Influence of two natural cross-linkers on microtensile bond strength durability ­ An in vitro study / Influência de dois reticuladores naturais na durabilidade da resistência de união à microtração ­ Um estudo in vitro

Objective: to investigate the effect of two natural cross-linkers on microtensile bond strength (µTBS) and evaluate their influence on the durability of the resin dentin bonds. Material and Methods: the Moringa oleifera and Centella asiatica plant extracts were qualitatively tested with high-performance thin layer chromatography (HPTLC) for the presence of phenols. The phenolic content ranged from 27 to 30 gallic acid equivalents (GAE), µg/mg of dry weight. After etching, two concentrations (5% and 1%) of these two extracts were prepared and used as pretreatment liners on dentin. They were applied for a min. After restoration with resin composite, dentin resin beams were prepared. The study groups were 5% Moringa, 1% Moringa 5% Centella 1% Centella, and control (without cross-linker application). For each group, half of the samples underwent µTBS testing after 24 hours, while the remaining half were immersed in artificial saliva to assess the bond's longevity after 6 months of ageing. Statistical analysis was performed using one-way ANOVA followed by Tukey's post hoc test. Results: both 5% and 1% Moringa showed a significant difference (p<0.05) compared to the other groups at both intervals. However, after ageing, the specimens in the control and 1% Centella groups resulted in a significant decrease in µTBS. Conclusion: overall, both concentrations of Moringa (5% and 1%) were effective in stabilising the bond during both intervals.(AU)

Objetivo: investigar o efeito de dois reticuladores naturais na resistência de união (µTBS) à microtração e avaliar sua influência na durabilidade da adesão da resina à dentina. Material e Métodos: extratos das plantas Moringa oleifera e Centella asiatica foram qualitativamente testados através de cromatografia em camada fina de alta performance (HPTLC) para a presença de fenóis. O conteúdo fenólico alcançou entre 27 a 30 equivalentes de ácido gálico (GAE), µg/mg de peso seco. Após o condicionamento, duas concentrações (5% e 1%) dos extratos foram preparadas e utilizadas como forros de pré-tratamento em dentina. Eles foram aplicados por um minuto. Após a restauração com resina composta, palitos de dentina e resina foram preparados. Os grupos foram 5% Moringa, 1% Moringa, 5% Centella, 1% Centella e controle (sem aplicação de reticulador). Para cada grupo, metade das amostras foram submetidas ao teste µTBS após 24 horas, enquanto a outra metade foi imersa em saliva artificial para avaliar a longevidade adesiva após 6 meses de envelhecimento. Foi realizada análise estatística através de ANOVA 1-fator, seguido do teste post hoc de Tukey. Resultados: ambas as concentrações de 5% e 1% de Moringa demonstraram diferença significativa (p<0.05) comparadas aos outros grupos em ambos os intervalos. No entanto, após o envelhecimento, os espécimes dos geupos controle e 1% de Centella resultaram em uma redução significativa de µTBS. Conclusão: no geral, ambas as concentrações de Moringa (5% e 1%) foram efetivas em estabelecer a adesão em ambos os intervalos (AU)

Potencial antibacteriano dos flavonoides e desenvolvimento de uma resina composta experimental a base de flavonoide / Antibacterial potential of flavonoids and development of an experimental flavonoid-based resin composite

Os flavonoides podem ser considerados substâncias fitofarmacêuticas, ou seja, são obtidas na natureza e possuem benefícios à saúde humana. Alguns desses benefícios estão relacionados ao sistema cardiovascular, doenças crônicas como diabetes e em desordens bucais como periodontite e cárie. Assim, os objetivos do presente estudo foram: analisar efeitos antibacterianos de diferentes flavonoides contra bactérias relacionadas à doença periodontal e à cárie dentária por meio de uma revisão de escopo; avaliar as propriedades físico-químicas de uma resina composta experimental adicionada de naringina. Para a revisão de escopo, 19 artigos foram incluídos, todos estudos in vitro. Para bactérias relacionadas à doença periodontal, proantocianidinas, isoliquiritigenina, liquiritigenina, galangina, quercitrina, taxifolina, crisina, diosmetina, quercetina, miricetina, naringina, apigenina, catequinas, luteolina, morina e rutina foram investigadas. Para bactérias relacionadas à cárie dentária, baicaleína, naringenina, catequina, isoliquiritigenina, liquiritigenina, miricetina, quercetina e kaempferol já foram investigados. Atividade bacteriostática, bactericida e antibiofilme foram predominantemente relatadas. Para o desenvolvimento de uma resina experimental, naringina foi adicionada em concentrações de 5, 10 e 15mM. Testes laboratoriais foram conduzidos para avaliar a resistência flexural e modulo de elasticidade, alteração de cor, sorção e solubilidade e a citotoxicidade dessas resinas, comparado ao controle sem adição do flavonoide. Os dados foram analisados quanto à normalidade e homoscedasticidade. A resistência à flexão, o módulo de flexão, a sorção de água, a solubilidade em água, os parâmetros a* e C* e a citotoxicidade de 24 horas foram analisados por ANOVA de uma via seguida pelo teste de Tukey. L*, b* e WID foram analisados por Welch ANOVA seguido pelo teste T3 de Dunnett, pois os dados eram heteroscedásticos. A citotoxicidade após 48h e 72h foi analisada pelo teste de Kruskal Wallis e Dunn porque os dados não foram normalmente distribuídos e heteroscedásticos. A revisão de escopo demonstrou um potencial de ação dos flavonoides nas bactérias relacionadas à carie e doença periodontal, sendo promissor quanto ao desenvolvimento de novas terapias e novos materiais restauradores. As resinas compostas experimentais adicionadas de naringina não apresentaram citotoxicidade e não demonstraram efeitos deletérios quanto as propriedades físico-químicas, apesar de promover uma alteração na cor final da resina.

