LECTINA RELACIONADA AO FIBRINOGÊNIO DO OURIÇO-DO-MAR Echinometra lucunter: ISOLAMENTO, SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS E ATIVIDADE ANTIMICROBIANA

Uma das primeiras linhas de defesa dos invertebrados está relacionada ao reconhecimento dos patógenos por receptores/proteínas de reconhecimento padrão (PRRs/PRPs) e moléculas de reconhecimento. Dentre elas, destacam-se as proteínas relacionadas ao fibrinogênio (FRePs) identificadas nos invertebrados e que, em sua maioria, atuam como PRPs desempenhando papéis importantes na aglutinação microbiana, lise e clearance bacteriano e na defesa antiparasitária. Uma lectina relacionada ao fibrinogênio chamada de ELL foi isolada do fluido celomático do ouriço-do-mar Echinometra lucunter por cromatografia de afinidade em goma de xantana. ELL é um dímero composto por subunidades de 25 kDa, unidas por uma ligação dissulfeto. A nova lectina foi inibida por glicoproteínas como mucinas (PSM II, PSM III e BSM) e tiroglobulina. A sequência de aminoácidos de ELL foi determinada por espectrometria de massas. O monômero de ELL consiste de 229 aminoácidos, incluindo sete cisteínas envolvidas em três ligações dissulfeto intracadeia conservadas e uma ligação dissulfeto intercadeia. A sequência completa de ELL possui motivos conservados e domínio de fibrinogênio na porção C-terminal típico de proteínas relacionadas ao fibrinogênio. Um modelo tridimensional de ELL foi previsto por homologia, revelando que a proteína possui dois domínios de reconhecimento a carboidratos, o DRC A está localizado na região N-terminal e parece interagir com N-acetil-manosamina e o DRC B encontra-se na porção C-terminal e pode ligar-se a N-acetil-galactosamina. Em ensaios de atividade biológica, ELL foi capaz de inibir o crescimento de bactérias Gram-positivas patogênicas, além de reduzir a biomassa e viabilidade celular do biofilme formado por bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, sugerindo sua capacidade de reconhecer patógenos.

One of the first lines of defense for invertebrates is related to the recognition of pathogens by standard recognition receptors / proteins (PRRs / PRPs) and recognition molecules. Among them, fibrinogen-related proteins (FRePs) that are identified in invertebrates stand out, and that, in their majority, act as PRPs playing important roles in microbial agglutination, bacterial lysis and clearance and in antiparasitic defense. A fibrinogen-related lectin called ELL was isolated from the coelomic fluid of the sea urchin Echinometra lucunter by affinity chromatography on xanthan gum. ELL is a dimer composed of 25 kDa subunits, joined by a disulfide bond. The new lectin was inhibited by glycoproteins such as mucins (PSM II, PSM III and BSM) and thyroglobulin. The amino acid sequence of ELL was determined by mass spectrometry. The ELL monomer consists of 229 amino acids, including seven cysteines involved in three conserved intrachain disulfide bonds and an interchain disulfide bond. The complete ELL sequence has conserved motifs and fibrinogen domain in the typical C-terminal portion of fibrinogen-related proteins. A three-dimensional model of ELL was predicted by homology, revealing that the protein has two carbohydrate recognition domains, CRD A is located in the N-terminal region and appears to interact with N-acetyl-mannosamine and CRD B is found in the C-terminal and can bind to N-acetyl-galactosamine. In biological activity assays, ELL was able to inhibit the growth of pathogenic Gram-positive bacteria, in addition to reducing the biomass and cell viability of the biofilm formed by Gram-positive and Gram-negative bacteria, suggesting its ability to recognize pathogens.

