Immobilization of mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum in E. coli and application for kraft pulp biobleaching

Abstract As an important enzyme, xylanase is widely used in the food, pulp, and textile industry. Different applications of xylanase warrant specific conditions including temperature and pH. This study aimed to carry out sodium alginate beads as carrier to immobilize previous reported mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum which expressed in E. coli, the activity of immobilization of mutated xylanase was elevated about 4% at pH 6 and 13% at 62 °C. Moreover, the immobilized mutated xylanase retained a greater proportion of its activity than the wide type in thermostability. These properties suggested that the immobilization of mutated xylanase has potential to apply in biobleaching industry.

Resumo Como importante enzima, a xilanase é amplamente utilizada na indústria alimentícia, de celulose e têxtil. Diferentes aplicações de xilanase garantem condições específicas, incluindo temperatura e pH. Este estudo teve como objetivo realizar grânulos de alginato de sódio como carreador para imobilizar xilanase mutada relatada anteriormente de Neocallimastix patriciarum que expressa em E. coli, a atividade de imobilização da xilanase mutada foi elevada em cerca de 4% em pH 6 e 13% a 62 °C. Além disso, a xilanase mutada imobilizada reteve uma proporção maior de sua atividade do que o tipo amplo em termoestabilidade. Essas propriedades sugerem que a imobilização da xilanase mutada tem potencial para aplicação na indústria de biobranqueamento.

Immobilization of mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum in E coli and application for kraft pulp biobleaching / Imobilização de xilanase mutada de Neocallimastix patriciarum em E coli e aplicação para polpa kraft

As an important enzyme, xylanase is widely used in the food, pulp, and textile industry. Different applications of xylanase warrant specific conditions including temperature and pH. This study aimed to carry out sodium alginate beads as carrier to immobilize previous reported mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum which expressed in E. coli, the activity of immobilization of mutated xylanase was elevated about 4% at pH 6 and 13% at 62 °C. Moreover, the immobilized mutated xylanase retained a greater proportion of its activity than the wide type in thermostability. These properties suggested that the immobilization of mutated xylanase has potential to apply in biobleaching industry.

Como importante enzima, a xilanase é amplamente utilizada na indústria alimentícia, de celulose e têxtil. Diferentes aplicações de xilanase garantem condições específicas, incluindo temperatura e pH. Este estudo teve como objetivo realizar grânulos de alginato de sódio como carreador para imobilizar xilanase mutada relatada anteriormente de Neocallimastix patriciarum que expressa em E. coli, a atividade de imobilização da xilanase mutada foi elevada em cerca de 4% em pH 6 e 13% a 62 °C. Além disso, a xilanase mutada imobilizada reteve uma proporção maior de sua atividade do que o tipo amplo em termoestabilidade. Essas propriedades sugerem que a imobilização da xilanase mutada tem potencial para aplicação na indústria de biobranqueamento.

Immobilization of mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum in E. coli and application for kraft pulp biobleaching / Imobilização de xilanase mutada de Neocallimastix patriciarum em E. coli e aplicação para polpa kraft

Abstract As an important enzyme, xylanase is widely used in the food, pulp, and textile industry. Different applications of xylanase warrant specific conditions including temperature and pH. This study aimed to carry out sodium alginate beads as carrier to immobilize previous reported mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum which expressed in E. coli, the activity of immobilization of mutated xylanase was elevated about 4% at pH 6 and 13% at 62 °C. Moreover, the immobilized mutated xylanase retained a greater proportion of its activity than the wide type in thermostability. These properties suggested that the immobilization of mutated xylanase has potential to apply in biobleaching industry.

Resumo Como importante enzima, a xilanase é amplamente utilizada na indústria alimentícia, de celulose e têxtil. Diferentes aplicações de xilanase garantem condições específicas, incluindo temperatura e pH. Este estudo teve como objetivo realizar grânulos de alginato de sódio como carreador para imobilizar xilanase mutada relatada anteriormente de Neocallimastix patriciarum que expressa em E. coli, a atividade de imobilização da xilanase mutada foi elevada em cerca de 4% em pH 6 e 13% a 62 °C. Além disso, a xilanase mutada imobilizada reteve uma proporção maior de sua atividade do que o tipo amplo em termoestabilidade. Essas propriedades sugerem que a imobilização da xilanase mutada tem potencial para aplicação na indústria de biobranqueamento.

Immobilization of mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum in E coli and application for kraft pulp biobleaching / Imobilização de xilanase mutada de Neocallimastix patriciarum em E coli e aplicação para polpa kraft

As an important enzyme, xylanase is widely used in the food, pulp, and textile industry. Different applications of xylanase warrant specific conditions including temperature and pH. This study aimed to carry out sodium alginate beads as carrier to immobilize previous reported mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum which expressed in E. coli, the activity of immobilization of mutated xylanase was elevated about 4% at pH 6 and 13% at 62 °C. Moreover, the immobilized mutated xylanase retained a greater proportion of its activity than the wide type in thermostability. These properties suggested that the immobilization of mutated xylanase has potential to apply in biobleaching industry.(AU)

Como importante enzima, a xilanase é amplamente utilizada na indústria alimentícia, de celulose e têxtil. Diferentes aplicações de xilanase garantem condições específicas, incluindo temperatura e pH. Este estudo teve como objetivo realizar grânulos de alginato de sódio como carreador para imobilizar xilanase mutada relatada anteriormente de Neocallimastix patriciarum que expressa em E. coli, a atividade de imobilização da xilanase mutada foi elevada em cerca de 4% em pH 6 e 13% a 62 °C. Além disso, a xilanase mutada imobilizada reteve uma proporção maior de sua atividade do que o tipo amplo em termoestabilidade. Essas propriedades sugerem que a imobilização da xilanase mutada tem potencial para aplicação na indústria de biobranqueamento.(AU)

TERMITEIROS ARBORÍCOLAS (Microcerotermes indistinctus e Constrictotermes cyphergaster) COMO SUBSTRATO DE NIDIFICAÇÃO PARA A ABELHA SEM FERRÃO Partamona seridoensis NA CAATINGA

