Caracterização molecular do vírus da cinomose canina, aspectos epizootiológicos, clínicos e do diagnóstico em cães naturalmente infectados

O vírus da cinomose canina (CDV) é um dos principais agentes infecciosos de cães domésticos e carnívoros silvestres, causando uma doença infecciosa multissistêmicas de alta mortalidade que acomete animais de diferentes faixas etárias, raças, machos e fêmeas e, tanto vacinados quanto não vacinados. A vacinação é o principal método de controle desta doença, no entanto, estudos vêm mostrando a possível existência de falhas vacinais em decorrência de diferença genética entre estirpes circulantes e estirpes vacinais. Dados referentes à epizootiologia são desconhecidos em Goiânia, poucos estudos comparam métodos diagnósticos em diferentes amostras em uma população de cães sintomáticos e às características moleculares do CDV em Goiás ainda não foram documentados. Este estudo objetivou determinar as características epizootiológicas do CDV, comparar os métodos diagnósticos de imunocromatografia (IC) e RT-PCR para a identificação do agente etiológico em diferentes amostras biológicas [swab conjuntival, sangue, urina, fluido cerebroespinal (FCE) e pool de amostras] e identificar as estirpes do CDV circulantes em cães naturalmente infectados e sintomáticos, no município de Goiânia, GO, Brasil, durante os anos de 2017 e 2020. Dados epizootiológicos foram coletados de 74 cães com sinais clínicos extraneurais e/ou neurais compatíveis com cinomose. Destes cães, 46 (62%) foram positivos por meio do teste de imunocromatografia (31%) ou pela técnica de RT-PCR (53%). Cães machos e fêmeas, de diferentes raças e idades foram acometidos, mas houve predominância em cães sem raça definida, adultos de um a seis anos e não vacinados. No entanto, aproximadamente 10,9% dos cães infectados e sintomáticos eram vacinados. Os sinais extraneurais predominantes foram hiporexia ou anorexia, secreção nasal e/ou ocular, desidratação e hiperqueratose de coxins e trufa. Dentre os sinais clínicos neurais os mais frequentes foram alteração de estado mental, déficit motor e mioclonias. Foi observada letalidade de aproximadamente 89% entre os animais com acometimento neurológico. As amostras de swab conjuntival, urina, pool e FCE tiveram maior frequência de positividade no teste de IC enquanto as amostras de urina e sangue, na RT-PCR. Do total de 149 amostras (sangue, urina e FCE) destinadas ao RT-PCR (gene N), o vírus foi identificado em 64 amostras (42,95%) e foram selecionadas 54 positivas para a RT-PCR seguida por Nested PCR para amplificação parcial do gene hemaglutinina (H). A amplificação parcial do gene H foi realizada e oito amostras foram sequenciadas e caracterizadas por meio da análise filogenética como pertencentes ao genótipo América do Sul 1/ Europa. Foram encontrados diferentes locais de substituição de aminoácidos no fragmento do gene H analisado das sequências identificadas e uma estirpe apresentou a mutação Y549H, típica de animais silvestres. Outros locais do fragmento apresentaram substituições em epítopos (resíduos 367, 376, 379, 381, 386 e 388) que podem interferir com a habilidade da vacina em promover proteção adequada contra a infecção pelo CDV, reduzindo sua efetividade. As estirpes isoladas foram geneticamente distante das estirpes vacinais, pertencentes ao genótipo América do Norte 1, com aproximadamente 10% de diferença nucleotídica. A partir da análise do genótipo América do Sul 1/ Europa, foram definidos dez subgenótipos. Esses achados evidenciam a relevância da infecção de cães por cinomose no Brasil, demonstrando a predominância do genótipo América do Sul 1/ Europa na região central do país e suportam a necessidade da realização de estudos epizootiológicos e de identificação molecular do CDV em outras regiões do país, em decorrência de sua grande extensão geográfica, da variabilidade de espécies animais acometidas, das diferenças moleculares entre as estirpes e da alta taxa de letalidade entre os animais infectados sintomáticos.

