RESUMO
As melhorias alcançadas nas propriedades físico-químicas dos materiais endodônticos permitiram a utilização de materiais de reparo em situações clínicas que eram consideradas críticas. Os chamados biocerâmicos, derivados do MTA, apresentando boa biocompatibilidade e bioatividade, se tornaram uma solução eficaz. Estes materiais apresentam propriedades clínicas melhoradas, com excelente consistência e manuseabilidade, além de adequado tempo de trabalho e presa. Estes cimentos seguem em evolução e as empresas vêm investindo em melhorias em suas composições com o intuito de potencializar suas propriedades biotivas. Este trabalho teve como objetivo avaliar o cimento biocerâmico Bio-C Repair (Angelus, Londrina, Paraná, Brasil) e o seu potencial sucessor, o cimento Bio-C Repair Íon+ (Angelus, Londrina, Paraná, Brasil), bem como o MTA (Angelus, Londrina, Paraná, Brasil). Foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animal (CEUA-UFMG 350/2019). Tais biocerâmicos foram avaliados quanto às respostas de macrófagos. Os experimentos foram realizados no laboratório de Gnotobiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biológicas (ICB) da Universidade Federal de Minas Gerais. Utilizou-se macrófagos murinos obtidos de camundongos C57BL/6 quando se avaliou a viabilidade celular (pelo método MTT), a aderência celular, a capacidade de fagocitose (na presença da levedura S. boulardii) e a detecção da produção de Espécies Reativas de Oxigênio (ROS), na ausência e na presença de Zymosan A (de Saccharomyces cerevisiae), bem como, na presença e na ausência dos cimentos. Os macrófagos inflamatórios foram obtidos do peritônio dos animais após a injeção de caldo Tioglicolato estéril a 3%. Após aspirados, os macrófagos foram centrifugados e a concentração celular final foi ajustada de acordo com cada ensaio proposto: viabilidade e aderência (1x106 cel/mL); ensaio de fagocitose e ROS (5x105 cel/mL). Fez-se a manipulação dos materiais sob fluxo laminar, quando foram inseridos em capilares estéreis. Os resultados de viabilidade celular demonstraram que houve diferença significativa na cultura de 24 horas, tratada com o Bio-C Repair Íon+, em relação ao grupo controle. Os ensaios de fagocitose e aderência celular não apresentaram diferença estatisticamente significante entre os grupos. As análises demonstraram expressivos níveis de ROS quando as células foram tratadas na presença de Zymozan A. Na presença desse estímulo, o Bio-C Repair Íon+ apresentou diferença significativa em relação a todos os demais biocerâmicos e ao grupo controle. Os resultados foram analisados pelo teste ANOVA (P<0,05), comparando-se os grupos experimentais entre si e o grupo controle. Conclui-se que o novo material reparador Bio-C Repair Íon+ apresenta ações de biocompatibilidade quase semelhantes ao Bio-C Repair e MTA. As diferenças observadas em relação ao Bio-C Repair Ion+ quanto à viabilidade celular e a produção de ROS podem estar relacionadas ao íon metálico presente em sua composição.
The improvements achieved in the physicochemical properties of endodontic materials allowed the use of repair materials in clinical situations considered critical. The so-called bioceramics, derived from MTA, showing good biocompatibility and bioactivity, have become an effective solution. These materials have improved clinical properties, exhibiting excellent consistency and handling, as well as good working and setting time. These types of cement are still evolving, and companies have been investing in improvements in their compositions to enhance their bioactive properties. This study aimed to evaluate the Bio-C Repair bioceramic cement (Angelus, Londrina, Paraná, Brazil) and its potential successor, the Bio-C Repair Íon+ (Angelus, Londrina, Paraná, Brazil), as well as the MTA (Angelus, Londrina, Paraná, Brazil). The Animal Use Ethics Committee (CEUA) of the Federal University of Minas Gerais (UFMG) approved the study (350/2019). Such bioceramics were evaluated in macrophage responses. The experiments were carried out in the Gnotobiology and Immunology laboratory of the Institute of Biological Sciences (ICB) of the UFMG. Murine macrophages obtained from C57BL/6 mice were used to evaluate cell viability (by the MTT method), cell adhesion, phagocytosis capacity (in the presence of the yeast S. boulardii), and in the detection of the production of Reactive Oxygen Species (ROS) in the absence and presence of Zymosan A (from Saccharomyces cerevisiae), as well as in the presence and absence of types of cement. Inflammatory macrophages were obtained by injecting sterile 3% thioglycolate broth into the animals' peritoneum. After aspirating, the macrophages were centrifuged, and the final cell concentration was adjusted according to each proposed assay: viability and adherence (1x106 cells/mL), phagocytosis, and ROS assay (5x105 cells/mL). The materials were manipulated under laminar flow when inserted into sterile capillaries. The cell viability results showed a significant difference in the 24-hour culture, treated with Bio-C Repair Ion+, to the control group. The phagocytosis and cell adhesion assays showed no statistically significant difference between the groups. The analyses showed expressive ROS levels when the cells were treated in the presence of Zymosan A. In the presence of this stimulus, the Bio-C Repair Ion+ showed a significant difference between all other bioceramics and the control group. The results were analyzed by the ANOVA test (P<0.05), comparing the experimental groups and the control group. It is concluded that the new repair material Bio-C Repair Ion+ has biocompatibility actions almost similar to Bio-C Repair and MTA. The differences observed with Bio-C Repair Ion+ regarding cell viability and ROS production may be related to the metallic ion's composition.
Assuntos
Materiais Biocompatíveis , Teste de Materiais , Cimentos Dentários , Endodontia , MacrófagosRESUMO
Objetivo: Avaliar a severidade da periodontite apical (PA) em ratos expostos à fumaça do cigarro, por meio da análise histológica do perfil inflamatório e imunomarcação macrofágica. Material e Métodos: Foram utilizados trinta e dois ratos machos Wistar distribuídos em quatro grupos (n=8): PA (ratos com PA induzida); F (ratos expostos à fumaça do cigarro); FPA (ratos com PA induzida expostos à fumaça do cigarro); C (ratos sem PA e sem exposição ao cigarro). Para inalação da fumaça do cigarro, os animais permaneceram em câmara de tabagismo por oito minutos, três vezes ao dia por vinte dias antes da indução da PA. Em seguida, os animais tiveram as polpas coronárias expostas ao meio oral por 30 dias para a indução da PA e continuaram inalando fumaça até completarem 50 dias. No momento da eutanásia, as hemi-maxilas do lado direito foram removidas para avaliar o perfil inflamatório por coloração em hematoxilina e eosina e imuno-histoquímica para marcação macrofágica F4/80 (macrófago), CD206 (M2) e iNOS (M1). Dados não paramétricos foram analisados por Kruskal-Wallis, seguido de post-hoc Dunn e Mann- Whitney (P<.05). Resultados: O infiltrado inflamatório foi moderado no grupo PA e intenso no grupo FPA (P>.05). Na imunomarcação de macrófagos M1, os grupos C e F apresentaram diferenças significantes quando comparado aos grupos PA e FPA (P<0,05). No anticorpo F4/80 não houve diferença entre os grupos (P>.05). Conclusão: A inalação da fumaça do cigarro em ratos contribuiu para uma reação inflamatória periapical mais intensa, com presença predominante de macrófagos pró-inflamatórios M1, agravando a severidade da periodontite apical(AU)
Objective: To evaluate the severity of apical periodontitis (AP) in rats exposed to cigarette smoke, through histological analysis of the inflammatory profile and macrophage immunostaining. Material and Methods: thirty-two male Wistar rats were used, distributed into four groups (n=8): PA (rats with induced AP); F (rats exposed to cigarette smoke); FPA (AP-induced rats exposed to cigarette smoke); C (rats without AP and without exposure to cigarettes). For cigarette smoke inhalation, animals remained in a smoking chamber for eight minutes, three times daily for twenty days before AP induction. Then, animals had the coronary pulp exposed to oral environment for 30 days to induce AP while continued inhaling smoke until completing 50 days of experimental period. During euthanasia process, the right hemimaxillas were removed to assess inflammatory profile by hematoxylin and eosin staining and immunohistochemistry for macrophage immulabeling: F4/80 (macrophage), CD206 (M2) and iNOS (M1). Nonparametric data were analyzed by Kruskal-Wallis, followed by post-hoc Dunn and Mann-Whitney (P<.05). Results: The inflammatory infiltrate was moderate in the PA group and intense in the FPA group (P<.05). Histomorphometric analysis of M2 macrophages revealed statistical differences between groups C and PA, and F and FPA (P>.05). In the immunostaining of M1 macrophages, groups C and F showed significant differences when compared to groups PA and FPA (P<0.05). While the PA and FPA groups presented a large amount of immunoreactive cells, being higher for the FPA group (P<0.05). In the F4/80 antibody there was no difference between the groups (P>.05)Conclusion: Inhalation of cigarette smoke in rats contributed to a more intense periapical inflammatory reaction, with a predominant presence of pro-inflammatory M1 macrophages, aggravating the severity of apical periodontitis(AU)
Assuntos
Animais , Ratos , Fumantes , Fumar , Fumar/efeitos adversos , Inflamação , MacrófagosRESUMO
Abstract The aim of this study was to evaluate the M1 and M2 macrophage modulation after stimuli with different materials used during endodontic treatment. In bone marrow-derived macrophage cell culture, from males C57BL/6 wild-type (WT) mice, gene expression analysis of markers to M1 and M2 macrophages was performed by qRT-PCR (Cxcl10, CxCL9, iNOS, Arg1, Chil3, Retnla and MRC1) and cytokine quantification by Luminex® (GM-CSF, IL-10, IL-6, IL-1β and TNF-α) after exposure to the five endodontic sealers: AH Plus, Sealapex Xpress, Endosequence BC Sealer, BioRoot RCS and a calcium hydroxide-based paste. For normal values, ANOVA test was used, followed by Tukey post-test. For non-normal values, the Kruskall-Wallis test was used. BioRootTM RCS and EndoSequence BC SealerTM stimulated the highest expression of markers for M1 macrophages, while calcium hydroxide-based paste stimulated the lowest expression of these gene markers. For M2 protein markers, BioRootTM RCS presented the highest stimulation while calcium hydroxide-based paste also presented the lowest stimulation. It was concluded that all the evaluated filling materials increased the genetic expression of pro- and anti-inflammatory markers: TNF-α and IL-10 respectively. The others proinflammatory mediators showed differences against the filling materials. However, this process did not induce the inflammatory response polarization, resulting in a hybrid macrophage.
Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a modulação dos macrófagos M1 e M2 após estímulos com diferentes materiais utilizados durante o tratamento endodôntico. Em cultura de células de macrófagos derivados da medula óssea de camundongos machos C57BL/6 wild-type (WT), após a exposição à cinco cimentos endodônticos: AH Plus, Sealapex Xpress, Endosequence BC Sealer, BioRoot RCS e pasta à base de hidróxido de cálcio foi realizada a análise da expressão gênica dos marcadores para macrófagos M1 e M2 por qRT-PCR (Cxcl10, CxCL9, iNOS, Arg1, Chil3, Retnla e MRC1) e quantificação de citocinas por Luminex® (GM -CSF, IL-10, IL-6, IL-1β e TNF-α). Para valores normais, foi utilizado o teste ANOVA, seguido do pós-teste de Tukey. Para valores não normais, foi utilizado o teste de Kruskall-Wallis. BioRootTM RCS e EndoSequence BC SealerTM estimularam maior expressão de marcadores para macrófagos M1, enquanto a pasta à base de hidróxido de cálcio estimulou expressão mais baixa desses marcadores gênicos. Para o marcador de proteínas para M2, BioRootTM RCS apresentou a maior estimulação, enquanto a pasta à base de hidróxido de cálcio também apresentou menor estimulação. Concluiu-se que os materiais obturadores avaliados aumentaram a expressão genética de marcadores pró- e anti-inflamatórios: TNF-α e IL-10 respectivamente. Os demais marcadores pró inflamatórios mostraram diferenças em relação aos materiais obturadores. No entanto, esse processo não induziu a polarização da resposta inflamatória, resultando em um macrófago híbrido.
Assuntos
Animais , Masculino , Coelhos , Materiais Restauradores do Canal Radicular , Fenótipo , Teste de Materiais , Resinas Epóxi , Macrófagos , Camundongos Endogâmicos C57BLRESUMO
Abstract This study evaluated the cytotoxicity of Sealapex Xpress and Real Seal XT and their effect on macrophage activation. J774.1 macrophages were incubated with Sealapex Xpress and Seal Real XT (0.1, 1.0, and 10 mg/mL) for 24 and 48 h. Cell viability was assessed by the MTT assay and macrophage activation was measured by pro- and anti-inflammatory cytokine production using ELISA. Data were analyzed using one-way ANOVA and Tukey's post-test (a=0.05). Cell viability was not affected with 0.1 or 1.0 mg/mL of extracts of Sealapex Xpress and Real Seal XT at 24 and 48 h (p>0.05), but was significantly lower when cells were exposed to 10 mg/mL of both sealers (p<0.05). Sealapex Xpress inhibited the production of TNF-a, whereas Real Seal XT induced TNF-a secretion at 24 h (p<0.05). IL-6 production was induced by Real Seal XT, but not by Sealapex Xpress (p<0.05). Real Seal XT and Sealapex Xpress induced the secretion of anti-inflammatory IL-10. IL-4 was not detected in any group. In conclusion, both sealers had low toxicity but differentially activated macrophages. Macrophage activation by Sealapex Xpress was characterized by inhibition of TNF-a and induction of IL-10, whereas Real Seal XT induced IL-6 solely.
Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a citotoxicidade dos cimentos endodônticos Sealapex Xpress e Real Seal XT pelo ensaio de MTT e a ativação de macrófagos J774.1. Os cimentos endodônticos Sealapex Xpress e Real Seal XT foram pesados e os extratos foram obtidos a partir da diluição em meio de cultura DMEM por 48 horas (10mg/mL, 1mg/m, e 0,1 mg/mL). A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio MTT e a produção de citocinas (TNF-a, IL-6 e IL-10) foi investigada pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) em células de linhagem (macrofagos J774.1). Os dados obtidos foram analisados utilizando-se análise de variância de uma via e pós-teste de Tukey (a=0,05). A viabilidade celular após 24 ou 48 horas não foi afetada nas concentrações de 0,1 ou 1 mg/mL dos dois cimentos estudados (p>0,05). Por outro lado, na concentração 10 mg/mL, a viabilidade celular foi significativamente mais baixa (p <0,05). Observou-se que o Sealapex Xpress inibiu a produção de TNF-a, enquanto o Real Seal XT induziu a secreção de TNF-a às 24 h (p<0,05). A produção de IL-6 foi induzida pelo Real Seal XT, mas não pelo Sealapex Xpress (p<0,05). A secreção da citocina anti-inflamatória IL-10 foi induzida tanto pelo Real Seal XT quanto pelo Sealapex Xpress. IL-4 não foi detectada em nenhum grupo. Em conclusão, os dois cimentos obturadores apresentaram baixa toxicidade, mas ativaram os macrófagos de modo distinto. A ativação pelo Sealapex Xpress foi caracterizada pela inibição do TNF-a e indução da IL-10, enquanto o Real Seal XT induziu somente IL-6.
Assuntos
Materiais Restauradores do Canal Radicular , Teste de Materiais , Hidróxido de Cálcio , Salicilatos , Mediadores da Inflamação , MacrófagosRESUMO
Aim: Nitric oxide (NO) is an important mediator related to damage of the pulp tissue and at the same time to regenerative pulp processes. However, it is not clear how common endodontic microorganisms can regulate this mediator. This study aimed to investigate NO production by macrophages and fibroblasts against Enterococcus faecalis- and Staphylococcus aureus-antigens. Methods: RAW 264.7 macrophages and L929 fibroblast cell lines were stimulated with different heat-killed (HK) antigen concentrations (105-108 colony forming units - CFU) from E. faecalis and S. aureus with or without interferon-gamma (IFN-γ). Cell viability by MTT colorimetric assay and NO production from the culture supernatants were evaluated after 72 h. Results: Data here reported demonstrated that none of the antigen concentrations decreased cell viability in macrophages and fibroblasts. The presence of HK-S. aureus and HK-E. faecalis antigen- stimulated NO production with or without IFN-γ on RAW 264.7. The HK-S. aureus antigen stimulated NO production in L929 fibroblasts with or without IFN-γ, and the highest concentration of HK-E. faecalis with IFN-γ also stimulated NO production by these cells. Conclusion: The amount of NO produced by macrophages and fibroblasts may be involved in the concentration and type of prevalent endodontic microorganisms, generating new answers for the understanding of pulpal revascularization/regeneration processes
Assuntos
Staphylococcus aureus , Enterococcus faecalis , Fibroblastos , Macrófagos , Óxido NítricoRESUMO
Abstract Natural products have emerged as a rich source of bioactive compounds for adjunctive treatments of many infectious and inflammatory conditions, including periodontitis. Among the monoterpenes with significant biological properties, there is the perillyl alcohol (POH), which can be found in several essential oils and has shown immunomodulatory properties in recent studies, which may be interesting in the treatment of non-neoplastic inflammatory disorders. Objective To determine the antibacterial and immune modulatory activities of the POH. Methodology The minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum bactericidal concentration (MBC) of the POH for two significant Gram-negative periodontal pathogens were determined by macrodilution and subculture, respectively. Cell proliferation and cytotoxicity in RAW 264.7 macrophages were determined by Trypan Blue and mitochondrial enzymatic activity assay. The modulation of reactive oxygen species (ROS) was analyzed by flow cytometry and expression of TNF and arginase-1 by real-time PCR. Results The POH was effective against P. gingivalis (ATCC 33277) and F. nucleatum (ATCC 25586) with MIC= MBC=1600 μM. No cytotoxicity up to 100 µM was observed on macrophages. The cell proliferation was inhibited from 48 hours at 100 μM (p<0.05) and 250 μM (p<0.01). The POH increased ROS production at both 10 μM and 100 μM (p<0.05) in unstimulated cells. The PMA-induced ROS production was not affected by POH, whereas 100 μM significantly reduced lipopolysaccharide-induced (LPS-induced) ROS. The expression of TNF was not affected by POH in unstimulated cells or in cells polarized to M1 phenotype, whereas both concentrations of POH reduced (p<0.05) the expression of arginase-1 in M2-polarized macrophages. Conclusion The POH has antibacterial activity against periodontal pathogens and reduced proliferation of murine macrophages without significant cytotoxicity at concentrations up to 100 μM. In addition, the POH reduced the LPS-induced ROS and the expression of arginase-1 in M2-polarized macrophages.