A diagnose morfológica da espécie de abelha sem ferrão, endêmica da Caatinga, Partamona seridoensis é amplamente descrita e consolidada, porém, os aspectos arquitetônicos, estruturais e termodinâmicos dos cupinzeiros hospedeiros desta abelha termitófila obrigatória são pouco conhecidos. Diante disso, este trabalho buscou realizar um estudo base que teve por objetivos: (1) indicar qual melhor metodologia de dimensionamento de volume e área superficial de cupinzeiros arborícolas, oferecendo um modelo matemático de ajuste; (2) realizar uma descrição comparativa entre as estruturas arquitetônicas de ninhos de P. seridoensis localizados em termiteiros das espécies Microcerotermes indistinctus e Constrictotermes cyphergaster; (3) estudar as características térmicas de ninhos de abelhas e dos substratos circundantes; (4) apresentar um modelo detalhado de uma colmeia racional voltada exclusivamente para espécies termitófilas. O período experimental compreendeu os meses de abril a novembro de 2018, em que foram utilizados vinte cupinzeiros para os estudos, sendo dez de cada espécie, onde metade era habitado por abelhas e a outra metade inativa. (1) Para o primeiro objetivo utilizou-se a modelagem 3D e equações aritméticas para os cálculos de volume e área superficiais dos termiteiros. Os resultados encontrados para os dimensionamentos dos termiteiros mostraram que a compartimentalização é a metodologia que apresentou volumetria mais próxima à realidade. Porém devido à sua complexidade, é inviável de ser utilizada em campo, tornando o modelo elipsoidal mais vantajoso, uma vez que as medidas necessárias à sua utilização são apenas a largura, a altura e o comprimento dos cupinzeiros. (2) Para a descrição das características gerais dos termiteiros e a morfologia dos ninhos de P. seridoensis seguiu-se metodologias estabelecidas pela literatura. Verificou-se que os aspectos gerais e arquitetônicos dos ninhos de P. seridoensis, inseridos em cupinzeiros com substratos e dimensionamentos distintos, apresentaram características estruturais semelhantes e típicas das abelhas termitófilas do gênero Partamona. (3) Para a análise das características térmicas, sensores de temperatura foram inseridos em locais específicos (substrato, invólucro, áreas de cria e com potes de alimento) para cupinzeiros que possuíam ninhos de abelhas e, em termiteiros inativos, nas profundidades de 5, 10, 15, e 20 cm. Os dados ambientais foram obtidos de estação meteorológica automática instalada no local do experimento. A escolha do cupinzeiro mais adequado por P. seridoensis para nidificar pode ser por conta do tipo de substrato termoisolante, mas outros fatores podem influenciar, como a agressividade do hospedeiro, a cavidade pré-existente ou mesmo o grau de antropização do ambiente. Contudo, quando se avaliou apenas a questão térmica, os cupinzeiros de M. indistinctus foram melhores para a P. seridoensis, uma vez que exigiram menos da temperatura ambiental e possuíram maior isolamento térmico quando comparados aos termiteiros de C. cyphergaster, mesmo que estes também tivessem características desejáveis como a termoestabilidade. (4) Por fim, para a construção da colmeia racional foram utilizados os resultados provenientes deste estudo, unindo as características arquitetônicas mais usuais das colmeias já utilizadas, em que as observações preliminares em P. seridoensis indicaram que estas abelhas se habituaram rapidamente ao modelo de colmeia desenvolvido.

Morphological characteristics of the stingless bee Partamona seridoensis (Apidae, Meliponini), endemic to the Caatinga, are well known. However, the architectural, structural and thermodynamic aspects of the nests of this obligatory thermophilic bee within arboreal termite nests are poorly known. The present thesis aimed at increasing the knowledge about these facts, fundamental for future ecological studies on this meliponine species. The main goals were to: (1) indicate the best methodology for estimating the volume and surface area of arboreal termite nests and provide a mathematical adjustment model; (2) compare the architectural structures of P. seridoensis nests within the nests of the termite species Microcerotermes indistinctus and Constrictotermes cyphergaster; (3) study the thermal characteristics of both bee and surrounding termite nests; (4) elaborate a model of a new rational hive for thermophilic stingless bee species. Between April and November 2018, twenty termite nests, ten of each species, were used for the investigations. Half of the termite nests had been colonized by bees whereas the other half was inactive. (1) 3D-modelling and geometric shapes were used to estimate the volume and surface area of the arboreal termite nests. A combination of superimposed cylinders with spherical caps presented values closer to reality (3D-model) than ellipsoids. However, due to its complexity, it is not feasible for use in the field, rendering the ellipsoidal model, which requires only 3 linear measurements, more advantageous. (2) Methodologies established in literature were adopted to describe the characteristics of both termite nests and the nests of P. seridoensis. Despite differences in nest characteristics between the two termite species, the architecture of P. seridoensis nests showed no significant differences between the surrounding substrates. (3) For the analysis of the thermal characteristics of the nests, temperature sensors were inserted in specific locations in and around the bee nests (substrate, involucrum, brood area, and food area). As control, sensors were placed at depths of 5, 10, 15, and 20 cm in inactive termite nests. Environmental temperature was monitored through a weather station at the site of the experiment. The bees'choice which termite species' nest to colonize may be based on the thermal insulation characteristics of substrate. Yet, other factors such as the hosts' aggressiveness, the pre- existence of a inhabitable cavity, or even the anthropization of the environment may have an impact on the bees' choice. Concerning the thermal characteristics, the nests of M. indistinctus showed better insulation properties, given that temperatures inside the nests were more independent from ambient temperature the compared to the nests of C. cyphergaster. However, the nests of latter species presented an elevated thermostability, which is a characteristic in favour of the colonization by bees. (4) The results from this study were used in combination with the most common architectural characteristics of rational hives for the construction of rational hives for P. seridoensis. Preliminary observations on the success of the new hive model indicate that the bees quickly get used to the rational hive developed.

PRODUÇÃO E PURIFICAÇÃO DE PROTEASE OBTIDA DO FUNGO FILAMENTOSO Aspergillus sydowii POR FERMENTAÇÃO EM ESTADO SÓLIDO UTILIZANDO RESÍDUO DE CAFÉ COMO SUBSTRATO

As proteases são um grupo de enzimas hidrolíticas, que possuem a capacidade de hidrolisar ligações peptídicas extremamente importantes para indústria, sendo seu uso correspondente a 60% das enzimas comercializadas. Devido essa importância, faz-se necessária a utilização de novas fontes de obtenção ou de novas formas de baratear a produção. Pensando nisso a utilização de resíduos agroindustrial em associação com processos fermentativos pode ser uma forma de obtenção de novas enzimas alem de ajudar a combater os sérios danos ambientais causados pela eliminação desses resíduos na natureza. A Fermentação em Estado Sólido (FES) vem como tentativa de reaproveitamento desse material que pode ser utilizado como um substrato de alta qualidade por um baixo preço para produção de proteases com potencial biotecnológico. O presente trabalho teve como objetivo utilizar Aspergillus sydowii para a produção de protease através da FES, além de purificar a enzima alvo através de processos de cromatográficos, bem como a determinação das características bioquímicas da protease produzida e isolada. O micro-organismo utilizado foi isolado diretamente do café e identificado. Em seguida, foi realizada uma verificação do seu potencial de produção para protease. Para a produção foram avaliados o tempo de fermentação, a umidade e a quantidade de substrato utilizada. Para o processo de purificação foram utilizadas técnicas de precipitação com acetona, colunas cromatográficas utilizando como resina a DEAE-Sephadex e gel filtração Superdex 75. Foram analisados os extratos brutos e purificados. Os extratos foram submetidas à caracterização quanto a sua termoestabilidade, temperatura e pH ótimos, efeitos de inibidores e íons metálicos. O extrato bruto apresentou atividade proteolítica de 412 U/mL, tendo uma inibição de pelo Fenilmetilsulfonilflúor (85%) e o íon Fe+3 aumentou a atividade em 69%. A atividade ótima foi encontrada em pH 8 a 45°C, com estabilidade termica do extrato entre 25°C e 45°C, mantendo 85% de sua atividade inicial. A protease purificada apresentou um tamanho de 48 KDa, a técnica utilizada apresentou um alto rendimento de 5,9 vezes, a recuperação de 53% e a atividade proteolítica de 256 U/mL. A enzima teve uma inibição pelo Fluoreto de Fenilmetilsulfonila (60%) e o íon Cu+2 (56,5%). A atividade ótima foi encontrada em pH 8,0 a 45°C, com estabilidade da enzima entre 35°C e 50°C, mantendo 70% de sua atividade inicial. A linhagem de A. sydowii isolada foi eficaz para a produção de protease com potencial biotecnologico atraves da FES utilizando o resíduo de café, além de uma possivel solução para o dano ambiental provocado pelo borra do café.

