to lowering of temperature, ejaculates from three boars collected through the technique of the glove hand were used. After collection, an aliquot of semen was diluted in the BTS and distributed, in equal parts, in 5 treatments that differed in terms of temperatures (37 and 25 °C) and balance period (6 and 24 hours) before conservation at 17 °C for 7 days. The treatments were: T1: semen not subjected to any time or equilibrium temperature; T2 and T3: semen incubated at 37 °C for 6 and 24 hours, respectively; T4 and T5: to semen incubated at 25 °C for 6 and 24 hours, respectively. The semen was evaluated on days D1 to D4 and on D7 for vigor and sperm motility at five minutes, and two hours after rewarming at 37 °C. The semen incubated at 37 °C/24 hours presented values of vigor and motility much lower than those of the other treatments (p<0.05, while the semen submitted to the equilibrium temperature of 25 °C for 6 hours prior to dilution stood out by conserving sperm motility after 2 hours of incubation at 37 °C (p<0.05). In conclusion, the different temperatures and times of equilibrium used influenced the semen conservation, in which a higher pre-dilution incubation temperature (37 °C) for a prolonged period (24 hours) reduced the sperm resistance to a lowering of temperature, while the combination 25 °C/6 hours favored the maintenance of sperm motility in a thermoresistance test.

Estudo preliminar da morfometria da cabeça espermática do macaco-de-cheiro de vida livre / Preliminary study of the spermatic head morphometry of free living Ecuadorian Squirrel Monkey

The objective of this study was to describe and compare the head morphometry of normal and pathological sperm from Saimiri macrodon. In the morphological analysis, 39% of the sperm had normal morphology, and 61% had major or minor defects, with pathology in the tails being the most frequent with 47% (38% curled tail, 7% folded tail and 2% strongly folded tail). Among the evaluated head morphometry parameters, area (A), width (L) and ellipticity (E) showed statistical difference (p>0.05) between normal and pathological sperm. The average head area and width was lower in normal sperm (p=0,01 e p=0,04, respectively), and the mean ellipticity was higher (p=0,038), when compared to pathological sperm. This definition of the sperm morphometric parameters of S. macrodon is important for the samples selection destined to reproduction biotechnologies and for the clarification of taxonomic and evolutionary issues in the genus Saimiri.

Protein profile as a quality indicator of cryopreserved semen from Tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) / Perfil protéico como indicador qualitativo do semen criopreservado de Tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818)

The aim of this study was to evaluate the association between proteins in the seminal plasma of tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) with seminal quality indicators after thawing. The semen was cryopreserved with a dilution based on BTS with 8% DMSO. A 200 µL sample of semen from each animal was diluted in 800 µL BTS, centrifuged at 800 rpm, and the supernatant was cryopreserved to further analyze of the protein profile of seminal plasma through one-dimensional electrophoresis (SDS-PAGE). After 15 days of cryopreservation, a cryopreserved semen straw was thawed to analyze both qualitative and quantitative parameters. When considering all collections, the SDS-PAGE identified 15 protein bands in the seminal plasma of tambaqui. When the interaction (presence or absence) between proteins observed in the seminal plasma and the post thawed spermatic parameters was evaluated, we observed a great influence of the presence of proteins on spermatic quality. A greater (P 0.05) fertilization rate was observed with the presence of proteins 12, 34, 44, 85, and 90 kDa. Proteins in seminal plasma of tambaqui influenced the spermatic quality after thawing, and thus, they can be utilized as an indicator of sperm quality, especially the proteins with a molecular weight 50 kDa.(AU)

