Gene expression during the development of Mycobacterium smegmatis biofilms on hydroxyapatite surfaces / Expresión génica durante el desarrollo de biopelículas de Mycobacterium smegmatis en superficies de hidroxiapatita

Bacterial biofilms are a consortium of bacteria that are strongly bound to each other and the surface on which they developed irreversibly. Bacteria can survive adverse environmental conditions and undergo changes when transitioning from a planktonic form to community cells. The process of mycobacteria adhesion is complex, involving characteristics and properties of bacteria, surfaces, and environmental factors; therefore, the formation of different biofilms is possible. Cell wall-, lipid-, and lipid transporter-related genes (glycopeptidolipids, GroEL1, protein kinase) are important in mycobacterial biofilm development. We investigated gene expression during in vitro development of Mycobacterium smegmatis biofilms on a hydroxyapatite (HAP) surface. Biofilm formation by M. smegmatis cells was induced for 1, 2, 3, and 5 days on the HAP surface. Mycobacteria on polystyrene generated an air–liquid interface biofilm, and on the fifth day, it increased by 35% in the presence of HAP. Six genes with key roles in biofilm formation were analyzed by real-time RT‒qPCR during the biofilm formation of M. smegmatis on both abiotic surfaces. The expression of groEL1, lsr2, mmpL11, mps, pknF, and rpoZ genes during biofilm formation on the HAP surface did not exhibit significant changes compared to the polystyrene surface. These genes involved in biofilm formation are not affected by HAP.(AU)

In vitro activity of six biocides against carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae and presence of genes encoding efflux pumps / Actividad in vitro de seis biocidas frente a Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasa y presencia de genes codificantes de bombas de expulsión

Introduction: Acquisition of reduced susceptibility to biocides may contribute to the dissemination of high-risk (HR) clones of carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae (CP-Kp). The aim of this study was (a) to determinate the activity of biocides against CP-Kp, and (b) to analyse the relationship between biocide activity and the presence of efflux pumps. Methods: The minimal inhibitory concentrations (MICs) of 6 biocides (sodium hypochlorite, chlorhexidine digluconate, benzalkonium chloride, povidone-iodine, ethanol and triclosan) were determined in triplicate at 25°C and 37°C in Mueller-Hinton broth (MHB) and M9 minimum medium, against 17 CP-Kp isolates representing different clones (HR and no-HR), sequence-types (STs) and carbapenemases. Efflux pumps genes were detected by whole genome sequencing (MiSeq). Results: Median MICs were slightly higher at 37°C than at 25°C (p≤0.05), except for benzalkonium chloride, triclosan and ethanol. MIC medians were much higher in MHB than in M9, except for triclosan. No significant differences were observed in the median MICs, regarding the type of clone, ST or carbapenemase; cepA, acrAB, kpnEF and oqxAB genes were detected in all isolates, whereas qacE and qacA were not detected; smvAR, and qacΔE genes were detected in 94% and 47% of isolates, respectively. Conclusions: Triclosan, chlorhexidine digluconate, benzalkonium chloride and ethanol were the most active biocides. The activity of some biocides is affected by temperature and growth media, suggesting that standardised procedures for biocide susceptibility testing based on MIC determination are required. This activity, in terms of MICs, are not related to the type of clone, ST, carbapenemase or the presence of the efflux pump genes.(AU)

Introducción: La adquisición de sensibilidad reducida a los biocidas puede contribuir a la diseminación de clones de alto riesgo (HR) de Klebsiella pneumoniae productor de carbapenemasa (Kp-PC). El objetivo de este trabajo fue: (a) determinar la actividad de varios biocidas frente a Kp-PC, y (b) analizar la relación de dicha actividad con la presencia de genes codificantes de bombas de expulsión. Métodos: Las concentraciones mínimas inhibitorias (CMI) de 6 biocidas (hipoclorito de sodio, digluconato de clorhexidina, cloruro de benzalconio, povidona yodada, etanol y triclosán) se determinaron por triplicado a 25 y 37°C, tanto en caldo Mueller-Hinton (MHB) como en medio mínimo M9, frente a 17 aislados de Kp-PC representativos de diferentes clones (HR y no HR), secuenciotipos (ST) y carbapenemasas. Los genes de bombas de expulsión se detectaron mediante secuenciación masiva del genoma completo (MiSeq). Resultados: Las medianas de las CMI fueron ligeramente superiores a 37°C que a 25°C, excepto para cloruro de benzalconio, etanol y triclosán. Las medianas de las CMI fueron considerablemente superiores en MHB que en M9, excepto para triclosán; cepA, acrAB, kpnEF y oqxAB se detectaron en todos los aislados, mientras que qacE y qacA no se detectaron; smvAR y qacΔE se detectaron en el 94% y en el 47% de los aislados, respectivamente. Conclusiones: La actividad de algunos biocidas se afecta por la temperatura y el medio de crecimiento. Esta actividad, en términos de CMI, no se relaciona con el tipo de clon, ST, carbapenemasa, ni con la presencia de genes que codifican bombas de expulsión.(AU)

Assessment of a semi-automated enrichment system (Uroquattro HB&L) for detection of faecal carriers of ESBL-/AmpC-producing Enterobacterales / Evaluación de un sistema de enriquecimiento semiautomático (Uroquattro HB&L(TM)) para la detección de portadores fecales de Enterobacterales productoras de beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE)/AmpC