Proteases are hydrolytic enzymes able to hydrolyze peptide bonds and thereby presenting several applications for industrial purposes (corresponding to 60% of the commercial enzymes). Wasting of agro-industrial raw material generates environmental problems at the same time that represents an economic hindrance. Solid State Fermentation emerges as an alternative to reuse this raw material by providing high quality substrate at a low price for the production of proteases with biotechnological potential. The present work aimed to select Aspergillus sydowii strains to perform Solid State Fermentation and then to purify a protease through chromatography process, as well as the determination of its biochemical characteristics. In this study the microorganism cultivated directly in the coffee substrate was isolated and identified regarding to its production potential, the fermentation time, the humidity and the amount of the substrate. For the purification process a number of techniques were used, acetone precipitation, gravitational column using DEAE-Sephadex resin and Superdex 75 gel filtration using the AKTA avant system. Solid state fermentation is a promising technology largely used in a biotechnology process and is a suitable strategy for producing low cost enzymatic products. At the present study, an enzyme obtained through solid state fermentation (SSF) by Aspergillus sydowii was herein purified, characterized and tested for its antimicrobial activity. The fermentations used coffee ground residues as substrate and the crude enzyme was submitted through further purification steps of: cetonic precipitation, chromatography through DEAE-Sephadex column and FPLC system (gel filtration in na Äkta avant system, Superdex 75 collumn). Both crude and purified enzymes were submitted to characterization of their thermostability, optimal temperature and pH, effects of inhibitors and metal ions. A purified protease (48 KDa) was obtained with high yield (5.9 fold) and recovery (53%) with proteolytic activity of 256 U/mL. The enzyme was highly inhibited by phenylmethanesulfonyl fluoride (60%) and the ion Cu+2 (56.5%). The optimal activity was found at pH 8, at 45 °C of temperature, with the enzyme stability between 35° C and 50° C (maintaining 70% of its highest activity). It was possible to determine appropriate conditions to the obtainment of thermostable proteases with biotechnological interest associated with a method that concomitantly shows excellent production levels and recovery waste raw material in a very profitable process.

Produção, purificação, caracterização e aplicação de tanase de Aspergillus melleus URM 5827 produzida por fermentação em estado sólido utilizando sementes de achachairú (Garcinia humilis (Vahl) C. D. Adam).

Tanino acil hidrolase (TAH) conhecida como tanase (E.C:3.1.1.20) é uma enzima que hidrolisa ésteres e ligações laterais de taninos hidrolisáveis. O ácido tânico é um típico tanino hidrolisável, que pode ser hidrolisado por tanase em glicose e ácido gálico. A tanase pode ser obtida a partir de fontes vegetais, animais e microbianas, sendo o meio microbiológico a fonte mais importante de obtenção desta enzima. O chá verde apresenta várias substâncias, dentre elas, as catequinas que são uma importante fonte de antioxidante, que ajudam na manutenção do organismo.A atividade e a purificação de tanase produzida por Aspergillus melleus URM 5827 foi avaliada por fermentação em estado sólido utilizando como substrato sementes de achachairú (Garcinia humilis (Vahl) C. D. Adam). Foram utilizadas 42 culturas de fungos do gênero Aspergillus para seleção qualitativa das culturas com potencial para produção da tanase. Com a cultura selecionada foi realizada uma fermentação em estado sólido utilizando sementes de achachairú como substrato. Um planejamento fatorial (23) foi utilizado para analisar a influência das variáveis de produção: quantidade de substrato, umidade inicial e quantidade de ácido tânico sobre a atividade da tanase. A purificação foi avaliada por cromatografia de troca iônica em DEAE- Sephadex. A máxima atividade foi produzida por Aspergillus melleus URM 5827 com 452,55 unidades por grama de substrato na base seca (U/gss) utilizando 5,0 g de substrato, com umidade inicial de 60% e 2,0% de ácido tânico em 48 horas de fermentação. A enzima purificada apresentou peso molecular de 69,52 kDa em Superdex G-75, enquanto que em eletroforese SDS-PAGE apresentou 66,5 kDa. Quanto a caracterização, apresentou pH e temperatura ótima de 5,5 e 40ºC respectivamente, obtendo termoestabilidade a 30ºC. A atividade enzimática na presença de íons, surfactantes e inibidores de protease, foi inibida na presença dos íons ZnCl2, ZnSO4 e dos surfactantes triton X-100, SDS, reduzida com os íons CaCl2, KCl, NaCl, MgSO4, CuSO4, dos surfactantes Tween 20, Tween 80 e dos inibidores de protease EDTA e -mercaptoetanol. A tanase aumentou a atividade antioxidante do chá verde significativamente. Os resultados obtidos no presente estudo, mostram o potencial promissor da tanase produzida por Aspergillus melleus URM 5827 e na sua utilização no aumento do potencial antioxidante do chá verde.

Tannin acylhydrolase (TAH) known as tannase (E.C:3.1.1.20) is an enzyme which hydrolizes esters and lateral bonds of hydrolizable tannins. The tannic acid is a typical hydrolizable tannin, which can be hydrolized by tannase along with glucose and gallic acid. Tannase can be obtained from vegetables, animal and microbial sources. From those, the last is the most important source to obtain the enzyme. Green tea has several substances, among which catechins are a major source of antioxidant, which help in maintaining the organism.The activity and purification of tannase produced by Aspergillus melleus URM 5827 was evaluated by semi solid fermentation using seeds of mangosteen (Garcinia humilis (Vahl) C. D. Adam) as substract. Forty two cultures fungical cultures of Aspergillus were used for qualitative selection purposes in order to verify potential for tannase production. After selecting cultures, it was performed a semi solid fermentation using seeds of mangosteen as substrate. A factorial planning (2³) was used to verify the influence of production variables such as: quantity of substrate; initial moisture and amount of tannic acid over tannase activity. The purification was evaluated by ionic change chromatography at DEAE-Sephadex. Maximum activity was produced by Aspergillus melleus URM 5827 with 452.55 units per gram of dry-based substract (U/gss) using 5.0 grams of substrate, with initial moisture of 60% and 2% of tannic acid through 48 hours fermentation. The purified enzyme has a molecular weight of 69.52 kDa on Superdex G-75, while on SDS-PAGE electrophoresis showed 66.5 kDa. As for the characterization, the optimum pH and temperature was 5.5 and 40ºC, respectively, achieving thermostability at 30ºC. Coughing increases the antioxidant activity of green tea significantly. The results obtained in this study show the promising potential of tannase produced by Aspergillus melleus URM 5827 and its use in improving the antioxidant potential of green tea.

