Use of glycosaminoglycans from Oreochromisniloticus skin as an antioxidant supplement for milt cryopreservation of Brazilian bocachico / Uso de glicosaminoglicanos da pele Oreochromis niloticus como suplemento antioxidante na criopreservação de sêmen de curimatã comum (Prochilodus brevis)

The study aimed to evaluate the in vitro antioxidant action of glycosaminoglycans (GAGs) from the skinof Oreochromis niloticus, and to determine their ideal concentration to supplement the sperm freezing medium of Prochilodus brevis. In experiment 1, the in vitro antioxidant properties of GAGs were verified through the analysis of DPPH, chelating ferrous ability, and total antioxidant capacity. In experiment 2, milt pools were formed, which were frozen in solution supplemented or not with different GAGs concentrations: 0 (control), 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, or 5.0 mg mL-¹ (total of 10 treatments). The samples were evaluated for membrane integrity, DNA integrity, sperm morphology, and sperm kinetics. The results of experiment 1 showed that the GAGs exhibited, with the increase of the concentration, significant antioxidant action, for all the evaluated tests, mainly in the chelating ferrous ability. In experiment 2, it was observed that the increase of GAGs concentration decreased kinetic parameters (P < 0.05), however, the control and 0.5 mg mL-1 GAGs concentration showed similar results. For the other parameters (membrane integrity, DNA integrity, and sperm morphology), there was no decrease in results with the increase of GAGs concentration. In conclusion, GAGs extracted from O. niloticus skin have antioxidant action, and the concentration of 0.5 mg mL-¹ was the most adequate to supplement the P. brevis sperm-freezing medium.

O estudo teve como objetivo avaliar in vitro a ação antioxidante de glicosaminoglicanos (GAGs) da pele de Oreochromis niloticus e determinar sua concentração ideal para suplementar o meio de congelação espermático de Prochilodus brevis. No experimento 1, foram verificadas as propriedades antioxidantes in vitro dos GAGs por meio das análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total. No experimento 2, foram formados pool de sêmen, que foram congelados em solução suplementada, ou não, com diferentes concentrações de GAGs: 0 (controle); 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou5,0 mg mL-¹ (total de 10 tratamentos). As amostras foram avaliadas quanto à integridade da membrana, integridade do DNA, morfologia e cinética espermática. Os resultados do experimento 1, mostraram que os GAGs exibiram, com o aumento da concentração, ação antioxidante significativa, para todos os testes avaliados, principalmente na capacidade quelante do ferro. No experimento 2, observou-se que o aumento da concentração de GAGs diminuiu os parâmetros cinéticos (P < 0,05), porém o controle e a concentração de 0,5 mg mL-1 de GAGs apresentaram resultados semelhantes. Para os demais parâmetros (morfologia, integridade de membrana e de DNA), não houve diminuição dos resultados com o aumento da concentração de GAGs. Em conclusão, os GAGs, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidante, sendo a concentração de 0,5 mg mL-1 a mais adequada para suplementar o meio de congelação espermático de P. brevis.

Use of glycosaminoglycans from Oreochromisniloticus skin as an antioxidant supplement for milt cryopreservation of Brazilian bocachico / Uso de glicosaminoglicanos da pele Oreochromis niloticus como suplemento antioxidante na criopreservação de sêmen de curimatã comum (Prochilodus brevis)

The study aimed to evaluate the in vitro antioxidant action of glycosaminoglycans (GAGs) from the skinof Oreochromis niloticus, and to determine their ideal concentration to supplement the sperm freezing medium of Prochilodus brevis. In experiment 1, the in vitro antioxidant properties of GAGs were verified through the analysis of DPPH, chelating ferrous ability, and total antioxidant capacity. In experiment 2, milt pools were formed, which were frozen in solution supplemented or not with different GAGs concentrations: 0 (control), 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, or 5.0 mg mL-¹ (total of 10 treatments). The samples were evaluated for membrane integrity, DNA integrity, sperm morphology, and sperm kinetics. The results of experiment 1 showed that the GAGs exhibited, with the increase of the concentration, significant antioxidant action, for all the evaluated tests, mainly in the chelating ferrous ability. In experiment 2, it was observed that the increase of GAGs concentration decreased kinetic parameters (P < 0.05), however, the control and 0.5 mg mL-1 GAGs concentration showed similar results. For the other parameters (membrane integrity, DNA integrity, and sperm morphology), there was no decrease in results with the increase of GAGs concentration. In conclusion, GAGs extracted from O. niloticus skin have antioxidant action, and the concentration of 0.5 mg mL-¹ was the most adequate to supplement the P. brevis sperm-freezing medium.(AU)

O estudo teve como objetivo avaliar in vitro a ação antioxidante de glicosaminoglicanos (GAGs) da pele de Oreochromis niloticus e determinar sua concentração ideal para suplementar o meio de congelação espermático de Prochilodus brevis. No experimento 1, foram verificadas as propriedades antioxidantes in vitro dos GAGs por meio das análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total. No experimento 2, foram formados pool de sêmen, que foram congelados em solução suplementada, ou não, com diferentes concentrações de GAGs: 0 (controle); 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou5,0 mg mL-¹ (total de 10 tratamentos). As amostras foram avaliadas quanto à integridade da membrana, integridade do DNA, morfologia e cinética espermática. Os resultados do experimento 1, mostraram que os GAGs exibiram, com o aumento da concentração, ação antioxidante significativa, para todos os testes avaliados, principalmente na capacidade quelante do ferro. No experimento 2, observou-se que o aumento da concentração de GAGs diminuiu os parâmetros cinéticos (P < 0,05), porém o controle e a concentração de 0,5 mg mL-1 de GAGs apresentaram resultados semelhantes. Para os demais parâmetros (morfologia, integridade de membrana e de DNA), não houve diminuição dos resultados com o aumento da concentração de GAGs. Em conclusão, os GAGs, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidante, sendo a concentração de 0,5 mg mL-1 a mais adequada para suplementar o meio de congelação espermático de P. brevis.(AU)

Utilização de soluções de natureza orgânicas em diferentes concentrações, na ativação do sêmen de curimatã comum / Use of organic natural solutions at different concentrations, on activation of the common curimatem semen

A determinação da solução adequada à ativação da motilidade espermática torna-se uma questão importante em trabalhos envolvendo o sêmen de peixes. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a atuação de soluções ativadoras, de composição orgânica, em diferentes concentrações sobre a cinética do sêmen in natura de Prochilodus brevis. O sêmen foi coletado e foram feitas análises de motilidade espermática, velocidade curvilinear (VCL), velocidade em linha reta (VSL) e velocidade média do percurso (VAP) e duração da motilidade espermática. A glicose 200 mM tendeu a apresentar maiores valores que os demais (p<0,05), apresentando diferença em relação à mesma concentração com frutose na VSL. Conclui-se que a glicose 200 mM é o mais recomendado para a ativação espermática de P. brevis.

Determination of the appropriate solution to the activation of sperm motility becomes an important issue in studies involving fish semen. Thus, the objective of this work was to evaluate the performance of activating solutions, of organic composition, in different concentrations on the kinetics of the semen in natura of Prochilodus brevis. Semen was collected and analyzes of sperm motility, curvilinear velocity (VCL), velocity in the straight line (VSL) and mean velocity of the trajectory (VAP) and duration of sperm motility were made. The 200 mM glucose tended to present higher values than the others (p<0.05), presenting difference in relation to the same concentration with fructose in VSL. It is concluded that 200 mM glucose is the most recommended for the sperm activation of P. brevis.

