Importância do plasma seminal na qualidade e preservação do espermatozoide suíno / Importance of seminal plasma in the quality and preservation of boar sperm

Ao preservar o espermatozoide suíno no estado líquido ou criopreservado, os componentes do plasma seminal (PS) contidos nos ejaculados podem alterar a capacidade de fertilização desses gametas. O PS contém substâncias essenciais para a manutenção da viabilidade e fertilidade dos espermatozoides. No entanto, esses componentes podem ser deletérios dependendo da quantidade ou duração do tempo de contato entre a ejaculação e a remoção do PS durante o processamento do sêmen para a conservação na forma refrigerada ou congelada. Foram identificadas substâncias que prejudicam (principal proteína plasmática seminal PSPI) ou melhoram (espermadesina PSP-I) a capacidade de fertilização dos espermatozoides. Dependendo dos cachaços e dos procedimentos de colheita de sêmen, a remoção do PS pode ser benéfica antes da preservação no estado líquido ou criopreservado. Em alguns casos, o PS removido antes da congelação pode ser adicionado de volta ao diluente de descongelamento, com efeitos positivos no sêmen descongelado e na viabilidade do espermatozoide no trato reprodutivo da porca. Neste texto, há um foco nos diferentes efeitos de PS em amostras de sêmen refrigerado e criopreservado de suínos com ênfase em como PS modula a função e morfologia das células espermáticas antes, durante e após a preservação de forma refrigerada ou criopreservada.(AU)

When preserving sperm in the liquid or cryopreserved state, seminal plasma (SP) components within ejaculates can alter fertilizing capacity of these gametes. The SP contains substances essential for maintenance of sperm viability and fertility; however, these components can be deleterious depending on quantity, or duration of time before there is removal of SP from sperm in semen processing. Substances that impair (Major seminal plasma protein PSPI - boar) or improve (e.g., spermadhesin PSP-I - boar) sper- matozoa fertilizing capacity have been identified. Depending on individual males and semen collection procedures, SP removal may be beneficial before preservation in the liquid or cryopreserved state. In some cases, SP that is removed can be added back to thawing extender with there being positive effects in thawed sperm and for sperm viability in the female reproductive tract. In this review article, there is a focus on different effects of SP in samples of cooled and cryopreserved semen from boar with there being emphasis on how SP modulates the function and morphology of sperm cells before, during, and after preservation in the refrigerated or cryopreserved state.(AU)

Refrigeração de sêmen canino em meio diluente à base de água de coco (Cocos nucifera) natural / Canine semen refrigeration in a natural coconut water (Cocos nucifera)-based extender / Refrigeración de semen canino en un medio diluyente natural a base de agua de coco (Cocos nucifera)

A inseminação artificial em cadelas contribui para o melhoramento genético da espécie, previne algumas doenças sexualmente transmissíveis a partir da cópula e possibilita a reprodução de animais que não poderiam copular de forma natural, seja por motivos anatômicos, geográficos ou comportamentais. Todavia, nem sempre é possível utilizar o sêmen fresco, sendo assim necessário um diluente para resfriar e mantê-lo viável por determinado período. Diante disso, o objetivo com este trabalho foi analisar o sêmen canino diluído em água de coco e refrigerado, à 5 ºC em diferentes tempos. Foram utilizados cinco cães da raça Hounds do Brasil, realizando três colheitas de sêmen de cada animal, com intervalos de sete dias. Os ejaculados foram mantidos a temperatura de 37ºC e realizado análises macroscópicas (volume, cor, aspecto e odor) e microscópicas (motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática). Em seguida, os ejaculados foram diluídos em água de coco natural a uma concentração de 200 milhões de espermatozoides/mL, e mantidos à temperatura de 5 °C, por até 72 horas. Nos intervalos de seis, doze, vinte e quatro, trinta e seis, quarenta e oito, e setenta e duas horas, as amostras foram avaliadas quanto a motilidade e vigor espermático. Os ejaculados frescos apresentaram em média volume de 6,2 mL, cor branca, aspecto aquoso a leitoso, odor "sui generis", motilidade espermática de 89,5 %, vigor espermático 4,3, concentração média de 418 x106espermatozoides/mL e 7,3% de alterações patológicas. Após o início do resfriamento à 5 ºC, os valores de motilidade e vigor diminuíram com o passar do tempo, sendo os menores valores encontrados após 48 e 72 horas. O diluente a água de coco in natura mostrou-se eficiente para refrigeração de sêmen canino, à 5 ºC, conservando-o por um período de até 36h após a colheita, conforme preconizado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.(AU)

improvement of the species, prevents some sexually transmitted diseases through copulation and allows the reproduction of animals that could not copulate naturally, either for anatomical, geographic or behavioral reasons. However, it is not always possible to use fresh semen, thus requiring a diluent to cool and keep it viable for a certain period. Therefore, the objective of this work was to analyze canine semen diluted in coconut water and refrigerated at 5 ºC at different times. Five Brazilian Hounds were used, performing three semen collections from each animal, with intervals of seven days. The ejaculates were kept at a temperature of 37 ºC and macroscopic (volume, color, appearance and odor) and microscopic (motility, vigor, concentration and sperm morphology) analyzes were performed. Then, the ejaculates were diluted in natural coconut water at a concentration of 200 million sperm/mL, and kept at a temperature of 5 °C for up to 72 hours. At intervals of six, twelve, twenty-four, thirty-six, forty-eight, and seventy-two hours, samples were evaluated for sperm motility and vigor. Fresh ejaculates had an average volume of 6.2 mL, white color, watery to milky appearance, "sui generis" odor, 89.5% sperm motility, 4.3 sperm vigor, average concentration of 418 x106 spermatozoa/mL and 7.3%pathological changes. After the beginning of cooling at 5 °C, the values of motility and vigor decreased over time, with the lowest values found after 48 and 72 hours. The in natura coconut water extender proved to be efficient for cooling canine semen at5 ºC, keeping it for a period of up to 36 hours after harvest, as recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.(AU)

Artificial insemination in bitches contributes to the genetic La inseminación artificial en perras contribuye a la mejora genética de la especie, previene algunas enfermedades de transmisión sexual a través de la cópula y permite la reproducción de animales que no podrían copular de forma natural, ya sea por razones anatómicas, geográficas o de comportamiento. Sin embargo, no siempre es posible utilizar semen fresco, por lo que se requiere un diluyente para enfriarlo y mantenerlo viable durante un cierto período. Por tanto, el objetivo de este trabajo fue analizar semen canino diluido en agua de coco y refrigerado a 5 ºC en diferentes tiempos. Se utilizaron cinco sabuesos brasileños, realizándose tres colectas de semen de cada animal, con intervalos de siete días. Los eyaculados se mantuvieron a una temperatura de 37 ºC y se realizaron análisis macroscópicos (volumen, color, apariencia y olor) y microscópicos (motilidad, vigor, concentración y morfología espermática). Luego, los eyaculados se diluyeron en agua de coco natural a una concentración de 200 millones de espermatozoides/mL y se mantuvieron a una temperatura de 5 °C hasta por 72 horas. A intervalos de seis, doce, veinticuatro, treinta y seis, cuarenta y ocho y setenta y dos horas, se evaluó la motilidad y el vigor de los espermatozoides en las muestras. Los eyaculados frescos tuvieron un volumen promedio de 6,2 mL, color blanco, apariencia acuosa a lechosa, olor "sui generis", motilidad espermática de 89,5%, vigor espermático de 4,3, concentración promedio de 418 x106 espermatozoides/mL y cambios patológicos de 7,3%. Después del inicio del enfriamiento a 5 °C, los valores de motilidad y vigor disminuyeron con el tiempo, encontrándose los valores más bajos a las 48 y 72 horas. El diluyente de agua de coco in natura demostró ser eficaz para enfriar el semen canino a5 ºC, manteniéndolo por un período de hasta 36 horas después de la cosecha, según lo recomendado por el Colegio Brasileño de Reproducción Animal.(AU)