Flavonoids can be considered phytopharmaceutical substances, that is, they are obtained in nature and have benefits to human health. Some of these benefits are related to the cardiovascular system, chronic diseases such as diabetes, and oral disorders as periodontitis and dental caries. Thus, the objectives of the present study were: to analyze the antibacterial effects of different flavonoids against bacteria related to periodontal disease and dental caries through a scoping review; to evaluate the physicalchemical properties of an experimental resin composite with naringin addition. For the scoping review, nineteen articles were included, all in vitro studies. For bacteria related to periodontal disease, proanthocyanidins isoliquiritigenin, liquiritigenin, galangin, quercetrin, taxifolin, chrysin, diosmetin, quercetin, myricetin, naringin, apigenin, catechins, luteolin, morin and rutin were investigated. For bacteria related to dental caries, baicalein, naringenin, catechin, isoliquiritigenin, liquiritigenin, myricetin, quercetin and kaempferol have been investigated. Bacteriostatic, bactericidal and antibiofilm activity were predominantly reported. For the development of an experimental composite, naringin was added in concentrations of 5, 10 and 15mM. Laboratory tests were conducted to evaluate the flexural strength and flexural modulus, color change, sorption and solubility, and the cytotoxicity of these composites, compared to the control group without flavonoids addition. Data were analyzed for normality and homoscedasticity. Flexural strength, flexural modulus, water sorption, water solubility, a* and C* parameters, and 24-hour cytotoxicity were analyzed by one-way ANOVA followed by Tukey's test. L*, b* and WID were analyzed by Welch ANOVA followed by Dunnett's T3 test, as the data were heteroscedastic. While the 48h and 72h cytotoxicity was analyzed by the Kruskal Wallis and Dunn test, because the data were not normally distributed and heteroskedastic. The scope review demonstrated a potential action of flavonoids on bacteria related to caries and periodontal disease, with potential development of new therapies and new restorative materials. The experimental composites with naringin addition did not show cytotoxicity and did not demonstrate deleterious effects in terms of physicochemical properties, despite promoting a change in the final color of the resin.

Efeito de soluções contendo hexametafosfato de sódio e quercetina, associados ou não ao fluoreto, sobre o desgaste erosivo dentinário in vitro / Effect of sodium hexametaphosphate and quercetin, associated or not with fluoride, on dentin erosion in vitro

O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito de soluções contendo fluoreto (F), hexametafosfato de sódio (HMP) e quercetina (QC), sozinhos ou em associação, sobre a erosão dentinária e sobre a inibição de metaloproteinases da matriz (MMPs) -2 e -9, em protocolos in vitro. Blocos de dentina radicular bovina (4 × 4 × 2 mm; n = 96), selecionados por dureza superficial, foram aleatoriamente divididos em 8 grupos experimentais (n = 12/grupo) e tratados 2×/dia (um minuto) com as seguintes soluções: (1) água deionizada (controle negativo); (2) 1100 ppm F ("F"); (3) 1,0% HMP ("HMP"); (4) 0,03% QC ("QC"); (5) F+HMP; (6) F+QC; (7) HMP+QC; e (8) F+HMP+QC. Os blocos foram submetidos a desafios erosivos 4×/dia, por 5 dias (exposição dinâmica a ácido cítrico 50 mmol.l-1 , pH 3,2, 90 s). Em seguida, foram analisados quanto à perda dentinária (perfilometria) e à perda de dureza integrada em profundidade (área sob a curva, ∆KHN). O potencial antiproteolítico das soluções contendo F, HMP e/ou QC foi analisado por zimografia. Os dados de perda dentinária (log10) foram submetidos a ANOVA um critério, seguido do teste de Tukey. Os resultados de ∆KHN (dados brutos) foram submetidos a ANOVA dois critérios, medidas repetidas, seguido do teste HolmSidak (p< 0,05). O menor desgaste erosivo foi observado no grupo F+HMP+QC. Nas menores profundidades (5-30 µm), os blocos tratados com a solução contendo F+HMP+QC apresentaram os maiores valores de ∆KHN. A análise zimográfica mostrou que todos os tratamentos promoveram atividade antiproteolítica total da MMP-2, com exceção da QC administrada sozinha (inibição de 77%). Para MMP-9, todas as soluções contendo HMP e a associação de F+QC apresentaram atividade antiproteolítica total. Conclui-se que a adição de HMP e QC a soluções contendo F levou a uma maior proteção contra a erosão dentinária, tanto em superfície (perda dentinária) quanto em relação ao conteúdo mineral do tecido remanescente (∆KHN), além de promover uma completa inibição da atividade de MMPs -2 e -9 in vitro(AU)