Capacidade fecundante do sêmen congelado de Prochilodus brevis / Fertilizing capacity of the cryopreserved sperm of Prochilodus brevis

Background: Seminal cryopreservation is a technique that optimizes aquacultural production, as it requires less breedingand enables reproduction outside of the breeding season. This technique also helps to preserve species, thus reducing thepressure on the natural stocks. Several studies have sought to develop freezing protocols that result in semen of a goodquality. However, some studies do not evaluate the ability of frozen semen to produce viable larvae. Therefore, the aimof this study was to verify the fertilizing capacity of the frozen semen of Prochilodus brevis.Materials, Methods & Results: Semen from twenty adult males of the Brazilian bocachico was collected and evaluatedto establish the total motility, curvilinear velocity, straight linear velocity, average path velocity, membrane integrity, pH,and concentration. Six pools were formed, each of which was diluted in a freezing medium containing 5% glucose with10% dimethyl sulfoxide (DMSO) or 5% glucose with 10% methyl glycol (MG). The samples were loaded into 0.25 mLFrench straws, frozen in a dry shipper, and stored in a liquid nitrogen canister. The semen was then thawed and evaluatedto establish the total motility, curvilinear velocity, straight linear velocity, average path velocity, and membrane integrity.For the fertilization test, four females were used. The oocytes from each female were divided into three batches and fertilized with either fresh or cryopreserved semen. The rates of fertilization, hatching, and larval survival were then measured.Data were expressed as the mean ± standard deviation and analyzed using SAS (2002). The frozen semen with glucose +DMSO was significantly higher (P < 0.001) than the frozen semen with glucose + MG, in all seminal quality parametersevaluated (63.95 ± 15.88% and 25.36 ± 3.53% for the motility, 36.38 ± 7.02 μm.s-1 and 20.45 ± 2.84 μm.s-1 for the curvilinear velocity, 19.26 ± 2.74 μm.s-1 and...

Utilização de soluções de natureza orgânicas em diferentes concentrações, na ativação do sêmen de curimatã comum / Use of organic natural solutions at different concentrations, on activation of the common curimatem semen

A determinação da solução adequada à ativação da motilidade espermática torna-se uma questão importante em trabalhos envolvendo o sêmen de peixes. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a atuação de soluções ativadoras, de composição orgânica, em diferentes concentrações sobre a cinética do sêmen in natura de Prochilodus brevis. O sêmen foi coletado e foram feitas análises de motilidade espermática, velocidade curvilinear (VCL), velocidade em linha reta (VSL) e velocidade média do percurso (VAP) e duração da motilidade espermática. A glicose 200 mM tendeu a apresentar maiores valores que os demais (p<0,05), apresentando diferença em relação à mesma concentração com frutose na VSL. Conclui-se que a glicose 200 mM é o mais recomendado para a ativação espermática de P. brevis.(AU)

Determination of the appropriate solution to the activation of sperm motility becomes an important issue in studies involving fish semen. Thus, the objective of this work was to evaluate the performance of activating solutions, of organic composition, in different concentrations on the kinetics of the semen in natura of Prochilodus brevis. Semen was collected and analyzes of sperm motility, curvilinear velocity (VCL), velocity in the straight line (VSL) and mean velocity of the trajectory (VAP) and duration of sperm motility were made. The 200 mM glucose tended to present higher values than the others (p<0.05), presenting difference in relation to the same concentration with fructose in VSL. It is concluded that 200 mM glucose is the most recommended for the sperm activation of P. brevis.(AU)

Capacidade fecundante do sêmen congelado de Prochilodus brevis / Fertilizing capacity of the cryopreserved sperm of Prochilodus brevis

Background: Seminal cryopreservation is a technique that optimizes aquacultural production, as it requires less breedingand enables reproduction outside of the breeding season. This technique also helps to preserve species, thus reducing thepressure on the natural stocks. Several studies have sought to develop freezing protocols that result in semen of a goodquality. However, some studies do not evaluate the ability of frozen semen to produce viable larvae. Therefore, the aimof this study was to verify the fertilizing capacity of the frozen semen of Prochilodus brevis.Materials, Methods & Results: Semen from twenty adult males of the Brazilian bocachico was collected and evaluatedto establish the total motility, curvilinear velocity, straight linear velocity, average path velocity, membrane integrity, pH,and concentration. Six pools were formed, each of which was diluted in a freezing medium containing 5% glucose with10% dimethyl sulfoxide (DMSO) or 5% glucose with 10% methyl glycol (MG). The samples were loaded into 0.25 mLFrench straws, frozen in a dry shipper, and stored in a liquid nitrogen canister. The semen was then thawed and evaluatedto establish the total motility, curvilinear velocity, straight linear velocity, average path velocity, and membrane integrity.For the fertilization test, four females were used. The oocytes from each female were divided into three batches and fertilized with either fresh or cryopreserved semen. The rates of fertilization, hatching, and larval survival were then measured.Data were expressed as the mean ± standard deviation and analyzed using SAS (2002). The frozen semen with glucose +DMSO was significantly higher (P < 0.001) than the frozen semen with glucose + MG, in all seminal quality parametersevaluated (63.95 ± 15.88% and 25.36 ± 3.53% for the motility, 36.38 ± 7.02 μm.s-1 and 20.45 ± 2.84 μm.s-1 for the curvilinear velocity, 19.26 ± 2.74 μm.s-1 and...(AU)

Influência do tempo de resfriamento e soluções diluentes sobre a congelabilidade do sêmen de Prochilodus brevis / Influence of cooling time and diluents on the freezability of Prochilodus brevis semen

Background: Prochilodus brevis is a rheophilic fish of economic and ecological importance. However, anthropic action has made its population vulnerable. Thus, the development of reproductive biotechnologies, such as seminal conservation, is necessary to subsidize their fish farming. However, seminal collections are often performed in places with few laboratory resources, demanding studies to determine the maximum time for which sperm can be cooled, as well as its process until frozen. Thus, the present study aimed to evaluate the influence of cooling time and the presence of dilution solutions on cryopreservation of P. brevis semen.Material, Methods & Results: After seminal collection, nine pools were formed and analyzed for seminal pH, concentration, membrane integrity, morphology and spermatic kinetics - motility, curvilinear velocity (VCL), average path velocity (VAP) and straight line velocity (VSL). After the analysis of the pools in natura (control 1), they were processed as follows: 1)- immediate freezing (control 2); 2)- cooling: undiluted, diluted in coconut water powder (ACP-104) or diluted in 5% glucose, followed by cooling at different times (6, 12, 24 or 48 h); 3)- Post-refrigeration freezing: the pools were diluted in their respective diluents and 10% dimethyl sulfoxide. After 15 days, the samples were thawed and analyzed for the aforementioned parameters. For the cooled and post-thawed semen, a completely randomized design with 2 (diluent × cooling time) and 3 (storage form × cooling time and storage form × diluent) factors, respectively, was utilized. ANOVA and Dunnett tests were applied to compare the means. In case of seminal cooling, there was no difference (P > 0.05) in sperm motility between control 1 and the undiluted and diluted treatments in ACP-104 for up to 24 h. After 48 h, only the VCL of the sample diluted in ACP-104 was similar (P > 0.05) to that of control 1.[...]

Influência do tempo de resfriamento e soluções diluentes sobre a congelabilidade do sêmen de Prochilodus brevis / Influence of cooling time and diluents on the freezability of Prochilodus brevis semen

Background: Prochilodus brevis is a rheophilic fish of economic and ecological importance. However, anthropic action has made its population vulnerable. Thus, the development of reproductive biotechnologies, such as seminal conservation, is necessary to subsidize their fish farming. However, seminal collections are often performed in places with few laboratory resources, demanding studies to determine the maximum time for which sperm can be cooled, as well as its process until frozen. Thus, the present study aimed to evaluate the influence of cooling time and the presence of dilution solutions on cryopreservation of P. brevis semen.Material, Methods & Results: After seminal collection, nine pools were formed and analyzed for seminal pH, concentration, membrane integrity, morphology and spermatic kinetics - motility, curvilinear velocity (VCL), average path velocity (VAP) and straight line velocity (VSL). After the analysis of the pools in natura (control 1), they were processed as follows: 1)- immediate freezing (control 2); 2)- cooling: undiluted, diluted in coconut water powder (ACP-104) or diluted in 5% glucose, followed by cooling at different times (6, 12, 24 or 48 h); 3)- Post-refrigeration freezing: the pools were diluted in their respective diluents and 10% dimethyl sulfoxide. After 15 days, the samples were thawed and analyzed for the aforementioned parameters. For the cooled and post-thawed semen, a completely randomized design with 2 (diluent × cooling time) and 3 (storage form × cooling time and storage form × diluent) factors, respectively, was utilized. ANOVA and Dunnett tests were applied to compare the means. In case of seminal cooling, there was no difference (P > 0.05) in sperm motility between control 1 and the undiluted and diluted treatments in ACP-104 for up to 24 h. After 48 h, only the VCL of the sample diluted in ACP-104 was similar (P > 0.05) to that of control 1.[...](AU)