The canine distemper virus (CDV) is one of the main infectious agents of domestic dogs and wild carnivores, causing a multisystemic infectious disease with high mortality that affects animals of different age groups, breeds, males and females, and both vaccinated and unvaccinated. Vaccination is the main method of controlling this disease, however, studies have shown the possible existence of vaccine failures due to a genetic difference between circulating strains and vaccine strains. Data regarding epizootiology are unknown in Goiânia, few studies compare diagnostic methods in different samples in a population of symptomatic dogs and the molecular characteristics of CDV in Goiás have not yet been documented. This study aimed to determine the epizootiological characteristics of CDV, compare the diagnostic methods of immunochromatography (IC) and RT-PCR for the identification of the etiological agent in different biological samples [conjunctival swab, blood, urine, cerebrospinal fluid (CSF), and sample pool] and identify the circulating CDV strains in naturally infected and symptomatic dogs in the municipality of Goiânia, GO, Brazil, during 2017 and 2020. Epizootiological data were collected from 74 dogs with extraneural and/or neural clinical signs compatible with distemper. Of these dogs, 46 (62%) were positive using the immunochromatography test (31%) or by the RT-PCR technique (53%). Male and female dogs of different breeds and ages were affected, but there was a predominance in mixed breed dogs, adults aged one to six years and not vaccinated. However, approximately 10.9% of infected and symptomatic dogs were vaccinated. Predominant extraneural signs were hyporexia or anorexia, nasal and/or ocular discharge, dehydration, and nasal and digital hyperkeratosis. Among the neural clinical signs, the most frequent were changes in mental status, motor deficit, and myoclonus. A mortality rate of approximately 89% was observed among animals with neurological involvement. Conjunctival swab, urine, pool, and CSF samples had a higher frequency of positivity in the CI test, while urine and blood samples in RT-PCR. From a total of 149 samples (blood, urine, and FCE) destined for RT-PCR (N gene), the virus was identified in 64 samples (42.95%) and 54 positives were selected for RT-PCR followed by Nested PCR for partial amplification of the hemagglutinin (H) gene. Partial amplification of the H gene was performed and eight samples were sequenced and characterized by phylogenetic analysis as belonging to the South America 1/Europe genotype. Different amino acid substitution sites were found in the analyzed H gene fragment of the identified sequences and one strain presented the Y549H mutation, typical of wild animals. Other fragment sites had epitope substitutions (residues 367, 376, 379, 381, 386, and 388) that may interfere with the vaccine's ability to provide adequate protection against CDV infection, reducing its effectiveness. The isolated strains were genetically distant from the vaccine strains, belonging to the North America 1 genotype, with approximately 10% nucleotide difference. From the analysis of the South America 1/ Europe genotype, ten subgenotypes were defined. These findings highlight the relevance of canine distemper infection in Brazil, demonstrating the predominance of the South America 1/ Europe genotype in the central region of the country and support the need to conduct epizootiological and molecular identification studies of CDV in other regions of the country, due to its large geographic extension, the variability of animal species affected, the molecular differences between the strains and the high lethality rate among symptomatic infected animals.

INQUÉRITO EPIDEMIOLÓGICO E ESTUDO DE CASOS DA BRUCELOSE CANINA POR BRUCELLA ABORTUS

Objetivou-se realizar uma revisão sistemática sobre Brucelose em cães e avaliar o papel epidemiológico desses animais no ciclo da doença. A Brucelose canina é uma doença infectocontagiosa crônica, que acomete os canídeos domésticos e silvestres e o homem. Tem características epidemiológicas distintas quanto ao agente etiológico em áreas rurais e urbanas. Em áreas rurais, frequentemente é causada pela B. abortus, devido a convivência estreita com bovinos e pequenos ruminantes, que são acometidos por essa espécie de elevada virulência. No Brasil, o primeiro caso de diagnóstico clinico de B. abortus em bovinos ocorreu no Rio Grande do Sul por Danton Seixas em 1913. As infecções em cães causadas por B. abortus ocorre geralmente através do contato de cães da zona rural com produtos de origem animal in natura contaminado, contato ou ingestão de tecidos animais, de restos de abortamentos brucélicos de animais de produção. A infecção inicia-se principalmente pelas mucosas oral, nasofaríngea, conjuntival ou por solução de continuidade da pele. Após penetração as bactérias são fagocitadas por macrófagos ou outras células fagocitárias e são transportadas para linfonodos regionais e órgãos genitais. Nos cães machos a brucelose apresenta-se sob a forma de epididimite, prostatite, atrofia testicular uni ou bilateral, dermatite de bolsa escrotal, anormalidades espermáticas e infertilidade. Existem vários tipos de diagnóstico dentre eles o clínico, imunológicos, molecular, microbiológico e anatomopatológico. Sendo o mais indicado o sorológico, que identifica anticorpos contra a B.abortus. O tratamento é realizado através da castração e antibioticoterapia. A prevenção é feita através de teste de diagnóstico antes do acasalamento, de controle semestral para cães de área rural e retirada de animais positivos do canil. Como os cães são meios de transmissão ao homem, as autoridades de saúde devem dar uma atenção especial a essa doença, incluindo o controle dos cães no Programa de Controle e Erradicação de Brucelose do Ministério da Agricultura. Além de intensificar o controle de vacinação e diagnóstico em bovinos.