Use of cooled buffalo semen as a strategy to increase conception rates in fixed-time artificial insemination programs during unfavorable reproductive periods / [Uso de sêmen resfriado de búfalo como estratégia para aumentar as taxas de concepção em programas de inseminação artificial em tempo fixo, durante períodos reprodutivos desfavoráveis]

The objective of this study was to compare the reproductive efficiency of dairy buffaloes undergoing fixed-time artificial insemination (FTAI) protocols based on progesterone/estrogen (P4/E2) and eCG during unfavorable breeding season using cooled (CS) and frozen semen (FS). A total of 446 buffaloes (> 40 days postpartum) were randomly distributed into four blocks (years): B1-2014 (n = 143), B2-2015 (n = 34), B3-2016 (n = 90), and B4-2017 (n = 179). Each block was subdivided into two (AI with CS and FS using the same ejaculate of each bull). Thus, the block subdivision was as follows: B1 (CS = 71 and FS = 72); B2 (CS = 18 and FS = 16); B3 (CS = 47 and FS = 43); and B4 (CS = 90 and FS = 89). The ejaculates of eight Murrah bulls collected using an artificial vagina were divided into two aliquots: one aliquot was diluted in Botu-Bov® commercial extender and cooled (BB-CS), and the other was diluted in the same extender and frozen (BB-FS). BB-CS aliquots were cooled at 5 °C/24 h using a refrigerator. BB-FS group aliquots were also cooled, and after equilibrating at 5 °C for 4 h, were placed in a 21-L Styrofoam box, 5 cm above the surface of liquid nitrogen. In the afternoon (A) on D0 (2:00 p.m.) the animals received EB 2.0 mg IM (Estrogin®) and an ear implant (CRESTAR® 3.0 mg P4). At D9 (A), the implant was removed, and the animals received eCG 400 IU IM (Folligon® 5000) + Cloprostenol PGF2α 0.530 mg IM (Sincrocio®). At D10 (A), the animals received EB 1.0 mg IM (Estrogin®), and at D12 (8:00 a.m.), AI was performed. At D42, pregnancy was diagnosed via ultrasonography. Total CRs were 48.2% CS and 34.6% FS for years 2014 to 2017, with a significant difference of 13.7% (P<0.05). In conclusion, cooled semen resulted in higher CR than frozen semen in dairy buffaloes under the P4/E2 and eCG FTAI during the unfavorable reproductive season.(AU)

O objetivo deste estudo foi comparar a eficiência reprodutiva de búfalas leiteiras submetidas a protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) à base de progesterona/estrogênio (P4/E2) e eCG, durante a estação reprodutiva desfavorável, usando-se sêmen resfriado (SR) e congelado (SC) Um total de 446 búfalas (> 40 dias após o parto) foi distribuído aleatoriamente em quatro blocos (anos): B1-2014 (n = 143), B2-2015 (n = 34), B3-2016 (n = 90) e B4-2017 (n = 179). Cada bloco foi subdividido em dois (IA com SR e SC utilizando-se a mesma ejaculação de cada touro). Assim, a subdivisão do bloco foi a seguinte: B1 (SR = 71 e SC = 72); B2 (SR = 18 e SC = 16); B3 (SR = 47 e SC = 43); e B4 (SR = 90 e SC = 89). Os ejaculados de oito touros Murrah coletados com vagina artificial foram divididos em duas alíquotas: uma alíquota diluída em diluente comercial Botu-Bov® e resfriada (BB-SR), e a outra diluída no mesmo diluente e congelada (BB-SC). As alíquotas de BB-SR foram resfriados a 5°C/24h usando-se um refrigerador. As alíquotas do grupo BB-SC também foram resfriadas e, após equilíbrio a 5°C por 4h, foram colocadas em uma caixa de isopor de 21L, 5 cm acima da superfície do nitrogênio líquido. À tarde (A), no D0 (14h), os animais receberam BE 2,0 mg IM (Estrogin®) e um implante auricular (Crestar® 3,0 mg P4). No D9 (A), o implante foi retirado e os animais receberam eCG 400 UI IM (Folligon® 5000) + cloprostenol PGF2α 0,530 mg IM (Sincrocio®). No D10 (A), os animais receberam BE 1,0mg IM (Estrogin®), e, no D12 (8h da manhã), foram realizadas as IAs. No D42, a gestação foi diagnosticada por ultrassonografia. As taxas de concepção (TC) totais foram 48,2% SR e 34,6% SC para os anos de 2014 a 2017, com uma diferença significativa de 13,7% (P<0,05). Em conclusão, o sêmen resfriado resultou em maior TC do que o sêmen congelado em bubalinos leiteiros sob P4/E2 e eCG FTAI durante a estação reprodutiva desfavorável.(AU)

Sperm energy metabolism

The development of techniques to increase sperm longevity demands knowledge about cell metabolism. Sperm requires a constant supply of energy to maintain its cell functions. Approximately 500 metabolic reactions take place in somatic cells, and several of them require energy. Most of the produced energy goes for sperm motility, which is an ATP-dependent specialized process. Spermatozoa possess the required mechanisms to produce energy through glycolysis, citric acid cycle (Krebs cycle) and oxidative phosphorylation. Understanding these pathways provides knowledge on the interactions between the semen extender substrates and sperm cells. The aim of this review is to approach the major energy producing pathways of the sperm, as well as the substrates available for this metabolism.

Para o desenvolvimento de técnicas que visam o aumento da longevidade espermática, é necessário o entendimento metabólico desta célula. O espermatozoide exige um fornecimento constante de energia para a manutenção das funções celulares. Aproximadamente 500 reações metabólicas são conhecidas por ocorrer nas células somáticas, sendo que grande parte delas requer energia. Para atingir seu objetivo, grande parte da produção energética do espermatozoide é destinada à motilidade, o qual é um processo especializado e dependente de ATP. O espermatozoide possui os mecanismos necessários para produzir energia através da glicólise, Ciclo do Ácido Cítrico (Ciclo de Krebs) e Fosforilação Oxidativa. O entendimento destas vias torna-se indispensável para a compreensão das interações entre os substratos do meio diluente e o espermatozoide. O objetivo desta revisão é abordar as principais vias de produção energética do espermatozoide, assim como os substratos disponíveis para metabolização.