Cryopreservation of Prochilodus brevis semen: freezing media and thawing rates / Criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis: meios de congelação e taxas de descongelação

Prochilodus brevis is a migratory fish, an important component of its river ecosystem and an appreciated animal in northeastern cuisine. However, human activities have threatened its survival. Thus, researchers have become interested in developing genetic material storage protocols, such as seminal cryopreservation. Therefore, determination of the appropriate freezing media and thawing rate is a fundamental step toward the use of this biotechnology in the production of common curimatã and for reducing risks to the species survival. As such, the aim of the current study was to evaluate the effect of different freezing media and thawing rates on the quality of cryopreserved semen from P. brevis. For this study, males received a single dose of pituitary extract of carp 18 hours before semen collection. The semen samples were diluted in 5% glucose + 10% methyl glycol (MG), 5% glucose + 10% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0.9% NaCl + 10% methyl glycol, and 0.9% NaCl + 10% dimethyl sulfoxide, loaded into 0.25-mL straws and frozen in liquid nitrogen vapor. The semen from each treatment was thawed at three different thawing rates: 25 C for 30 sec, 30 C for 16 sec and 40 C for 12 sec. Motility, vitality and morphology analyses were performed by computer-assisted sperm analysis (CASA). The characteristics of the fresh sperm mostly resembled those found in the literature. For the parameter...(AU)

O Prochilodus brevis é um peixe reofílico, importante componente do ecossistema fluvial e apreciado na culinária nordestina. No entanto, ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Desta forma, surge, nos pesquisadores, o interesse no desenvolvimento de protocolos de conservação do material genético, como a criopreservação seminal. Logo, a determinação do meio de congelação e da taxa de descongelação adequados, são passos fundamentais que possibilitarão a utilização dessa biotecnologia na produção de curimatã comum, reduzindo os riscos à sua sobrevivência. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes meios de congelação e taxas de descongelação sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Para isso, 18 horas antes da coleta de sêmen, os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa. Cada animal foi sedado com solução à base de eugenol e o sêmen foi coletado. As amostras foram diluídas em quatro meios de congelação (5% Glicose + Metilglicol 10%; 5% Glicose + DMSO 10%; 0,9% NaCl + Metilglicol 10%; 0,9% NaCl + DMSO 10%) envasadas em palhetas de 0,25 mL e congeladas em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado após sete dias em três taxas de descongelação: 25 C 30 s-1; 30 C 16 s-1; 40 C 12 s-1. Foram feitas as análises de motilidade, vitalidade e morfologia com auxílio de sistema automatizado de análise seminal...(AU)

Cryopreservation of Prochilodus brevis semen: freezing media and thawing rates / Criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis: meios de congelação e taxas de descongelação

Prochilodus brevis is a migratory fish, an important component of its river ecosystem and an appreciated animal in northeastern cuisine. However, human activities have threatened its survival. Thus, researchers have become interested in developing genetic material storage protocols, such as seminal cryopreservation. Therefore, determination of the appropriate freezing media and thawing rate is a fundamental step toward the use of this biotechnology in the production of common curimatã and for reducing risks to the species survival. As such, the aim of the current study was to evaluate the effect of different freezing media and thawing rates on the quality of cryopreserved semen from P. brevis. For this study, males received a single dose of pituitary extract of carp 18 hours before semen collection. The semen samples were diluted in 5% glucose + 10% methyl glycol (MG), 5% glucose + 10% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0.9% NaCl + 10% methyl glycol, and 0.9% NaCl + 10% dimethyl sulfoxide, loaded into 0.25-mL straws and frozen in liquid nitrogen vapor. The semen from each treatment was thawed at three different thawing rates: 25 C for 30 sec, 30 C for 16 sec and 40 C for 12 sec. Motility, vitality and morphology analyses were performed by computer-assisted sperm analysis (CASA). The characteristics of the fresh sperm mostly resembled those found in the literature. For the parameter...

O Prochilodus brevis é um peixe reofílico, importante componente do ecossistema fluvial e apreciado na culinária nordestina. No entanto, ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Desta forma, surge, nos pesquisadores, o interesse no desenvolvimento de protocolos de conservação do material genético, como a criopreservação seminal. Logo, a determinação do meio de congelação e da taxa de descongelação adequados, são passos fundamentais que possibilitarão a utilização dessa biotecnologia na produção de curimatã comum, reduzindo os riscos à sua sobrevivência. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes meios de congelação e taxas de descongelação sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Para isso, 18 horas antes da coleta de sêmen, os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa. Cada animal foi sedado com solução à base de eugenol e o sêmen foi coletado. As amostras foram diluídas em quatro meios de congelação (5% Glicose + Metilglicol 10%; 5% Glicose + DMSO 10%; 0,9% NaCl + Metilglicol 10%; 0,9% NaCl + DMSO 10%) envasadas em palhetas de 0,25 mL e congeladas em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado após sete dias em três taxas de descongelação: 25 C 30 s-1; 30 C 16 s-1; 40 C 12 s-1. Foram feitas as análises de motilidade, vitalidade e morfologia com auxílio de sistema automatizado de análise seminal...

SUPLEMENTAÇÃO DO MEIO DE CONGELAÇÃO SEMINAL DE Prochilodus brevis COM POLISSACARÍDEOS SULFATADOS EXTRAÍDOS DE PELE DE TILÁPIA E DE ALGAS MARINHAS

Prochilodus brevis, ou curimatã comum, é um peixe reofílico que encontra-se com sua sobrevivência ameaçada por ações antrópicas. Assim, esforços pela preservação da espécie têm sido tomados, o que tornou necessário aprimorar as biotécnicas reprodutivas, como a criopreservação seminal, com potenciais agentes antioxidantes. Diante disso, o estudo objetivou elaborar um protocolo de criopreservação seminal de P. brevis suplementando o meio de congelação com polissacarídeos sulfatados (PS), extraídos de algas marinhas (Gracilaria domingensis ou Ulva fasciata) ou pele de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). Para isso, no experimento 1, verificou-se o potencial antioxidante in vitro (análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total) das glicosaminoglicanos (GAG) da pele de O. niloticus e sua suplementação, em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou 5,0 mg/mL), no meio de congelação seminal (Glicose + dimetilsufóxido - DMSO). No experimento 2, o sêmen foi diluído no meio de congelação (Glicose + DMSO) suplementado com diferentes concentrações (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 e 3.0 mg/mL) de PS de duas algas marinhas (G. domingensis ou U. fasciata). Em ambos os experimentos, um tratamento não suplementado foi utilizado como controle, as amostras foram criopreservadas e, após um período, analisadas: cinética (motilidade total; motilidade progressiva; velocidade curvilinear [VCL], velocidade em linha reta [VSL], velocidade média de deslocamento [VAP], linearidade [LIN] e oscilação [WOB]), morfologia, integridade de membrana plasmática (IMP) e de DNA espermáticos (IDE) e potencial de membrana mitocondrial (PMM experimento 2). No experimento 1, foi verificado que os GAG nas maiores concentrações apresentam maior ação antioxidante in vitro, especialmente na atividade quelante do ferro, contudo o aumento das concentrações dos GAG diminuiu os parâmetros cinéticos, porém a concentração de 0,5 mg mL-1 apresentou resultados semelhantes ao controle. Para os parâmetros de morfologia, IMP e IDE, não houve diminuição dos resultados com o aumento das concentrações das GAG. No experimento 2, não houve interação entre as algas e as concentrações. As algas testadas, independentemente da concentração, não diferiram entre si. Ao comparar as concentrações, independentemente da alga, 1,0 mg/mL de PS apresentou melhores resultados para VCL e VSL. Para VAP e WOB, 1,0 mg/mL de PS apresentou melhores resultados, mas diferiu estatisticamente apenas de 3,0 mg/mL. LIN seguiu o mesmo padrão, mas diferiu estatisticamente das concentrações de 2,5 e 3,0 mg/mL de PS. Para motilidade progressiva, 1,0 mg/mL de G. domingensis apresentou resultados superiores em relação ao controle. Para PMM, G. domingensis foi superior a U. fasciata, independentemente da concentração. As menores concentrações (0,5 e 1,0 mg/mL) apresentaram os melhores resultados, independentemente da alga. No entanto, para PMM, o controle foi superior a todos os tratamentos testados. Dessa forma, conclui-se que os GAG, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidantes in vitro e as menores concentrações (0,5 mg/mL) de GAG e PS de G. domingensis são um suplemento em potencial para o meio de congelação de P. brevis.