The aim of the present study was to investigate the effect of solutions containing fluoride (F), sodium hexametaphosphate (HMP) and quercetin (QC), alone or in association, on dentin erosion and on the inhibition of matrix metalloproteinases (MMPs) - 2 and -9, using in vitro protocols. Bovine root dentin blocks (4 × 4 × 2 mm; n = 96), selected by surface hardness, were randomly divided into 8 experimental groups (n = 12/group) and treated 2×/day (one minute) with the following solutions: (1) deionized water (negative control); (2) 1100 ppm F ("F"); (3) 1.0% HMP ("HMP"); (4) 0.03% QC ("QC"); (5) F+HMP; (6) F+QC; (7) HMP+QC; and (8) F+HMP+QC. Blocks were submitted to erosive challenges 4×/day for 5 days (dynamic exposure to 50 mmol.l-1 citric acid, pH 3.2, 90 s). They were then analyzed for dentin loss (profilometry) and integrated hardness loss in depth (area under the curve, ∆KHN). The antiproteolytic potential of solutions containing F, HMP and/or QC was analyzed by zymography. Dentin loss results (log10 transformed) were submitted to one-way ANOVA, followed by Tukey's test. ∆KHN data (raw) were submitted to two-way, repeated-measures ANOVA, followed by the Holm-Sidak test (p< 0.05). The lowest dentin erosive wear was promoted by F+HMP+QC. At the lowest depths (5-30 µm), blocks treated with F+HMP+QC showed the highest values of ∆KHN. Zymography analysis showed that all treatments completely inhibited MMP-2 activity, except for QC administered alone (77% inhibition). For MMP-9, all the solutions containing HMP or the association of F+QC promoted total antiproteolytic activity. It was concluded that the addition of HMP and QC to F solutions led to greater protection against dentin erosion, both at the surface (dentin loss) and in relation to the mineral content of the remaining tissue (∆KHN), in addition to promoting a complete inhibition of MMPs -2 and -9 activity in vitro(AU)

Citotoxicidade e efeito indutor de mineralização de flavonoides sobre células osteoblásticas / Cytotoxicity and inducing effect of mineralization of flavonoids on osteoblastic cells

A perda óssea dentária e a formação de lesões periapicais surgem como uma consequênc ia do desequilíbrio da homeostase óssea. Os osteoblastos, juntamente com os osteoclastos e osteócitos, atuam na formação e na reabsorção óssea. Vários marcadores de formação óssea são produzidos por osteoblastos ativos e refletem diferentes aspectos da dif erenciação osteoblástica e da remodelação óssea. Com isso, muitos autores têm explorado o uso de fitoterápicos, visando obter novos compostos que apresentem propriedades terapêuticas, como os flavonoides, e que estimulem a neoformação óssea e o reparo da r egião periapical. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a citotoxicidade e efeito indutor de mineralização de flavonoides sobre células osteoblásticas humanas. Para isso, células osteoblásticas da linhagem Saos expostas aos seguintes flavono2 foram ides: quercetina, miricetina e seus derivados taxifolina, isoquercitrina, rutina, ampelopsina e EGCG, além de pinocembrina, crisina e canferol, de forma isolada e combinada. Foi avaliado o efeito citotóxico, a atividade de fosfatase alcalina e indução de n mé todo de Shapiroódulos de mineralização. Os resultados foram analisados p elo Wilk, e as variáveis foram submetidas à análise de ANOVA seguida pelo teste de Tukey para comparar entre os grupos e/ou concentrações ou teste de Dunnett para comparar entre cada grupo e o controle, com nível de significância de 5%. A viabilidade da cultura de osteoblastos não teve uma redução estatisticamente significativa na presença da maioria dos compostos, exceto crisina a 100µM. Taxifolina, isoquercitrina, rutina, ampelopsina e EGCG foram os compostos que estimularam significativamente a atividade da fosfatase alcalina, juntamente com as combinações taxifolina+isoquercitrina, taxifolina+ampelopsina e taxifolina+rutina a 25/25 µM. Quanto a formação de nódulos de mine ralização, ampelopsina, isoquercitrina, rutina, pinocembrina e miricetina isolados e taxifolina+isoquercitrina, taxifolina+ampelopsina e taxifolina+rutina combinados obtiveram os melhores resultados, variando de acordo com as concentrações. Concluise que a taxifolina, isoquercitrina, rutina e ampelopsina e combinações de taxifolina com esses flavonoides são citocompatíveis e apresentam efeito indutor de mineralização em osteoblastos Saos-2(AU)