Distribuicao espaco-temporal do ourico-do-mar Echinometra lucunter (LINNAEUS, 1758) (ECHINODERMATA: ECHINOIDEA) na Praia do Pacheco, Ceara

A espécie Echinometra lucunter (Linnaeus, 1758) tem grande importância ecológica, por modificar a arquitetura do ecossistema e a estrutura da comunidade residente. O objetivo do presente trabalho foi descrever e identificar o seu padrão de distribuição espaço-temporal numa área entremarés da Praia do Pacheco, Caucaia Ceará. Para análise da distribuição espacial e abundância de Echinometra lucunter, realizou-se amostragens mensais nas marés baixas de sizígia (maio/2019 a fevereiro/2020); traçou-se nos recifes de arenito três transectos de 150 m (T1, T2 e T3), perpendiculares a linha de costa, em direção ao mar e equidistantes 100 m. Coletou-se de cada transecto, cinco amostras, de pontos sorteados em intervalos de 30 m (0, 30, 60, 90, 120, e 150 m). A área amostral em cada ponto foi delimitada com um quadrado de 50 x 50 cm, e os ouriços-do-mar encontrados no quadrado foram contados. Dividiu-se o local em cinco áreas: A1 (0-30 m), A2 (31-60 m), A3 (61-90 m), A4 (91-120 m) e A5 (121-150 m), cada uma com cinco pontos aleatórios de cada transecto. Para a análise morfométrica de Echinometra lucunter, coletou-se nas marés baixas de sizígia (dezembro/2020 e janeiro/2021), 34 exemplares de ambientes protegidos (poças de maré) e 47 indivíduos de locais expostos (zonas de arrebentação). Mensurou-se as variáveis: peso total, peso da lanterna de Aristóteles e peso gonadal (em gramas); altura, diâmetro maior, espessura da carapaça, altura da lanterna de Aristóteles (em centímetros). Com esses dados, obteve-se a esfericidade, o índice da lanterna de Aristóteles e o índice gonadal. Contabilizou-se 661 ouriços-do-mar em 750 quadrados, sendo que 1 indivíduo estava na A1 (0 inds/m²), 59 animais na A2 (16 inds/m²), 220 na A3 (59 inds/m²), 181 na A4 (49 inds/m²) e 200 espécimes na A5 (54 inds/m²). As maiores densidades de ouriços-domar ocorreram nos meses secos (setembro/2019 a novembro/2019) e com baixas pluviosidades. O padrão de distribuição foi agregado, com ocupação dos animais nas áreas mais próximas do mar. Houve diferença significativa entre as abundâncias médias das cinco áreas (p0,05). Não houve variações significativas entre as áreas A3 e A4 e entre as áreas A4 e A5 (p>0,05). As variáveis morfométricas espessura da carapaça (cm) e índice gonadal variaram significativamente, sendo maiores nos ouriços-do-mar coletados dos ambientes expostos (zonas de arrebentação).

The species Echinometra lucunter (Linnaeus, 1758) has great ecological importance, as it modifies the ecosystem's architecture and the structure of the resident community. The objective of the present work was to describe and identify its spatiotemporal distribution pattern in an intertidal area of Praia do Pacheco, Caucaia Ceará. To analyze the spatial distribution and abundance of Echinometra lucunter, monthly samplings were carried out at low tides of syzygy (May/2019 to February/2020); three 150 m transects (T1, T2 and T3) were traced in the sandstone reefs, perpendicular to the coastline, towards the sea and equidistant 100 m. Five samples were collected from each transect, from points drawn at intervals of 30 m (0, 30, 60, 90, 120, and 150 m). The sampling area at each point was delimited with a 50 x 50 cm square, and the sea urchins found in the square were counted. The site was divided into five areas: A1 (0-30 m), A2 (31-60 m), A3 (61-90 m), A4 (91-120 m) and A5 (121-150 m), each one with five random points from each transect. For the morphometric analysis of Echinometra lucunter, 34 specimens from protected environments (tide pools) and 47 individuals from exposed areas (surf zones) were collected at low tides of syzygy (December/2020 and January/2021). The following variables were measured: total weight, weight of Aristotle's lantern and gonadal weight (in grams); height, larger diameter, carapace thickness, height of Aristotle's lantern (in centimeters). With these data, the sphericity, the Aristotle's lantern index and the gonadal index were obtained. There were 661 sea urchins in 750 squares, with 1 individual in the A1 (0 inds/m²), 59 animals in the A2 (16 inds/m²), 220 in the A3 (59 inds/m²), 181 in the A4 (49 inds/m²) and 200 specimens on the A5 (54 inds/m²). The highest densities of sea urchins occurred in the dry months (September/2019 to November/2019) and with low rainfall. The distribution pattern was aggregated, with animals occupying the areas closest to the sea. There was a significant difference between the average abundances of the five areas (p0.05). There were no significant variations between areas A3 and A4 and between areas A4 and A5 (p>0.05). The morphometric variables carapace thickness (cm) and gonadal index varied significantly, being higher in sea urchins collected from exposed environments (surf zones).