Prochilodus brevis, or Brazilian bocachico, is a rheophilic fish that meets its threats through anthropic actions. Thus, efforts to preserve the species have been taken, which made it necessary to improve reproductive biotechniques, such as seminal cryopreservation, with potential antioxidant agents. Therefore, the study aimed to develop a protocol for seminal cryopreservation of P. brevis supplementing the freezing medium with sulfated polysaccharides (PS), extracted from seaweed (Gracilaria domingensis or Ulva fasciata) or Nile tilapia skin (Oreochromis niloticus). For this, in experiment 1, the in vitro antioxidant potential (DPPH analysis, iron chelating capacity and total antioxidant capacity) of the O. niloticus skin glycosaminoglycans (GAG) and their supplementation at different concentrations (0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5; 3.0; 3.5; 4.0; 4.5 or 5.0 mg/mL), in the seminal freezing medium (Glucose + dimethyl sufoxide - DMSO). In experiment 2, semen was diluted in freezing medium (Glucose + DMSO) supplemented with different concentrations (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0 mg/mL) of PS from two marine algae (G. domingensis or U. fasciata). In both experiments, an unsupplemented treatment was used as a control, the samples were cryopreserved and, after a period, analyzed: kinetics (total motility; Progressive motility; curvilinear velocity [VCL], straight line velocity [VSL], mean velocity of the path [VAP], linearity [LIN] and wobble [WOB]), morphology, plasma membrane integrity (IMP) and sperm DNA (IDE) and mitochondrial membrane potential (PMM experiment 2). In experiment 1, it was verified that GAGs at higher concentrations have greater antioxidant action in vitro, especially in the chelating activity of iron, however the increase in GAG concentrations decreased the kinetic parameters, but the concentration of 0.5 mg mL-1 presented results similar to the control. For the parameters of morphology, IMP and IDE, there was no decrease in results with increasing concentrations of GAG. In experiment 2, there was no interaction between algae and concentrations. The algae tested, regardless of concentration, did not differ from each other. When comparing the concentrations, regardless of the alga, 1.0 mg/mL of PS showed better results for VCL and VSL. For VAP and WOB, 1.0 mg/mL of PS showed better results, but statistically differed only from 3.0 mg/mL. LIN followed the same pattern, but differed statistically from the concentrations of 2.5 and 3.0 mg/mL of PS. For progressive motility, 1.0 mg/mL of G. domingensis showed superior results compared to the control. For PMM, G. domingensis was superior to U. fasciata, regardless of concentration. The lowest concentrations (0.5 and 1.0 mg/mL) showed the best results, regardless of the alga. However, for PMM, the control was superior to all tested treatments. Thus, it is concluded that the GAG, extracted from the skin of O. niloticus, have antioxidant action in vitro and the lowest concentrations (0.5 mg/mL) of GAG and PS of G. domingensis are a potential supplement for the freezing medium of P. brevis.

Avaliação de diferentes crioprotetores e taxas de diluição na criopreservação seminal de Prochilodus brevis / Evaluation of different crioprotectants and dilution ratios on Prochilodus brevis sperm cryopreservation

Este estudo objetivou caracterizar o sêmen de Prochilodus brevis e avaliar os efeitos de diferentescrioproterores e taxas de diluição sobre a cinética e a morfologia do sêmen criopreservado. Inicialmente,amostras seminais de P. brevis (n = 40) foram analisadas quanto ao volume, pH, osmolaridade, concentração,motilidade e morfologia espermáticas. Para a criopreservação, o material coletado foi distribuído em 10 pools desêmen (n = 10), submetidos a seis tratamentos compostos pela combinação de glicose 5%, dois crioprotetores(DMSO ou MG) e três taxas de diluição (1:3, 1:6 ou 1:9 sêmen:diluidor). As amostras, in natura e pósdescongeladas,foram analisadas quanto à sua morfologia e cinética espermática utilizando o CASA. O sêmen deP. brevis apresentou características semelhantes a demais espécies de Prochilodus. O sêmen congelado comglicose e MG apresentou resultados significativamente superiores (P < 0,05) comparado àquele congeladoutilizando DMSO. As diluições 1:3 e 1:6 apresentaram melhores resultados para glicose + MG, enquanto 1:9 foimelhor para glicose + DMSO. Portanto, a associação glicose + MG, numa taxa de diluição de 1:3 ou 1:6, é amais indicada para a criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis.(AU)

This study aimed to characterize Prochilodus brevis sperm and evaluate the effects of different diluentsand dilution ratios on kinetics and morphology of cryopreserved sperm. Initially, sperm samples of P. brevis(n = 40) were assessed for volume, pH, osmolality, spermatic concentration, motility and morphology. Forcryopreservation, the collected material was distributed in ten pools of semen (n = 10), submitted to sixtreatments composed by a combination of glucose 5% with two cryoprotectants (DMSO or MG) and threedilution ratios (1:3, 1:6 or 1:9 - sperm:diluent). In natura and post-thawed samples were assessed for spermaticmorphology and kinetics using CASA. The sperm of P. brevis showed similar characteristics to otherProchilodus species. Sperm cryopreserved in glucose plus MG presented significantly higher results (P < 0.05)compared to sperm frozen in DMSO. The dilution ratios of 1:3 and 1:6 yielded better results for glucose + MG,while 1:9 was the best dilution for glucose + DMSO. In conclusion, the association of glucose + MG, in adilution ratio of 1:3 or 1:6, is the most indicated for Prochilodus brevis sperm cryopreservation.(AU)

Avaliação de diferentes crioprotetores e taxas de diluição na criopreservação seminal de Prochilodus brevis / Evaluation of different crioprotectants and dilution ratios on Prochilodus brevis sperm cryopreservation

Este estudo objetivou caracterizar o sêmen de Prochilodus brevis e avaliar os efeitos de diferentescrioproterores e taxas de diluição sobre a cinética e a morfologia do sêmen criopreservado. Inicialmente,amostras seminais de P. brevis (n = 40) foram analisadas quanto ao volume, pH, osmolaridade, concentração,motilidade e morfologia espermáticas. Para a criopreservação, o material coletado foi distribuído em 10 pools desêmen (n = 10), submetidos a seis tratamentos compostos pela combinação de glicose 5%, dois crioprotetores(DMSO ou MG) e três taxas de diluição (1:3, 1:6 ou 1:9 – sêmen:diluidor). As amostras, in natura e pósdescongeladas,foram analisadas quanto à sua morfologia e cinética espermática utilizando o CASA. O sêmen deP. brevis apresentou características semelhantes a demais espécies de Prochilodus. O sêmen congelado comglicose e MG apresentou resultados significativamente superiores (P < 0,05) comparado àquele congeladoutilizando DMSO. As diluições 1:3 e 1:6 apresentaram melhores resultados para glicose + MG, enquanto 1:9 foimelhor para glicose + DMSO. Portanto, a associação glicose + MG, numa taxa de diluição de 1:3 ou 1:6, é amais indicada para a criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis.