PRODUÇÃO, PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO PARCIAL DA FITASE EXTRACELULAR PRODUZIDA POR ASPERGILLUS NIGER VAR. PHOENICIS URM 4924 E SUA ATIVIDADE HIDROLÍTICA E ANTI-PROTEOLÍTICA IN VITRO EM RAÇÕES COMERCIAIS DE AVES E SUÍNOS

As enzimas exógenas têm a capacidade de auxiliar na degradação de ingredientes específicos presentes em alimentos. Dentre os principais aditivos enzimáticos utilizados na alimentação de animais aves e suínos pode-se destacar as lipases, xilanases, glucanases, proteases e fitases. O fitato é um composto considerado como fator anti-nutricional, pois é responsável por perdas nutricionais significativas. Fitases formam um grupo de enzimas, denominadas genericamente de mio-inositol-hexafosfato fosfohidrolase, que hidrolizam o fitato, liberando sais de inositol e fosfato inorgânico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito das variáveis (pH e temperatura) que influenciam à produção de fitase por A. niger var. phoenicis URM 4924, pré-purificação da enzima através da fermentação extrativa em SDFA PEG/citrato, caracterização bioquímica do pré e pós-purificado, atividade anti-proteolítica frente à pepsina gástrica suína e à tripsina pancreática, bem como o perfil hidrolítico in vitro da fitase em rações comerciais de aves e suínos. Temperatura e pH mostraram ser importantes parâmetros na produção da fitase e o conteúdo de ergosterol mostrou-se como um bom indicador para estimar a produção da biomassa. A fitase em estudo apresentou temperatura ótima a 30 °C e pH ótimo a 4,0. Após a extração e purificação da fitase em sistemas de duas fases aquosas por fermentação extrativa obteve-se máxima recuperação em atividade (150,38%) utilizando MPEG (8000 g/mol), CPEG, (20,0% m/m), CCIT (20,0% m/m), pH (6,0) e agitação (100 rpm). Através dos resultados obtidos verifica-se que após o processo de extração e purificação utilizando fermentação extrativa por SDFA PEG/citrato, a termoestabilidade da fitase diminuiu consideravelmente (38,4% da atividade residual em 90°C por 120 minutos para 50,0% da atividade residual em 70°C por 25 minutos). Observa-se que a enzima pré-purificada foi inibida em concentrações de fósforo de 6 moles de PO4-2, entretanto a fitase pós-purificada em SDFA. PEG/citrato foi inibida em concentração de fósforo menor do que a pré-purificada. Quanto a resistência quanto à proteólise, a fitase manteve 60,0% da sua atividade residual por 40 minutos. No entanto, quando exposta a atividade proteolítica da tripsina entérica, a fitase manteve aproximadamente 20,0% da atividade residual. A fitase mostrou-se com bom desempenho na resistência proteolítica, bem como na hidrólise do fitato em rações comerciais de aves e suínos, características bioquímicas essenciais para uma enzima com potencial aplicação industrial. Os resultados deste presente trabalho demostram o potencial do fungo Aspergillus niger var. phoenicis URM 4924 para produzir fitase sob fermentação submersa para aplicação na alimentação de animais não-ruminantes.

Exogenous enzymes have ability to assist on degradation of specific compounds in foods. Among some enzyme additives fed to poultry and pigs can be lipases, xylanases, glucanases, proteases and phytases. Phytate is a compound considered an anti-nutritional factor since it is responsible for significant nutritional losses. Phytases are a group of enzymes, generically known as myo-inositol hexaphosphate fosfohidrolase that hydrolyze phytate, releasing inositol and inorganic phosphate salts. This aim of this study was to evaluate the effect of variables (pH and temperature) that influence the production of phytase by A. niger var. phoenicis URM 4924, pre-purification of the enzyme by extractive fermentation in ATPS PEG/citrate, biochemical characterization of pre- and post-purified, anti- proteolytic activity against pig gastric pepsin and pancreatic trypsin, and the profile hydrolytic in vitro phytase in commercial diets of poultry and pigs. Temperature and pH proved to be important parameters in the production of phytase. Ergosterol content proved to be a good indicator to estimate biomass production. Phytase studied showed optimum temperature at 30°C and optimum pH 4.0. After extraction and purification of phytase in aqueous two-phase systems by extractive obtained maximum recovery in activity (150.38 %) using MPEG (8000 g/mol), CPEG (20.0 % m/m), CCIT (20.0% w/w), pH (6.0) and agitation (100 rpm). From the results obtained it can be seen that after the extraction process using extractive fermentation and purification in ATPS PEG/citrate, thermostability of phytase decreased significantly (38.4% residual activity at 90° C for 120 minutes to 50.0 % of residual activity at 70° C for 25 minutes). It is observed that the pre- purified enzyme was inhibited by concentrations of phosphorus of 6 mols of PO4-2, however post-purified phytase in ATPS PEG/citrate inhibited by low phosphorus concentration of the pre-purified. For resistance to proteolysis as the phytase kept 60.0 % of residual activity. after 40 minutes. However, when exposed to the proteolytic activity of trypsin enteric the phytase kept approximately 20.0 % of residual activity. Phytase proved diserable performance on proteolytic resistance, as well as phytate hydrolysis in commercial diets of poultry and pig, essential biochemical characteritics for an enzyme with potential industrial application. The results of this study demonstrate the potential of Aspergillus niger var. phoenicis URM 4924 to produce phytase in submerged fermentation for use in animal feed.

Avaliação da composição química e tratamentos térmicos da carne ovina de animais submetidos a dieta com o subproduto do urucum (Bixa orellana L.)