Dental bone loss and the formation of periapical lesions arise as a consequence of imbalance of bone homeostasis. Osteoblasts, together with osteoclasts and osteocytes, act in bone formation and resorption. Several markers of bone formation are produced by active osteoblasts and reflect different aspects of osteoblastic differentiation and bone remodeling. Thus, many authors have explored the use of phytotherapics in order to obtain new compounds with therapeutic properties, such as flavonoids, and also stimulate bone neoformation and periapical region repair. The objective of this study was to evaluate in vitro the cytotoxicity and inducing effect of flavonoid mineralization on human osteoblastic cells. For this, osteoblastic cells of the Saos-2 lineage were exposed to the following flavonoids: quercetin, myricetin and its derivatives taxifoline, isoquercitrin, rutin, ampelopsin and EGCG, in addition to pinocembrin, chrysin and kaempferol, in an isolated and combined manner. The cytotoxic effect, the activity of alkaline phosphatase and the induction of mineralization nodules were evaluated. The results were analyzed using the Shapiro-Wilk method, and the variables were submitted to ANOVA analysis followed by the Tukey test to compare between groups and/or concentrations or Dunnett's test to compare between each group and the control, with a level of 5% significance. The viability of the osteoblast culture did not have a statistically significant reduction in the presence of most compounds, except 100 µM chrysin. Taxifoline, isoquercitrin, rutin, ampelopsin and EGCG were the compounds that significantly stimulated the activity of alkaline phosphatase, together with the combinations taxifoline+isoquercitrin, taxifoline+ampelopsin and taxifoline+rutin at 25/25 µM. As for the formation of mineralization nodules, ampelopsin, isoquercitrin, rutin, pinocembrin and myricetin alone and taxifoline+isoquercitrin, taxifoline+ampelopsin and taxifoline+rutin combined obtained the best results, varying according to the concentrations. It is concluded that taxifoline, isoquercitrin, rutin and ampelopsin and combinations of taxifolin with these flavonoids are cytocompatible and have a mineralization-inducing effect on Saos-2 osteoblasts(AU)

Analysis of the Total Level of Flavonoids in the Brown Algae ( Phaeophyceae ) Extract as Analgesic and Anti-Inflammatory Drugs

Abstract Objective: To determine the total level of flavonoids in brown algae extract Padina sp., Sargassum sp., and Turbinaria sp., which could serve as an analgesic and anti-inflammatory drug. Material and Methods: This is an experimental study with a one-shot case study research design. The study sample consisted of three species of brown algae, namely, Padina sp., Sargassum sp., and Turbinaria sp. The study samples were obtained from Saugi Island, Pangkep, Regency. The sampling method used was convenience sampling. The total flavonoid level in the three extracts of brown algae samples was determined at three concentrations (150 ppm, 300 ppm, and 450 ppm) with three replicates. The analysis used a colorimetric method, a spectrophotometer and aluminium chloride as the reagent. Results: The total level of flavonoids in Padina sp. was the highest at 0.894 ± 0.027%, compared to the levels of 0.786 ± 0.075% in Sargassum sp. and 0.745 ± 0.016% in Turbinaria sp. Conclusion: Padina sp. had the highest total flavonoid levels compared to Sargassum sp. and Turbinaria sp. Flavonoid compounds from brown algae have the potential to be used as analgesic and anti-inflammatory drugs.

Streptococcus Colonial Growth of Dental Plaque Inhibition Using Flavonoid Extract of Ants Nest (Myrmecodia pendans): An in Vitro Study

Objective: To know the activity of resistance of flavonoid content in ant nest plant in decreasing the number of colonies S. mutans oral cavity of children as a medic herbal material. Material and Methods: The subjects were plaque sample of 20 children aged 7-12 years. Research begins by making toothpaste from ant nest extract. Samples of children's dental plaque were inserted into BHIB media, after which incubated for 24 hours, 1/10 dilution with BHIB media three times, followed by TYC media planting and incubation of anaerob with temperature 370C for 48 hours. After that then count the number of colonies of S. mutans. Results: On ethyl acetate extract of ant nest incubated at room temperature with concentration 20%, 40%, 60%, 80%, 100% obtained a decrease from each treatment amount of Streptococcus mutans colony on TYC media with median value of each treatment was 89, 67, 64, 61, 59 and 51 for the ethyl acetate fraction, and 62, 61, 60, 59, 49 at the ethanol fraction. There was no significant difference between the six concentration groups (p>0.05). Conclusion: Flavonoids extract of ant nest plants have growth barrier on Streptococcus mutans bacteria, the greater the concentration given the greater the number of S. mutans colony.