This study aimed to characterize Prochilodus brevis sperm and evaluate the effects of different diluentsand dilution ratios on kinetics and morphology of cryopreserved sperm. Initially, sperm samples of P. brevis(n = 40) were assessed for volume, pH, osmolality, spermatic concentration, motility and morphology. Forcryopreservation, the collected material was distributed in ten pools of semen (n = 10), submitted to sixtreatments composed by a combination of glucose 5% with two cryoprotectants (DMSO or MG) and threedilution ratios (1:3, 1:6 or 1:9 - sperm:diluent). In natura and post-thawed samples were assessed for spermaticmorphology and kinetics using CASA. The sperm of P. brevis showed similar characteristics to otherProchilodus species. Sperm cryopreserved in glucose plus MG presented significantly higher results (P < 0.05)compared to sperm frozen in DMSO. The dilution ratios of 1:3 and 1:6 yielded better results for glucose + MG,while 1:9 was the best dilution for glucose + DMSO. In conclusion, the association of glucose + MG, in adilution ratio of 1:3 or 1:6, is the most indicated for Prochilodus brevis sperm cryopreservation.

ULTRASSONOGRAFIA MODO-B COMO UMA FERRAMENTA NÃO INVASIVA PARA DETERMINAÇÃO SEXUAL E AVALIAÇÃO DA MATURAÇÃO GONADAL EM Prochilodus brevis (CHARACIFORMES, PROCHILODONTIDAE)

Dentre as espécies de peixes nativas brasileiras, com potencial para exploração, encontra-se a curimatã comum (Prochilodus brevis). Todavia, sua reprodução induzida apresenta alguns entraves, alguns deles devem-se à falta de dimorfismo sexual evidente, inclusive em indivíduos adultos, aliado ao fato de os métodos de sexagem pré-existentes serem invasivos e prejudicarem o bem-estar do animal e consequentemente seu sucesso reprodutivo. Nesse contexto, a ultrassonografia surge como um possível método para determinação sexual nessa espécie. Com o objetivo de verificar a eficácia desse método, foram selecionados ao acaso 32 curimatãs, de ambos os sexos, oriundas de um plantel de 55 animais adultos, capturados no município de Canindé-CE, de onde foram transportados imediatamente para a Universidade Estadual do Ceará. Após o período de adaptação, foi procedida a análise ultrassonográfica desses animais, distribuída em 2 ocasiões, com intervalo de cerca de 6 meses entre elas. Após a análise ultrassonográfica, os animais foram eutanasiados e submetidos à avaliação necroscópica, com foco na morfometria gonadal, e foram coletados fragmentos de ovários e testículos para análise histológica e classificação do estádio de maturação gonadal. Foram realizadas análises de correlação e regressão múltipla (p<0,05), a fim de verificar o grau de associação entre os parâmetros ultrassonográficos e morfométricos, para estabelecer uma equação de predição para o peso gonadal (PG), volume gonadal (VG) e índice gonadossomático (IGS). IGS=16,22 x areatransversa, PG= 30,3 x areatransversa, VG= 0,001260036 x pixels. Também obteve-se um modelo capaz de predizer o sexo dos animais, com base em parâmetros ultrassonográficos. Dessa forma, conclui-se que a ultrassonografia é uma ferramenta útil para realizar a sexagem, estimar o IGS, o peso e o volume gonadal de P. brevis, durante a estação reprodutiva.

The Brazilian bocachico (Prochilodus brevis) is one of many Brazilian native species of fish, with potential to exploitation. However, its induced reproduction has some obstacles, some of them are the absence of evident sexual dimorphism, even if in adults individuals, and t fact of the old methods of sexing be invasive and prejudice the welfare of the animal and its reproductive success. In this canary, the ultrasonography appears as a possible method to sexual determination in this species. With the objective of verify the efficacy of this method, 32 bocachicos of both sexes were selected from a squad of 55 adult animals, captured in Canindé- CE, from where they were transportated to the State University of Ceará. After a adaptation period, they were divided in two groups and analyzed by ultrasonography, with the interval of 6 months between them. So, they were euthanized and the necroscopy was done with the focus on the gonads. Fragments of testicles and ovaries were collected to histologic analyze and classification of the stage of gonadal maturity. Analyzes of correlation and multiple regression were done to verify the degree of association of the ultrasonographic and morphometric parameters, to establish an equation of predition to gonadal weight (WG), gonadal volume (GV) and gonadossomatic index (GSI). IGS=16,22 x transversearea, PG= 30,3 x transversearea, VG= 0,001260036 x pixels. It was selected a model of sex prediction based on the ultrassonografic parameters. In conclusion, the ultrassonography is a useful tool to sex, to estimate the GSI, the gonadal weight and gonadal volume of P. brevis, during the reproductive season.

DOSE INSEMINANTE, VOLUME IDEAL DA SOLUÇÃO ATIVADORA E RESFRIAMENTO DE EMBRIÕES DE CURIMATÃ COMUM (Prochilodus brevis)

O Prochilodus brevis (curimatã comum), espécie de peixe reofílico, vem tendo a sua população natural reduzida devido às ações antrópicas, e apesar de possuir potencial aquícola, sua produção em cativeiro ainda não está bem estabelecida. Portanto, os objetivos deste trabalho foram determinar a dose inseminante e o volume de água (solução ativadora) para otimizar a reprodução em cativeiro de P. brevis; resfriar embriões desta espécie em diferentes soluções crioprotetoras e fases do desenvolvimento embrionário; e caracterizar morfometricamente os embriões. O experimento 1 foi dividido em duas etapas. Na etapa 1, determinou-se a proporção de espermatozoides:ovócito, testando-se seis proporções distintas (3 × 104; 15 × 104; 3 × 105; 3 × 106; 5 × 106; e 1 × 107). Após a definição da melhor dose encontrada na etapa 1, a etapa 2 foi realizada testando-se diferentes volumes de água como solução ativadora (25, 50, 75, 100, 125 e 150 mL de água.2mL de ovócitos-1). Nas duas etapas, foi analisado as taxas de fertilização e eclosão para a definição da melhor dose inseminante e volume da solução ativadora. No experimento 3, foram testadas diferentes soluções crioprotetoras associadas (metanol, DMSO, na concentração de 4,5% ou 9% associados a duas concentrações de sacarose 8,5 e 17% e glicose 8,5%) a dois diferentes estágios do desenvolvimento embrionário (fechamento do blastóporo e aparecimento de vesícula óptica) para a elaboração de um protocolo de resfriamento de embriões. No experimento 1, com resultados obtidos na etapa 1 e 2 observou-se que a proporção de 9,28 ×105 espermatozoides:ovócito e o volume ideal da solução ativadora estimado de 75.64 mL.2mL-1 garantiram boas taxas de fertilização. No experimento 3, não houve interação entre os crioprotetores e o estágio do desenvolvimento embrionário submetido ao resfriamento, podendo ser selecionado ambos os estágios para o resfriamento. Comparando os tratamentos, observou-se que os continham sacarose 17,1% associados ao metanol (4,5% ou 9%) e DMSO (4,5%) apresentaram a menor taxa de embriões degenerados após o resfriamento em relação aos tratamentos com sacarose + glicose 8,5% + 9% DMSO e somente água destilada. No entanto, tais resultados não diferiram dos tratamentos contendo sacarose 17,1% + 9% DMSO e sacarose + glicose 8,5% + 9% metanol. Com resultados obtidos na presente pesquisa, conclui-se que relação de 9,28 ×105 espermatozoides:ovócito associado com o volume de 75,64 mL de água.2mL de ovócitos-1, garantem boas taxas de fertilização na reprodução assistida de P. brevis. Além disso, os embriões de P. brevis podem ser resfriados utilizando sacarose 8,5% ou 17,1% associada a metanol 9% ou a glicose 8,5% + metanol 4,5% + DMSO 4,5% por seis horas de estocagem a -8ºC.