Comparative effects of dietary sea urchin shell powder and feed additives on meat quality and fatty acid profiles of broiler breast meat / Efeitos comparativos do pó da casca do ouriço-do-mar e suplementos de dieta na qualidade da carne e no perfil de ácidos graxos da carne do peito de frangos de corte

This study was a small pen trial in which we investigated comparative effects of dietary sea urchin shell powder and feed additives on meat quality and fatty acid profiles of broiler breast meat. A total of 108 male broilers were assigned to 3 groups (control, 1% sea urchin shell powder, and 1% feed additives) with 3 replicates of 12 chicks per pen in a completely randomized design for 28 days. The following parameters have been investigated: proximate composition (DM, CP, EE, and ash), physicochemical properties (pH, TBARS, cooking loss and DPPH radical scavenging), meat color and fatty acid profiles. No remarkable effects between treatment and storage day were observed for proximate composition, physicochemical properties, meat color and fatty acid profiles. In conclusion, diets with 1% sea urchin shell powder have the ability to increase DPPH radical scavenging and unsaturated fatty acid, indicating an opportunity for partial diet substitution in comparison with 1% feed additives.

Nesse ensaio investigaram-se os efeitos comparativos do pó da casca do ouriço-do-mar e suplementos alimentares sobre a qualidade de carne e o perfil de ácidos graxos de carne de peito de frangos de corte. Cento e oito frangos de corte machos foram distribuídos em 3 grupos (controle, 1% pó da casca do ouriço-do-mar, 1% aditivos alimentares), com 3 repetições, com 12 frangos por gaiola, num esquema aleatório, durante 28 dias. Foram investigados os seguintes parâmetros: composição aproximada (MS, PB, EE e cinzas), propriedades físico-químicas (pH, TBARS, perda no cozimento e o radical livre DPPH), cor da carne e ácidos graxos. Não foi observado nenhum efeito significativo entre o tratamento e o dia de armazenagem para a composição aproximada, propriedades físico-químicas, cor da carne e ácidos graxos. Os resultados mostram que rações com pó da casca do ouriço-do-mar são capazes de aumentar o radical livre DPPH e os ácidos graxos não saturados e revelam uma oportunidade para a substituição parcial da ração com 1% de aditivos alimentares.

Comparative effects of dietary sea urchin shell powder and feed additives on meat quality and fatty acid profiles of broiler breast meat / Efeitos comparativos do pó da casca do ouriço-do-mar e suplementos de dieta na qualidade da carne e no perfil de ácidos graxos da carne do peito de frangos de corte

This study was a small pen trial in which we investigated comparative effects of dietary sea urchin shell powder and feed additives on meat quality and fatty acid profiles of broiler breast meat. A total of 108 male broilers were assigned to 3 groups (control, 1% sea urchin shell powder, and 1% feed additives) with 3 replicates of 12 chicks per pen in a completely randomized design for 28 days. The following parameters have been investigated: proximate composition (DM, CP, EE, and ash), physicochemical properties (pH, TBARS, cooking loss and DPPH radical scavenging), meat color and fatty acid profiles. No remarkable effects between treatment and storage day were observed for proximate composition, physicochemical properties, meat color and fatty acid profiles. In conclusion, diets with 1% sea urchin shell powder have the ability to increase DPPH radical scavenging and unsaturated fatty acid, indicating an opportunity for partial diet substitution in comparison with 1% feed additives.(AU)