Efeito isolado ou combinado de flavonoides e peptídeos catiônicos sobre biofilme endodôntico e sua influência na viabilidade celular, capacidade de migração e inibição de citocinas em fibroblastos / Effect of flavonoids and cationic peptides, alone or in combination, on endodontic biofilm and their influence on cell viability, migration capacity and inhibition of cytokines in fibroblasts

Este trabalho foi dividido em dois capítulos que objetivou avaliar: 1) o efeito isolado ou combinado do flavonoide epigallocatechin-3-gallate (EGCG) em associação com o peptídeo LL-37 e seu análogo KR-12-a5 sobre a viabilidade celular de fibroblastos e sobre cultura planctônica, biofilme simples, dual-espécies e túbulos dentináios e 2) as interações sinérgicas do EGCG e proantocianidina do oxicoco (A-type cranberry proanthocyanidins, AC-PAC), quando usado em combinação com LL-37 ou KR-12-a5 sobre a viabilidade celular, a capacidade de migração e inibição das citocinas em cultura de fibroblastos (HGF-1), quando estimuladas ou não pelo lipopolissacarídeo de A. actinomycetencomitans (LPS). No capítulo 1, a concentração inibitória mínima (MIC), a concentração bactericida mínima (MBC) e concentração inibitória fracionária (FIC) de EGCG, LL-37 e KR-12-a5 foram determinadas a partir de valores decrescentes dos compostos por meio dos métodos de microdiluição e checkerboard contra Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii e Fusobacterium nucleatum após 24 horas de tratamento. Fibroblastos da linhagem L-929 foram expostos a combinações de EGCG com peptídeos em diferentes concentrações e o metabolismo celular avaliado por ensaios de MTT. Os compostos com melhor efeito antimicrobiano e citotóxico foram avaliados por 24-36h, isoladamente ou em combinação, em biofilmes individuais ou biofilmes de dual-espécies com E. faecalis formados em placas de poliestireno por 48h por meio de contagem bacteriana. Os biofilmes de E. faecalis também foram cultivados em túbulos dentinários por 2 semanas, tratados com EGCG, KR-12-a5 e EGCG + KR-12-a5 e a porcentagem de células mortas foi determinada pela análise de imagens usando Microscopia Confocal. No capítulo 2, a linhagem celular de fibroblastos gengivais humanos primários HGF-1 foi pré-tratada durante 2 h com EGCG ou AC-PAC a 25 e 12,5 µg / mL, LL-37 ou KR-12-a5 a 0,06 e 0,03 µM ou com uma combinação de EGCG + ACPAC; AC-PAC + KR-12-a5; AC-PAC + LL-37; EGCG + KR-12-a5 ou EGCG + LL-37, nas mesmas concentrações. As culturas celulares foram então estimuladas com 50 µg/mL de LPS por 24-48h. A viabilidade celular e migração foram analisadas usando ensaios colorimétricos e fluorescentes, respectivamente. A quantificação de citocinas foi determinada por ensaios multiplex ELISA. Os resultados mostraram que em condições planctônicas, EGCG + KR-12-a5 apresentaram efeito sinérgico ou aditivo contra todas as bactérias testadas, com FIC menor que os valores de MIC obtidos pelos compostos isolados. As combinações de EGCG e peptídeos testados não foram tóxicas para os fibroblastos, uma vez que o crescimento celular foi superior a 70%. Em condições de biofilme simples, EGCG + KR-12-a5 eliminou S. mutans e A. israelii e reduziu E. faecalis e F. nucleatum. Para biofilmes de duas espécies, quando E. faecalis foi combinado com S. mutans, EGCG + KR-12-a5 teve efeito sinérgico eliminando S. mutans e reduzindo estatisticamente as contagens de E. faecalis. Em biofilmes associando E. faecalis e A. israelii ou F. nucleatum, EGCG + KR-12-a5 eliminaram E. faecalis e promoveram redução de A. israelii e F. nucleatum, embora não tenha sido observada diferença estatística entre os compostos. EGCG + KR-12-a5 reduziu mais de 80% dos biofilmes de E. faecalis nos túbulos dentinários. Dentre os grupos experimentais estudados, o EGCG, principalmente a 25 e 12,5 µg/mL estimulou o crescimento de fibroblastos, protegendo-os dos efeitos do LPS. Efeito sinérgico entre EGCG + AC-PAC, EGCG + LL-37 e EGCG + KR-12-a5 no metabolismo celular também foi observado na presença de LPS. Combinações do EGCG com AC-PAC ou KR-12-a5 e AC-PAC com LL-37 foram capazes de aumentar estatisticamente a migração celular. EGCG, AC-PAC, LL-37 e KR-12-a5 promoveram a redução de citocinas individualmente ou em combinação (EGCG + AC-PAC e EGCG + KR12-a5) mais especificamente para IL-6, IL-8, GM- CSF e TNF-α. Conclui-se que a associação de EGCG e KR-12-a5 é citocompatível e promove um efeito sinérgico contra bactérias associadas a infecções endodônticas, sob condições planctônicas e de biofilme. O EGCG, isoladamente ou associado ao AC-PAC e ao KR-12-a5, aumenta a viabilidade e migração celular, bem como a inibição de citocinas por fibroblastos estimulados por LPS. A associação de EGCG com KR-12-a5 poderia ser uma opção de princípio ativo em medicações para fins endodônticos(AU)