Os produtos cárneos são passíveis de processos oxidativos que promovem o aparecimento de compostos prejudiciais à saúde do consumidor, tais como os óxidos de colesterol e o malonaldeído, os quais estão intimamente relacionados com o aparecimento de doenças cardiovasculares e cânceres, além de serem responsáveis pela deterioração do produto. Para minimizar tais processos a indústria tem utilizado antioxidantes sintéticos, como o butilhidroxitolueno-BHT e o butilhidroxianisol-BHA, porém esses compostos apresentam o inconveniente de estarem relacionados à promoção de cânceres, em especial o de pulmão. Assim, a indústria vem procurando alternativas que confiram proteção aos produtos sem ocasionar danos à saúde humana, e os carotenoides se destacam pois são antioxidantes naturais que podem garantir a proteção ao produto, além de possibilitar atividades benéficas à saúde, em especial proteção contra a ação dos radicais livres, os quais participam dos processos de inicialização e desenvolvimento de diversas patologias. Com este estudo objetivou-se avaliar a termoestabilidade da carne de ovinos que receberam dietas contendo subproduto do urucum submetida a diferentes tratamentos térmicos. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 4x4 (quatro tratamentos térmicos e quatro concentrações de bixina na carne). Os tratamentos térmicos foram: in natura, cozimento, forno e fritura, e foram utilizados níveis de inclusão do subproduto do urucum as dietas que proporcionaram as seguintes concentrações de bixina: (1) sem inclusão, (2) com inclusão de 0,056 mg, (3) de 0,113 mg e (4) de 0,169 mg de bixina/kg de ração (base na ma téria seca). As amostras foram obtidas a partir da secção transversal do corte comercial denominado de lombo. Para a determinação da composição química e estabilidade térmica, foram realizadas as seguintes analises: matéria seca, proteína bruta, extrato etéreo, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), colesterol e óxidos de colesterol (COPs) na carne. Os tratamentos térmicos promoveram alterações na composição química da carne e a formação de substâncias reativas ao ácido barbitúrico (TBARS) (P<0,05). A bixina conferiu estabilidade oxidativa à carne in natura (P<0,05), indicando a efetividade de seu uso no aumento da vida útil. Porém, o carotenoide não foi eficiente em inibir a oxidação durante tratamentos térmicos (P>0,05). A concentração dos COPs foi elevada pelos tratamentos térmicos (P<0,05). Os teores de 0,109 e 0,164 mg de bixina inibiram a formação dos COPs (P<0,05). Conclui-se que a bixina não altera a composição química da carne ovina, e que os tratamentos térmicos contribuem para elevação dos constituintes da carne. A bixina foi capaz de retardar os processos oxidativos da carne ovina in natura. Porém não atribui o mesmo efeito na carne processa. Os tratamentos térmicos em combinação com a bixina promoveram redução do colesterol na carne.

The meat products are subject to oxidative processes that promote the appearance of compounds harmful to consumer health such as cholesterol oxides and malondialdehyde, which are closely related to the onset of cardiovascular diseases and cancers, and are responsible for the deterioration of product. To minimize these processes the industry has used synthetic antioxidants such as butylhydroxytoluene, butylhydroxyanisole, BHT and BHA, however, these compounds have the disadvantage of being related to the promotion of cancer, in special lung. So the industry is looking for alternatives that provides protection to products without causing harm to human health, and carotenoids stand out because they are natural antioxidants that can guarantee protection to the product, in addition to enabling activities beneficial to health, especially protection from the action of free radicals, which participate in the startup process and development of various diseases. This study aimed to evaluate the thermal stability of the sheep meat fed the byproduct of annatto subjected to different thermal treatments. The experimental design was completely randomized in a 4x4 factorial scheme (four thermal treatments and four bixin concentrations in the flesh).The thermal treatments were: fresh, cooking, oven and frying, and were used for inclusion levels of the byproduct of annatto the diets provided the following concentrations of bixin: (1) no addition, (2) with addition of 0.056 mg (3) mg and 0.113 (4) 0.169 mg of bixin / kg of feed (dry matter basis). Samples were obtained from the cross section of the named commercial cut tenderloin. To determine the chemical and thermal stability, the following analyzes were performed: dry matter, crude protein, ether extract, thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), cholesterol and cholesterol oxides (COPs) in the meat. The heat treatment caused changes in the chemical composition of meat and the formation of reactive substances barbiturate acid (TBARS) (P <0.05). The bixin gave oxidative stability of fresh beef (P <0.05), indicating the effectiveness of its use in increasing life. However, the carotenoid was not effective to inhibit oxidation during heat treatments (P> 0.05). The concentration of COPs was high by heat treatment (P <0.05). The contents of 0.109 and 0.164 mg of bixin inhibit the formation of COPs (P <0.05). It is concluded that bixin does not alter the chemical composition of the lamb meat, and that heat treatments contribute to elevation of the meat constituents. The bixin was able to slow down the oxidative processes of sheep meat in natura. But does not give the same effect on handling meat. The heat treatments in combination with bixin promoted reduction of cholesterol in meat.

Highly thermostable and alkaline -amylase from a halotolerant-alkaliphilic Bacillus sp. AB68

An alkaliphilic and highly thermostable -amylase producing Bacillus sp. was isolated from Van soda lake. Enzyme synthesis occurred at temperatures between 25ºC and 40ºC. Analysis of the enzyme by SDS-PAGE revealed a single band which was estimated to be 66 kDa. The enzyme was active in a broad temperature range, between 20ºC and 90ºC, with an optimum at 50ºC; and maximum activity was at pH 10.5. The enzyme was almost completely stable up to 80ºC with a remaining activity over 90% after 30 min pre-incubation. Thermostability was not increased in the presence of Ca2+. An average of 75% and 60ºC of remaining activity was observed when the enzyme was incubated between pH 5 and 9 for 1 h and for 2 h, respectively. The activity of the enzyme was inhibited by SDS and EDTA by 38% and 34%, respectively.

Bacillus sp AB68 alcalifílico produtor de -amilase alcalina termoestável foi isolado do lago Van soda. A síntese da enzima ocorreu entre 25ºC e 40ºC. A análise da enzima por SDS-PAGE revelou uma única banda estimada em 66 kDa. A enzima foi ativa em uma ampla faixa de temperatura, entre 20ºC e 90ºC, com um ótimo a 50ºC. A atividade máxima foi em pH 10,5. A enzima foi estável até 80ºC, mantendo 90% de atividade após 30 min de pré-incubação. A termoestabilidade não aumentou na presença de Ca2+. Quando incubada em pH entre 5 e 9 por 1h e por 2h, a enzima manteve 75% e 60% de atividade, respectivamente. SDS e EDTA causaram redução de 38% e 34% na atividade da enzima, respectivamente.

Effect of the culture conditions on the production of an extracellular protease by thermophilic Bacillus sp and some properties of the enzymatic activity

Protease production by thermophilic Bacillus sp strain SMIA-2 cultivated in liquid cultures containing 1% maltose as a carbon source and supplemented with whey protein (0.1%) and corn steep liquor (0.3%) reached a maximum at 14 h, with levels of 42 U/mg protein. The microorganism was capable of utilizing a wide range of carbon sources, but protease activity varied according the carbon source. Starch and maltose were the best carbon sources in the present study for protease secretion, while lactose and sucrose were less effective. Increasing maltose concentration in the medium until 1%, improved the growth of the organism and the enzyme activity. Regarding the amounts of corn steep liquor and whey protein in the medium, the concentrations of 0.2% and 0.1% respectively, were considered the most effective for protease secretion by the organism. Studies on the protease characterization revealed that the optimum temperature of this enzyme was 70ºC. Thermostability profile indicated that the enzyme retained 80% of the original activity after 2 h heat treatment at 60ºC. At 70ºC, 70% of the original activity was retained after 15 min heat treatment. The optimum pH of the enzyme was found to be 8.5. After incubation of crude enzyme solution at room temperature for 2 h at pH 6.0-10.0, a decreased of about 15% of its original activity at pH 8.5 was observed. At pH 10.0, the decrease was 24%. In the presence of 1.0 M and 5.0 M NaCl, 76% and 37% of protease activity was retained after 2 h incubating at 45ºC respectively.