Nesse ensaio investigaram-se os efeitos comparativos do pó da casca do ouriço-do-mar e suplementos alimentares sobre a qualidade de carne e o perfil de ácidos graxos de carne de peito de frangos de corte. Cento e oito frangos de corte machos foram distribuídos em 3 grupos (controle, 1% pó da casca do ouriço-do-mar, 1% aditivos alimentares), com 3 repetições, com 12 frangos por gaiola, num esquema aleatório, durante 28 dias. Foram investigados os seguintes parâmetros: composição aproximada (MS, PB, EE e cinzas), propriedades físico-químicas (pH, TBARS, perda no cozimento e o radical livre DPPH), cor da carne e ácidos graxos. Não foi observado nenhum efeito significativo entre o tratamento e o dia de armazenagem para a composição aproximada, propriedades físico-químicas, cor da carne e ácidos graxos. Os resultados mostram que rações com pó da casca do ouriço-do-mar são capazes de aumentar o radical livre DPPH e os ácidos graxos não saturados e revelam uma oportunidade para a substituição parcial da ração com 1% de aditivos alimentares.(AU)

Chemical defense in the red seaweed Plocamium brasiliense: spatial variability and differential action on herbivores / Defesa química na macroalga marinha vermelha Plocamium brasiliense: variabilidade espacial e diferentes ações sobre herbívoros

Species of Plocamium are known as prolific sources of halogenated secondary metabolites exhibiting few explored ecological roles. In this study the crude extracts from specimens of P. brasiliense collected in two distinct places, Enseada do Forno and Praia Rasa, Búzios, Estado do Rio de Janeiro, were evaluated as defense against the sea urchin Lytechinus variegatus and the crab Acanthonyx scutiformis. These specimens produce a similar amount of crude extract and also halogenated monoterpene compound-types, but individuals of P. brasiliense from Praia Rasa exhibit a major compound representing about 59% of the total chemicals. Natural concentrations of the crude extracts obtained from both specimens of P. brasiliense significantly inhibited the herbivory by the sea urchin L. variegatus, but had no significant effect on the feeding by A. scutiformis, a crab commonly associated to chemically defended host. Crude extract from P. brasiliense collected at Praia Rasa was more efficient as defense against L. variegatus than that crude extract from populations of this alga from Enseada do Forno, probably due to presence of a major secondary metabolite. These two studied population live under different environmental conditions, but they are only about 30 Km apart. However, it is impossible to affirm that environmental characteristics (abiotic or biotic) would be responsible for the difference of defensive potential found in the two populations of P. brasiliense studied here. Further genetic studies will be necessary to clarify this question and to explain why populations of a single species living in different but close locations can exhibit distinct chemicals.(AU)

Espécies de Plocamium são conhecidas como fontes prolíficas de metabólitos secundários halogenados com significados ecológicos pouco conhecidos. Neste trabalho extratos brutos de espécimes de P. brasiliense coletados em duas localidades distintas, Enseada do Forno e Praia Rasa, Búzios, Estado do Rio de Janeiro, foram avaliados como defesa química contra o ouriço Lytechinus variegatus e o caranguejo Acanthonyx scutiformis. Estes espécimes produzem teores similares de extrato bruto e tipos de substâncias monoterpenos halogenados, mas os indivíduos da Praia Rasa possui um componente majoritário representando 59% do total de metabólitos. Concentrações naturais dos extratos brutos destes espécimes inibiram significativamente o consumo por L. variegatus, mas não causaram qualquer efeito sobre A. scutiformis, um caranguejo comumente associado a P. brasiliense, um hospedeiro quimicamente defendido. O extrato bruto de P. brasiliense coletada na Praia Rasa foi mais eficiente como defesa frente a L. variegatus do que aquele obtido de população desta alga da Enseada do Forno, provavelmente pela presença de uma substância majoritária. Estas duas populações de P. brasiliense estudadas vivem sob diferentes condições ambientais, mas distantes somente cerca de 30 km. Entretanto, é impossível afirmar que características ambientais (abióticas ou bióticas) seriam responsáveis pelas diferenças de potencial defensivo encontrados nestas duas populações de P. brasiliense estudadas. Futuros estudos genéticos são necessários para esclarecer esta questão e para explicar porque populações de uma mesma espécie vivendo em regiões tão próximas, mas ambientalmente distintas, produzem substâncias distintas.(AU)