This study was divided in two chapters that aimed to evaluate: 1) the effect of flavonoid epigallocatechin-3-gallate (EGCG), cationic peptide LL-37 peptide and its analogue KR12-a5, alone or in combination, on fibroblast cell viability and on bacteria in planktonic and single/dual-species biofilms/dentin tubules; 2) the synergistic interactions of EGCG and cranberry proanthocyanidins (A-type cranberry proanthocyanidins, AC-PAC), when used in combination with LL-37 or KR-12-a5 on cell viability, the ability to induce cell migration and inhibit cytokines in culture of fibroblasts (HGF-1) when stimulated or not by the lipopolysaccharide of A. actinomycetencomitans (LPS). For the chapter 1, Minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and fractional inhibitory concentration (FIC) of EGCG, LL-37 and KR-12-a5 were determined from decreasing values of the compounds by Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii and Fusobacterium nucleatum against microdilution and checkerboard after 24 hours of treatment. L-929 fibroblasts were exposed to combinations of EGCG with peptides at different concentrations and cell metabolism assessed by MTT assays. The compounds if the best antimicrobial and cytotoxic effect were also evaluated for 24-36h, alone or in combination, in 48h singleor dual-species biofilms with E. faecalis formed on polystyrene plates by bacterial counting. E. faecalis biofilms were also cultured in dentin tubules for 2 weeks and treated with EGCG, KR-12-a5 and EGCG + KR-12-a5 to determine the percentage of dead cells by analysis of images using Confocal Microscopy. For the chaper 2, primary human gingival fibroblast HGF-1 cell line was pretreated for 2 h with either EGCG or AC-PAC at 25 and 12.5 µg/mL, LL-37 or KR-12-a5 at 0.03 and 0.06 µM or with a combination of EGCG + AC-PAC; AC-PAC + KR-12-a5; AC-PAC + LL-37; EGCG + KR-12-a5 or EGCG + LL37, at the same concentrations. Cell cultures were then stimulated with 50 µg/mL LPS for 24-48h. Cell viability and migration were analyzed using colorimetric and fluorescent assays, respectively. Quantification of cytokines was determined by multiplex ELISA assays. The results show that in planktonic conditions, EGCG + KR-12- a5 showed a synergistic or additive effect against all the bacteria tested, with FIC lower than the MIC values obtained by the compounds alone. Combinations of EGCG and peptides tested were not toxic to fibroblasts, since cell growth was higher than 70%. Under single biofilm conditions, EGCG + KR-12-a5 eliminated S. mutans and A. israelii and reduced E. faecalis and F. nucleatum. For dual- species biofilms, when E. faecalis was combined with S. mutans, EGCG + KR-12-a5 had a synergistic effect by eliminating S. mutans and statistically reducing E. faecalis counts. In biofilms associated with E. faecalis and A. israelii or F. nucleatum, EGCG + KR-12-a5 eliminated E. faecalis and promoted reduction of A. israelii and F. nucleatum, although no statistical difference was observed between the compounds. EGCG + KR-12-a5 reduced more than 80% of the E. faecalis biofilms in the dentin tubules. Among the experimental groups studied, EGCG, mainly at 25 and 12.5 µg/mL stimulated the growth of fibroblasts, protecting them from the effects of LPS. Synergistic effect between EGCG + AC-PAC, EGCG + LL-37 and EGCG + KR12-a5 on cell metabolism was also observed in the presence of LPS. Combinations of EGCG with AC-PAC or KR-12-a5 and AC-PAC with LL-37 were able to increase statistically cell migration. EGCG, AC-PAC, LL-37 and KR-12-α5 promoted cytokine reduction individually or in combination (EGCG + AC-PAC and EGCG + KR-12-a5) more specifically for IL-6, IL-8, GM-CSF and TNF-α. The association of EGCG and KR-12-a5 was cytocompatible and promoted a synergistic effect against bacteria associated with endodontic infections under planktonic and biofilm conditions. EGCG, alone or in combination with AC-PAC and KR-12-a5, increases cell viability and migration, as well as inhibition of cytokines by LPS-stimulated fibroblasts. The association of EGCG with KR12-a5 could be an option as active principle for medications to be used for endodontic purposes(AU)

Efeito de flavonoides sobre microrganismos de interesse endodôntico e sua influência na expressão de marcadores de mineralização / Effect of flavonoids on endodontic microorganisms and their influence on the expression of mineralization markers