Assuntos
Animais , Camundongos , Fusobacterium nucleatum/efeitos dos fármacos , Espécies Reativas de Oxigênio/análise , Porphyromonas/efeitos dos fármacos , Monoterpenos/farmacologia , Macrófagos/efeitos dos fármacos , Antibacterianos/farmacologia , Arginase/análise , Fatores de Tempo , Produtos Biológicos/farmacologia , Testes de Sensibilidade Microbiana , Expressão Gênica , Lipopolissacarídeos/farmacologia , Reprodutibilidade dos Testes , Fator de Necrose Tumoral alfa/análise , Fusobacterium nucleatum/crescimento & desenvolvimento , Espécies Reativas de Oxigênio/metabolismo , Porphyromonas/crescimento & desenvolvimento , Proliferação de Células/efeitos dos fármacos , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real , Citometria de Fluxo , Células RAW 264.7 , Macrófagos/metabolismoRESUMO
As propriedades e a composição dos cimentos endodônticos podem influenciar nas reações inflamatórias perirradiculares e comprometer o sucesso do tratamento endodôntico. Os macrófagos estão presentes no infiltrado inflamatório periapical, envolvidos na eliminação e controle microbiano nesta região. Este estudo avaliou a atividade de viabilidade celular, aderência, fagocitose da levedura S. boulardii, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), óxido nítrico (NO), e das citocinas (TNF- α e TGF-ß) por macrófagos peritoneais murinos de perfil pró-inflamatório (M1) e anti-inflamatório (M2) obtidos de camundongos C57BL/6 e BALB/c, respectivamente. Os macrófagos foram obtidos e a suspensão celular foi colocada em contato com capilares contendo ou não os cimentos Endosequence BC Sealer (BC), Sealer PLus BC (MK), Bio-c Sealer (Ang) e MTA. Mensurou-se a viabilidade celular pelos métodos da exclusão do azul de tripan e por MTT nos tempos 24, 48 e 72 horas. No primeiro ensaio, foi encontrada viabilidade celular semelhante entre os biocerâmicos e o MTA nos tempos testados; no entanto, houve diferença significativa em 72h entre BC e controle (capilar vazio); para o MTT houve diferença com o controle entre: Ang (24h), BC e MK (48h) para M1; para M2, MK (24h), Ang (48h) e BC, Ang, MTA (72h) (p<0,05). Nos ensaios de aderência e de fagocitose não houve diferença significativa para os materiais testados em ambos os subtipos de macrófago. Em relação à produção de ROS, houve uma maior expressão para M1 em comparação com M2. Na ausência do Zimosan não houve produção significativa entre os cimentos, para ambos os macrófagos. Na presença do Zimosan A, o cimento MK apresentou maior produção que os grupos tratados com Ang e MTA, e controle (p<0,05) para macrófago M1. No ensaio de detecção de NO, na presença do estímulo, todos os cimentos testados apresentaram diferenças significativas com o controle, para o macrófago M1. Na dosagem de TNF houve diferença significativa somente para macrófagos M1, com uma maior produção pelo cimento Endosequence BC, mesmo sem estímulo; sobretudo, quando estimulados com IFN-γ, BC apresentou maior produção que os grupos tratados MK e Ang; e, todos os grupos apresentaram diferenças em relação ao controle. A dosagem de TGF- ß não apresentou diferenças para os grupos tratados na presença ou ausência do estímulo. Concluiu-se que a composição dos biocerâmicos, à base de silicato de cálcio, semelhante à do MTA, permitiu que os biocerâmicos não interferissem nas respostas de macrófagos de ambas as linhagens testadas.
The properties and compositions of endodontic sealers may influence the periradicular inflammatory reactions and compromise the success of endodontic treatment. Macrophages are present in the periapical inflammatory infiltrate, being involved in the microbial clearance in this region. This study evaluated the cell viability, adhesion, phagocytosis of S. boulardii, production of reactive oxigen species (ROS) and nitrite oxide (NO) and cytokines (TNF and TGF-ß) by murine peritoneal macrophages of pro-inflammatory (M1) and anti-inflammatory (M2) profiles obtained from C57BL / 6 and BALB / c mice, respectively. Macrophages were obtained and the cell suspension was placed in contact with capillaries containing or not the sealers Endosequence BC Sealer (BC), Sealer PLus BC (MK), Bio-c Sealer (Ang) e MTA. Cell viability was measured by the methods of tripan blue exclusion and by MTT at times 24, 48 and 72 hours. In the first assay, similar cell viability was found between the bioceramic and the MTA in the tested times; However, there was a significant difference in 72h between BC and control (empty capillary); For the MTT there was a difference with the control between: Ang (24h), BC e MK (48h) para M1; para M2, MK (24h), Ang (48h) e BC, Ang, MTA (72h) (p<0,05). n the adherence and phagocytosis assays there was no significant difference for the materials tested in both macrophage subtypes. Regarding the production of ROS, there was a greater expression for M1 compared to M2. In the absence of Zymosan there was no significant production between the sealers for both macrophages. In the presence of Zimosan A, the MK cement presented higher production than the groups treated with Ang and MTA, and control (p <0.05) for M1 macrophages. n the NO detection assay, in the presence of the stimulus, all the sealers tested showed significant differences with the control, for the M1 macrophage. In the TNF there was only difference for M1, with a higher production by the Endosequence BC even without stimulus, when stimulated with IFN-γ, BC showed higher production than the treated groups MK and Ang; and all groups showed differences in relation to control. The TGF-ß dosage did not present difference for the groups treated in the presence or absence of the stimulus. It was concluded that the calcium silicate composition, similar to that of MTA, allowed the bioceramics to not interfere in the macrophages responses of both tested strains.