Reprodução de Lytechinus variegatus ( Echinodermata: Echinoidea ): efeito do ciclo lunar e características da população / Reproduction of Lytechinus variegatus ( Echinodermata: Echinoidea ): effect of lunar cycle and population characteristics

Este estudo avaliou as características reprodutivas de uma população do ouriçodo mar Lytechinus variegatus e a influência do ciclo lunar na liberação de gametas. Foramrealizadas oito coletas para avaliação do índice gonadossomático (IG) e dos parâmetrospopulacionais relacionados com a reprodução. Para avaliação do efeito da Lua na liberaçãode gametas foram realizadas coletas em três ciclos lunares completos. Ao todo foramcoletados 295 indivíduos, sendo 156 machos e 131 fêmeas (proporção 1,19:1), porém nãohouve diferença significativa na proporção sexual da população. O peso dos machos foisignificativamente maior que o das fêmeas, porém não houve diferença significativa no IG,peso gonadal e diâmetro entre os sexos. Com a amplitude no diâmetro dos animaiscoletados (5,5-8,7 cm) foram estabelecidas cinco classes de tamanho. Não houve diferençassignificativas no IG entre as classes de tamanho. Houve efeito da periodicidade lunar naliberação de gametas, com menor IG na lua nova, indicando que esta ocorre no primeiroquarto lunar e em marés de sizígia.(AU)

This work evaluated thespawning of sea urchin Lytechinus variegates based on lunar cycle and populationcharacteristics. Eight monthly collections were realized to estimate the gonadosomatic index(GI) and population parameters regarding reproduction. To evaluate the effect of the lunarcycle on spawning, samples were taken for each moon phase of three lunar cycles. In theentire work 295 individuals were collected, 156 males and 131 females (1.19:1 ratio).However, there was no significant difference in the sex ratio of the population. The weightof males was significantly greater than that of females. There were no differences betweenmales and females in gonadosomatic index (GI), gonad weight and diameter. There was aneffect of the lunar periodicity on spawning, with lower GI in new moon, indicating thatspawning occurs on the first lunar quarter in spring tide.(AU)

Estudo da estabilidade espermática de ouriço-do-mar em diferentes condições de conservação e perfil de toxicidade do metronidazol

Os ouriços-do-mar da espécie Arbacia lixula foram coletados próximo aos recifes da praia de Ponta Verde, na cidade de Maceió. No laboratório, injetou-se 2,5mL de cloreto de potássio (KCl) a 0,5M ao redor da região peribucal, o que provocou a eliminação dos gametas após alguns minutos. Os espermatozóides foram identificados por apresentarem cor esbranquiçada e os óvulos pela cor alaranjada. Para a determinação da forma de acondicionamento, os espermatozóides foram submetidosàs temperaturas de 2-8ºC e 0ºC dentro de tubos fechados com tampa rosqueada e tubos fechados com algodão, e com o passar do tempo foram feitas ativações em água do mar, visualizando-se em microscópio óptico com aumento de 200x as células ativas. Para a toxicidade do metronidazol, soluções na concentração de 10%, 20%, 30% e 50% foram adicionadas aos espermatozóides ativados, monitorando-se a motilidade e em seguida o número de células presentes na amostra foi determinado.Observou-se que inicialmente havia 65% de células espermáticas com viabilidade. Os espermatozóides que foram acondicionados em tubos fechados com algodão apresentaram menor tempo de conservação comparados aos que foram acondicionados em tubos rosqueados. Já a temperatura de 2-8ºC foi a que manteve por um maior período de tempo a viabilidade das células espermáticas. Desta forma concluímos que concentrações de metronidazol iguais ou acima de 30