Prochilodus brevis (Brazilian bocachico), a species of reophilic fish, has had its natural population reduced due to anthropic actions, and despite having aquaculture potential, its captive production is not yet well established. Therefore, the objectives of this work were to determine the inseminating dose and water volume (activating solution) to optimize the captive breeding of P. brevis; cooling embryos of this species in different cryoprotective solutions and stages of embryonic development; and morphometrically characterize the embryos. Experiment 1 was divided into two steps. In step 1, the sperm: oocyte ratio was determined by testing six distinct ratios (3 × 104; 15 × 104; 3 × 105; 3 × 106; 5 × 106; and 1 × 107). After defining the best dose found in step 1, step 2 was performed by testing different volumes of water as activating solution (25, 50, 75, 100, 125 and 150 mL of water.2mL of oocytes-1). In both steps, fertilization rates were analyzed to define the best inseminating dose and volume of activating solution. In experiment 3, different associated cryoprotective solutions (methanol, DMSO at a concentration of 4.5% or 9% associated with two concentrations of sucrose 8.5 and 17% and glucose 8.5%) were tested at two different stages of development. embryonic (blastopore closure and appearance of the optic vesicle) for the elaboration of an embryo cooling protocol. In experiment 1, with results obtained in steps 1 and 2, it was observed that the ratio of 9.28 × 105 sperm: oocyte and the ideal volume of the estimated activating solution of 75.64 mL.2mL-1 guaranteed good fertilization rates. In experiment 3, there was no interaction between cryoprotectants and the stage of embryonic development submitted to cooling, and both stages could be selected for cooling. Comparing the treatments, it was observed that they contained 17.1% sucrose associated with methanol (4.5% or 9%) and DMSO (4.5%) presented the lowest rate of degenerate embryos after cooling compared to treatments with sucrose + 8.5% glucose + 9% DMSO and distilled water only. However, such results did not differ from treatments containing sucrose 17.1% + 9% DMSO and sucrose + 8.5% glucose + 9% methanol. With results obtained in the present research, it can be concluded that a ratio of 9.28 × 105 sperm: oocyte associated with the volume of 75.64 mL of water.2mL of oocytes-1, guarantee good fertilization rates in assisted reproduction of P. brevis In addition, P. brevis embryos may be cooled using 8.5% sucrose or 17.1% associated with 9% methanol or 8.5% glucose + 4.5% methanol + 4.5% DMSO for six hours. storage at -8ºC.

INFLUÊNCIA DO TEMPO DE RESFRIAMENTO E DE SOLUÇÕES DILUENTES SOBRE A CONGELABILIDADE DO SÊMEN DE CURIMATÃ COMUM, Prochilodus brevis (CHARACIFORMES, PROCHILODONTIDAE)

Prochilodus brevis é um peixe reofílico de importância econômica e ecológica. Entretanto, a ação antropogênica tem tornado sua população vulnerável. Dessa forma, é necessário o desenvolvimento de biotécnicas reprodutivas, como a conservação seminal, a fim de subsidiar estudos sobre sua piscicultura. Porém, muitas vezes, as coletas seminais ocorrem em locais com poucos recursos laboratoriais e, por isso, são necessários estudos sobre o tempo máximo em que o sêmen pode ser mantido resfriado até ser congelado. Dessa forma, objetivou-se avaliar a influência do tempo de resfriamento e da presença de soluções diluidoras sobre a congelabilidade do sêmen da espécie. Para isso, nove pools foram analisados quanto: concentração, pH, integridade de membrana, morfologia e cinética espermáticas. Após a análise do pool in natura (controle 1), este foi submetido às seguintes etapas: 1- Congelação imediata (controle 2); 2- Resfriamento: Não Diluído, Diluído em água de coco em pó (ACP-104) ou Diluído em Glicose 5%, em diferentes tempos de resfriamento (6, 12, 24 ou 48 h); 3- Congelação pós-resfriamento: os tratamento foram rediluídos nos seus respectivos diluentes, acrescidos de 10% de dimetilsufóxido. Após 15 dias, as amostras foram descongeladas e analisadas quanto aos parâmetros citados anteriormente. Para o sêmen resfriado e o pós-descongelado, foi realizado um delineamento inteiramente casualizado com 2 e 3 fatores, respectivamente, e os testes de ANOVA e Dunnett foram aplicados para a comparação das médias. No que se refere ao resfriamento seminal, para a motilidade espermática não houve diferença (P > 0,05) entre o controle 1 e os tratamentos resfriados Não Diluído e Diluído em ACP-104 por até 24 h. Após 48 h, para velocidade curvilinear (VCL) apenas o tratamento resfriado Diluído em ACP-104 foi semelhante (P > 0,05) ao controle 1. Na comparação da forma de armazenagem (Não Diluído, Diluído em ACP-104 ou Diluído em Glicose) com o tempo de resfriamento, a partir de 24 h a motilidade espermática dos tratamentos resfriados Não Diluído e Diluído em ACP-104 foram superiores (P < 0,05) ao Diluído em Glicose. Após 48 h, o sêmen resfriado Diluído em ACP-104 apresentou uma maior estabilidade (P < 0,05) da motilidade do que os demais tratamentos. Para as velocidades espermáticas, o tratamento resfriado Diluído em Glicose por 48 h apresentou resultados inferiores (P < 0,05) quando comparados aos demais. No que se refere ao sêmen pós-descongelado, o sêmen resfriado Diluído por 6 h, independente do diluente empregado, apresentou valores de cinética espermática superiores (P < 0,05) quando comparado ao controle 2 e aos demais tratamentos. Com relação à forma de armazenagem (Diluído e Não Diluído) e os diluentes empregados, o tratamento previamente resfriado em ACP-104 apresentou a melhor cinética espermática. Portanto, para possíveis ensaios de fertilização, recomenda-se a utilização do diluente ACP-104 no resfriamento seminal de P. brevis por até 48 h ou do sêmen que foi congelado após ter sido resfriado em ACP-104 por no máximo 6 h.

Prochilodus brevis is a rheophilic fish of economic and ecological importance. However, anthropic action has made its population vulnerable. Thus, the development of reproductive biotechnologies, such as seminal conservation, is necessary to subsidize their fish farming. However, seminal collections are often performed in places with few laboratory resources, demanding studies to determine the maximum time for which sperm can be cooled, as well as its process until frozen. Thus, the present study aimed to evaluate the influence of cooling time and the presence of dilution solutions on cryopreservation of P. brevis semen. After seminal collection, nine pools were analyzed for seminal pH, concentration, membrane integrity, morphology and spermatic kinetics. After the analysis of the pools in natura (control 1), they were processed as follows: (1) immediate freezing (control 2); (2) cooling: undiluted, diluted in coconut water powder (ACP-104) or diluted in 5% glucose, followed by cooling at different times (6, 12, 24 or 48 h); (3) Post-refrigeration freezing: the pools were diluted in their respective diluents and 10% dimethyl sulfoxide. After 15 days, the samples were thawed and analyzed for the aforementioned parameters. For the cooled and post-thawed semen, a completely randomized design with 2 and 3 factors, respectively, was utilized. ANOVA and Dunnett tests were applied to compare the means. In case of seminal cooling, there was no difference (P > 0.05) in sperm motility between control 1 and the undiluted and diluted treatments in ACP-104 for up to 24 h. After 48 h, only the curvilinear velocity (VCL) of the sample diluted in ACP-104 was similar (P > 0.05) to that of control 1. When comparing forms of storage (undiluted, diluted in ACP-104 or diluted in glucose) and cooling times, the undiluted samples and the samples diluted in ACP-104 were better (P < 0.05) for all the kinetics parameters analyzed, than those diluted in glucose after 24 h. After 48 h, the cooled semen diluted in ACP-104 presented greater (P < 0.05) motility than the other treated semen samples. The samples diluted in glucose for 48 h presented lower spermatic velocity (P < 0.05) than those subjected to other treatments. Regardless of the diluent used, the post-thawed semen and the cooled semen diluted for 6 h, presented higher sperm kinetic values (P < 0.05) than those of control 2 and other treated samples. Therefore, for fertilization trials, it is recommended to use ACP-104 as diluent for seminal cooling of P. brevis for up to 48 h or semen that has been frozen after cooling in ACP-104 for a maximum of 6 h.