Sperm energy metabolism

The development of techniques to increase sperm longevity demands knowledge about cell metabolism. Sperm requires a constant supply of energy to maintain its cell functions. Approximately 500 metabolic reactions take place in somatic cells, and several of them require energy. Most of the produced energy goes for sperm motility, which is an ATP-dependent specialized process. Spermatozoa possess the required mechanisms to produce energy through glycolysis, citric acid cycle (Krebs cycle) and oxidative phosphorylation. Understanding these pathways provides knowledge on the interactions between the semen extender substrates and sperm cells. The aim of this review is to approach the major energy producing pathways of the sperm, as well as the substrates available for this metabolism.(AU)

Para o desenvolvimento de técnicas que visam o aumento da longevidade espermática, é necessário o entendimento metabólico desta célula. O espermatozoide exige um fornecimento constante de energia para a manutenção das funções celulares. Aproximadamente 500 reações metabólicas são conhecidas por ocorrer nas células somáticas, sendo que grande parte delas requer energia. Para atingir seu objetivo, grande parte da produção energética do espermatozoide é destinada à motilidade, o qual é um processo especializado e dependente de ATP. O espermatozoide possui os mecanismos necessários para produzir energia através da glicólise, Ciclo do Ácido Cítrico (Ciclo de Krebs) e Fosforilação Oxidativa. O entendimento destas vias torna-se indispensável para a compreensão das interações entre os substratos do meio diluente e o espermatozoide. O objetivo desta revisão é abordar as principais vias de produção energética do espermatozoide, assim como os substratos disponíveis para metabolização.(AU)

Diagnosis and management strategies for urospermia in stallions / Diagnóstico e estratégias de manejo na urospermia em garanhões

Urospermia, contaminação do sêmen com urina durante a ejaculação, é considerada a segunda causa mais frequente de disfunção ejaculatoria em garanhões. A presença de urina no sêmen pode afetar drasticamente a fertilidade através do pH alcalino e alta osmolaridade da urina, além de causar uma potencial inflamação uterina após a cobertura ou inseminação artificial. Esta condição pode estar associada a outras doenças como cistite, herpesvírus equino-1 e paralisia periódica hipercalêmica; no entanto, causas idiopáticas são as mais comuns. Por esse motivo, o tratamento da urospermia pode ser frustrante e o prognóstico para a resolução completa dessa condição costuma ser desfavorável. Garanhões que sofrem de urospermia são frequentemente diagnosticados após resultados frustrantes de fertilidade e baixa qualidade do sêmen. O diagnóstico de urospermia é baseado na aparência amarela e odor típico, presença de cristais de urina, pH alcalino, além do aumento da creatinina e níveis de nitrogênio. O tratamento da urospermia é desafiador, já que a maioria dos casos é idiopática, limitando as opções terapêuticas. No entanto, quando uma condição primária é diagnosticada, ela deve ser tratada para tentar resolver a causa da urospermia. Na maioria dos casos, as terapias direcionadas à redução da contaminação da urina incluem a redução da quantidade de urina na bexiga antes da cobertura ou coleta de sêmen, tratamento farmacológico para auxiliar o fechamento do colo da bexiga durante a ejaculação, ou a coleta apenas da porção rica em esperma através da coleta fracionada do ejaculado. O método mais simples e estabelecido para o manejo da urospermia é encorajar o garanhão a urinar antes da coleta de sêmen ou cobertura natural. No entanto, quando a coleta de sêmen livre de urina não é possível, o sêmen contaminado com urina pode ser processado para minimizar os efeitos adversos do pH e da osmolaridade ao esperma. O sêmen contaminado com urina deve ser diluído com diluente à base de leite no intuito de diminuir os efeitos deletérios da urina sobre os espermatozoides. A centrifugação com gradiente de densidade a fim de selecionar os espermatozoides com características superiores também é uma alternativa nesses casos. Além disso, a criopreservação de sêmen contendo baixos níveis de contaminação com urina pode ser realizada.

Urospermia is the contamination of semen with urine during ejaculation. Urospermia is the second most frequent ejaculatory dysfunction of stallions. It can drastically affect fertility mediated by alkaline pH, the high osmolarity of urine, and presumably excessive post-breeding inflammatory response. This condition can be associated with many other diseases (i.e., cystitis, equine herpesvirus-1, and hyperkalemic periodic paralysis); however, idiopathic causes appear to be predominant. For this reason, the treatment of urospermia can be frustrating, and the prognosis for complete resolution of this condition is often poor. Stallions suffering from urospermia are usually diagnosed after poor semen quality and fertility results. Diagnosis of urospermia is based on the yellow appearance, urine smell, urine crystal, alkaline pH, increased creatinine, and urea nitrogen levels. The treatment for urospermia is challenging. Most cases are idiopathic, thereby limiting therapeutic options. However, when a primary condition is diagnosed, it should be treated to solve the cause of urospermia. In most cases, therapies directed at reducing urine contamination include reducing the amount of urine in the bladder before breeding, pharmacological treatments to enhance bladder neck closure during ejaculation, or collecting only the sperm-rich portion of the ejaculate using an open-ended artificial vagina are used to manage stallions with urospermia. The simplest and most established method for managing urospermia is to encourage the stallion to urinate before semen collection or natural breeding. However, when the collection of semen free from urine is not possible, urine-contaminated semen can be processed to minimize the adverse effects of pH and osmolarity on the sperm. Semen contaminated with urine should be immediately extended with a milk-based extender to mitigate the deleterious effects of urine on the sperm. Single-layer gradient centrifugation can also be used to select sperm with superior traits for low urine contamination. In addition, semen cryopreservation can be performed in stallion semen with a low level of urine contamination.

Diluente Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa sobre a qualidade do sêmen caprino após a criopreservação / Tris diluent supplemented with Mauritia flexuoxa oil on the quality of goat semen after cryopreservation

Objetivou-se verificar os efeitos, nos parâmetros espermáticos, na integridade mitocondrial, acrossomal e de membrana em células espermáticas, desencadeados pelo uso do Tris (Tris hidroximetil aminometano) suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa como diluente para criopreservação de sêmen caprino. Quatro caprinos clinicamente saudáveis foram utilizados. Os animais eram alimentados diariamente com volumoso (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrado (ração peletizada com teor de 20% proteína, 300 g/animal/dia) e sal mineral específico para Caprinos (Caprinofós®), à vontade. Dois ensaios foram realizados: I Teste de toxicidade; II Criopreservação do sêmen com concentrações ideais. No teste de toxicidade as concentrações avaliadas foram: 5%, 10%, 15% e 20% de diluente a base de óleo de Mauritia flexuoxa. Após o teste de toxicidade, foi escolhido a concentração que apresentou o melhor resultado (5%). Logo após, foram realizadas mais 32 coletas, que foram diluídas em Tris-gema-glicerol (grupo controle) ou diluente contendo óleo vegetal (Mauritia flexuoxa). As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000®. Após o período mínimo de uma semana as palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos de centrifugação e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade, vigor espermático e morfologia. Em seguida, por meio de sondas fluorescentes foram avaliadas a integridade de acrossomo, membrana plasmática (Diacetato de Carboxifluresceína e Iodeto de Propídeo) e função mitocondrial sob microscopia de epifluorescência. Quanto a motilidade e vigor, integridade mitocondrial e acrossomal, o grupo buriti foi inferior ao grupo controle. O Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa na concentração de 5% não influenciou significativamente a qualidade espermática, porém, observouse morfologia e integridade de membrana favoráveis. Dessa forma, sendo uma alternativa para substituição de diluentes a base de produtos de origem animal.(AU)