Estudo da estabilidade espermática de ouriço-do-mar em diferentes condições de conservação e perfil de toxicidade do metronidazol

Os ouriços-do-mar da espécie Arbacia lixula foram coletados próximo aos recifes da praia de Ponta Verde, na cidade de Maceió. No laboratório, injetou-se 2,5mL de cloreto de potássio (KCl) a 0,5M ao redor da região peribucal, o que provocou a eliminação dos gametas após alguns minutos. Os espermatozóides foram identificados por apresentarem cor esbranquiçada e os óvulos pela cor alaranjada. Para a determinação da forma de acondicionamento, os espermatozóides foram submetidosàs temperaturas de 2-8ºC e 0ºC dentro de tubos fechados com tampa rosqueada e tubos fechados com algodão, e com o passar do tempo foram feitas ativações em água do mar, visualizando-se em microscópio óptico com aumento de 200x as células ativas. Para a toxicidade do metronidazol, soluções na concentração de 10%, 20%, 30% e 50% foram adicionadas aos espermatozóides ativados, monitorando-se a motilidade e em seguida o número de células presentes na amostra foi determinado.Observou-se que inicialmente havia 65% de células espermáticas com viabilidade. Os espermatozóides que foram acondicionados em tubos fechados com algodão apresentaram menor tempo de conservação comparados aos que foram acondicionados em tubos rosqueados. Já a temperatura de 2-8ºC foi a que manteve por um maior período de tempo a viabilidade das células espermáticas. Desta forma concluímos que concentrações de metronidazol iguais ou acima de 30

Ecological roles of natural products of the Brazilian red seaweed Laurencia obtusa

Laboratory and field experiments were performed to assess the ecological roles of natural products produced by the Brazilian red seaweed Laurencia obtusa. Laboratory assays revealed that the natural concentration of the crude organic extract of L. obtusa significantly inhibited feeding by two herbivores: the crab Pachygrapsus transversus and the sea urchin Lytechinus variegatus. It was verified that this chemically defensive action was due to halogenated sesquiterpenoid elatol, found to be the major natural product of this red seaweed. In addition, it was verified that the antifouling property of the chemicals produced by L. obtusa could make this red alga less attractive for fish grazing. Direct protection against two herbivore species and indirect protection against herbivory by fouling inibition constitute evidence that the major natural product from Brazilian L. obtusa plays multiple environmental roles, thereby increasing the adaptive value of these metabolites. On the other hand, the evidence reinforces the idea that marine natural products may have different functions in the sea.

Foram realizadas experiências em laboratório e em campo, com o intuito de verificar as funções ecológicas de produtos naturais produzidos pela macroalga bentônica Laurencia obtusa da costa brasileira. Nas experiências em laboratório, foi constatado que a concentração natural do extrato orgânico bruto de L. obtusa inibiu significativamente seu consumo por dois herbívoros, o caranguejo Pachygrapsus transversus e o ouriço-do-mar Lytechinus variegatus. Foi verificado que essa ação defensiva deve-se ao elatol, um sesquiterpeno halogenado encontrado como o produto natural mais abundante nessa alga vermelha. Além disso, verificou-se que a propriedade antiincrustante desse metabólito produzido por L. obtusa poderia torná-la menos atrativa à herbivoria por peixes. A ação protetora direta contra duas espécies de herbívoros e uma proteção indireta contra a herbivoria por inibição da incrustação constituem evidências de que o produto natural majoritário encontrado em L. obtusa do Brasil possui múltiplas funções ecológicas no ambiente. Por outro lado, reforça a idéia de que produtos naturais marinhos podem ter diferentes funções no mar, aumentando, assim, o valor adaptativo desses metabólitos.