The objective was to carry out a systematic review on Brucellosis in dogs and to evaluate the epidemiological role of these animals in the disease cycle. Canine Brucellosis is a chronic infectious disease, which affects domestic and wild canids and man. It has distinct epidemiological characteristics regarding the etiological agent in rural and urban areas. In rural areas, it is often caused by B. abortus, due to close contact with cattle and small ruminants, which are affected by this highly virulent species. The name Brucellosis is named after the discoverer of the agent named Bruce. In Brazil, the first case of clinical diagnosis of B. abortus in cattle occurred in Rio Grande do Sul by Danton Seixas in 1913. Infections in dogs caused by B. abortus usually occur through contact of rural dogs with products of animal origin. contaminated in natura, contact or ingestion of animal tissues, remains of brucellic abortions of farm animals. The infection starts mainly by the oral, nasopharyngeal, conjunctival mucosae or by a skin continuity solution. After penetration, the bacteria are phagocyted by macrophages or other phagocytic cells and are transported to regional lymph nodes and genitals. In male dogs, brucellosis presents in the form of epididymitis, prostatitis, unilateral or bilateral testicular atrophy, scrotal bag dermatitis, sperm abnormalities and infertility. There are several types of diagnosis, including clinical, immunological, molecular, microbiological and anatomopathological. Among them, the most suitable is serological, which identifies antibodies against B.abortus. Treatment is carried out through castration and antibiotic therapy. Prevention is carried out through a diagnostic test before mating, semi-annual control for dogs in rural areas and removal of positive animals from the kennel. As dogs are a means of transmission to man, health authorities must pay special attention to this disease, including the control of dogs in the Ministry of Agriculture's Brucellosis Control and Eradication Program. In addition to intensifying vaccination control and diagnosis in cattle.

Brucelose é uma importante doença bacteriana zoonótica. Propõe-se com este projeto o desenvolvimento de uma vacina que seja protetora contra a infecção por todas as espécies de Brucella, além do desenvolvimento de teste sorológico específico.

Brucelose é uma das principais doenças infecciosas de caráter zoonótico que resulta em significativas perdas econômicas para animais de produção. O controle e a prevenção da brucelose animal são em grande parte baseados na vacinação com cepas vivas atenuadas. Inicialmente, foram realizados estudos de meta-análise do campo de vacinologia de Brucella no camundongo e hospedeiros naturais preferenciais, com objetivo de avaliar de forma temporal o índice de proteção de diferentes categorias vacinais e a influência de diversas variáveis na proteção vacinal. A meta-análise no modelo murino estudou 117 publicações de vacinas experimentais indexadas no PubMed, totalizando 782 experimentos analisados, que demonstraram na análise temporal que não houve melhoria dos índices de proteção ao longo das últimas três décadas. O modelo de meta-regressão desenvolvido, incluiu as categorias de vacinas (atenuada, DNA, inativada, mutante, subunidade e vetorizada) considerando o índice de proteção como a variável dependente e os outros parâmetros (linhagem de camundongo, via de vacinação, número de vacinações, uso de adjuvante, desafio com espécies de Brucella) como variáveis independentes. As vacinas de subunidades e vetorizadas proporcionaram índices de proteção significativamente menores quando comparados com vacinas atenuadas. Outras variáveis influenciaram positivamente o índice de proteção, tais como duas imunizações e desafio com B. melitensis, B. ovis e B. suis, por outro lado, o uso de adjuvante não teve efeito significativo no índice de proteção. O estudo de meta-análise em hospedeiros naturais, avaliou 45 publicações indexadas no PubMed e Scopus, representando 116 experimentos individuais. Adotou-se como medida de proteção, o valor de diferença de risco, calculado baseado na prevenção de abortos e infecção em órgãos de animais imunizados e não imunizados. A análise temporal neste estudo demonstrou que não houve melhorias na proteção vacinal nas últimas décadas. O modelo de meta-regressão desenvolvido para os hospedeiros naturais, incluiu as categorias de vacinas (atenuada, inativada, mutante, subunidade e vetorizadas), considerando o valor de diferença de risco como a variável dependente. Algumas variáveis demonstraram influenciar a proteção vacinal, sendo a via de vacinação subcutânea significativamente mais protetiva do que a via intramuscular e oral, além da via subcutânea ter proporcionado maior valor de diferença de risco que a via conjuntival, quando utilizada no desafio. As vacinas de subunidades proporcionaram significativamente menor proteção, enquanto que as vacinas inativadas foram mais protetivas que as vacinas atenuadas. Foi desenvolvido um estudo avaliando a cepa mutante B. ovis abcBA como potencial vetor de múltiplos epítopos de Brucella preditos de células T. Este estudo avaliou a expressão in vitro da expressão de uma proteína quimérica recombinante na cepa vetorial, analisando o perfil de atenuação em macrófagos e camundongos, e sua eficácia protetiva contra diferentes espécies virulentas de Brucella. A cepa B. ovis abcBA demonstrou ser um promissor vetor vacinal, sendo capaz de expressar a proteína quimérica recombinante PRB14 e manter o perfil de atenuação. Sendo assim, a cepa B. ovis abcBA PRB14 induziu proteção contra o desafio com patógeno B. ovis, entretanto, não demonstrou proteção contra desafio experimental com B. abortus e B. suis. Com o objetivo de avaliar o papel isolado da PRB14 de induzir resposta imune protetiva contra a infecção por Brucella em camundongos BALB/c, finalmente produzimos essa proteína quimérica em E. coli e a utilizamos como antígeno vacinal associado a adjuvante de Freud. No entanto, esta proteína não se mostrou protetiva contra a infecção por B. abortus, B. ovis e B. suis em camundongos.