The objective was to verify the effects, sperm parameters, mitochondrial, acrosomal and membrane integrity in sperm cells, triggered by the use of Tris (Tris hydroxymethyl aminomethane) supplemented with Mauritia flexuoxa oil as a diluent for cryopreservation of goat semen. Four goats clinically healthy were used. The animals were fed daily with bulky (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrate (pelleted feed with 20% protein content, 300 g / animal / day) and mineral salt Specific for Goats (Caprinofós®), ad libitum. Two tests were carried out: I - Toxicity test; II - Semen cryopreservation with ideal concentrations. In the toxicity test as selected were: 5%, 10%, 15% and 20% of Mauritia flexuoxa oil-based diluent. After the toxicity test, the concentration that showed the best result (5%) was chosen. Soon after, a further 32 samples were obtained, which were diluted in Tris-glycerol (control group) or diluent containing vegetable oil (Mauritia flexuoxa). The samples were cryopreserved using the Tk3000® machine. After a minimum of one week, the samples were thawed in a 37 ° C water bath for 30 seconds, packed in centrifugation microtubes and homogenized for immediate analysis of motility, sperm vigor and morphology. Then, by means of fluorescent probes, the integrity of the acrosome, plasma membrane (Carboxyflurescein diacetate and Propidium Iodide) and mitochondrial function under epifluorescence microscopy were evaluated. As for motility and vigor, mitochondrial and acrosomal integrity, the buriti group was inferior to the control group. Tris supplemented with Mauritia flexuoxa oil at a concentration of 5% did not significantly influence sperm quality, however, favorable motility, morphology and membrane integrity were observed. Thus, being an alternative to replace diluents based on products of animal origin.(AU)

Diluente Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa sobre a qualidade do sêmen caprino após a criopreservação / Tris diluent supplemented with Mauritia flexuoxa oil on the quality of goat semen after cryopreservation

Objetivou-se verificar os efeitos, nos parâmetros espermáticos, na integridade mitocondrial, acrossomal e de membrana em células espermáticas, desencadeados pelo uso do Tris (Tris hidroximetil aminometano) suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa como diluente para criopreservação de sêmen caprino. Quatro caprinos clinicamente saudáveis foram utilizados. Os animais eram alimentados diariamente com volumoso (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrado (ração peletizada com teor de 20% proteína, 300 g/animal/dia) e sal mineral específico para Caprinos (Caprinofós®), à vontade. Dois ensaios foram realizados: I – Teste de toxicidade; II – Criopreservação do sêmen com concentrações ideais. No teste de toxicidade as concentrações avaliadas foram: 5%, 10%, 15% e 20% de diluente a base de óleo de Mauritia flexuoxa. Após o teste de toxicidade, foi escolhido a concentração que apresentou o melhor resultado (5%). Logo após, foram realizadas mais 32 coletas, que foram diluídas em Tris-gema-glicerol (grupo controle) ou diluente contendo óleo vegetal (Mauritia flexuoxa). As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000®. Após o período mínimo de uma semana as palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos de centrifugação e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade, vigor espermático e morfologia. Em seguida, por meio de sondas fluorescentes foram avaliadas a integridade de acrossomo, membrana plasmática (Diacetato de Carboxifluresceína e Iodeto de Propídeo) e função mitocondrial sob microscopia de epifluorescência. Quanto a motilidade e vigor, integridade mitocondrial e acrossomal, o grupo buriti foi inferior ao grupo controle. O Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa na concentração de 5% não influenciou significativamente a qualidade espermática, porém, observouse morfologia e integridade de membrana favoráveis. Dessa forma, sendo uma alternativa para substituição de diluentes a base de produtos de origem animal.

The objective was to verify the effects, sperm parameters, mitochondrial, acrosomal and membrane integrity in sperm cells, triggered by the use of Tris (Tris hydroxymethyl aminomethane) supplemented with Mauritia flexuoxa oil as a diluent for cryopreservation of goat semen. Four goats clinically healthy were used. The animals were fed daily with bulky (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrate (pelleted feed with 20% protein content, 300 g / animal / day) and mineral salt Specific for Goats (Caprinofós®), ad libitum. Two tests were carried out: I - Toxicity test; II - Semen cryopreservation with ideal concentrations. In the toxicity test as selected were: 5%, 10%, 15% and 20% of Mauritia flexuoxa oil-based diluent. After the toxicity test, the concentration that showed the best result (5%) was chosen. Soon after, a further 32 samples were obtained, which were diluted in Tris-glycerol (control group) or diluent containing vegetable oil (Mauritia flexuoxa). The samples were cryopreserved using the Tk3000® machine. After a minimum of one week, the samples were thawed in a 37 ° C water bath for 30 seconds, packed in centrifugation microtubes and homogenized for immediate analysis of motility, sperm vigor and morphology. Then, by means of fluorescent probes, the integrity of the acrosome, plasma membrane (Carboxyflurescein diacetate and Propidium Iodide) and mitochondrial function under epifluorescence microscopy were evaluated. As for motility and vigor, mitochondrial and acrosomal integrity, the buriti group was inferior to the control group. Tris supplemented with Mauritia flexuoxa oil at a concentration of 5% did not significantly influence sperm quality, however, favorable motility, morphology and membrane integrity were observed. Thus, being an alternative to replace diluents based on products of animal origin.

Características seminais pós-descongelamento em garanhões da raça crioula / Post-thaw seminal characteristics of Criollo breed stallions

Este trabalho teve como objetivo avaliar as características seminais de garanhões da raça Crioula após o processo de criopreservação utilizando o BotuCrio® . Foram utilizados 24 garanhões alojados nas proximidades de Porto Alegre, RS, Brasil. As análises do sêmen foram realizadas pré e pósdescongelamento através do sistema Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision®. Somente foram utilizadas amostras com motilidade total ≥ 60 % e vigor ≥ 3, estas foram envasadas em palhetas de 0,5 ml, dispostas horizontalmente a 5ºC durante 20 minutos. Após colocadas a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido durante 20 minutos. Sendo finalmente imersas em nitrogênio líquido, após descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos. Os valores médios e desvios padrões das variáveis pós-descongelamento foram: motilidade total (52,85 % ± 7,27); motilidade progressiva (31,15 % ± 10,21); motilidade rápida (4,78 % ± 5,37); motilidade local (22,44 % ± 8,68); velocidade curvilinear (97,67 μm/s ± 35,25); velocidade em linha reta (35,33 μm/s ± 15,29); velocidade da trajetória média (44,99 μm/s ± 17,98); linearidade (0,3 % ± 0,15); BCF (2,5 Hz ± 1,7); ALH (0,35 μm ± 0,3); integridade funcional da membrana (42,73 % ± 7,06) e integridade estrutural da membrana (48,06 % ± 8,99). Concluímos que o protocolo utilizando diluente BotuCrio® é viável para criopreservação do sêmen de cavalos da raça Crioula, pois garante motilidade acima de 30 % pós-descongelamento que é recomendado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.(AU)

The aim of this study was to evaluate seminal characteristics of Criollo breed stallions, after cryopreservation process using the BotuCrio®. One ejaculate from twenty-four stallions located near to Porto Alegre, RS, Brazil were used. Semen analysis were performed pre and post-freezing through the Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision® system. Only samples with total motility ≥ 60 % and vigor ≥ 3 were used. The samples were placed in 0.5 ml straws, arranged horizontally at 5ºC for 20 minutes. Then, 6 cm above the level of liquid nitrogen in vapor for 20 minutes. Finally, being immersed in liquid nitrogen, the samples thawed in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Mean values and standard deviations of post-freeze variables were: total motility (52.85 % ± 7.27); progressive motility (31.15 % ± 10.21); rapid motility (4.78 % ± 5.37); local motility (22.44 % ± 8.68); Curvilinear Velocity (97.67 μm/s ± 35.25); Straight Line Velocity (35.33 μm/s ± 15.29); Average Path Velocity (44.99 μm/s ± 17.98); Linearity (0.3 % ± 0.15); BCF (2.5 Hz ± 1.7); ALH (0.35 μm ± 0.3) functional integrity (42.73 % ± 7.06) and physical integrity (48.06 % ± 8.99). We conclude that the protocol used for semen cryopreservation is feasible for use in the Criollo breed, because it has motility above 30 % post-freezing semen parameters, wich is the recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.(AU)