A produção de proteases pelo termofílico Bacillus sp cepa SMIA-2 cultivado em culturas líquidas contendo maltose (1%) e suplementada com proteínas de soro (0,1%) e água de maceração de milho (0,3%) alcançou o máximo em 14 h, com níveis de 42 U/mg proteína. O microrganismo foi capaz de utilizar várias fontes de carbono, mas a atividade da protease variou com cada fonte. Amido e maltose foram as melhores fontes para a secreção da protease, enquanto lactose e sacarose não foram muito efetivas. O aumento da concentração de maltose no meio de cultura até 1% melhorou o crescimento do organismo e a atividade da enzima. Em relação à concentração de proteínas do soro e da água de maceração de milho no meio de cultura, 0,1% e 0,2% respectivamente, foram as mais efetivas para a secreção da enzima pelo organismo. Estudos sobre a caracterização da protease revelaram que a temperatura ótima desta enzima foi 70ºC. Em relação a termoestabilidade da enzima, a protease manteve 80% de sua atividade original após 2 h de tratamento a 60ºC. A 70ºC, 70% de sua atividade original foi mantida após 15 min. O pH ótimo para atividade da enzima foi 8,5. Após a incubação da solução enzimática bruta a pH 6,0-10.0 por 2 h a temperatura ambiente, foi observado um decréscimo de em torno de 15% da sua atividade original a pH 8,5. A pH 10,0 o decréscimo na atividade foi de 24%. Na presença de 1.0 M e 5.0 M NaCl, 76% e 37% da atividade da protease foi mantida após 2 h de incubação a 45ºC respectivamente.

Produção, purificação e caracterização de um peptídeo antimicrobiano produzido por uma linhagem de Bacillus sp.P34

Uma bactéria identificada como Bacillus sp. P34 isolada de intestino de peixe (Leporinus sp.) da Bacia Amazônica foi estudada quanto a sua capacidade de produzir substâncias do tipo-bacteriocina. As condições ótimas para produção da substância antimicrobiana foram determinadas. A produção da atividade antimicrobiana foi observada começando na fase exponencial de crescimento, sendo a atividade máxima observada no início da fase estacionária. Os resultados da Análise de Superfície de Resposta mostraram que a máxima produção da atividade antimicrobiana ocorreu a pH inicial entre 6.0 e 8.0 e temperaturas entre 25 e 37C. A substância inibiu bactérias patogênicas e deteriorantes importantes em alimentos como Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, Aeromonas hydrophila, Erwinia carotovora e Pasteurella haemolytica. O teste de termoestabilidade mostrou a perda de atividade quando a temperatura alcançou 100C por 15 minutos. Foi sensível à ação das enzimas proteolíticas tripsina, papaína e pronase E. A substância antimicrobiana apresentou efeito bactericida e bacteriolítico sobre L. monocytogenes e B. cereus a 160 UA ml-1. O crescimento de Escherichia coli and Salmonella Enteritidis foi inibido somente quando o agente quelante EDTA foi adicionado juntamente. A atividade esporocida não foi observada. A análise da cultura de L. monocytogenes depois do tratamento com o composto antimicro

Purificação e caracterização da bacteriocina cereína 8A, produzida por uma ..

Foi estudada uma bacteriocina produzida por uma linhagem de B. cereus 8A, isolado de solo da região Sul do Brasil. Na primeira etapa de estudo determinaram-se as condições básicas de produção de bacteriocina com amplo espectro de ação denominada de Cereína 8A. A bacteriocina bruta inibiu várias bactérias indicadoras, como Listeria monocytogenes, Clostridium perfringens e Bacillus cereus mostrando um efeito bactericida. O teste de termoestabilidade mostrou a perda de atividade quando submetida a uma temperatura a partir de 87ºC. Verificou-se a resistência da bacteriocina bruta frente a diferentes enzimas proteolíticas. A Cereína 8A demonstrou uma ação inibidora em culturas de Escherichia coli e Salmonella Enteritidis, quando tratadas com EDTA. A análise da biomassa de L. monocytogenes e B. cereus após tratamento com a Cereína 8A, através da espectrofotometria de infravermelho determinou alteração no perfil, correspondente à fração dos ácidos graxos da membrana celular bacteriana. A substância peptídica foi separada por meio da precipitação com sulfato de amônio, extração com 1-butanol e aplicação em coluna de cromatografia por troca iônica tipo Q-Sepharose. A Cereína 8A purificada mostrou um peso molecular de aproximadamente 26 kDa. O espectro ultravioleta indica ser um polipeptídeo e o infravermelho acusou a presença de grupos NH e acil na estrutura . Uma hipótese do mecanismo

Production of thermostable glucoamylase by newly isolated Aspergillus flavus A 1.1 and Thermomyces lanuginosus A 13.37

Thirteen thermophilic fungal strains were isolated from agricultural soil, tubers and compost samples in tropical Brazil. Two strains were selected based on of their ability to produce considerable glucoamylase activity while growing in liquid medium at 45ºC with starch as the only carbon source. They were identified as Aspergillus flavus A1.1 and Thermomyces lanuginosus A 13.37 Tsiklinsky. The experiment to evaluate the effect of carbon source, temperature and initial pH of the medium on enzyme production was developed in a full factorial design (2x2x3). Enzyme productivity was influenced by the type of starch used as carbon source. Cassava starch showed to be a better substrate than corn starch for glucoamylase production by A. flavus but for T. lanuginosus the difference was not significant. Enzyme activities were determined using as substrates 0.3% soluble starch, 0.3% maltose or 0.3% of starch plus 0.1% maltose. The enzymes from A. flavus A1.1 hydrolyzed soluble starch preferentially but also exhibited a significant maltase activity. Moreover higher quantities of glucose were released when the substrate used was a mixture of starch and maltose, suggesting that this fungus produced two types of enzyme. In the case T. lanuginosus A 13.37, the substrate specificity test indicated that the enzyme released also hydrolyzed starch more efficiently than maltose, but there was no increase in the liberation of glucose when a mixture of starch and maltose was used as substrate, suggesting that only one type of enzyme was secreted. Glucoamylases produced from A. flavus A1.1 and T. lanuginous A.13-37 have high optimum temperature (65ºC and 70ºC) and good thermostability in the absence of substrate (maintaining 50% of activity for 5 and 8 hours, respectively, at 60ºC) and are stable over in a wide pH range. These new strains offer an attractive alternative source of enzymes for industrial starch processing.