O objetivo desse estudo foi de avaliar a associação entre a presença de proteínas no plasma seminal do tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) com indicadores de qualidade seminal pós-descongelamento. O semen foi criopreservado com diluidor a base de BTS com 8% DMSO. Uma amostra de 200 µL de semen de cada animal foi diluída em 800 µL de BTS, e centrifugada em 800 rpm, e somente o sobrenadante foi criopreservado para posterior análise do perfil proteico do plasma seminal, através da eletroforese unidimensional (SDS-PAGE). Decorridos 15 dias da criopreservação, uma palheta com semen criopreservado foi descongelado para análise dos parâmetros quali-quantitativos. Considerando todas as coletas, o SDS-PAGE identificou 15 bandas proteicas no plasma seminal do tambaqui. Quando se avaliou a interação (presença ou ausência) das proteínas encontradas no plasma seminal, com os parâmetros espermáticos pós-descongelamento, observou-se grande influência da presença das proteínas na qualidade espermática. Observou-se maior taxa de fertilização (P 0,05) com a presença das proteínas 12, 34, 44, 85 e 90 kDa. As proteínas do plasma seminal de tambaqui influenciaram na qualidade espermática após descongelamento, podendo ser utilizadas como indicadores para a qualidade espermática após descongelamento, principalmente as proteínas com peso molecular 50 kDa.(AU)

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).(AU)

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).(AU)

Spermatogenesis in sheep supplemented with detoxified castor bean (Ricinus communis L. ) as a replacement for soybean meal / Espermatogênese de ovinos suplementados com torta de mamona (Ricinus communis L. ) destoxificada em substituição ao farelo de soja

The objective was to evaluate the effect of replacing soybean meal with the detoxified castor bean cake on testicular morphometry and spermatogenesis of sheep. Were used 24 uncastrated, 9-month old sheep weighing 29±0.8 kg they were randomly distributed among three treatments: T1 = 0%, T2 = 50%, and T3 = 100% substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake. The animals were fed with Aruana grass pastage (Panicum maximum Aruana) and a ration for 90 days. After slaughtering, the testicles were collected and histological slides were prepared with tissue fragments. The data were evaluated for normality using the Shapiro-Wilk test, and analysis of variance was carried out at 5% level of significance. Substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake had no effect on any of the assessed variables at the tested levels (P >0.05). The mean yield of spermatogenesis was 72.91 rounded spermatids per spermatogonium; the mean of total number of germ cells held by a Sertoli cell was 12.09; the mean of the testicular spermatic reserve was 31.82×109 and that per testicular gram was 238.28×106; the mean of daily spermatic production was 3.03×109 and that per testicular gram was 22.69×106; and the total number of Sertoli cells was 4.15×109 and that per testicular gram was 34.51×106. The results show that it is possible to replace 100% of the soybean meal with detoxified castor bean cake in sheep diet without any effects on spermatogenesis; however, it is important to perform seminal evaluations in future studies.(AU)

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada sobre a espermatogênese em ovinos. Foram utilizados 24 ovinos, com peso médio de 29±0,8kg e 9 meses de idade, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos: T1= 0%, T2= 50% e T3= 100% de substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada. Os animais foram alimentados com pastagem de capim Aruana (Panicum maximum cv. Aruana) e ração durante 90 dias. Por ocasião do abate, coletou-se os testículos para mensurações e avaliação da espermatogênese. Os dados foram avaliados quanto à normalidade por meio do teste de Shapiro-Wilk e utilizou-se a Análise de Variância com 5% de significância. Não houve efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada nos níveis testados (P>0,05) para nenhuma das variáveis avaliadas. O rendimento médio da espermatogênese foi de 72,91 espermátides arredondadas produzidas a partir de uma espermatogônia; a média do número total de células germinativas sustentadas por uma de célula de Sertoli foi 12,09; a média da reserva espermática testicular total foi de 31,82x109 e de 238,28x106 por grama de testículo; a média da produção espermática diária foi de 3,03x109 e de 22,69x106 por grama de testículo e o número total de células de Sertoli foi de 4,15x109 e de 34,51x106 por grama de testículo. Os resultados demonstram que é possível substituir 100% do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada na dieta de ovinos sem prejuízos no processo de espermatogênese.(AU)

Spermatogenesis in sheep supplemented with detoxified castor bean (Ricinus communis L. ) as a replacement for soybean meal / Espermatogênese de ovinos suplementados com torta de mamona (Ricinus communis L. ) destoxificada em substituição ao farelo de soja