Características seminais pós-descongelamento em garanhões da raça crioula / Post-thaw seminal characteristics of Criollo breed stallions

Este trabalho teve como objetivo avaliar as características seminais de garanhões da raça Crioula após o processo de criopreservação utilizando o BotuCrio® . Foram utilizados 24 garanhões alojados nas proximidades de Porto Alegre, RS, Brasil. As análises do sêmen foram realizadas pré e pósdescongelamento através do sistema Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision®. Somente foram utilizadas amostras com motilidade total ≥ 60 % e vigor ≥ 3, estas foram envasadas em palhetas de 0,5 ml, dispostas horizontalmente a 5ºC durante 20 minutos. Após colocadas a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido durante 20 minutos. Sendo finalmente imersas em nitrogênio líquido, após descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos. Os valores médios e desvios padrões das variáveis pós-descongelamento foram: motilidade total (52,85 % ± 7,27); motilidade progressiva (31,15 % ± 10,21); motilidade rápida (4,78 % ± 5,37); motilidade local (22,44 % ± 8,68); velocidade curvilinear (97,67 μm/s ± 35,25); velocidade em linha reta (35,33 μm/s ± 15,29); velocidade da trajetória média (44,99 μm/s ± 17,98); linearidade (0,3 % ± 0,15); BCF (2,5 Hz ± 1,7); ALH (0,35 μm ± 0,3); integridade funcional da membrana (42,73 % ± 7,06) e integridade estrutural da membrana (48,06 % ± 8,99). Concluímos que o protocolo utilizando diluente BotuCrio® é viável para criopreservação do sêmen de cavalos da raça Crioula, pois garante motilidade acima de 30 % pós-descongelamento que é recomendado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.

The aim of this study was to evaluate seminal characteristics of Criollo breed stallions, after cryopreservation process using the BotuCrio®. One ejaculate from twenty-four stallions located near to Porto Alegre, RS, Brazil were used. Semen analysis were performed pre and post-freezing through the Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision® system. Only samples with total motility ≥ 60 % and vigor ≥ 3 were used. The samples were placed in 0.5 ml straws, arranged horizontally at 5ºC for 20 minutes. Then, 6 cm above the level of liquid nitrogen in vapor for 20 minutes. Finally, being immersed in liquid nitrogen, the samples thawed in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Mean values and standard deviations of post-freeze variables were: total motility (52.85 % ± 7.27); progressive motility (31.15 % ± 10.21); rapid motility (4.78 % ± 5.37); local motility (22.44 % ± 8.68); Curvilinear Velocity (97.67 μm/s ± 35.25); Straight Line Velocity (35.33 μm/s ± 15.29); Average Path Velocity (44.99 μm/s ± 17.98); Linearity (0.3 % ± 0.15); BCF (2.5 Hz ± 1.7); ALH (0.35 μm ± 0.3) functional integrity (42.73 % ± 7.06) and physical integrity (48.06 % ± 8.99). We conclude that the protocol used for semen cryopreservation is feasible for use in the Criollo breed, because it has motility above 30 % post-freezing semen parameters, wich is the recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.

Effect of plasma separation techniques and sperm selection on sperm recovery and viability of cooled pony stallion semen for 48h at 5°C / [Efeito das técnicas de separação de plasma e de seleção de esperma na recuperação e viabilidade do sêmen de garanhão pônei resfriado por 48h a 5°C]

Separation techniques of seminal plasma [centrifugation (SC) and Sperm Filter® (SF)] and sperm selection [Androcoll-E (SCA) and filtration glass wool (GW)] were used in 24 ejaculates from 6 stallions. In experiment 1, the ejaculates were allocated into control (no spin), centrifugation at 600 g x 10min, SF and GW. In experiment 2, semen was submitted to SC, SGA and filtered through GW. Following the treatments in both experiments, samples were kept chilled at 5°C to 50 x 106 sperm/ml for 48h. The variables measured on fresh and cooling semen were pH, motility, membrane viability function by 6-carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide (CFDA / PI), viability or vitality (eosin / nigrosine) and mitochondrial activity. In experiment 1, centrifugation to remove seminal plasma resulted in greater damage to sperm than separation by sperm filter, and selection by glass wool was more efficient in separating viable cells and maintaining viability during cooling. In experiment 2 Androcoll-E and glass wool treatments resulted in higher (P <0.0001) motility, membrane function, mitochondrial activity, and viability than centrifuged semen. Both selection by Androcoll- E and glass wool improved the quality of semen pony stallions for preservation for up to 48h to 5ºC.(AU)

As técnicas de separação do plasma seminal (centrifugação, SpermFilter) e de seleção espermática (Androcoll-E e filtração por lã de vidro) foram aplicadas em 24 ejaculados de seis garanhões da raça Pônei Brasileiro. Após coleta e separação da fração gel, os ejaculados foram diluídos 1:1 com diluente à base de leite em pó. No experimento 1, os ejaculados foram distribuídos em controle (sem centrifugação), centrifugação a 600g x 10min, SpermFilter e filtração por lã de vidro. No experimento 2, o sêmen foi submetido aos procedimentos: centrifugado (SC), centrifugado com Androcoll-E e filtrado por lã de vidro. Após os procedimentos de ambos os experimentos, as amostras foram mantidas refrigeradas a 5ºC, com 50 x 106 espermatozoides/mL, por 48h. As variáveis mensuradas a fresco, 24h e 48h foram: pH, motilidade, funcionalidade de membrana, viabilidade por diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio (CFDA/PI, vitalidade (eosina/nigrosina) e atividade mitocondrial. Já osmolaridade e morfologia espermática foram avaliadas somente imediatamente após a coleta. No experimento 1, a centrifugação para retirada do plasma seminal resultou em maiores danos aos espermatozoides do que a separação por SpermFilter. A filtração por lã de vidro mostrou-se mais eficiente em separar células viáveis e manter a viabilidade durante o resfriamento. No experimento 2, os tratamentos com Androcoll-E e filtrado por lã de vidro foram superiores (P<0,0001) ao sêmen centrifugado quanto à motilidade, à funcionalidade de membrana, à atividade mitocondrial e à viabilidade, tanto nas amostras de sêmen fresco como de sêmen refrigerado. O Androcoll-E e a lã de vidro permitiram manter por 48h, a 5ºC, o sêmen de garanhões pôneis utilizando-se diluente à base de leite.(AU)

Sodium bicarbonate and HEPES as buffer components for cooling the semen of pony stallions / Bicarbonato de sódio e HEPES como tampões para o resfrigeração de sêmen de pôneis