AVALIAÇÃO DE SOLUÇÕES DILUIDORAS E TAXAS DE DESCONGELAÇÃO NO SÊMEN CRIOPRESERVADO DE Prochilodus brevis

A curimatã comum é um peixe reofílico, importante componente do ecossistema fluvial e apreciado na culinária nordestina. No entanto, ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Desta forma, surge nos pesquisadores, o interesse no desenvolvimento de protocolos de conservação do material genético, como a criopreservação seminal. Logo, a determinação do meio de congelação e da taxa de descongelação adequados, são passos fundamentais que possibilitarão a utilização dessa biotecnologia na produção de curimatã comum, reduzindo os riscos à sua sobrevivência. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes soluções diluidoras e taxas de descongelação sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Para isso, 18 horas antes da coleta de sêmen, os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa. Cada animal foi sedado com solução à base de eugenol e o sêmen foi coletado. As amostras foram diluídas em quatro meios de congelação (5% Glicose + Metilglicol 10%; 5% Glicose + Dimetilsulfóxido 10%; 0,9% NaCl + Metilglicol 10%; 0,9% NaCl + Dimetilsulfóxido 10%) envasadas em palhetas de 0,25 mL e congeladas em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado após sete dias em três taxas de descongelação: 25 °C 30 s-1; 30 °C 16 s-1; 40 °C 12 s-1. Foram feitas as análises de motilidade, vitalidade e morfologia com auxílio de sistema automatizado de análise seminal (CASA). As características do sêmen in natura assemelharam-se, em sua maioria, às encontradas na literatura. Para o sêmen criopreservado, os maiores resultados de motilidade total e velocidade curvilinear (VCL) foram obtidos utilizando Glicose e DMSO, independente da taxa de descongelação empregada. Para a velocidade em linha reta (VSL) e velocidade média do percurso (VAP), o DMSO proporcionou os melhores resultados, independente do diluente e da taxa de descongelação. No que se refere à vitalidade, os maiores índices foram alcançados quando se utilizou DMSO e as taxas de descongelação de 30 °C 16 s-1 ou 40 °C 12 s-1. Quanto à análise morfológica, a maior porcentagem de espermatozoides normais foi obtida utilizando as taxas de 25 °C 30 s-1 e 40 °C 12 s-1, independente do meio de congelação. A qualidade seminal sofre interferência do meio de congelação, bem como da interação entre seus componentes (diluente e crioprotetor) e da taxa de descongelação empregada. Sob as condições metodológicas empregadas, recomenda-se a criopreservação do sêmen de P. brevis em 5% Glicose + DMSO 10% e descongelação a 30 °C durante 16 segundos ou 40 °C durante 12 segundos.

Curimatã comum is a migratory fish, an important component of river ecosystem and appreciated in the northeastern cuisine. However, human activities have threatened their survival. Thus arises in the researchers the interest in the development of genetic material storage protocols, such as seminal cryopreservation. Therefore, determining the appropriate freezing media and thawing rate are fundamental steps that will enable the use of this biotechnology in the production of common curimatã, reducing the risk to their survival. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effect of different freezing media and thawing rates on the quality of P. brevis cryopreserved semen. For that, 18 hours before semen collection, males received a single dose of pituitary extract of carp. Each animal was sedated with eugenol solution-based and the semen was collected. Samples were diluted in four freezing media (5% Glucose + methyl glycol 10%; 5% Glucose + Dimethylsulfoxide 10%; 0.9% NaCl + methyl glycol 10%, 0.9% NaCl + Dimethylsulfoxide 10%) loaded in straws 0, 25 mL and frozen in liquid nitrogen vapor. The semen was thawed after seven days in three thawing rates: 25 °C 30 sec-1; 30 °C 16 sec-1; 40 °C 12 sec-1. The motility, vitality and morphology analyzes were performed by computer assisted sperm analysis (CASA). The in natura semen characteristics resembled, mostly, those found in the literature. For cryopreserved semen, the greatest results of total motility and curvilinear velocity (VCL) were obtained using Glucose and DMSO, regardless of thawing rate employed. For the straight-line velocity (VSL) and average path velocity (VAP), DMSO showed the best results, regardless of the diluent and thawing rate. As regards the vitality, the highest values were achieved when DMSO and thawing rates 30 °C/16 sec or 40 °C/12 sec were used. As to morphological analysis, the greatest percentage of normal sperm cells was obtained using the rates 25 °C/30 sec and 40 °C/12 sec, regardless of freezing media. The sperm quality suffers interference from the freezing media, as well as the interaction between its components (diluent and cryoprotectant) and the thawing rate used. Under the methodological conditions employed, it is recommended to P. brevis semen cryopreservation the use 5% Glucose + cryoprotectant DMSO 10% and thawing rate at 30 °C for 16 seconds or 40 °C for 12 seconds.

ANÁLISE CINÉTICA, MORFOLÓGICA E BIOQUÍMICA DO SÊMEN DE CURIMATÃ COMUM Prochilodus brevis (Teleostei, Characiforme) DENTRO E FORA DA ESTAÇÃO REPRODUTIVA

O curimatã comum caracteriza-se como um peixe reofílico, pois necessita realizar a migração para a reprodução em direção a cabeceira do rio durante a estação chuvosa. As modificações ambientais geradas pelas chuvas promovem a maturação gonadal e consequente desova, tendo essa espécie uma sazonalidade reprodutiva. Dessa forma, esse estudo teve como objetivo comparar as características físico-químicas, a cinética, a morfologia e a bioquímica do sêmen de Prochilodus brevis induzidos hormonalmente à reprodução em cativeiro, na estação reprodutiva e não reprodutiva. Para isso, foram realizadas quatro coletas ao longo do período de um ano. Durante as coletas, os reprodutores foram induzidos hormonalmente à espermiação. Os animais foram sedados, submetido à leitura do chip, medidos e pesados. O volume do ejaculado, foi aferido por meio de seringas graduadas e a leitura do pH do sêmen foi realizada com o auxílio de fitas de pH. A concentração espermática foi realizada em câmara de Neubauer. Para a análise da cinética foi utilizado o sistema de análise seminal auxiliada por computador (CASA). Foram confeccionados esfregaços corados para observar a presença e tipos de morfoanomalias espermáticas. O sêmen de cada animal foi centrifugado, para a análise do plasma seminal. Nessas análises foram avaliadas as concentrações de proteínas totais, glicose, frutose, triglicerídeo, cálcio e cloreto, através de kits bioquímicos. Os dados de pH do sêmen de P. brevis, sugerem condição alcalina do sêmen dentro do esperado para peixes de água doce (8,23 a 8,65). Não houve diferença entre a estação reprodutiva e não reprodutiva para o volume seminal e para a concentração espermática. Em relação a análise bioquímica, a concentração de proteínas totais (1,51 ± 0,06 g dL-1), glicose (79,44 ± 1,88 mg dL-1) e triglicerídeos (61,59 ± 8,10 mg dL-1) no plasma seminal, apresentaram uma maior concentração na estação não reprodutiva. Já os íons cálcio, apresentaram-se mais concentrados na estação reprodutiva (15,98 ± 1,02 mg dL-1) enquanto os íons cloreto não apresentaram diferença entre as concentrações nos períodos analisados. Em relação as velocidades somente a VSL apresentou um valor maior na estação não reprodutiva (44,06 ± 1,33 um s-1). Na morfologia dos espermatozoides houve diferença significativa, tendo a estação reprodutiva uma porcentagem de espermatozoides normais superior a estação não reprodutiva. Assim, podemos concluir que as características físicas, cinéticas, morfológicas e bioquímicas do sêmen de Prochilodus brevis, mantidos em cativeiro, sofrem influência da estação reprodutiva. No entanto, esses animais permanecem aptos à reprodução quando induzidos hormonalmente, na estação reprodutiva e na estação não reprodutiva.