O tratamento endodôntico de dentes permanentes jovens representa um grande desafio clínico devido a presença de paredes dentinárias finas, divergentes ou paralelas e ápice aberto, o que dificulta a desinfecção e a execução dos procedimentos convencionais. Terapias de regeneração endodôntica envolvem o uso de materiais capazes de promover uma desinfecção eficaz sem causar citotoxicidade, além de induzir a diferenciação de células-tronco ou bioestimular células remanescentes do tecido pulpar mesmo após a injúria. Nesse contexto, os flavonoides, polifenóis presentes em frutas e vegetais, poderiam ser agentes interessantes para o tratamento endodôntico de dentes imaturos devido a sua amplitude terapêutica. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano, citotóxico e indutor de mineralização de flavonoides com finalidade de aplicação endodôntica. Este trabalho de tese foi dividido em três capítulos. O capítulo 1 avaliou a toxicidade dos flavonoides taxifolina, crisina, pinocembrina e galangina sobre fibroblastos pelo ensaio de MTT, a atividade antimicrobiana pela determinação da concentração inibitória e bactericida mínima, e a ação antibiofilme do flavonoide com melhor efeito antimicrobiano, por meio de ensaios em placas de poliestireno e em dentina radicular bovina por meio da análise por microscopia confocal. Os resultados mostraram que o flavonoide taxifolina não foi tóxico para os fibroblastos em nenhuma das concentrações analisadas, enquanto que os flavonoides crisina, pinocembrina e galangina apresentaram efeitos citotóxicos. Crisina, pinocembrina e galangina não apresentaram efeito antimicrobiano frente E. faecalis and S. mutans nas concentrações testadas. A taxifolina foi capaz de inibir todas as bactérias testadas, eliminar biofilmes de E. faecalis e S. mutans em placas de poliestireno e reduzir significantemente o biofilme de E. faecalis em túbulos dentinários. O capítulo 2 avaliou a citotoxicidade do flavonoide taxifolina e o seu potencial sobre a indução de marcadores de mineralização dentinária (produção de fosfatase alcalina - ALP, nódulos de mineralização ­ NM e expressão dos genes DSPP ­ sialofosfoproteína dentinária e DMP-1 ­ proteína da matriz dentinária - 1) em células semelhantes a odontoblastos MDPC-23, após tratamentos de 24, 72h e contínuo. A taxifolina não apresentou citotoxicidade em nenhum dos três tipos de tratamento analisados. Todas as concentrações do tratamento de 24h e as concentrações de 10 e 5µM do tratamento de 72h aumentaram a atividade de ALP. A formação de NM aumentou com os tratamentos de taxifolina à 10µM em ambos os tratamentos de 24 e 72h, e à 5µM no tratamento de 24h. A expressão de DMP-1 aumentou com o tratamento de taxifolina em ambos os tratamentos de 24 e 72h, enquanto que a de DSPP aumentou apenas com o tratamento de 72h na concentração de 5µM. O capítulo 3 avaliou a citotoxicidade da taxifolina, e o seu potencial sobre a indução de marcadores de mineralização óssea (ALP, NM e expressão dos genes ALP e colágeno 1 - Col-1) em células semelhantes a osteoblastos Saos-2, após tratamentos de 24, 72h e contínuo. Os resultados mostraram que os tratamentos com taxifolina nas concentrações de 10, 5 e 1µM não foram citotóxicos em nenhum dos períodos analisados. O tratamento de 72h da taxifolina à 10µM foi capaz de aumentar a atividade de ALP e a formação de NM, além de aumentar a expressão de Col-1 após 13 dias. O tratamento de 24h da taxifolina na concentração de 10µM aumentou a expressão de ALP após 6 dias. Conclui-se que a taxifolina é um flavonoide com potencial uso para o tratamento endodôntico de dentes permanentes jovens, devido à sua ação antimicrobiana/antibiofilme, baixa citotoxicidade e capacidade de estimular a mineralização em odontoblastos e osteoblastos(AU)