The composition of semen diluents can modify its viability during cooling. The buffering effects of HEPES and sodium bicarbonate were evaluated considering the pH and sperm viability. The semen of seven adult Brazilian ponies was evaluated before and after cooling at 5o C for 24 h and 48 h. A non-buffered skim milk powder extender (C) and the same extender buffered with sodium bicarbonate (SB) and HEPES (H) were used. After dilution, semen (three ejaculates/pony) was centrifuged and the seminal plasma discarded. Sperm was then diluted with SB, H or C and its concentration adjusted to 50 x 106 sptz/mL. Progressive motility evaluated after dilution showed similar results with all extenders (71.42% (SB), 74.28% (H), and 74.52% (C)). Sperm motility was evaluated 24 h and 48 h after cooling for SB (44.76% and 25.23%), H (51.42% and 38.09%) and C (54.05% and 41.66%, respectively). Plasma membrane integrity was similar after exposure to the three extenders (62.71% (SB), 68.76% (H), and 69.23% (C)). Mitochondrial activity was higher in SB immediately after dilution (SB= 1.05nm, H= 0.81nm, C= 0.79nm), and after 24 h (0.83nm (SB), 0.73nm (H) and 0.64nm (C)). After 48 h, the mitochondrial activity decreased to 0.72nm (SB), 0.69nm (H), and 0.63nm (C) (P > 0.05). The pH, osmolarity and pH after 48 h of cooling of the diluted semen were higher in SB (8; 382; 7.9), intermediate in H (7.5; 362; 7.32) and lower in C (7.16; 350; 7.07). Lipid peroxidation and its induction were similar in all groups. Data were analyzed by analysis of variance (ANOVA), and Duncan’s test was used to evaluate the significant differences (P < 0.05). Sodium bicarbonate reduced the progressive motility and increased the semen pH. The extender C was considered more appropriate for immediate use in artificial insemination. The non-buffered and HEPES-buffered extenders were considered appropriate for the cooling of equine semen for 48 h at 5°C.

A composição dos diluentes de sêmen pode modificar sua viabilidade durante o processo de resfriamento. O efeito de tamponamento do HEPES e Bicarbonato de Sódio foi avaliado considerando o pH e a viabilidade espermática. Sete pôneis brasileiros adultos tiveram seu sêmen avaliado antes e após a refrigeração a 5°C durante 24 h e 48 h. Um diluente de leite em pó desnatado não tamponado (C) e um diluente tamponado com bicarbonato de sódio (SB) ou HEPES (H) foram utilizados. Após a diluição, o sêmen (três ejaculados/ pônei) foi centrifugado e o sobrenadante foi descartado. O sêmen foi então diluído com SB, H ou C e a concentração ajustada para 50 x 106 espermatozoides/mL. A motilidade progressiva avaliada após a diluição apresentou resultados similares para todos os diluentes (71,42% (SB), 74,28% (H), 74,52% (C)). A motilidade espermática foi avaliada 24 h e 48 h após o resfriamento, respectivamente, para SB (44,76%, 25,23%), H (51,42%, 38,09%) e C (54,05%, 41,66%). A integridade da membrana plasmática foi semelhante após a exposição aos três diluentes (62,71% (SB), 68,76% (H), 69,23% (C)). A atividade mitocondrial após a diluição foi maior em SB (SB = 1.05nm, H = 0.81nm, C = 0.79nm) e após 24 h foi 0.83nm (SB), 0.73nm (H) e 0.64nm (C). A atividade mitocondrial após 48 h diminuiu para 0.72nm (SB), 0.69nm (H) e 0.63nm (C) (P > 0.05). O pH, a osmolaridade e o pH do sêmen diluído após as 48 h de refrigeração foram maiores em SB (8; 382; 7,9), intermediário em H (7,5; 362; 7,32) e menor em C (7,16; 350; 7,07). A peroxidação lipídica e sua indução foram semelhantes em todos os grupos. As médias foram avaliadas através de análise de variância (ANOVA) e o Teste Duncan foi utilizado para analisar as diferenças significativas (P < 0.05). O bicarbonato de sódio reduziu a motilidade progressiva e aumentou o pH do sêmen. O diluente C foi considerado mais adequado para uso imediato na inseminação artificial...

Sodium bicarbonate and HEPES as buffer components for cooling the semen of pony stallions / Bicarbonato de sódio e HEPES como tampões para o resfrigeração de sêmen de pôneis

The composition of semen diluents can modify its viability during cooling. The buffering effects of HEPES and sodium bicarbonate were evaluated considering the pH and sperm viability. The semen of seven adult Brazilian ponies was evaluated before and after cooling at 5o C for 24 h and 48 h. A non-buffered skim milk powder extender (C) and the same extender buffered with sodium bicarbonate (SB) and HEPES (H) were used. After dilution, semen (three ejaculates/pony) was centrifuged and the seminal plasma discarded. Sperm was then diluted with SB, H or C and its concentration adjusted to 50 x 106 sptz/mL. Progressive motility evaluated after dilution showed similar results with all extenders (71.42% (SB), 74.28% (H), and 74.52% (C)). Sperm motility was evaluated 24 h and 48 h after cooling for SB (44.76% and 25.23%), H (51.42% and 38.09%) and C (54.05% and 41.66%, respectively). Plasma membrane integrity was similar after exposure to the three extenders (62.71% (SB), 68.76% (H), and 69.23% (C)). Mitochondrial activity was higher in SB immediately after dilution (SB= 1.05nm, H= 0.81nm, C= 0.79nm), and after 24 h (0.83nm (SB), 0.73nm (H) and 0.64nm (C)). After 48 h, the mitochondrial activity decreased to 0.72nm (SB), 0.69nm (H), and 0.63nm (C) (P > 0.05). The pH, osmolarity and pH after 48 h of cooling of the diluted semen were higher in SB (8; 382; 7.9), intermediate in H (7.5; 362; 7.32) and lower in C (7.16; 350; 7.07). Lipid peroxidation and its induction were similar in all groups. Data were analyzed by analysis of variance (ANOVA), and Duncans test was used to evaluate the significant differences (P < 0.05). Sodium bicarbonate reduced the progressive motility and increased the semen pH. The extender C was considered more appropriate for immediate use in artificial insemination. The non-buffered and HEPES-buffered extenders were considered appropriate for the cooling of equine semen for 48 h at 5°C.(AU)

A composição dos diluentes de sêmen pode modificar sua viabilidade durante o processo de resfriamento. O efeito de tamponamento do HEPES e Bicarbonato de Sódio foi avaliado considerando o pH e a viabilidade espermática. Sete pôneis brasileiros adultos tiveram seu sêmen avaliado antes e após a refrigeração a 5°C durante 24 h e 48 h. Um diluente de leite em pó desnatado não tamponado (C) e um diluente tamponado com bicarbonato de sódio (SB) ou HEPES (H) foram utilizados. Após a diluição, o sêmen (três ejaculados/ pônei) foi centrifugado e o sobrenadante foi descartado. O sêmen foi então diluído com SB, H ou C e a concentração ajustada para 50 x 106 espermatozoides/mL. A motilidade progressiva avaliada após a diluição apresentou resultados similares para todos os diluentes (71,42% (SB), 74,28% (H), 74,52% (C)). A motilidade espermática foi avaliada 24 h e 48 h após o resfriamento, respectivamente, para SB (44,76%, 25,23%), H (51,42%, 38,09%) e C (54,05%, 41,66%). A integridade da membrana plasmática foi semelhante após a exposição aos três diluentes (62,71% (SB), 68,76% (H), 69,23% (C)). A atividade mitocondrial após a diluição foi maior em SB (SB = 1.05nm, H = 0.81nm, C = 0.79nm) e após 24 h foi 0.83nm (SB), 0.73nm (H) e 0.64nm (C). A atividade mitocondrial após 48 h diminuiu para 0.72nm (SB), 0.69nm (H) e 0.63nm (C) (P > 0.05). O pH, a osmolaridade e o pH do sêmen diluído após as 48 h de refrigeração foram maiores em SB (8; 382; 7,9), intermediário em H (7,5; 362; 7,32) e menor em C (7,16; 350; 7,07). A peroxidação lipídica e sua indução foram semelhantes em todos os grupos. As médias foram avaliadas através de análise de variância (ANOVA) e o Teste Duncan foi utilizado para analisar as diferenças significativas (P < 0.05). O bicarbonato de sódio reduziu a motilidade progressiva e aumentou o pH do sêmen. O diluente C foi considerado mais adequado para uso imediato na inseminação artificial...(AU)

Qualidade espermática durante a curva de resfriamento do sêmen suíno diluído em água de coco em pó visando sua criopreservação / Sperm quality during the cooling curve of swine semen diluted in coconut water extender aiming your cryopreservation

A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 oC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution – BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.

Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 °C for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution – BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination.

Qualidade espermática durante a curva de resfriamento do sêmen suíno diluído em água de coco em pó visando sua criopreservação / Sperm quality during the cooling curve of swine semen diluted in coconut water extender aiming your cryopreservation

A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 oC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.(AU)

Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 °C for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination.(AU)

Comparação de diluidores comerciais na motilidade, funcionalidade e integridade da membrana plasmática do espermatozoide bovino / Comparison of commercial diluents on motility, functionality and integrity of plasma membrane of bovine spermatozoa

O objetivo do estudo foi comparar o efeito de três diluidores comerciais (Tryladil®, Botu-Bov® e OptiXcell®) na qualidade doespermatozoide bovino após o processo de criogenia. Para tal, foram utilizados oito touros da raça Nelore (2 ejaculados/touro).As amostras de sêmen fresco, diluído e pós-descongelamento foram avaliadas, comparando os parâmetros de motilidade total,vigor, funcionalidade da membrana (HOST) e integridade da membrana (eosina). Os dados foram expressos em média e desviopadrão. As variáveis foram submetidas às análises de ANOVA e Tukey ou teste de Friedman e Dunns, dependendo da normalidade(p 0,05). Os achados mostram que no momento da diluição não houve diferença (p0,005) entre os diluidores comerciais nosparâmetros avaliados (exceto integridade da membrana plasmática). No entanto, no momento do pós-descongelamento osespermatozoides criopreservados utilizando-se o diluidor Tryladil® apresentaram maiores valores (p0,005) referentes a integridade efuncionalidade da membrana plasmática comparado aos diluídos em Botu-Bov® e OptIXcell®. Os parâmetros relacionados a cinéticaespermática (motilidade e vigor) não se diferiram (p0,005) entre os diluidores comerciais utilizados. Em conclusão, no momentopós-descongelamento o diluidor Tryladil® apresentou os melhores resultados nos parâmetros de integridade e funcionalidade damembrana plasmática. Sendo assim, recome

The main of the study was to compare the quality of frozen bull semen processed with three different commercially extenders (Tryladil®, Botu-Bov® and OptiXcell®). For this, eight Nelore bulls (two ejaculate per bull). Sperm samples were analyzed fresh, diluted and frozen-thawed. The parameters analyzed were total motility, sperm vigor, functional integrity of sperm plasma membrane (HOST) and plasma membrane integrity (eosin). Date were expressed as mean and standard deviation. The variables were subjected to ANOVA (Tukey test) or Friedman (Dunns test) test according to normality (p< 0,05). The results indicate that there was no difference (p˃0,005) among all treatments in the parameters evaluated (except plasma membrane integrity) at dilution moment. However, Tryladil extender promoted an increase (p˂0,005) in functional and integrity of sperm plasma membrane compared with others extenders at the post-thawing analyze. After thawing, there was no difference (p˃0,005) among all treatments in the kinetic parameters. In conclusion, the Tryladil® extender promoted an increase in functional and integrity of frozen-thawed sperm plasma membrane. Therefore, the Tryladil® extender is recommended to be use as an extender for Nelore bull sperm cryopreservation.(AU)

The impact of bacterial contamination of the ejaculate and extender on the quality of swine semen doses / O impacto da contaminação bacteriana do ejaculado e do diluente na qualidade das doses inseminantes de suínos

The aim of this study was to verify the influence of the degree of bacterial contamination of boar ejaculate and semen extender on the quality of semen doses. The experiment was conducted in four boar studs, from which raw semen and two semen doses from each ejaculate were collected to evaluate the number of colony-forming units (CFU), pH, sperm morphology and motility. Extender samples were also evaluated for CFU. Ejaculates that had higher levels of contamination (> 220 CFU mL-1) resulted in semen doses with a greater degree of bacterial contamination but with no reduction in motility or alteration in pH. When the semen doses were classified according to the degree of contamination of the extender, a decrease in motility was observed after 108 and 168 h of storage (P < 0.05) in the group whose extender had ≥14,000 CFU mL-1 versus the group whose extender had ≤ 330 CFU mL-1. The pH remained stable during 168 h of storage in semen doses with extender that had lower contamination levels, but decreased from 7.2 to 6.0 between 24 and 168 h of storage (P < 0.05) in the group with extender that had higher levels of contamination. A higher number of abnormal acrosomes (P < 0.05)was observed after 168 h of storage in the semen doses whose extender was highly contaminated. The production of semen doses with low bacterial contamination and high sperm cell viability will only be possible with a strict hygienic control in semen processing, primarily with respect to the extender, combined with minimal contamination during collection.(AU)

O objetivo desse estudo foi verificar a influência do grau de contaminação bacteriana do ejaculado do macho suíno e do diluente na qualidade das doses inseminantes. O estudo foi conduzido em quatro centrais de inseminação, onde foram colhidas amostras de sêmen fresco e duas doses inseminantes produzidas a partir de cada uma das referidas amostras de sêmen. As amostras foram avaliadas quanto ao número de Unidades Formadoras de Colônia (UFC) de bactérias mesófilas totais e coliformes, pH, morfologia espermática e motilidade. As amostras de diluente também foram avaliadas quanto ao número de bactérias mesófilas. Ejaculados que apresentaram grau mais elevado de contaminação bacteriana ( > 220 UFC mL-1) resultaram em doses inseminantes com maior nível de contaminação bacteriana, porém não houve redução de motilidade ou alteração de pH. Quando as doses inseminantes foram classificadas de acordo com a contaminação do diluente, um decréscimo na motilidade foi observado após 108 e 168 horas de armazenamento (P < 0,05) no grupo em que o diluente apresentava ≥14.000 UFC mL-1 se comparado com o observado no grupo cujo diluente apresentava ≤ 330 UFC mL-1. O pH permaneceu estável durante as 168 h de armazenamento em doses inseminantes que apresentavam diluentes com menor nível de contaminação, mas diminuiu de 7,2 para 6,0 entre 24 e 168 h de armazenamento (P < 0,05), no grupo com diluente que apresentava o maior nível de contaminação. Um número maior de acrossomas anormais (P < 0,05) foi observado após 168 h de armazenamento em doses inseminantes cujo diluente era altamente contaminado. A produção de doses inseminantes com baixa contaminação bacteriana e alta viabilidade de células espermáticas só é possível com um estrito controle de higiene durante o processamento do sêmen, principalmente no que se refere ao diluente, combinado com uma contaminação mínima durante a coleta do sêmen.(AU)

Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation / Identificação de danos ultraestruturais e funcionais em espermatozoides de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) oriundos da criopreservação