Assuntos
Obturação do Canal Radicular , Cimentos Dentários , Endodontia , Inflamação , Macrófagos/microbiologia , Anti-InfecciososRESUMO
Muitos produtos probióticos são compostos pela associação de lactobacilos no intuito de potencializar seu efeito benéfico. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a imunomodulação e atividade anti-Candida causada por diferentes combinações de suspensões probióticas em macrófagos e em Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA), e L. paracasei (LP) foram suspendidos para obtenção das suspensões LR, LA, LP, LR+LA, LR+LP, LA+LP e LR+LA+LP. Foram utilizadas suspensões de Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 e C. glabrata (CG) ATCC 9030. Macrófagos de camundongo (RAW 264.7) foram ativados por cada suspensão de lactobacilos e desafiados por cada uma das cepas fúngicas. Foram investigadas taxa de fagocitose, produção de citocinas e óxido nítrico e a viabilidade celular. A melhor suspensão probiótica para cada cepa fúngica seria usada nos testes in vivo, com G. mellonella, no entanto, devido à baixa virulência das espécies não-albicans, os testes in vivo prosseguiram com CA e LR. Duas cepas clínicas de CA foram acrescentadas: 21 e 60. Suspensões de LR foram injetadas na hemolinfa das larvas 24 h antes do desafio com as cepas fúngicas. Foram determinadas curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL das cepas de C. albicans e de hemócitos. Os resultados foram analisados estatisticamente de acordo com a distribuição normal (ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn) e a curva de sobrevivência pelo teste de Log-rank (Mantel-Cox), p<0,05. As melhores suspensões para CA, CK e CG foram LR (com melhores resultados no perfil de citocinas), LP e LA (com melhores resultados sobre a fagocitose), respectivamente. Em G. mellonella, a suspensão de LR proporcionou aumento da percentagem de sobrevivência e do número de hemócitos e diminuição da contagem de UFC/mL em todos os grupos com diferenças estatisticamente significantes. Sendo assim, pode-se concluir que as suspensões de lactobacilos possuem potencial imunomodulador cepa dependente mas sua mistura não favorece essa qualidade. Além disso, possuem atividade anti-Candida, demonstrada pela diminuição na contagem de Candida(AU)
Many probiotic products are composed by association of lactobacilli in order to potentiate their beneficial effect. Therefore, the objective of this study was evaluating the immunomodulation and anti-Candida activity caused by different combinations of probiotic suspensions in macrophages and in Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA) and L. paracasei (LP) were suspended to obtain the suspensions LR, LA, LP, LR + LA, LR + LP, LA + LP and LR + LA + LP. Suspensions of Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 and C. glabrata (CG) ATCC 9030 were used. Mouse macrophages (RAW 264.7) were activated by each suspension of lactobacilli and then challenged by each fungal strain. Phagocytosis, cytokine and nitric oxide production and cell viability were investigated. The best lacobacilli suspension for each fungal strain would be used in the in vivo assays with G. mellonella, however, because of low virulence of the non-albicans species, in vivo tests were performed with CA and LR. Two clinical strains of CA were added: 21 and 60. LR suspensions were injected into the haemolymph of the larvae 24 h before challenging with fungal strains. Survival curve, CA strains CFU/mL counting and hemocytes were determined. The results were statistically analyzed according to their normal distribution (ANOVA and Tukey or Kruskal-Wallis and Dunn) and the survival curve by Log-rank test (MantelCox), p <0.05. The best suspensions for CA, CK and CG were LR (which obtained the best results in the cytokine profile), LP and LA (which obtained the best results on phagocytosis), respectively. In G. mellonella, LR suspension increased percentage survival and hemocyte counting and decreased CFU/mL counting in all groups, with statistically significant differences in the results. Thus, it can be concluded that the suspensions of lactobacilli have immunomodulatory potential strain-dependent but their association does not favor this quality. Besides, they showed anti-Candida activity, demonstrated by the decrease of Candida counting (AU)
Assuntos
Humanos , Candida , Imunomodulação , MacrófagosRESUMO
Enterococcus faecalis (E. faecalis) é um microrganismo presente em lesões endodônticas persistentes, mostrando maior resistência do que outras bactérias ao Hidróxido de Cálcio, um medicamento alcalino que consegue eliminar diversos microrganismos durante o tratamento endodôntico. Assim, os objetivos desse estudo foram: (a) avaliar a resposta de E. faecalis isolados de canal radicular, após estresse alcalino, quanto sobrevivência, crescimento, alteração do pH, resistência/susceptibilidade antimicrobiana e formação de biofilme sobre discos de dentina; (b) avaliar a capacidade fagocítica e produção de óxido nítrico (NO) por macrófagos humanos, frente a bactérias E. faecalis de canais radiculares, submetidas a estresse alcalino; (c) avaliar a expressão de TLR2 e CD14 na superfície dos macrófagos desafiados com as diferentes cepas bacterianas. As cepas utilizadas foram: ATCC4083 (CANAL 1) e uma cepa clínica, obtida por nós, a partir de uma lesão endodôntica primária (CANAL 2), ambas isoladas de canais radiculares; e ATCC29212 isolada de urina (URINA), utilizada como controle. O estresse alcalino foi obtido através da inoculação das bactérias em meio BHIalcalino por 4, 24, 48 e 72 horas. As bactérias alcalino-resistentes foram semeadas em ágar, com ou sem troca do meio, e quantificadas por CFU/mL. A susceptibilidade antimicrobiana das diferentes cepas, estressadas ou não (controle), foi determinada pelo Etest; e o biovolume do biofilme foi quantificado microscopicamente. Para avaliar a capacidade fagocítica, macrófagos obtidos a partir de monócitos do sangue periférico foram desafiados com as diferentes cepas, estressadas ou não em meio BHI-alcalino, por 30 minutos, na proporção 5:1 (bactéria/macrófago), e corados com Laranja de Acridina. Foi contado o total de macrófagos com bactérias internalizadas, considerando o número de bactérias internalizadas por célula (<5 e =5). A concentração de NO foi medida em sobrenadantes, através da reação de Griess, e a expressão de TLR2 e CD14 pelos macrófagos foi analisada por citometria de fluxo. Os resultados revelaram que Enterococcus oriundos de canal radicular foram menos resistentes ao estresse alcalino e mais susceptíveis aos antibióticos testados, do que as bactérias oriundas de urina. A falta de nutrientes foi um fator determinante para o crescimento bacteriano de todas as cepas. O biovolume dos biofilmes foi semelhante para todas as cepas estudadas, e não foi alterado após exposição ao BHI-alcalino. Na presença de bactérias submetidas ao estresse alcalino, houve um menor número de macrófagos com bactérias internalizadas, em comparação ao controle. No entanto, a produção de NO e a expressão de TLR2 e CD14 não foram alteradas. Independentemente da cepa utilizada e da presença de estresse alcalino, a maioria dos macrófagos apresentavam-se com =5 bactérias internalizadas por célula. Na ausência de estresse, as cepas de urina resultaram em maior produção de NO que aquelas oriundas do canal radicular; entretanto, a produção deste gás foi semelhante entre as cepas após estresse alcalino. A partir desses resultados, podemos concluir que bactérias E. faecalis de urina diferem daquelas oriundas do canal radicular, principalmente quanto a susceptibilidade/resistência microbiana; assim sugerimos que estudos envolvendo o campo da Endodontia devam ser realizados com cepas oriundas de canal radicular, preferencialmente que de urina. Concluiu-se ainda que um ambiente alcalino associado a falta de nutrientes pode reduzir o crescimento de E. faecalis. Adicionalmente, o estresse alcalino pode levar a alterações na estrutura da parede de E. faecalis, o que dificulta o seu reconhecimento, reduzindo sua fagocitose, mas não a sua capacidade de ativar a produção de NO, pelos macrófagos. Assim, uma medicação intracanal a base de hidróxido de cálcio associada a restaurações coronais muito bem adaptadas, para se evitar infiltração, é fundamental em tratamentos endodônticos. No entanto, os efeitos do estresse alcalino, nos Enterococcus alcalino-resistentes, podem prejudicar sua fagocitose, contribuindo para sua persistência na doença endodôntica.(AU)
Enterococcus faecalis (E. faecalis) is an microorganism present in persistent endodontic lesions, with greater resistance than other bacteria to the calcium hydroxide, an alkaline intracanal dressing which eliminate several bacterial species during endodontic treatment. The objectives of this study were: (a) to evaluate the response of E. faecalis, isolated from root canal, under alkaline-stress, starvation, antimicrobial resistance/susceptibility and biofilm formation on dentin disks; (b) to evaluate the phagocytic ability and the nitric oxide (NO) concentration of human macrophages against root canal E. faecalis isolates submitted to alkaline stress; (c) to evaluate the intensity of TLR2 and CD14 expression on the surface of macrophages challenged with the different bacterial strains. The bacterial strains used were: ATCC 4083 (CANAL 1) and a clinical strain, obtained by us, from a primary endodontic lesion (CANAL 2), both isolated from pulpless teeth; and ATCC29212, isolated from urine (URINE), was a reference for comparison. All strains were inoculated in alkaline-BHI broth for 4, 24, 48 and 72 hours. The alkalineresistant bacteria were seeded in agar and quantified by CFU/mL. Antimicrobial susceptibility of bacterial strains, stressed or not (control) was determined by the Etest and the biovolume after biofilm formation was quantified by microscopy. To evaluate the phagocytic ability, macrophages obtained by culture of peripheral blood monocyte, were challenged with bacterial strains, stressed or not in BHI-alkaline for 30 minutes at 5:1 ratio (bacteria/macrophages) and stained with Acridine Orange. The total of macrophages with internalized bacteria and also the number of internalized bacteria per cell (<5 and =5) were counted. The NO concentration in the supernatants was measured by Griess reaction and the intensity of TLR2 and CD14 expression on the surface of macrophages