The endodontic treatment of young permanent teeth represents a great clinical challenge due to the presence of thin, divergent or parallel dentin walls and the open apex that makes it difficult to disinfect and perform conventional endodontic procedures. Endodontic regeneration therapies involve the use of materials capable of promoting effective disinfection without causing cytotoxicity, in addition to inducing differentiation of stem cells or biostimulating remaining pulp tissue cells even after injury. In this context, the flavonoids, polyphenols present in fruits and vegetables, could be interesting agents for the endodontic treatment of immature teeth due to the wide therapeutic use. Thus, the objective of the present study was to evaluate the antimicrobial, cytotoxic effects and capacity of mineralization induction of flavonoids for endodontic application. This thesis was divided into three chapters. The chapter 1 evaluated the toxicity of taxifolin, chrysin, pinocembrin and galangin flavonoids on fibroblasts by the MTT method, antimicrobial activity by determining the minimum inhibitory and bactericidal concentrations and analyzed the antibiofilm action of the flavonoid with the best antimicrobial effect, by means of the biofilm assays in polystyrene plates and in bovine root dentin and confocal microscopy analysis. The results showed that the flavonoid taxifolin was not toxic on fibroblasts in any tested concentration, while chrysin, pinocembrin and galangin flavonoids showed cytotoxic effects. Chrysin, pinocembrin and galangin showed no antimicrobial effect against E. faecalis and S. mutans in any tested concentrations. Taxifolin was able to inhibit all tested bacteria, to eliminate E. faecalis and S. mutans biofilms on polystyrene plates and significantly reduce E. faecalis biofilms from the dentin tubules. The chapter 2 evaluated the cytotoxicity of taxifolin and its potential on the induction of dentin mineralization markers (alkaline phosphatase production - ALP, mineralization nodules - MN and expression of genes DSPP - dentin sialophosphoprotein and DMP-1 - dentin matrix protein - 1) on odontoblast-like cells MDPC-23, after treatments of 24, 72h and continuous. Taxifolin did not present cytotoxicity at any of the three types of treatments analyzed. All concentrations of 24h-treatment and 10 and 5µM of 72htreatment increased ALP activity. NM formation increased with taxifolin treatments at 10µM in both 24 e 72h treatments, and at 5µM in the 24h-treatment. Expression of DMP-1 increased with taxifolin in both 24 e 72h-treatments, whereas DSPP expression increased only with 72h-treatment at 5µM. The chapter 3 evaluated the cytotoxicity of taxifolin and its potential on the induction of bone mineralization markers (ALP, NM and expression of ALP and collagen 1 -Col-1 genes) on Saos-2 osteoblast-like cells, after treatments of 24, 72h and continuous. The results showed that taxifolin treatments at 10, 5 and 1µM were not cytotoxic in any of the periods analyzed. The 72h-treatment of taxifolin at 10µM was able to increase ALP activity and NM formation, in addition to increasing Col-1 expression after 13 days. The 24h-treatment of taxifolin at 10µM increased ALP expression after 6 days. It is concluded that taxifolin is a flavonoid with potential use for endodontic treatment of young permanent teeth due to its antimicrobial/antibiofilm action, low cytotoxicity and ability to stimulate mineralization in odontoblasts and osteoblasts(AU)

Impact of the Use of Ethanolic Extract of Propolis, Flavonoid and Non-Flavonoid Propolis for Direct Pulp Capping in Collagen Type I Density

Aim: To analysis collagen type I density on inflamed rat dental pulp after capping with propolis. Methods: Flavonoid and non-flavonoid substances were purified from propolis. Eighty male rats were divided into five groups, each group consisting of 16 rats. As a negative control (group I), rats were not conducted any treatment. A class I cavity was prepared on the occlusal surface of right maxillary first molar. Dental pulp was exposed and allowed in oral environment for 60 minutes, then dental pulp capping with ethanolic extract of propolis (group II), flavonoid propolis (group III), non-flavonoid propolis (group IV), or calcium hydroxide as positive control (group V). Rats were sacrificed at 6 hours, 2, 4 or 7 days, biopsy samples were obtained, stained and viewed by light microscope. Data was statistically analysis using Friedman and Kruskal-Wallis tests. Results: Except in group I, collagen type I density was increased in group II, III, and V with the longer of observation time periods. However, in group IV, collagen type I density increased only on day 7. No statistically significant differences of collagen type I density among the groups for each time period were found. Conclusions: Propolis and flavonoid propolis may increase collagen density on inflamed rat dental pulp (AU).

Própolis como agente terapêutico alternativo para o controle do biofilme dentário / Propolis as alternative therapeutic agent for the dental biofilm's control

Historicamente, a própolis foi utilizada como medicamento por suas propriedades químicas. A partir dos anos 80, vários estudos demonstraram sua capacidade antimicrobiana, permitindo, assim, seu emprego terapêutico e preventivo. Esse artigo tem como objetivo demonstrar, através de revisão da literatura, a relevância da utilização da própolis no campo da Cariologia, considerando o seu caráter determinante para a estabilização dos fatores microbianos e de equilíbrio do processo de desmineralização e remineralização (processo DES-RE) da estrutura dentária. A própolis demonstrou ser efetiva na inibição da enzima glicosiltransferase (GTF), bem como na diminuição da produção de polissacarídeos insolúveis ou glucanos, que interferem na adesão bacteriana e, consequentemente, permeiam o acúmulo/estagnação do biofilme cariogênico. Estudos realizados in vivo e in vitro demonstraram que a presença de flavonoides na composição química da própolis comprova sua ação antibacteriana, e sugerem o seu emprego no controle do biofilme bacteriano bucal. Esse estudo permitiu concluir que, por apresentar comprovada ação antimicrobiana, a própolis representa um potencial agente de controle da cárie dentária, do acúmulo do biofilme cariogênico e do processo DES-RE. Entretanto, em relação ao processo DES-RE, sugerem-se novos estudos para obtenção de dados mais consistentes.