The aim of the study was to cryopreserve the semen of six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) in Tris-yolk and glycerol diluent, and to determine the damage caused by the freezing-thawing process, using fluorescent markers and ultrastructural analysis. Semen samples (n=11) collected from 4 adult six-banded armadillos by electroejaculation were cryopreserved in Tris diluent plus 20% egg yolk and 3% glycerol, in a fast freezing curve. Classical analysis of samples was performed after dilution, refrigeration and thawing, followed by fluorescence analysis, using a combination of fluorescent probes to assess membrane integrity (propidium iodide - PI and Hoechst - H342), and mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker Red®). We also used the ultrastructural analysis to verify possible morphological alterations caused by cryoinjuries. When compared with fresh samples, we verified a significant decline in all the armadillos' semen parameters after thawing, in which only 6.1% motile sperm were found. However, the percentage of sperm which remained with viable (13%) and functional (24.7%) membranes after thawing suggests that some cells could be live but immotile. Analysis using fluorescent markers revealed that the mitochondria of armadillos' sperm is highly sensible to the freezing protocol and the findings through ultrastructure analysis proved this statement. Additionally, the images obtained by transmission electron microscopy revealed that frozen-thawed sperm presented damaged plasma membrane, nuclear modifications as changes in chromatin and acrossomal changes relative to sperm capacitation. In conclusion, this study is the first attempt to cryopreserve the semen of an armadillo species, and to help us to identify critical points on the freezing-thawing procedure in order to improve the protocol.(AU)

O objetivo deste estudo foi criopreservar o sêmen de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) em diluente Tris-gema e glicerol, e determinar os danos causados pelo processo de congelação-descongelação, utilizando marcadores fluorescentes e análise ultraestrutural. As amostras de sêmen (n=11) coletadas de 4 tatus-peba adultos por eletroejaculação foram criopreservadas em diluente Tris acrescido de 20% de gema de ovo e 3% de glicerol, em curva rápida de congelação. A análise clássica das amostras foi realizada após a diluição, refrigeração e descongelação, seguida por análise de fluorescência, utilizando uma combinação de sondas fluorescentes para avaliar a integridade da membrana (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H342), e a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker RED®). Foi também utilizada a análise ultraestrutural para verificar possíveis alterações morfológicas causadas pela crioinjúria. Quando comparadas com as amostras a fresco, verificou-se uma queda significativa em todos os parâmetros seminais dos tatus após a descongelação, em que apenas 6,1% de espermatozoides móveis foram encontrados. No entanto, o percentual de espermatozoides que permaneceu com membrana viável (13%) e funcional (24,7%) após a descongelação sugere que algumas células podem estar vivas, mas imóveis. Análises utilizando marcadores fluorescentes revelaram que as mitocôndrias dos espermatozoides de tatus são altamente sensíveis ao protocolo de congelação e os achados através da análise ultraestrutural comprovaram esta afirmação. Além disso, as imagens obtidas por microscopia eletrônica de transmissão revelaram que espermatozoides congelados-descongelados apresentaram membranas plasmáticas danificadas, modificações nucleares como alterações na cromatina, e alterações acrossomais relativas à capacitação espermática. Em conclusão, este estudo é a primeira tentativa de criopreservação de sêmen em uma espécie de tatu, e nos auxiliou a identificar pontos críticos no processo de congelação-descongelação, a fim de melhorar o protocolo.(AU)

Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation / Identificação de danos ultraestruturais e funcionais em espermatozoides de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) oriundos da criopreservação

The aim of the study was to cryopreserve the semen of six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) in Tris-yolk and glycerol diluent, and to determine the damage caused by the freezing-thawing process, using fluorescent markers and ultrastructural analysis. Semen samples (n=11) collected from 4 adult six-banded armadillos by electroejaculation were cryopreserved in Tris diluent plus 20% egg yolk and 3% glycerol, in a fast freezing curve. Classical analysis of samples was performed after dilution, refrigeration and thawing, followed by fluorescence analysis, using a combination of fluorescent probes to assess membrane integrity (propidium iodide - PI and Hoechst - H342), and mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker Red®). We also used the ultrastructural analysis to verify possible morphological alterations caused by cryoinjuries. When compared with fresh samples, we verified a significant decline in all the armadillos' semen parameters after thawing, in which only 6.1% motile sperm were found. However, the percentage of sperm which remained with viable (13%) and functional (24.7%) membranes after thawing suggests that some cells could be live but immotile. Analysis using fluorescent markers revealed that the mitochondria of armadillos' sperm is highly sensible to the freezing protocol and the findings through ultrastructure analysis proved this statement. Additionally, the images obtained by transmission electron microscopy revealed that frozen-thawed sperm presented damaged plasma membrane, nuclear modifications as changes in chromatin and acrossomal changes relative to sperm capacitation. In conclusion, this study is the first attempt to cryopreserve the semen of an armadillo species, and to help us to identify critical points on the freezing-thawing procedure in order to improve the protocol.(AU)

O objetivo deste estudo foi criopreservar o sêmen de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) em diluente Tris-gema e glicerol, e determinar os danos causados pelo processo de congelação-descongelação, utilizando marcadores fluorescentes e análise ultraestrutural. As amostras de sêmen (n=11) coletadas de 4 tatus-peba adultos por eletroejaculação foram criopreservadas em diluente Tris acrescido de 20% de gema de ovo e 3% de glicerol, em curva rápida de congelação. A análise clássica das amostras foi realizada após a diluição, refrigeração e descongelação, seguida por análise de fluorescência, utilizando uma combinação de sondas fluorescentes para avaliar a integridade da membrana (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H342), e a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker RED®). Foi também utilizada a análise ultraestrutural para verificar possíveis alterações morfológicas causadas pela crioinjúria. Quando comparadas com as amostras a fresco, verificou-se uma queda significativa em todos os parâmetros seminais dos tatus após a descongelação, em que apenas 6,1% de espermatozoides móveis foram encontrados. No entanto, o percentual de espermatozoides que permaneceu com membrana viável (13%) e funcional (24,7%) após a descongelação sugere que algumas células podem estar vivas, mas imóveis. Análises utilizando marcadores fluorescentes revelaram que as mitocôndrias dos espermatozoides de tatus são altamente sensíveis ao protocolo de congelação e os achados através da análise ultraestrutural comprovaram esta afirmação.[...] (AU)

Anestesia por perfusão de saco aéreo em arara (Ara chloropterus): relato de caso / Anesthesia by infusion of air sac in a macaw (Ara chloropterus): a case report

O presente relato descreve a utilização da técnica anestésica deperfusão em saco aéreo durante a cirurgia para correção do bicode uma arara (Ara chloropterus). Esse tipo de abordagem anestésicaé recomendado para procedimentos em que se faz necessáriaa manipulação da região de cabeça e pescoço das aves. Após contençãofísica do animal, a anestesia foi induzida com auxílio demáscara facial, conectada ao sistema de Maplesson D (Baraka),utilizando isofluorano e fluxo diluente de oxigênio de 1L/min. Opreparo da cânula e posterior introdução em saco aéreo torácicocaudal foi estabelecido de modo similar ao descrito por Gunkele Lafortune (2005). A técnica mostrou-se adequada e bastantesegura; contudo, para ser empregada, é necessário que o profissionalanestesista conheça a anatomia e fisiologia das aves.

This report describes the use of an anesthetic perfusiontechnique applied in the air sac of a Macaw (Ara chloropterus)during surgery for correction of its broken beak. This anestheticapproach is recommended for procedures in which manipulationof the avian head or neck is necessary. After appropriateimmobilization of the animal, the anesthetic is introduced withthe help of a face mask connected to the Mapleson D (Baraka)system, using isoflurane with 1L-min. flow of diluent oxygen.The cannula preparation and introduction into the caudalthoracic air sac was performed is a way similar to that describedby Gunkel and Lafortune (2005). The technique proved to beappropriate and very safe, but the anesthetic professional musthave thorough of avian anatomy and physiology.