Entre 13 linhagens de fungos filamentosos isolados a partir de amostras de solo agrícola, tubérculos e de material em compostagem, duas foram selecionadas em função da capacidade de crescer em meio líquido contendo amido como única fonte de carbono, a 45ºC, e produzir consideráveis quantidades de glucoamilase. Essas linhagens, identificadas como Aspergillus flavus A1.1 e Thermomyces lanuginosus A13.37, foram utilizadas para desenvolvimento de experimentos para avaliar os efeitos do tipo de amido (milho e mandioca), do pH inicial do meio de cultura (4,0; 5,0 e 6,0) e da temperatura de incubação (40 e 45ºC), em um modelo fatorial (2x3x2), sobre a produção da glucoamilase. O tipo de amido usado como fonte de carbono para o cultivo dos fungos influenciou significativamente a produção de glucoamilase por A. flavus, sendo obtida uma maior quantidade da enzima em meio contendo amido de mandioca do que em meio com amido de milho. A produção da enzima por T. lanuginosus também foi maior em meio contendo amido de mandioca, porém, a diferença não foi estatisticamente significativa. As atividades enzimáticas sobre amido (0,3%), maltose (0,3%) ou sobre mistura de 0,3% de amido com 0,1% de maltose, indicaram que as enzimas de Aspergillus hidrolisaram, preferencialmente, o amido, embora tenham mostrado atividade considerável sobre a maltose. A maior liberação de glicose a partir da mistura de substratos sugeriu que o fungo em questão possa secretar dois tipos diferentes de enzimas. Enzimas produzidas por T. lanuginosus hidrolisaram o amido e a maltose e não liberaram maiores teores de glicose quando o substrato constou de mistura de amido e maltose. As enzimas de Aspergillus e Thermomyces apresentaram elevada temperatura ótima de atividade (65 e 70ºC, respectivamente) com boa termoestabilidade na ausência de substrato (manutenção de 50% da atividade por 5 e 8h respectivamente), além de estabilidade em ampla faixa de pH. Os resultados apresentados indicam uma importante fonte alternativa de glucoamilase para uso no processamento industrial de amido.

Purification and characterization of a new Xylanase from Humicola grisea var. Thermoidea

The thermophilic fungus Humicola grisea var. thermoidea secretes extracellular xylanase when grown on solid and in liquid media containing wheat bran and banana plant residue as substrates, respectively. At 55ºC, xylanase from the culture filtrate of H. grisea var. thermoidea grown on banana stalk retained 50% of its activity after 28 h of incubation. A xylanase (X2) was isolated from solid state cultures with wheat bran as the carbon source. It was purified to apparent homogeneity by ultrafiltration followed by ion-exchange and hydrophobic interaction chromatography on DEAE-Sepharose and Phenyl-Sepharose resins, respectively. The enzyme had an apparent molecular weight of 29 kDa, as determined by SDS-PAGE. The purified enzyme was most active at pH and temperature ranges of 4.5-6.5 and 55-60ºC, respectively. In addition, X2 showed thermostability at 60ºC with a half-life of approx. 5.5 h. The apparent Km values, using soluble and insoluble arabinoxylans as substrates, were 10.87 and 11.20 mg/ml, respectively.

O fungo termofílico Humicola grisea var. secreta xilanase extracelular quando cultivado em meios sólidos e líquidos contendo farelo de trigo e engaço de bananeira como substratos, respectivamente. À temperatura de 55ºC, xilanase do filtrado de meio de cultura de H. grisea var. thermoidea cultivado em engaço de bananeira reteve 50% de sua atividade após 28 de incubação. Uma xilanase (X2) foi isolada de culturas de estado sólido contendo farelo de trigo como fonte de carbono. X2 foi purificada por ultrafiltração, seguido por cromatografias de interação hidrofóbica e troca iônica em resinas de Phenyl-Sepharose e DEAE-Sepharose, respectivamente. A enzima apresentou peso molecular de 29 kDa, como determinado por SDS-PAGE. A enzima purificada foi mais ativa em intervalos de pH e temperatura de 4,5-6,5 and 55-60ºC, respectivamente. Além disso, X2 mostrou termoestabilidade a 60ºC com meia vida de aproximadamente 5,5 h. Os valores de Km aparente, utilizando arabinoxilanas solúveis e insolúveis, foram 10,87 and 11,20 mg/ml, respectivamente.

Purification and characterization of a new Xylanase from Humicola grisea var. Thermoidea

The thermophilic fungus Humicola grisea var. thermoidea secretes extracellular xylanase when grown on solid and in liquid media containing wheat bran and banana plant residue as substrates, respectively. At 55ºC, xylanase from the culture filtrate of H. grisea var. thermoidea grown on banana stalk retained 50% of its activity after 28 h of incubation. A xylanase (X2) was isolated from solid state cultures with wheat bran as the carbon source. It was purified to apparent homogeneity by ultrafiltration followed by ion-exchange and hydrophobic interaction chromatography on DEAE-Sepharose and Phenyl-Sepharose resins, respectively. The enzyme had an apparent molecular weight of 29 kDa, as determined by SDS-PAGE. The purified enzyme was most active at pH and temperature ranges of 4.5-6.5 and 55-60ºC, respectively. In addition, X2 showed thermostability at 60ºC with a half-life of approx. 5.5 h. The apparent Km values, using soluble and insoluble arabinoxylans as substrates, were 10.87 and 11.20 mg/ml, respectively.

O fungo termofílico Humicola grisea var. secreta xilanase extracelular quando cultivado em meios sólidos e líquidos contendo farelo de trigo e engaço de bananeira como substratos, respectivamente. À temperatura de 55ºC, xilanase do filtrado de meio de cultura de H. grisea var. thermoidea cultivado em engaço de bananeira reteve 50% de sua atividade após 28 de incubação. Uma xilanase (X2) foi isolada de culturas de estado sólido contendo farelo de trigo como fonte de carbono. X2 foi purificada por ultrafiltração, seguido por cromatografias de interação hidrofóbica e troca iônica em resinas de Phenyl-Sepharose e DEAE-Sepharose, respectivamente. A enzima apresentou peso molecular de 29 kDa, como determinado por SDS-PAGE. A enzima purificada foi mais ativa em intervalos de pH e temperatura de 4,5-6,5 and 55-60ºC, respectivamente. Além disso, X2 mostrou termoestabilidade a 60ºC com meia vida de aproximadamente 5,5 h. Os valores de Km aparente, utilizando arabinoxilanas solúveis e insolúveis, foram 10,87 and 11,20 mg/ml, respectivamente.