Brucellosis is one of the major zoonotic infectious diseases that results in significant economic losses for animals production. The control and prevention of animal brucellosis are largely based on vaccination with live attenuated strains. Initially, meta-analysis studies were conducted addressing the subject of Brucella vaccinology in mice and preferred natural hosts, aiming to evaluate the protection index of different vaccine categories and the influence of several variables on vaccine protection. The meta-analysis in the murine model studied 117 publications of experimental vaccines indexed in PubMed, in total 782 experiments analyzed, which demonstrated in the temporal analysis that there was no improvement in protection indexes over the last three decades. The meta-regression model developed included the categories of vaccines (attenuated, DNA, inactivated, mutant, subunit and vector) considering the protection index as the dependent variable and the other parameters (mouse lineage, vaccination route, number of vaccinations, use of adjuvant, challenge with Brucella species) as independent variables. Subunit and vectorized vaccines provided significantly lower protection rates when compared to attenuated vaccines, and other variables positively influenced the protection index, such as two immunizations and challenge with B. melitensis, B. ovis and B. suis, on the other hand, the use of adjuvant had no significant effect on the protection index. The meta-analysis study in natural hosts evaluated 45 publications indexed in PubMed and Scopus, representing 116 individual experiments. The value of risk difference, calculated based on the prevention of abortions and infection in organs of immunized and non-immunized animals, was adopted as a protection measure. The temporal analysis in this study demonstrated that there were no improvements in vaccine protection in the last decades. The meta-regression model developed for the natural hosts included the vaccine categories (attenuated, inactivated, mutant, subunit and vectorized) considering the value of risk difference as the dependent variable, and some variables demonstrated to influence vaccine protection, such as the subcutaneous route of vaccination was significantly more protective than the intramuscular and oral route, and the subcutaneous route provided a higher risk difference value than the conjunctival route when used in the challenge. Subunit vaccines provided significantly less protection, while inactivated vaccines were more protective than attenuated vaccines. A study was carried out evaluating the mutant strain B. ovis abcBA as a potential vector of multiple predicted T cell epitopes. This study evaluated the expression in vitro of the expression of a recombinant chimeric protein in the vector strain by analyzing the attenuation profile in macrophages and mice, and their protective efficacy against different virulent Brucella species. B. ovis abcBA strain was shown to be a promising vaccine vector, capable of expressing the recombinant chimeric protein and maintaining the attenuation profile. Therefore, the B. ovis abcBA PRB14 strain induced protection against the challenge with B. ovis, however, did not demonstrate protection against experimental challenge with B. abortus and B. suis. In order to evaluate the role of PRB14 in inducing a protective immune response against Brucella infection in BALB/c mice, we finally produced this chimeric protein in E. coli and used it as a vaccine antigen associated with Freud's adjuvant. However, this protein was not shown to be protective against B. abortus, B. ovis and B. suis infection in mice.