Métodos de coleta de gametas e estocagem de óvulos de ouriços-do-mar usados em ensaios ecotoxicologicos

Embriões de ouriços-do-mar, de diversas espécies, têm sido amplamente utilizados em ensaios crônicos para estudos de impacto ambiental. No Brasil, apenas duas espécies são normatizadas para estes estudos, o que limita estes ensaios a poucos laboratórios, situados em regiões onde estas espécies ocorrem. Soma-se a isto à vulnerabilidade dos ouriços aos atuais métodos de obtenção de gametas, a sua sazonalidade, além do desperdício dos gametas obtidos. Isto gera dificuldades e limitações na utilização destes organismos em quaisquer áreas. Buscando solucionar ou pelo menos minimizar estes problemas, dois estudos foram conduzidos. No primeiro, buscou-se estabelecer um método eficaz e de baixa toxicidade para obtenção de gametas do ouriço-do-mar Lytechinus variegatus. Foi demonstrada a eficiência do emprego da lidocaína + epinefrina (CLE) na liberação de gametas, bem como a posterior sobrevivência dos ouriços. Comparou-se os métodos CLE e KCl para obtenção de gametas, avaliando-se ainda a sensibilidade dos embriões obtidos com esses gametas, aos testes de toxicidade com dicromato de potássio. Adicionalmente, foi avaliado o efeito da estação do ano (inverno e primavera) na obtenção dos gametas. Dos 125 ouriços injetados com CLE, 94 (73%) liberaram gametas viáveis e 98% sobreviveram ao processo. As taxas de liberação de gametas foram superiores a 80% com os dois métodos (CLE e KCl), no entanto maior taxa de sobrevivência (P<0,05) foi observada com CLE (97,2%) em relação ao KCl (57,8%). Os embriões obtidos pelos dois métodos têm idêntica sensibilidade, frente aos testes de toxidade. Observou-se melhor resposta dos ouriços na primavera (83,8%) em relação ao inverno (62,7%) (P<0,05). O segundo estudo avaliou a adição de cloranfenicol para ampliar o tempo de viabilidade durante a estocagem dos óvulos das espécies L. variegatus, E. lucuntere e Arbacia lixula, em água do mar natural ou artificial. Para isto, os óvulos destas espécies foram estocados em água do mar natural e em água do mar artificial, contendo 50 mg L-1 de cloranfenicol e incubados à 15oC, sem luz. A utilização de 50 mg L-1 de cloranfenicol em água do mar natural e artificial ampliou a viabilidade dos óvulos dos ouriços L. variegatus, E. lucuntere A. lixula, por até 12, 11 e 13 dias, respectivamente, possivelmente por evitar a proliferação bacteriana. Contudo o percentual diário de desovas viáveis diminuiu com o aumento do tempo de estocagem. Mesmo assim o percentual médio diário de larvas pluteu foi maior que 80% em todos os dias de estocagem para L. variegatus e A. lixula, e até o 6o dia para E. lucunter. Observou-se ainda, diariamente, baixos percentuais de ovos/óvulos e fragmentos, sendo que para E. lucunter e A. lixula, houve uma tendência ao aumento destas estruturas com o passar do tempo de estocagem. Em relação ao tipo de água empregado, a água do mar artificial foi mais efetiva na estocagem dos óvulos de E. lucunter, enquanto A. lixula e L. variegatus não sofreram influência da água do mar natural ou artificial. Embriões gerados a partir de óvulos estocados foram usados em ensaios de toxicidade com as substâncias de referência sulfato de zinco e dicromato de potássio, para comparar sua sensibilidade com a de embriões obtidos da natureza. Observou-se que os embriões obtidos a partir de óvulos estocados não alteram sua sensibilidade aos testes de toxicidade. Conclui-se que a indução artificial de gametas com CLE, bem como o uso de cloranfenicol durante a sua estocagem constituem