The objective was to evaluate the effect of replacing soybean meal with the detoxified castor bean cake on testicular morphometry and spermatogenesis of sheep. Were used 24 uncastrated, 9-month old sheep weighing 29±0.8 kg they were randomly distributed among three treatments: T1 = 0%, T2 = 50%, and T3 = 100% substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake. The animals were fed with Aruana grass pastage (Panicum maximum Aruana) and a ration for 90 days. After slaughtering, the testicles were collected and histological slides were prepared with tissue fragments. The data were evaluated for normality using the Shapiro-Wilk test, and analysis of variance was carried out at 5% level of significance. Substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake had no effect on any of the assessed variables at the tested levels (P >0.05). The mean yield of spermatogenesis was 72.91 rounded spermatids per spermatogonium; the mean of total number of germ cells held by a Sertoli cell was 12.09; the mean of the testicular spermatic reserve was 31.82×109 and that per testicular gram was 238.28×106; the mean of daily spermatic production was 3.03×109 and that per testicular gram was 22.69×106; and the total number of Sertoli cells was 4.15×109 and that per testicular gram was 34.51×106. The results show that it is possible to replace 100% of the soybean meal with detoxified castor bean cake in sheep diet without any effects on spermatogenesis; however, it is important to perform seminal evaluations in future studies.

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada sobre a espermatogênese em ovinos. Foram utilizados 24 ovinos, com peso médio de 29±0,8kg e 9 meses de idade, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos: T1= 0%, T2= 50% e T3= 100% de substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada. Os animais foram alimentados com pastagem de capim Aruana (Panicum maximum cv. Aruana) e ração durante 90 dias. Por ocasião do abate, coletou-se os testículos para mensurações e avaliação da espermatogênese. Os dados foram avaliados quanto à normalidade por meio do teste de Shapiro-Wilk e utilizou-se a Análise de Variância com 5% de significância. Não houve efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada nos níveis testados (P>0,05) para nenhuma das variáveis avaliadas. O rendimento médio da espermatogênese foi de 72,91 espermátides arredondadas produzidas a partir de uma espermatogônia; a média do número total de células germinativas sustentadas por uma de célula de Sertoli foi 12,09; a média da reserva espermática testicular total foi de 31,82x109 e de 238,28x106 por grama de testículo; a média da produção espermática diária foi de 3,03x109 e de 22,69x106 por grama de testículo e o número total de células de Sertoli foi de 4,15x109 e de 34,51x106 por grama de testículo. Os resultados demonstram que é possível substituir 100% do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada na dieta de ovinos sem prejuízos no processo de espermatogênese.

Influencia do peso na hemodinâmica testicular em cães avaliados através da ultrassonografia Doppler / Influence of weight on testicular hemodynamics in dogs evaluated by Doppler ultrasound

A ultrassonografia com ferramenta Doppler é o melhor método de avaliação da vascularização testicular. Objetivou-se comparar a influência do peso dos animais e do lado testicular em relação à hemodinâmica da artéria testicular de cães. Foram utilizados 17 cães machos sadios, com idades entre 8 e 48 meses. Os animais foram pesados e divididos em dois grupos: 1) 0-20 kg e 2) >20 kg, colocados em decúbito dorsal e a artéria testicular foi localizada na região de cordão espermático, com a ferramenta Doppler colorido e pulsado. Os parâmetros de velocidade do fluxo sanguíneo e os índices hemodinâmicos foram determinados em avaliação única. Utilizou-se o Modelo misto do SAS para determinar os efeitos de peso (> ou < 20kg) e lado (direito e esquerdo) das variáveis (VPS, VFD, TAMEAN, TAMAX, RI, PI, S/D, DA). A onda encontrada nessa região foi de padrão de baixa resistividade. Não foram identificados efeitos de lado nas variáveis avaliadas. O diâmetro da artéria testicular foi maior (AU)