Serological follow-up and clinical-reproductive effect of the use, in reduced doses, of the brucellosis vaccine (sample B19) ln bovine adults naturally infected with Brucella sp / Acompanhamento sorológico e efeito clínico-reprodutivo do uso em dose reduzida da vacina contra brucelose (amostra B19) em bovinos adultos naturalmente infectados com Brucella sp

With the aim of evaluating the effect of the use of the brucellosis vaccine, sample B19 in reduced doses, (about 2 x 109bacteria/dose), through the evaluation of the post-vaccine clinical-reproductive manifestations in bovine adults naturally infected and serologically positive, a research was carried out with crossbred cows, which belong to milking cattle herds in Bom Conselho, district in the Meridian Sylvan area of the state of Pernambuco. At first, a survey of the cattle through the milk analyses was conducted with the ring-test in the district industry. Alter that, four farms were chosen, the test in the cattle was done again and also, individually, with the card test (CT). In 56 positive reagents, the first subdosage of the B19 vaccine was administered in the conjunctive. ln the sixth month alter the vaccination, 24 animais, chosen at random, received a second dose of the vaccine, subcutaneously. Monthly serous behavior was evaluated through the slow serum agglutination test (SAL), 2-Mercaptoetanol (2-ME), during 12 months and, through the Complement Fixation Test (FC) in the first and twelfth month. During this time a clinical reproductive supervision of the animals was carried out, through the gynecological exam. The vaccination with the B19 sample, in a reduced dose, demonstrated to be an efficient methodology in the reduction of the suggestive clinical aspects of dise

Com o objetivo de avaliar o efeito do uso da vacina contra brucelose, amostra B"9" em dose reduzida (cerca de 2 x 109 bactérias/dose), através da avaliação das manifestações clínico-reprodutivas pós-vacinais em bovinos adultos naturalmente infectados e sorologicamente positivos, conduziu-se um trabalho com vacas mestiças Girolanda, pertencentes a rebanhos leiteiros do Município de Bom Conselho, Agreste Meridional do Estado de Pernambuco. Inicialmente foi realizado um levantamento dos rebanhos através da análise do leite pelo ring test, na indústria receptora do município. Posteriormente foram selecionadas quatro propriedades, repetindo-se a prova nos rebanhos e depois individualmente pela prova do cartão (CT). Em 56 animais reagentes positivos aplicou-se a primeira subdose da vacina B19 pela via conjuntival. No sexto mês após a vacinação, 24 animais aleatoriamente selecionados receberam uma segunda dose da vacina por via subcutânea. Foi avaliado o comportamento sorológico mensal através das provas de Soroaglutinação Lenta (SAL), 2-Mercaptoetanol (2-ME), durante 12 meses, e pela prova de Fixação do Complemento (FC) no primeiro e 12º mês. Nesse período foi efetuado o acompanhamento clínico reprodutivo dos animais através do exame ginecológico. A vacinação com a amostra B19 em dose reduzida, demonstrou ser uma metodologia eficiente na redução dos aspectos clínico-reprodutivos suge

Resposta imunitária à vacinação conjuntival com a estirpe Rev.1 de Brucella melitensis em ovinos e caprinos / Serological response of sheep and goats to conjunctival Brucella melitensis Rev.1 vaccine

The live B. melitensis Rev.1 strain is considered the best vaccine available for the prophylaxis of brucellosis in small ruminants, especially when used at the standard dose by the conjunctival route. In the present study a 1´ 109 CFU dose for both sheep and goats conjunctivally vaccinated was tested to evaluate the duration of serological responses. Conjunctival vaccination with Rev. 1 performed in adult animals induced a rapid rise in serological titres as measured by Rose Bengal Plate Test (RBPT), Complement Fixation Test (CF) and Modified Rose Bengal Plate Test (MRBPT). Titres then decreased and became negative in most animals by four months after vaccination (except MRBPT). The goats responded better to the vaccination than the sheep as one month after vaccination 100% of the goats revealed positive results to RB and RBM and 93.4% to FC test. The RBM was the one that detected more positive animals along the study.(AU)

Serological follow-up and clinical-reproductive effect of the use, in reduced doses, of the brucellosis vaccine (sample B19) ln bovine adults naturally infected with Brucella sp / Acompanhamento sorológico e efeito clínico-reprodutivo do uso em dose reduzida da vacina contra brucelose (amostra B19) em bovinos adultos naturalmente infectados com Brucella sp.