was also analyzed by flow cytometry. Results shows less resistance to alkaline stress in root canal strains and less resistance to tested antibiotics when compared with urine enterococci. The lack of nutrient was a determining factor for the bacterial growth in all enterococci strains. The biovolume of biofilm formed by all strains were similar, and were not altered after exposure to an alkaline-BHI. In the presence of alkaline-stressed bacteria, there was a smaller number of macrophages with internalized bacteria, when compared to the control. The NO production or the TLR2 and CD14 expression were not altered. Regardless of the strain or alkaline environment, the number of macrophages that showed =5 internalized bacteria per cell was higher. Without an alkaline-stress the NO production results higher in the urine strain, when compared with the root canal strains, however, was not modificated after the exposure of bacteria to alkalinestress. We conclude that root-canal strains have different features when compared with urine enterococci, with the main differences being evident in their resistance/susceptibility to antibiotics; thus, we suggest that researches with aims directed to interpreting responses to endodontic treatment should be conducted with strains from root-canals. Besides, an alkaline environment associated to a starvation condition can reduce bacterial growth. Additionally, alterations in the structure of bacterial cell wall after alkali-stressing possibly made their recognition difficult, reducing their ability to be phagocytized, but not their ability to activate NO production. Therefore, intracanal medication with calcium hidroxyde dressing and coronal restorations, to prevent infiltration, should be critical in treatments of endodontics infections. However, the impact of alkaline stress, in alkaline-resistant enterococci, can impair the phagocytosis, contributing to their persistence in endodontic disease.(AU)
Assuntos
Humanos , Enterococcus faecalis/efeitos dos fármacos , Enterococcus faecalis/fisiologia , Macrófagos/microbiologia , Macrófagos/fisiologia , Fagocitose/fisiologia , Biofilmes/crescimento & desenvolvimento , Sobrevivência Celular , Células Cultivadas , Contagem de Colônia Microbiana , Cavidade Pulpar/microbiologia , Óxido Nítrico/metabolismo , Fatores de Tempo , Urina/microbiologiaRESUMO
Galleria mellonella é utilizada para estudar a virulência de microorganismose a potência de antimicrobianos. Este estudo buscou estabelecer criação de lagartas utilizadas em ensaios in vivo e avaliar o efeito do probiótico Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469, inativado pelo calor, no modelo e in vitro. Os objetivos foram: a) desenvolver uma metodologia de criação de G. mellonella, avaliando quatro dietas diferentes sobre crescimento larval, volume da hemolinfa, quantidade de hemócitos e resposta à infecção por meio da curva de sobrevivência b) avaliar os efeitos de L. rhamnosus sobre G. mellonella analisando: curva de sobrevivência; contagem de hemócitos, melanização da hemolinfa, produção de óxido nítrico na hemolinfa e os efeitos de L. rhamnosussobre macrófagos RAW 264.7 desafiados por S. aureus ou E. coli, analisando o perfil de indução de citocinas e óxido nítrico. Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA e Tukey, 5%) e a curva de morte e estimativa das diferenças na sobrevivência foram determinadas por Log-rank (Mantel-Cox, 5%). As rações a base de fubá e pólen apresentaram os melhores resultados, sendo semelhantes entre si e diferentes das demais rações (p < 0,05), sendo a ração a base de fubá escolhida por apresentar resultados semelhante ao pólen e menor custo. Os resultados in vivo demonstraram diminuição na mortalidade das lagartas no grupo com inoculação de L. rhamnosus, entretanto, sem diferença estatística. Houve aumento na contagem de hemócitos quando G. mellonella foi inoculada com S. aureus e E. coli, com ou sem inoculação de L. rhamnosus, além de haver melanização da hemolinfa,demonstraram que o L. rhamnosus melhorou a resposta de G. mellonella quando desafiada por bactérias. Os resultados in vitro demonstram que L.rhamnosus induziu alta produção de TNF-α, igualmente aos demais grupos (p ≤ 0,05), não havendo produção de IL-1β e IL-6 no grupo estimulado apenas por L. rhamnosus. Nos grupos que receberam o segundo estímulo ou ...
Galleria mellonella is used to study microorganisms virulence and antimicrobial power. This study aimed to standardize the creation of worms used in In vivo assays and evaluate the effect of heat-killed probiotic, Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469, on this model and in in vitro studies. The objectives were: a) developing a methodology for breeding G. mellonella with four different diets influence on larval growth,hemolymph volume, quantity of hemocytes and infection response bymeans of survival curve; b) evaluating the effects of L. rhamnosus on G.mellonella by means of the following analyzes: survival curve, hemocytes counting, hemolymph melanization, nitric oxide release, and the effects ofL. rhamnosus on macrophages RAW 264.7 challenged by S. aureus or E.coli by means of cytokines and nitric oxide production. Results were statistically analyzed (ANOVA and Tukey, 5%). Death curve and estimation of differences in survival were determined by Log-rank (MantelCox, and pollen-based rations showed the best results, being similar to each other and different from the other ones (p <0.05).Cornmeal ration was chosen since it presents results similar topollen and lower cost. In vivo results showed reduction in mortality of caterpillars in the group inoculated with L. rhamnosus, with no statistical difference. Hemocyte counting increased when G. mellonella was inoculated with S. aureus and E. coli, with or with out inoculation of L. rhamnosus, add to that hemolymph melanization, showing that L.rhamnosus improved G. mellonella response challenged by bacteria. Invitro results show that L. rhamnosus induced high production of TNF-α,like other groups (p = 0.05), with no production of IL-1β and IL-6 in thegroup stimulated only by L. rhamnosus. The groups which received only the second stimulus or only the contact with S. aureus or E. coli, there wasIL-1β, IL-6 and IL-10 production. The highest nitric oxide production was observed in the groups challenged...
Assuntos
Citocinas , Lacticaseibacillus rhamnosus , Macrófagos , Óxido NítricoRESUMO
Galleria mellonella é utilizada para estudar a virulência de microorganismose a potência de antimicrobianos. Este estudo buscou estabelecer criação de lagartas utilizadas em ensaios in vivo e avaliar o efeito do probiótico Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469, inativado pelo calor, no modelo e in vitro. Os objetivos foram: a) desenvolver uma metodologia de criação de G. mellonella, avaliando quatro dietas diferentes sobre crescimento larval, volume da hemolinfa, quantidade de hemócitos e resposta à infecção por meio da curva de sobrevivência b) avaliar os efeitos de L. rhamnosus sobre G. mellonella analisando: curva de sobrevivência; contagem de hemócitos, melanização da hemolinfa, produção de óxido nítrico na hemolinfa e os efeitos de L. rhamnosussobre macrófagos RAW 264.7 desafiados por S. aureus ou E. coli, analisando o perfil de indução de citocinas e óxido nítrico. Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA e Tukey, 5%) e a curva de morte e estimativa das diferenças na sobrevivência foram determinadas por Log-rank (Mantel-Cox, 5%). As rações a base de fubá e pólen apresentaram os melhores resultados, sendo semelhantes entre si e diferentes das demais rações (p < 0,05), sendo a ração a base de fubá escolhida por apresentar resultados semelhante ao pólen e menor custo. Os resultados in vivo demonstraram diminuição na mortalidade das lagartas no grupo com inoculação de L. rhamnosus, entretanto, sem diferença estatística. Houve aumento na contagem de hemócitos quando G. mellonella foi inoculada com S. aureus e E. coli, com ou sem inoculação de L. rhamnosus, além de haver melanização da hemolinfa,demonstraram que o L. rhamnosus melhorou a resposta de G. mellonella quando desafiada por bactérias. Os resultados in vitro demonstram que L.rhamnosus induziu alta produção de TNF-α, igualmente aos demais grupos (p ≤ 0,05), não havendo produção de IL-1β e IL-6 no grupo estimulado apenas por L. rhamnosus. Nos grupos que receberam o segundo estímulo...
Galleria mellonella is used to study microorganisms virulence and antimicrobial power. This study aimed to standardize the creation of worms used in In vivo assays and evaluate the effect of heat-killed probiotic, Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469, on this model and in in vitro studies. The objectives were: a) developing a methodology for breeding G. mellonella with four different diets influence on larval growth,hemolymph volume, quantity of hemocytes and infection response bymeans of survival curve; b) evaluating the effects of L. rhamnosus on G.mellonella by means of the following analyzes: survival curve, hemocytes counting, hemolymph melanization, nitric oxide release, and the effects ofL. rhamnosus on macrophages RAW 264.7 challenged by S. aureus or E.coli by means of cytokines and nitric oxide production. Results were statistically analyzed (ANOVA and Tukey, 5%). Death curve and estimation of differences in survival were determined by Log-rank (MantelCox, and pollen-based rations showed the best results, being similar to each other and different from the other ones (p <0.05).Cornmeal ration was chosen since it presents results similar topollen and lower cost. In vivo results showed reduction in mortality of caterpillars in the group inoculated with L. rhamnosus, with no statistical difference. Hemocyte counting increased when G. mellonella was inoculated with S. aureus and E. coli, with or with out inoculation of L. rhamnosus, add to that hemolymph melanization, showing that L.rhamnosus improved G. mellonella response challenged by bacteria. Invitro results show that L. rhamnosus induced high production of TNF-α,like other groups (p = 0.05), with no production of IL-1β and IL-6 in thegroup stimulated only by L. rhamnosus. The groups which received only the second stimulus or only the contact with S. aureus or E. coli, there wasIL-1β, IL-6 and IL-10 production. The highest nitric oxide production was observed in the groups challenged...