The common curimatã is characterized as a rheophilic fish, as it needs to migrate for reprodution toward the headwaters of the river during the rainy season. The environmental changes generated by the rains promote maturation and subsequent spawning, thus this species has reproductive seasonality. This study aimed to compare physico-chemicals characteristics, kinetics, morphology and biochemical composition of Prochilodus brevis sêmen, hormonally induced to captive breeding, between reproductive and non-reproductive season. For this, four samples were conducted over a period of one year. During the samples, breeders were induced hormonally to spermiation. The animals were sedated, identified, measured and weighted. The ejaculate volume was measured using graduated syringes and the pH analysis was performed using pH strips. The sperm concentration was performed in a Neubauer chamber. For kinetic the Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) was used. Stained smears were prepared to observe the presence and types of sperm morphological abnormalities. Semen from each fish was centrifuged for the analyses of the seminal plasma. In these analyzes were performed concentrations of total protein, glucose, fructose, triglyceride, calcium and chloride by biochemical kits. The pH data of Prochilodus brevis semen suggest an alkaline condition of semen, as expected for freshwater fish (8.23 to 8.65). There was no difference between breeding and non-breeding season for semen volume and sperm concentration, whereas in relation to plasma volume were differences between the periods analyzed. There was a statistical difference in the seminal plasma biochemistry parameters. The concentration of total protein (1.51 ± 0.06 dL g-1), glucose (79.44 ± 1.88 mg dL-1) and triglycerides (61.59 ± 8.10 mg dL-1) in seminal plasma were higher in the non-breeding season. On the other hand, the calcium ions, were more concentrated in the breeding season (15.98 ± 1.02 mg dL-1) and the chloride ions concentration showed no difference between the analyzed periods. The sperm morphology showed significant difference, with the breeding season presenting a higher percentage of normal sperm than non-breeding season. Thus, we can conclude that the physical, kinetic, morphological and biochemical features of Prochilodus brevis semen, kept in captivity, are influenced by reproductive season.

O descarte de pescado na pesca com rede de cerco no baixo rio Solimões, Amazônia Central

Discarding part of the catch is a common practice in worldwide fisheries. The make-up of the discards needs to be studied to evaluate the impact on the fishery as well as to correct data for stock assessment. It is also useful for the identification of commercially valuable species. 84 sets from 18 vessels in Tefé's purse seine fleet were observed over nine trips to the Lower Solimões River during the first semester of 1997. A questionnaire was filled out on board with the following information: date, hour of set, climate, name of the boat and skipper, fishing spot, gear used, size and mesh of the net, retained and discarded catch per species. A variation in the percentage of discards was observed over the months. Discards were higher than 20% until February, and from May onwards, but were less in March and April. Species were identified according to the following grouping: not discarded; occasionally discarded; and, always discarded. The mean fork length of discards was lower than that of retained fish for the following species: apapá; aracu; mapará; pacu; and, peixe-cachorro. However, there but was no significant difference in the sizes of discarded and retained aracu, branquinha, cubiu and sardinha. The fishermen had developed a net to select larger fish, the "escolhedeira", which allowed smaller fish to escape alive. Curimatã, matrinchã, pescada, cará and tucunaré were not discarded due to wide acceptance of these products in the local markets. Some discarded species like apapá, cubiu and branquinha that were often present in the catch have potential for alternative uses.

O descarte de parte da captura é pratica comum em pescarias de todo o mundo. A avaliação do impacto da pesca requer conhecer as características deste descarte e é útil para a identificação de itens utilizáveis comercialmente. Foram realizadas nove excursões de acompanhamento na região do baixo rio Solimões, em barcos de pesca comercial com redinha, durante o primeiro semestre de 1997, totalizando 18 barcos acompanhados, obtendo-se dados de 84 lances. A bordo foi preenchido um questionário com: data, hora do lance, clima, nome da embarcação e do encarregado, local de pesca, tipo de utensílio usado na captura, tamanho e malha da rede, captura por espécie em kg. Há variação no percentual descartado ao longo dos meses, havendo menor rejeição nos meses de março e abril. Descartes superiores a 20% ocorrem até fevereiro, voltando a repetir o padrão em maio. Itens não descartados, ocasionalmente descartados e sempre descartados foram determinados. Os tamanhos médios (comprimento furcal) das capturas descartadas foram inferiores aos da capturas conservadas para o apapá, aracu, mapará, pacu e peixe-cachorro. Porém, não apresentaram diferenças significativas para o aracu, a branquinha, o cubiu e a sardinha. Os pescadores utilizam uma rede para seleção do pescado grande, a "escolhedeira", permitindo aos peixes pequenos escaparem ainda com vida. Curimatã, matrinchã, pescada, cará e tucunaré grandes ou pequenos não são descartados devido à ampla aceitação destes produtos nos mercados locais. Algumas espécies rejeitadas, como apapá, cubiu, branquinha foram comuns nas capturas, apresentando potencial para uso alternativo.

O descarte de pescado na pesca com rede de cerco no baixo rio Solimões, Amazônia Central

Discarding part of the catch is a common practice in worldwide fisheries. The make-up of the discards needs to be studied to evaluate the impact on the fishery as well as to correct data for stock assessment. It is also useful for the identification of commercially valuable species. 84 sets from 18 vessels in Tefé's purse seine fleet were observed over nine trips to the Lower Solimões River during the first semester of 1997. A questionnaire was filled out on board with the following information: date, hour of set, climate, name of the boat and skipper, fishing spot, gear used, size and mesh of the net, retained and discarded catch per species. A variation in the percentage of discards was observed over the months. Discards were higher than 20% until February, and from May onwards, but were less in March and April. Species were identified according to the following grouping: not discarded; occasionally discarded; and, always discarded. The mean fork length of discards was lower than that of retained fish for the following species: apapá; aracu; mapará; pacu; and, peixe-cachorro. However, there but was no significant difference in the sizes of discarded and retained aracu, branquinha, cubiu and sardinha. The fishermen had developed a net to select larger fish, the "escolhedeira", which allowed smaller fish to escape alive. Curimatã, matrinchã, pescada, cará and tucunaré were not discarded due to wide acceptance of these products in the local markets. Some discarded species like apapá, cubiu and branquinha that were often present in the catch have potential for alternative uses.

O descarte de parte da captura é pratica comum em pescarias de todo o mundo. A avaliação do impacto da pesca requer conhecer as características deste descarte e é útil para a identificação de itens utilizáveis comercialmente. Foram realizadas nove excursões de acompanhamento na região do baixo rio Solimões, em barcos de pesca comercial com redinha, durante o primeiro semestre de 1997, totalizando 18 barcos acompanhados, obtendo-se dados de 84 lances. A bordo foi preenchido um questionário com: data, hora do lance, clima, nome da embarcação e do encarregado, local de pesca, tipo de utensílio usado na captura, tamanho e malha da rede, captura por espécie em kg. Há variação no percentual descartado ao longo dos meses, havendo menor rejeição nos meses de março e abril. Descartes superiores a 20% ocorrem até fevereiro, voltando a repetir o padrão em maio. Itens não descartados, ocasionalmente descartados e sempre descartados foram determinados. Os tamanhos médios (comprimento furcal) das capturas descartadas foram inferiores aos da capturas conservadas para o apapá, aracu, mapará, pacu e peixe-cachorro. Porém, não apresentaram diferenças significativas para o aracu, a branquinha, o cubiu e a sardinha. Os pescadores utilizam uma rede para seleção do pescado grande, a "escolhedeira", permitindo aos peixes pequenos escaparem ainda com vida. Curimatã, matrinchã, pescada, cará e tucunaré grandes ou pequenos não são descartados devido à ampla aceitação destes produtos nos mercados locais. Algumas espécies rejeitadas, como apapá, cubiu, branquinha foram comuns nas capturas, apresentando potencial para uso alternativo.