Doppler ultrasonography is the best method to evaluate testicular vascularization. The objective of this study was to compare the influence of animal weight and testicular side on the hemodynamics of testicular artery in dogs. Seventeen healthy male dogs, aged between 8 and 48 months, were used. The animals were weighed and divided into: 1) 0-20 kg and 2)> 20 kg., Placed in dorsal decubitus position and the testicular artery was located in the region of the spermatic cord, using the pulsed and colored Doppler tool. The parameters of blood flow velocity and hemodynamic indices were determined in a single evaluation. The mixed SAS model was used to determine the effects of weight (> or < 20Kg) and side (right and left) variables (VPS, VFD, TAMEAN, TAMAX, RI, PI, S / D, DA, VFS). The wave found in this region was pattern of low resistance. No side effects were identified in the variables evaluated. Diameter of the testicular artery was higher (p<0.05) (1.86mm) in the group of animals of greater weight. In dogs, testicular diameter may be influenced by animal weight. It should be taken into account at the time of interpretation as this may influence the estimates of arterial diameter.(AU)

Influencia do peso na hemodinâmica testicular em cães avaliados através da ultrassonografia Doppler / Influence of weight on testicular hemodynamics in dogs evaluated by Doppler ultrasound

A ultrassonografia com ferramenta Doppler é o melhor método de avaliação da vascularização testicular. Objetivou-se comparar a influência do peso dos animais e do lado testicular em relação à hemodinâmica da artéria testicular de cães. Foram utilizados 17 cães machos sadios, com idades entre 8 e 48 meses. Os animais foram pesados e divididos em dois grupos: 1) 0-20 kg e 2) >20 kg, colocados em decúbito dorsal e a artéria testicular foi localizada na região de cordão espermático, com a ferramenta Doppler colorido e pulsado. Os parâmetros de velocidade do fluxo sanguíneo e os índices hemodinâmicos foram determinados em avaliação única. Utilizou-se o Modelo misto do SAS para determinar os efeitos de peso (> ou < 20kg) e lado (direito e esquerdo) das variáveis (VPS, VFD, TAMEAN, TAMAX, RI, PI, S/D, DA). A onda encontrada nessa região foi de padrão de baixa resistividade. Não foram identificados efeitos de lado nas variáveis avaliadas. O diâmetro da artéria testicular foi maior

Doppler ultrasonography is the best method to evaluate testicular vascularization. The objective of this study was to compare the influence of animal weight and testicular side on the hemodynamics of testicular artery in dogs. Seventeen healthy male dogs, aged between 8 and 48 months, were used. The animals were weighed and divided into: 1) 0-20 kg and 2)> 20 kg., Placed in dorsal decubitus position and the testicular artery was located in the region of the spermatic cord, using the pulsed and colored Doppler tool. The parameters of blood flow velocity and hemodynamic indices were determined in a single evaluation. The mixed SAS model was used to determine the effects of weight (> or < 20Kg) and side (right and left) variables (VPS, VFD, TAMEAN, TAMAX, RI, PI, S / D, DA, VFS). The wave found in this region was pattern of low resistance. No side effects were identified in the variables evaluated. Diameter of the testicular artery was higher (p<0.05) (1.86mm) in the group of animals of greater weight. In dogs, testicular diameter may be influenced by animal weight. It should be taken into account at the time of interpretation as this may influence the estimates of arterial diameter.

Reproductive disorders affecting 21-month-old bulls assessed by andrological examination / Afecções reprodutivas que acometem tourinhos (21 meses) avaliados por meio de exame andrológico