Assuntos
Citocinas , Lacticaseibacillus rhamnosus , Macrófagos , Óxido NítricoRESUMO
O carcinoma epidermóide (CE) de língua representa uma das lesões malignas mais comuns em cavidade oral e caracteriza-se por apresentar um comportamento localmente invasivo e agressivo. Os exossomos são responsáveis pela comunicação célula-célula e podem influenciar na progressão tumoral, metástase e eficácia terapêutica. Dentre as células capazes de secretar exossomos estão as células tumorais e as células imunes. Sabe-se que a presença das células imunes é importante para erradicar os tumores. No entanto, achados recentes demonstram que a inflamação pode promover o crescimento tumoral. Os macrófagos associados a tumores (TAMs) são conhecidos por apresentarem diferentes subtipos, M1 e M2, capazes de secretarem exossomos. O presente estudo se propôs a observar o comportamento dos exossomos derivados dos TAMs, dos subtipos 1 e 2, frente a cultura de células humanas SCC-25, HSC-3 e SAS derivadas de CE de língua, por meio da análise da capacidade de invasão, proliferação e viabilidade das células tumorais na presença dos exossomos. Observou-se que as microvesículas derivadas dos TAMs apresentam positividade para CD63, caracterizando-as como exossomos. Os exossomos dos TAMs do subtipo M2 foram os únicos a apresentarem marcação para TGF-ß, quando em comparação com os exossomos M1, THP1 e das linhagens celulares de CE, sugerindo que os exossomos M2 podem ser responsáveis pela expressão de TGF-ß nas células tumorais, uma vez que são internalizados. Nos ensaios de migração, observou-se que as células SCC-25 em presença de meio de cultura DMEM F/12, apresentaram maior capacidade de invasão frente aos exossomos M2 (p≤0,001), para concentração de 0,1 µg/ml. Para as células HSC-3 e SAS, não foi observada relação estatisticamente significante entre a presença de exossomos cultivados juntamente com as células tumorais e a capacidade de invasão celular (p>0,05). Quando os exossomos foram colocados no compartimento inferior do transwell, as células HSC-3 em presença dos exossomos M2 (1,0 µg/ml) apresentaram maior capacidade de invasão (p≤0,001). O teste de viabilidade demonstrou que as células HSC-3 tornam-se mais viáveis frente à presença dos exossomos M2 (p≤0,001) na concentração de 50 µg/ml. Para as células SCC-25, o resultado foi o mesmo (p≤0,05). A imunofluorescência demonstrou a internalização dos exossomos nas linhagens celulares estudadas. Os achados sugerem que a presença de exossomos M2, frente às culturas de células de CE de língua, pode ser um campo de pesquisa importante para futuros estudos com terapias-alvo (AU).
Squamous cell carcinoma (SCC) of the oral tongue is one of the most common malignant lesions in the oral cavity and is characterized by presenting a locally invasive and aggressive behavior. The exosomes are responsible for cell-cell communication and may influence tumor progression, metastasis and therapeutic efficacy. Among the cells that can secrete exosomes are tumor cells and immune cells. It is known that the presence of immune cells is important to eradicate tumors. However, recent findings suggest that inflammation may promote tumor growth. The tumor associated macrophages (TAMs) are known to have subtypes, M1 and M2, that secrete exosomes. This study's goal was to observe the behavior of derivatives TAMs exosomes, subtypes 1 and 2, against human cell culture SCC-25, HSC-3 and SAS derived from SCC of oral tongue, through the analysis of invasiveness, proliferation and viability of tumor cells in the presence of exosomes. It was observed that the microvesicles derived from TAMs are positive for CD63, characterizing them as exosomes. The exosomes of the M2 subtype TAMs were the only ones to present TGF-ß marking, as compared with M1 exosomes, THP1 and SCC cell lines, suggesting that M2 exosomes may be responsible for TGF-ß expression in tumor cells. In the migration tests, it was found that the SCC-25 cells in the presence of culture medium DMEM F / 12 showed higher invasion capacity in the presence of M2 exosomes (p≤0,001) to a concentration of 0.1 µg/ml. For HSC-3 and SAS cells, there was no significant statistical relationship between the presence of exosomes and invasiveness (p> 0.05) for the exosomes derived from TAMs. When the exosomes were placed in the lower compartment of the transwell, the HSC-3 cells in the presence of M2 exosomes (1.0 µg/ml) had higher invasiveness (p≤0,001). The viability test showed that HSC-3 cells became more viable in the presence of M2 exosomes (p≤0.001) at a concentration of 50 µg/ml. For SCC-25 cells, the result was the same (p≤0.05). Immunofluorescence showed the internalization of exosomes in the cell lines studied. These findings suggest that the presence of M2 exosomes in the SCC of the oral tongue cell cultures may be an important research field for future studies of targeted therapies (AU).
Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas/patologia , Exossomos , Células THP-1 , Macrófagos , Técnicas In Vitro/métodos , Análise de Variância , Imunofluorescência/estatística & dados numéricos , Estatísticas não ParamétricasRESUMO
Hamamelis virginiana L. é uma planta nativa dos Estados Unidos daAmérica que foi inserida no Brasil por conta de suas vastas atividadesbiológicas, como ação antimicrobiana e anti-inflamatória. As pesquisas com extratos desse vegetal são vastas, embora não haja estudos com extrato glicólico da mesma. O objetivo do presente trabalho foi avaliar aatividade antimicrobiana e anti-inflamatória do extrato glicólico deHamamelis virginiana L. sobre cepas padrão de leveduras do gêneroCandida (Candida albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei e C. tropicalis), espécies de bactérias Gram-positivas(Enterococcus faecalis Staphylococcus aureus e Streptococcus mutans) eGram-negativas (Acinetobacter baumanii, Escherichia coli, Klebsiellapneumoniae), nas fases planctônica e biofilme; além de avaliar acitotoxicidade e atividade anti-inflamatória. A atividade antimicrobiana foi realizada por teste de microdiluição em caldo para a determinação daConcentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Microbicida Mínima(CMM), sendo os resultados utilizados como parâmetro para análise embiofilmes monotípicos. A atividade citotóxica foi analisada pelo teste MTTe quantificação da produção das citocinas interleucina-1β (IL-1β) e fatorde necrose tumoral alfa (TNF-α) por ELISA, sendo a avaliação da atividade anti-inflamatória realizada por meio de exposição da cultura de macrófagos de camundongo (RAW 264.7) a lipopolissacarídeo (LPS) deE. coli seguido por tratamento com o extrato de H. virginiana L. Os resultados que apresentaram distribuição normal foram analisados por ANOVA e teste Tukey (p≤ 0,05); já os sem distribuição normal foram analisados por Kruskal-Wallis e pós teste Dunns. Os resultados obtidos revelam que o extrato glicólico de Hamamelis virginiana L. proporcionou atividade antimicrobiana sobre os micro-organismos testados no presenteestudo e o teste de citotoxicidade apontou viabilidade celular igual ousuperior ao controle, ...
Hamamelis virginiana L. is a North American plant that was insert in Brasilbecause their biological activities, like antimicrobial and anti-inflamatoryactivities. Large researchs are development with H. virginiana L. extracts, although there are no studies with glycolic extract from it. The objective of this work was to evaluate the antimicrobial and anti-inflammatory activity of glycolic extract of Hamamelis virginiana L. over standard strains ofgenus Candida yeast (C. albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C.guilliermondii, C. krusei e C. tropicalis), species of Gram-positive bacteria(Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus e Streptococcus mutans)and Gram-negative (Acinetobacter baumanii, Escherichia coli, Klebsiellapneumoniae), in plankton communities and biofilm; besides the cytotoxicity and anti-inflammatory. The antimicrobial activity was performed by microdiluition test in broth for determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) e Minimum Microbicide Concentration(MMC), and the results used for antimicrobial analysis in biofilmsmonotypic. The cytotoxic activity was analyzed by the MTT test andquantification of production of the cytokines IL-β 1 and TNF-α by ELISA.,being that the anti-inflamatory activity was performed with exposition ofmacrophages mouse culture to E. coli lipopolissacaride (LPS) and extractpost-treatment. The results were analyzed by ANOVA and Tukey Test (p ≤0.05) if the results present normal distribuition; and Kruskal Wallis andpost-test Dunn if the results dont presente normal distribuition (p ≤ 0.05).Results shows that the H. virginiana L. glycolic extract have antimicrobialactivity about test micro-organisms and the cytotoxicity test shows highcellular viability or equal the control, except for the 100 mg/mL for 24 hcontact time. Cytokines werent produced by macrophages. Nitric oxidewas produced by cells in a contact for 24 h with the extract, which can berelated with the increased ...