With the aim of evaluating the effect of the use of the brucellosis vaccine, sample B19 in reduced doses, (about 2 x 109bacteria/dose), through the evaluation of the post-vaccine clinical-reproductive manifestations in bovine adults naturally infected and serologically positive, a research was carried out with crossbred cows, which belong to milking cattle herds in Bom Conselho, district in the Meridian Sylvan area of the state of Pernambuco. At first, a survey of the cattle through the milk analyses was conducted with the ring-test in the district industry. Alter that, four farms were chosen, the test in the cattle was done again and also, individually, with the card test (CT). In 56 positive reagents, the first subdosage of the B19 vaccine was administered in the conjunctive. ln the sixth month alter the vaccination, 24 animais, chosen at random, received a second dose of the vaccine, subcutaneously. Monthly serous behavior was evaluated through the slow serum agglutination test (SAL), 2-Mercaptoetanol (2-ME), during 12 months and, through the Complement Fixation Test (FC) in the first and twelfth month. During this time a clinical reproductive supervision of the animals was carried out, through the gynecological exam. The vaccination with the B19 sample, in a reduced dose, demonstrated to be an efficient methodology in the reduction of the suggestive clinical aspects of dise

Com o objetivo de avaliar o efeito do uso da vacina contra brucelose, amostra B"9" em dose reduzida (cerca de 2 x 109 bactérias/dose), através da avaliação das manifestações clínico-reprodutivas pós-vacinais em bovinos adultos naturalmente infectados e sorologicamente positivos, conduziu-se um trabalho com vacas mestiças Girolanda, pertencentes a rebanhos leiteiros do Município de Bom Conselho, Agreste Meridional do Estado de Pernambuco. Inicialmente foi realizado um levantamento dos rebanhos através da análise do leite pelo ring test, na indústria receptora do município. Posteriormente foram selecionadas quatro propriedades, repetindo-se a prova nos rebanhos e depois individualmente pela prova do cartão (CT). Em 56 animais reagentes positivos aplicou-se a primeira subdose da vacina B19 pela via conjuntival. No sexto mês após a vacinação, 24 animais aleatoriamente selecionados receberam uma segunda dose da vacina por via subcutânea. Foi avaliado o comportamento sorológico mensal através das provas de Soroaglutinação Lenta (SAL), 2-Mercaptoetanol (2-ME), durante 12 meses, e pela prova de Fixação do Complemento (FC) no primeiro e 12º mês. Nesse período foi efetuado o acompanhamento clínico reprodutivo dos animais através do exame ginecológico. A vacinação com a amostra B19 em dose reduzida, demonstrou ser uma metodologia eficiente na redução dos aspectos clínico-reprodutivos suge

Eficácia da vacina RB51 em novilhas

O presente trabalho teve por objetivo a avaliação da eficácia da vacina RB51 em novilhas, visando utilizá-la como uma estratégia adicional no controle da brucelose bovina no Brasil. Trinta e três fêmeas bovinas com aproximadamente 24 meses de idade foram divididas em dois grupos. Um grupo (n=20) recebeu a vacina RB51 e o outro grupo (n=13) foi usado como controle não vacinado. Os animais do grupo vacinado com RB51 foram divididos em dois sub-grupos. Um sub-grupo (n=12) foi vacinado subcutaneamente com 1,5 x 10>10 UFC no dia 0 do experimento e o outro sub-grupo (n=8) foi vacinado com 1,6 x 10>10 UFC aos 60 dias de gestação (dia 260 do experimento). Todos os animais foram desafiados entre seis e sete meses de gestação com 3,0 x 10>7 UFC da amostra 2308 de B. abortus por via conjuntival. A vacinação com RB51 não resultou na produção de anticorpos detectáveis pelos testes sorológicos de rotina, antígeno acidificado tamponado e 2-mercaptoetanol. O grupo vacinado apresentou uma taxa de incidência acumulada de abortos de 25%, no grupo controle esta taxa foi de 62%. Após o sacrifício dos animais, B. abortus amostra RB51 não foi isolada em nenhum material e não houve aborto em nenhum animal vacinado aos 60 dias de gestação. Os resultados indicaram que a vacinação com RB51 previniu 59,4% dos abortos, 58,6% da infecção das vacas e 61,0% da infecção dos fetos. O risco relativo revelou que os animais não vacinados apresentaram 2,5 vezes mais risco de abortarem que os animais vacinados (IC 95% 1,029-5,889)