The objective of this study was to identify the prevalence of the main pathologies that affect the genital organs of young bulls. We used a database that contained data for 6,408 young Nelore bulls. The data were collected from June to August 2004 and 2005. The bulls were evaluated by andrological examination and semen samples were collected with the aid of an electroejaculation device. The animals were classified in terms of their sexual maturity as animals suitable for reproduction, animals suitable for reproduction in terms of natural service, animals temporarily unfit for reproduction, and animals excluded from reproduction. The reproductive disorders recorded in the excluded animals were classified as penile, testicular, anterior or posterior limb, epididymal, spermatic cord, spermatic, anal sphincter, foreskin, systemic, and seminal vesicle alterations. We used descriptive statistics and analysis of variance to analyze the data. Of the 6,408 bulls evaluated, 309 animals were excluded from reproduction (4.82%). The majority of the excluded bulls (31.7%) suffered from testicular-related pathologies (testicular asymmetry, small scrotal circumference for their age, orchitis, and hydrocele (64.28%, 32.65%, 2.04%, and 1.02%, respectively), seminal vesicle alterations (31.39%), sperm defects (17.15%), and penile alterations (6.79%). Of the 309 animals excluded from reproduction, 21 (6.79%of the excluded and 0.32% of the total animals) suffered from some type of penile alteration, such as persistence of the frenulum (16/21) and total or partial penile adhesion (5/21). Confining the herd for two months and subjecting the animals to their first andrological examination at a younger than usual age, with the objective of selling them, could be why there were high incidences of seminal vesicle pathologies (owing to the homosexual behavior of the males) and of penises with high [...].

Objetivou-se identificar a prevalência das principais patologias que acometem os órgãos genitais de tourinhos jovens. Foi utilizado um banco de dados de 6408 touros jovens da raça Nelore, nos meses de junho a agosto de 2004 e 2005. Os tourinhos foram avaliados por meio de exame andrológico e o sêmen coletado com auxílio do eletroejaculador. A maturidade sexual dos animais foi classificada em: animais aptos à reprodução, animais aptos à reprodução em regime de monta natural, animais temporariamente inaptos à reprodução e animais descartados. As afecções reprodutivas registradas nos animais descartados foram distribuídas em: alterações de pênis, testículos, membros anteriores ou posteriores, epidídimo, cordão espermático, alterações espermáticas, alterações do esfíncter anal, prepúcio, sistêmicas e de vesícula seminal. Análises descritiva e de Variância foram realizadas para análise dos dados. Dos 6408 touros avaliados, 309 animais foram descartados da reprodução (4,82%).A maioria dos touros descartados (31,7%) apresentou patologias relacionadas ao testículo (assimetria testicular, baixo perímetro escrotal para a idade, orquite e hidrocele, com valores de 64,28, 32,65, 2,04 e 1,02%, respectivamente), e vesículas seminais (31,39%), seguidas pelos defeitos espermáticos (17,15% dos descartados) e alterações de pênis (6,79%). Dos 309 animais descartados da reprodução, 21 (6,79% dos descartados e 0,32% do total de animais) apresentaram algum tipo de alteração peniana como persistência do frênulo (16/21) e aderências penianas, total ou parcial (5/21). O confinamento do rebanho por dois meses e a redução da idade dos animais para realização do primeiro exame andrológico, com objetivo de venda de animais precoces, podem ser os responsáveis pela maior incidência de patologias relacionadas às vesículas seminais [...].

Reproductive disorders affecting 21-month-old bulls assessed by andrological examination / Afecções reprodutivas que acometem tourinhos (21 meses) avaliados por meio de exame andrológico

The objective of this study was to identify the prevalence of the main pathologies that affect the genital organs of young bulls. We used a database that contained data for 6,408 young Nelore bulls. The data were collected from June to August 2004 and 2005. The bulls were evaluated by andrological examination and semen samples were collected with the aid of an electroejaculation device. The animals were classified in terms of their sexual maturity as animals suitable for reproduction, animals suitable for reproduction in terms of natural service, animals temporarily unfit for reproduction, and animals excluded from reproduction. The reproductive disorders recorded in the excluded animals were classified as penile, testicular, anterior or posterior limb, epididymal, spermatic cord, spermatic, anal sphincter, foreskin, systemic, and seminal vesicle alterations. We used descriptive statistics and analysis of variance to analyze the data. Of the 6,408 bulls evaluated, 309 animals were excluded from reproduction (4.82%). The majority of the excluded bulls (31.7%) suffered from testicular-related pathologies (testicular asymmetry, small scrotal circumference for their age, orchitis, and hydrocele (64.28%, 32.65%, 2.04%, and 1.02%, respectively), seminal vesicle alterations (31.39%), sperm defects (17.15%), and penile alterations (6.79%). Of the 309 animals excluded from reproduction, 21 (6.79%of the excluded and 0.32% of the total animals) suffered from some type of penile alteration, such as persistence of the frenulum (16/21) and total or partial penile adhesion (5/21). Confining the herd for two months and subjecting the animals to their first andrological examination at a younger than usual age, with the objective of selling them, could be why there were high incidences of seminal vesicle pathologies (owing to the homosexual behavior of the males) and of penises with high [...].(AU)