Assuntos
Biofilmes , Citocinas , Macrófagos , Medicamento FitoterápicoRESUMO
O processo de reparo ósseo depende de uma resposta inflamatória inicial e transitória, a qual envolve a participação de diversos leucócitos, como células da linhagem monócito/macrófago. O receptor CCR2 é importante para o recrutamento de macrófagos durante as respostas imunes, além de ter um papel na regulação da osteoclastogênese. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar papel de células CCR2+ no processo de reparo ósseo alveolar pós-exodontia em camundongos, por meio de análises microscópicas (MicroCT, histomorfometria, análise de birrefringência e imuno-histoquímica) e moleculares (PCRArray) comparativas entre as linhagens C57Bl/6 (WT) e CCR2KO, ao longo dos períodos de 0 hora, 7, 14 e 21 dias pós-exodontia do incisivo superior direito. Como resultado geral das análises microscópicas, constatamos que a ausência de células CCR2+ não afetou o resultado final do reparo ósseo alveolar em camundongos CCR2KO, mas levou a alterações transitórias e estatisticamente significantes (p<0,05) para quantificação de infiltrado inflamatório, vasos sanguíneos, fibroblastos, fibras colágenas, osteoblastos e osteoclastos. Além disso, a ausência de células CCR2+ resultou em diminuição (p<0,05) de células F4/80+ e CCR5+ no infiltrado inflamatório ao longo do processo de reparo ósseo alveolar de camundongos CCR2KO, demonstrando o papel do receptor CCR2 no recrutamento de macrófagos (células F4/80+), bem como sugerindo que as células F4/80+ apresentam dupla positividade para os receptores CCR2 e CCR5. Neste contexto, o receptor CCR5 seria o responsável pela migração remanescente, ainda que reduzida, de células F4/80+ nos animais CCR2KO. Considerando os resultados moleculares, a ausência de CCR2 resultou na alteração da expressão de diferentes marcadores em camundongos CCR2KO, tais como: o fator de crescimento TGF1, marcadores de matriz COL1, MMP1a, MMP2 e MMP9, marcadores ósseos RUNX2, DMP1, RANKL, RANK e CTSK, e marcadores de MSCs CD106, COT-4, NANOG, CD146...
The bone repair process depends of an initial and transitory inflammatory response, which involves the participation of various leukocytes subsets, as of the monocyte/macrophage lineage. The CCR2 receptor is important to macrophage recruitment during immune responses, and play an active role in the regulation of osteoclastogenesis. Thereby, the purpose of this study was to investigate the role of CCR2+ cells in the alveolar bone repair process in mice, by means of microscopic (MicroCT, histomorphometry, birefringence analysis and immunohistochemistry) and molecular (PCRArray) comparative analysis between C57BL / 6 (WT) and CCR2KO mice during periods of 0 hour, 7, 14 and 21 days post-extraction of the right upper incisor. As a result of the microscopic analysis, we noted that the absence of CCR2+ cells did not affect in the overall outcome of alveolar bone repair in CCR2KO mice, but resulted in transient and statistically significant (p<0.05) alterations of inflammatory infiltrate, blood vessels, fibroblasts, collagen fibers, osteoblasts and osteoclasts counts. Furthermore, the absence of CCR2+cells resulted in a decrease (p<0.05) of CCR5+ and F4/80+ cells in the inflammatory infiltrate along the alveolar bone repair process in CCR2KO mice, demonstrating the role of CCR2 receptor in macrophages migration (F4/80+ cells), as well as suggesting that the F4/80+ cells are double positive for CCR2 and CCR5. In this context, CCR5 receptor could be responsible for the remaining (but reduced) migration, of the F4/80 + cells in CCR2KO mice. According to molecular results, the absence of CCR2 resulted in an altered expression of different markers in CCR2KO mice, such as: growth factor TGF1, the matrix markers COL1, MMP1a, MMP2 and MMP9, the bone markers RUNX2, DMP1 RANKL, RANK and CTSK, and MSCs markers CD106, OCT-4, NANOG, CD146 and CD105, as well as immunological markers as IL-6 and TNF-, chemokine receptors CCR1, CXCR1 and CCR5, and the chemokines CCL12, CCL20, CCL25...
Assuntos
Animais , Masculino , Camundongos , Processo Alveolar/fisiologia , /fisiologia , Regeneração Óssea/fisiologia , Fibroblastos/fisiologia , Imuno-Histoquímica , Macrófagos/fisiologia , Biomarcadores , Reação em Cadeia da Polimerase , Período Pós-Operatório , Cirurgia Bucal , Fatores de TempoRESUMO
Atualmente, a população mundial está passando por um processo de transição demográfica, relacionado com o aumento considerável do número de idosos em relação aos jovens. O rápido crescimento da população idosa constitui uma das maiores preocupações da sociedade moderna, o que demanda um aumento no estudo da saúde e da melhoria da qualidade de vida dos idosos, incluindo um maior esclarecimento dos aspectos patofisiológicos relacionados com as doenças microbianas. Uma das infecções que afetam os idosos, principalmente os imunocomprometidos, é a candidose, a qual pode ser causada por diferentes espécies de Candida, em especial Candida albicans (C. albicans). Os monócitos e macrófagos exercem funções essenciais no combate a microrganismos através do processo fagocítico que abrange a produção de espécies reativas do nitrogênio e oxigênio que culminam no controle e/ou morte do patógeno. Uma vez esses fatores comprometidos, o combate aos agentes agressores é dificultado e ou ineficaz fazendo com que estas disfunções ocasionem problemas clínicos. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar in vitro a capacidade fagocítica, a geração de óxido nítrico (NO) e peróxido de hidrogênio (H2O2) intracelular, e a habilidade de controlar o crescimento extracelular do fungo C. albicans por monócitos e macrófagos humanos de idosos e jovens. Para isso, foram obtidos monócitos do sangue periférico de indivíduos idosos e jovens os quais permaneceram em cultura por 7 dias e se diferenciaram em macrófagos. Ambos os fagócitos foram desafiadas com diferentes proporções de C. albicans viáveis (5 células:1 fungo, 1:1 e 1:5) por 30min, 2h e 5h. Após os desafios, os dados foram analisados por meio de ensaio fluorescente de fagocitose e crescimento fúngico extracelular, e pelos kits DAF-FM diacetato (NO) e Cell Rox Deep (H2O2). Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão (SD) dos valores ou porcentagens obtidos e a análise estatística foi...
Currently, the world population is undergoing a process of demographic transition, associated with a considerable increase in the number of elderly compared with young subjects. The rapid growth of the elderly population is a major concern of the modern society, which requires an increase in the study of health and improved quality of life for the aged. This includes a greater clarification of the pathophysiological aspects of microbial diseases. One of the infections affecting the elderly, particularly those immunocompromised, is the candidosis that can be caused by various Candida species, especially Candida albicans (C. albicans). Monocytes and macrophages exert essential functions in combating microorganisms by phagocytic process. During this process occur the production of reactive nitrogen species and reactive oxygen species that culminate in the control and/or death of the pathogen. Once these factors are affected, the fight against aggressors is difficult and/or ineffective, and these disorders can cause clinical problems. Thus, the aim of this in vitro study was to investigate occurrence of phagocytosis, the intracellular generation of nitric oxide (NO) and hydrogen peroxide (H2O2), and the ability of human monocytes and macrophages from young and old in controlling the extracellular growth of the fungus C. albicans. Therefore, peripheral blood monocytes from elderly and young subjects were obtained and remained in culture for 7 days until they differentiate into macrophages. Both mononuclear cells were challenged with different proportions of viable C. albicans (5 cells:1 fungus, 1:1 and 1:5) for 30min, 2h and 5h. After the challenges, it was possible to evaluate the ability of fungal internalization and the controlling of extracellular fungal growth by a fluorescent assay, and measure the intracellular production of nitric oxide (NO) by DAF-FM Diacetate and hydrogen peroxide (H2O2) by Rox Deep Cell Kit. The results were expressed as mean ± standard...