NADP-dependent isocitrate dehydrogenase of Astyanax scabripinnis (Pisces, Characidae) from three altitudes at Grande Stream, Campos do Jordão, SP

Electrokinetic, thermic, and kinetic properties of products of NADP-dependent isocitrate dehydrogenase (IDHP; EC 1.1.1.42) loci of Astyanax scabripinnis (Pisces, Characidae) collected at three different altitudes (700 m, 1,800 m, and 1,920 m) of Grande Stream at Campos do Jordão, State of São Paulo, Brazil, were analyzed. Two IDHP bidirectionally divergent loci, a single skeletal muscle, the IDHP-A*, and a single liver IDHP-B*, both polymorphic, were detected in the three different altitude populations. The variant allele *128 at the IDHP-A* locus, had its highest frequency detected in the 1,920 m population (0.494). Among the nine variant alleles detected at the IDHP-B* locus (*37, *57, *69, *79, *85, *114, *119, *124, and *140), the *37 and 79 were detected only in 1,800 m population. Chi-square values showed that only the 700 m population is not in Hardy-Weinberg equilibrium for the IDHP-A* locus, while for the IDHP-B* locus, no population is. Homogeneity Chi² test indicated that the populations are significantly different in their A and B phenotype frequencies. Wright's FST mean value (0.036 and 0.32, IDHP-A* and IDHP-B*, respectively) was 0.178 for the three altitude populations which means that 82% of total genetic diversity was found among individuals of each one of the populations. Stability at environmental temperatures (16º to 21ºC), and apparent Km and Vmax values of each A-phenotype skeletal muscle crude extract suggest different roles of A-isoforms during the increased lipogenesis that occurs in fish at low temperatures.

Foram analisadas propriedades eletrocinéticas, térmicas e cinéticas dos produtos dos locos que codificam o isocitrato desidrogenase NADP-dependente (IDHP; E.C. 1.1.1.42) como Astyanax scabripinnis (Pisces, Characidae) em três diferentes alturas do Ribeirão Grande, Estado de São Paulo, Brasil. Nas populações das três altitudes foram detectados dois locos da IDHP, bidirecionalmente divergentes, um único em músculo esquelético, o IDHP-A*, e um único em fígado, o IDHP-B*, ambos polimórficos. O único alelo variante no loco IDHP-A*, A*128, mostrou maior freqüência na população de 1.920 m (0,494). Dentre os nove alelos variantes detectados no loco IDHP-B* (*37, *57, *69, *79, *85, *114, *119, *124 e *140), os alelos *37 e *79 apareceram somente na população de 1.800 m. Valores de Qui-quadrado revelaram que para o loco IDHP-A* somente a população de 700 m não está em equilíbrio de Hardy-Weinberg, enquanto para o loco IDHP-B* nenhuma população se encontra em equilíbrio. Qui² da homogeneidade revelou que as populações são significativamente diferentes em suas freqüências fenotípicas para ambos os locos. Valor médio de FST de Wright (0,036 e 0,320, IDHP-A* e IDHP-B*, respectivamente) foi de 0,178 para populações das três altitudes, o que significa que 82% da diversidade gênica total foi detectada entre indivíduos da mesma população. Estabilidades em temperatura ambiente (16º a 21ºC) e valores de Km e Vmax aparentes de extratos de músculo esquelético de cada fenótipo-A sugerem diferentes papéis das isoformas-A na lipogênese aumentada que ocorre nos peixes em baixas temperaturas.

Newcastle disease virus: Some biological characteristics of twelve samples isolated in Brazil / Virus da doença de Newcastle: Algumas características biológicas de 12 amostras isoladas no Brasil

Twelve Brazilian isolates of NDV were studied through evaluation of their biological properties. Three lentogenic, three mesogenic and six velogenic strains of NDV were identified according to their ICPI. They were differentiated from one another by the comparison of the thermostability, elution time and ability to agglutinate horse RBC. Among the lentogenic strains, two isolates resembled the LaSota vaccinal strain and one the B1 strain. None of the isolates resembled the 2C Ulster strain. The mesogenic sample obtained from turkeys could be differentiated from the two mesogenic chicken isolates. The velogenic sample were divided into 4 groups: rapid eluters - thermostable - (+) HA for horse RBC (one sample); rapid eluters thermostable - (-)HA for horse RBC (3 samples); rapid eluters - thermosensibIe - (-)HA for horse RBC (one sample); slow eluters - thermosensibIe (-)HA for horse RBC (one sample).

Foram estudadas algumas propriedades biológicas de 12 amostras de vírus da Doença de Newcastle (VDN), isoladas no Brasil. De acordo com o índice de patogenicidade intracerebral (IPIC), três amostras foram consideradas lentogênicas, três mesogênicas e 6 velogênicas. As amostras fora m diferenciadas entre si pela comparação da termoestabilidade, tempo de eluição e a habilidade de aglutinar hemácias de cavalo. Dentre as amostras lentogênicas dois dos isolados se assemelharam à amostra vacinal La Sota e um à amostra B 1. Nenhum dos isolados se assemelhou á amostra 2C Ulster. O isolado mesogênco obtido de perus pode ser diferenciado dos dois outros isolados mesogênicos obtidos de galinhas. As amostras velogênicas foram divididas em 4 grupos: eluição rápida - termoestabilidade - HA (+) para hemácias de cavalo (uma amostra); eluição rápida - termoestabilidade - HA (-) para hemácias de cavalo (três amostras); eluição rápida - termosensibilidade - HA (-) para hemácias de cavalo (uma amostra); eluição lenta - termosensibilidade - HA (-) para hemácias de cavalo (uma amostra).

Staphylococcal enterotoxins / Enterotoxinas estafilocócicas

Staphylococcal intoxication, caused by enterotoxins produced by species of Staphylococcus, is a constant problem in the Public Health, in consequence of the frequency of cases and thermostability of the toxin. Considering that this microorganism is one of the most common agents isolated from human and animal flora, the review relates briefly about structure, physicochemical and biological properties of staphylococcal enterotoxins and factors involved with their production in foods.

Intoxicação estafilocócica, causada por enterotoxinas produzidas por espécies de Staphylococcus, tem sido um problema constante em Saúde Pública, em vista da freqüência dos casos e da termoestabilidade das toxinas. Considerando que este microrganismo é um dos agentes mais frequentes na microbiota humana e animal, apresenta-se uma breve revisão sobre as características estruturais, propriedades físico-químicas e biológicas das enterotoxinas estafilocócicas, assim como fatores que afetam a sua produção em alimentos.

Staphylococcal enterotoxins. / icas

Staphylococcal intoxication, caused by enterotoxins produced by species of Staphylococcus, is a constant problem in the Public Health, in consequence of the frequency of cases and thermostability of the toxin. Considering that this microorganism is one of the most common agents isolated from human and animal flora, the review relates briefly about structure, physicochemical and biological properties of staphylococcal enterotoxins and factors involved with their production in foods.  

Intoxicação estafilocócica, causada por enterotoxinas produzidas por espécies de Staphylococcus, tem sido um problema constante em Saúde Pública, em vista da freqüência dos casos e da termoestabilidade das toxinas. Considerando que este microrganismo é um dos agentes mais frequentes na microbiota humana e animal, apresenta-se uma breve revisão sobre as características estruturais, propriedades físico-químicas e biológicas das enterotoxinas estafilocócicas, assim como fatores que afetam a sua produção em alimentos.