Objetivou-se identificar a prevalência das principais patologias que acometem os órgãos genitais de tourinhos jovens. Foi utilizado um banco de dados de 6408 touros jovens da raça Nelore, nos meses de junho a agosto de 2004 e 2005. Os tourinhos foram avaliados por meio de exame andrológico e o sêmen coletado com auxílio do eletroejaculador. A maturidade sexual dos animais foi classificada em: animais aptos à reprodução, animais aptos à reprodução em regime de monta natural, animais temporariamente inaptos à reprodução e animais descartados. As afecções reprodutivas registradas nos animais descartados foram distribuídas em: alterações de pênis, testículos, membros anteriores ou posteriores, epidídimo, cordão espermático, alterações espermáticas, alterações do esfíncter anal, prepúcio, sistêmicas e de vesícula seminal. Análises descritiva e de Variância foram realizadas para análise dos dados. Dos 6408 touros avaliados, 309 animais foram descartados da reprodução (4,82%).A maioria dos touros descartados (31,7%) apresentou patologias relacionadas ao testículo (assimetria testicular, baixo perímetro escrotal para a idade, orquite e hidrocele, com valores de 64,28, 32,65, 2,04 e 1,02%, respectivamente), e vesículas seminais (31,39%), seguidas pelos defeitos espermáticos (17,15% dos descartados) e alterações de pênis (6,79%). Dos 309 animais descartados da reprodução, 21 (6,79% dos descartados e 0,32% do total de animais) apresentaram algum tipo de alteração peniana como persistência do frênulo (16/21) e aderências penianas, total ou parcial (5/21). O confinamento do rebanho por dois meses e a redução da idade dos animais para realização do primeiro exame andrológico, com objetivo de venda de animais precoces, podem ser os responsáveis pela maior incidência de patologias relacionadas às vesículas seminais [...].(AU)

Eficiência de duas técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães e avaliação seminal pós-criopreservação / [Efficiency of two techniques for recovering epididymal spermatozoids from dogs and seminal evaluation post cryopreservation]

O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.(AU)

The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.(AU)

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%. In ejaculate samples, higher values of total morphological defects were observed after 24 and 48 hours of refrigeration at 4°C (P<0.022) compared to refrigeration at -1°C, using Friedman test. To quantify the decrease in sperm quality, parameter reductions were calculated among time points (F-24h/F-48h/24h-48h). In EPD samples, a greater reduction in sperm quality was detected after 24 hours of refrigeration at 4°C, both in motility and sperm kinetics and in the movement and velocity indices, compared to refrigeration at -1°C. Based on the results, it can be concluded that cooling of feline spermatozoa at -1°C for up to 48 hours was efficient in maintaining spermatic quality collected by EEJ and EPD, and it could be an alternative to spermatozoa cryopreservation in domestic felines.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%. No ejaculado, maiores valores de defeitos morfológicos totais foram observados após 24 e 48 horas de refrigeração a 4°C (P<0,022) em comparação com refrigeração a -1°C, usando o teste de Friedman. Para quantificar a diminuição na qualidade espermática, as reduções dos parâmetros foram calculadas entre os pontos de tempo (F-24h/F-48h/24h-48h). Na EPD, uma maior redução na qualidade espermática foi detectada após 24 horas de refrigeração a 4°C, tanto na motilidade e na cinética espermática quanto nos índices de movimento e velocidade, em comparação com a refrigeração a -1°C. Com base nos resultados, pode concluir-se que a refrigeração dos espermatozoides felino a -1°C, até 48 horas, foi eficaz na manutenção da qualidade espermático colhidos por EEJ e EPD, e pode ser uma alternativa para a criopreservação de espermatozoides em felinos domésticos.(AU)