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adolescente , Adulto Jovem , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Candida albicans/fisiologia , Macrófagos/imunologia , Macrófagos/microbiologia , Monócitos/imunologia , Monócitos/microbiologia , Fatores Etários , Análise de Variância , Sobrevivência Celular , Imunofluorescência , Fagocitose/fisiologia , Óxido Nítrico/metabolismo , Peróxido de Hidrogênio/metabolismo , Fatores de TempoRESUMO
Em animais, os protocolos de Treinamento Físico Crônico (TF) aeróbio de nível moderado têm sido relacionados com a melhora da capacidade do sistema imunológico, como por exemplo o aumento dos leucócitos e a maior produção de citocinas e de oxido nítrico. Durante o envelhecimento, ocorre uma desregulação do sistema imunológico, conhecido como Imunossenescência, a qual contribui para o aumento da suscetibilidade a infecções, câncer e autoimunidade, e redução da resposta vacinal. Assim, o presente estudo verificou os resultados do TF sobre o sistema imunológico, avaliando a capacidade fagocítica dos macrófagos peritoneais oriundos de animais jovens e idosos. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizados ratos da linhagem Wistar com 60 dias (Jovens) e com 14 meses de idade (Idosos), divididos em quatro grupos: Jovens Sedentários (JS) e Treinados (JT), e Idosos Sedentários (IS) e Treinados (IT). O protocolo de TF foi realizado através do exercício de nível por meio de natação por 45 minutos, três vezes na semana, por oito semanas consecutivas. Após, os macrófagos peritoneais foram desafiados em vitro, durante 30 e 120 minutos, com Escherichia Coli (E. coli) ou Candida albicans (C. albicans), previamente corados com FITC. Células com microrganismos internalizados foram quantificadas por meio de microscopia de fluorescência. RESULTADOS: Após o protocolo de EF, o percentual de macrófagos peritoneais com microrganismos internalizados, obtidos a partir dos ratos jovens ou idosos, foi maior (p < 0,05) em relação aos sedentários. Estes achados foram verificados tanto após desafio com bactérias E. coli quanto com fungos C. albicans, e independente do período de desafio. Os valores obtidos em 120 minutos foram superiores que aqueles correspondentes aos 30 minutos de desafio. Após o EF, os valores percentuais de macrófagos com microrganismos internalizados foram maiores entre os idosos que aqueles observados entre os jovens, independente do período de desafio...
In animals, the aerobic physical training (PT) of moderate level have been related with the improvement of the immunologic system capacity, like the increase of leukocytes and a higher production of cytokines and nitric oxide. While ageing, there is a deregulation of the immunologic system, known as Immunosenescence, which contributes to the increasing of the susceptibility to infections, cancer and autoimmunity, and the vaccine response. Thus, the present study examined the results of PF on the immune system, evaluating the phagocytic capacity of peritoneal macrophages derived from young and old animals. Material and Methods: Young (60-day old) and old (14-month old) Wistar mice were divided in four different groups: Sedentary Youngsters (SY) and Trained Youngsters (TY), Sedentary Elderly (SE) and Trained Elderly (TE). The physical training was based in an moderate aerobic PE protocol through swimming sessions of 45 minutes each, three times a week, for eight consecutive weeks. After that, the peritoneal macrophages were challenged in vitro, during 30 to 120 minutes, with Escherichia Coli (E.coli) or Candida albicans (C.albicans), previously dyed with FITC. Internalized microorganism cells were quantified through fluorescence microscopy. Results:After the PE protocol, the percentage of peritoneal macrophage with internalized microorganisms, from young and old mice, was higher (p<0,05) related to the sedentary. These findings were verified either after the challenge with E. coli bacteria or with C. albicans fungi, independently of the challenge time. The values obtained in 120 minutes were higher than those obtained in the 30 minutes of challenge. After the PE, the percentage values of macrophage with internalized microorganisms were higher among the elderly than those observed among the youngsters, independently of the challenge time (p < 0,05). These age differences also occurred among the sedentary animals...
Assuntos
Animais , Ratos , Condicionamento Físico Animal/fisiologia , Fagocitose/imunologia , Macrófagos/imunologia , Fatores Etários , Candida albicans/imunologia , Escherichia coli/imunologia , Fagocitose/microbiologia , Macrófagos/microbiologia , Fatores de TempoRESUMO
Atualmente diversas pesquisas em Periodontia e Implantodontia visam estudar novos procedimentos e materiais que otimizem o processo cicatricial. O reparo envolve a proliferação de várias células que atuam sob a coordenação de proteínas chamadas fatores de crescimento e/ou citocinas, nos quais muitos estudos têm se concentrado e confirmado seu papel especial no processo de reparação. Artin M é uma lectina isolada de sementes de Artocarpus integrifólia e foi utilizado no tratamento tópico de lesões por queimadura de pele proporcionando aceleração da cicatrização, e redução da necrose. Em estudos recentes, foi demonstrado que o Artin M também estimulou a proliferação de fibroblastos e a reparação tecidual de lesões em mucosa palatina de ratos. Buscando um melhor entendimento da forma de atuação desta lectina, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do Artin M na expressão gênica e produção proteica de citocinas e fatores de crescimento envolvidos no processo de reparo tecidual. Culturas primárias de fibroblastos gengivais e macrófagos de rato foram tratadas com Artin M nas concentrações de 1 ; 2,5 e 5,0 µg/ml por 4, 8, 12 e 24 h para análise da expressão gênica através da reação em cadeia da polimerase após transcrição reversa de maneira quantitativa, em tempo real (RT-qPCR) e, nas mesmas concentrações por 48 e 72h após estímulo para análise quantitativa da concentração proteica dos fatores de crescimento (VEGF e TGFß) e das citocinas pró-inflamatórias (IL-1, IL-6 e TNFα) em sobrenadante de culturas de células por meio de kits ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). Os resultados demonstraram um estímulo significativo (p<0,05; ANOVA) na expressão gênica das citocinas IL-1 e TNFα tanto pelos macrófagos como os fibroblastos. A secreção proteica dos fibroblastos gengivais demonstrou aumento nos níveis de TGFß, enquanto nos macrófagos houve aumento para TNFα. Os resultados sugerem que o Artin M atua aumentando a expressão gênica e proteica de citocinas relevantes no processo de reparação
Currently, several studies in Periodontics and Implantology seek for new procedures and material that optimize the healing process. The healing process involves the proliferation of various cells that act under the coordination of proteins called growth factors and/or cytokines, which have been focused by many researches that have confirmed their special role in the repair process. Artin M is a lectin isolated from Artocarpus integrifolia seed and used in the topical treatment of skin burn injuries, providing accelerated healing and necrosis reduction. Recently, some studies demonstrated that Artin M also stimulates fibroblast proliferation and wound healing in rat oral mucosa. Seeking a better understanding of the lectin action, the aim of this study was to evaluate the effects of Artin M on gene expression and protein production of cytokines and growth factors involved in tissue repair. Primary cultures of rat gingival fibroblasts and macrophages were treated with Artin M at concentrations of 1, 2.5, and 5.0 µg / ml for 4, 8, 12 and 24 h for gene expression analysis by quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) and at the same concentrations for 48 and 72h for quantitative analysis of protein concentration of growth factors (VEGF and TGFß ) and inflammatory cytokines ( IL-1 , IL-6 and TNFα ) in culture supernatants by ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). The results demonstrated significant (p < 0.05, ANOVA ) expression of IL-1 and TNF-α by macrophages as well as fibroblasts. In relation to the protein levels, gingival fibroblasts produced increased levels of TGFß, while macrophages synthesized significant levels of TNF-α. The results suggest that Artin M has a role in the increasing gene and protein expression of relevant cytokines in the repair process
Assuntos
Animais , Ratos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Citocinas , Fibroblastos , Macrófagos , Cicatrização , Lectinas de Ligação a Manose , Análise de VariânciaRESUMO
O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1β, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1β, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação 8 modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase
The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alpha-terpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of Porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1β, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1β, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by 10 inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase
Assuntos
Citocinas , Inflamação , Macrófagos , Óleo de MelaleucaRESUMO
O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1ß, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1ß, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1ß, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase
The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alphaterpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1ß, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1ß, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1ß, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase
Assuntos
Lipopolissacarídeos , Escherichia coli , Citocinas , Inflamação , Macrófagos , Óleo de MelaleucaRESUMO
Aim: To investigate the cytotoxicity of four endodontic sealers with different bases Epiphany(EPH), AH Plus (AHP), Sealer 26 (S26) and Endofill (ENF) on human foreskin fibroblasts(HFF) and mouse macrophages (J774/G8). Methods: Cells were placed in direct contact withfreshly prepared endodontic sealers in polypropylene tubes. The cells were incubated for 24, 48and 72 h. Cytotoxicity was assessed using the MTT assay (cell viability) and Griess reagent (NOrelease). Results: On the HFF cultures, EPH showed the lowest viability levels of all four sealersat 24 h (p<0.05), but over time (72h), EPH lessened its toxic levels in a similar pattern as the otherthree materials (p>0.05). The viability of all four sealers on the macrophage cultures showed nostatistically significant difference over time, except between EPH and AHP at 72 h (p<0.05).Although uniformity was not detected in macrophage and fibroblast release of NO in response tosealers over time, a trend of increased NO levels for EPH (p<0.05) was observed. Conclusions:The response pattern varied depending on time and type of cell line used for analysis, althoughthe results indicate a higher cytotoxicity for EPH in short-term tests.