INTRODUCTION: Early detection of patients carrying multiresistant bacteria is an effective implement in surveillance programs. Our objective was to compare the semi-automatic Uroquattro HB&L "ESBL/AmpC Screening" (Alifax®) system with the routine culture on selective media to detect ESBL/pAmpC-producing microorganisms (3CGRE). METHODS: A total of 201 rectal swabs samples were processed by inoculating them into the Uroquattro HB&L system, performing growth curve measurements at 6.5 and 10 h, and into direct culture medium. RESULTS: Thirty-five samples yielded 3CGRE. Measurements at 10 h incremented the positive 3GCRE detection 5.7% in comparison with routine culture medium. In negative rectal swabs, the overall percent agreement at 6.5 h and 10 h versus routine culture medium was 93% and 90%, respectively. CONCLUSIONS: The Uroquattro HB&L system increased the detection of ESBL/pAmpC-producing bacteria compared to direct plating with an incubation time of 10 h and shortens the time to report a negative sample

INTRODUCCIÓN: La detección temprana de pacientes portadores de bacterias multirresistentes es una medida eficaz de los programas de vigilancia. Nuestro objetivo fue comparar el sistema semiautomático Uroquattro HB&L™ «ESBL/AmpC screening» (Alifax®) frente al cultivo habitual en medios selectivos para detectar microorganismos productores de beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE)/AmpC (3CGRE). MÉTODOS: Se procesaron 201 frotis rectales mediante inoculación en el sistema Uroquattro HB&L™, se midió el crecimiento a las 6,5 y 10 h, y en el medio de cultivo directo. RESULTADOS: Treinta y cinco muestras fueron positivas para 3CGRE. La lectura a las 10 h incrementó la detección un 5,7% en comparación con el medio habitual. En muestras rectales negativas, la concordancia de la lectura global a las 6,5 y 10 h con el medio de cultivo habitual fue del 93 y 90%, respectivamente. CONCLUSIONES: El sistema Uroquattro HB&L™ incrementó la detección de bacterias productoras de BLEE/pAmpC en comparación con el cultivo directo con un tiempo de incubación de 10 h y acorta los tiempos de detección de muestras negativas

Evaluación de una prueba rápida para la detección de PBP2a en Staphylococcus aureus / Evaluation of a rapid assay for detection of PBP2a Staphylococcus aureus

INTRODUCCIÓN: En los últimos años se ha producido un incremento de las infecciones producidas por Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM). En comparación con las producidas por S. aureus sensible a meticilina (SASM), las infecciones por SARM requieren estancias hospitalarias más prolongadas y presentan mayor mortalidad. La detección rápida de la resistencia a la meticilina por la adquisición del gen mecA que codifica la proteína fijadora de penicilina (PBP2a) es crucial para evitar la diseminación nosocomial e instaurar una correcta terapia antimicrobiana. Nos proponemos evaluar el test inmunocromatográfico rápido para la detección de PBP2a directamente de colonias de S. aureus, PBP2a SA Culture Colony Test(R) (ICPBP2a). MATERIAL Y MÉTODOS: En 107 cepas de S. aureus se estudió la resistencia a meticilina mediante las siguientes pruebas: el sistema automatizado Vitek2(R) (bioMérieux), CHROMagar MRSA II(R) (BD Becton Dickinson ), difusión con disco de cefoxitina, la ICPBP2a (AlereTM) y como método de referencia, la detección molecular del gen mecA. RESULTADOS: La sensibilidad y especificidad para las pruebas de detección fueron para la difusión en agar con disco de cefoxitina 100% y 100% respectivamente, Vitek2(R) 100% y 100%, CHROMagarTM MRSA II 100% y 96%, y la ICPBP2a 98,25% y 100%. CONCLUSIÓN: La inmunocromatografía para la detección de PBP2a es una técnica rápida, fácil y económica. Resulta muy útil para el manejo de brotes hospitalarios

BACKGROUND: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is a significant pathogen causing both healthcare-associated and community-acquired infection. Rapid and accurate detection of this pathogen is crucial for the use of appropriate antimicrobial therapy and the control of nosocomial spread. METHODS: A total of 107 S. aureus strains were assayed for methicillin resistance: Vitek2(R) (bioMérieux), CHROMagarTM MRSA II (BD Becton Dickinson), disk diffusion in agar for cefoxitin 30 μg and immunochromatography PBP2a SA Culture Colony Test (AlereTM). The results of conventional tests were compared with the "gold standard" PCR test for mecA gene. RESULTS: Sensitivity and specificity were: disk diffusion for cefoxitin 100% and 100% respectively, Vitek2(R) 100 and 100%, CHROMagarTM MRSA II 100 and 96%, and ICPBP2a detection 98,25% and 100%. CONCLUSION: ICPBP2a Culture Colony Test (AlereTM) is fast, efficient and economical technique for detection of penicillin binding protein 2a (PBP2a) from isolates. This assay is a useful tool for the management of hospital outbreaks

Description of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae isolates in a Spanish tertiary hospital. Epidemiological analysis and clinical impact / Descripción de los aislamientos de enterobacterias productoras de carbapenemasa en un hospital terciario. Análisis epidemiológico e impacto clínico

OBJECTIVES: The aim of the study was to carry out an epidemiological analysis of patients with carbapenemase-producing Enterobacteriaceae (CPE) isolations in our hospital as well as to perform a description of the genotypic temporal evolution of CPE isolated. MATERIAL AND METHODS: An observational prospective cohort study was performed involving all patients with CPE isolates from clinical samples during November 2014 to November 2016 in a Spanish teaching hospital. Patients were clinically evaluated and classified either as infected or colonized. Information on the consumption of carbapenems in the hospital during the study period was also analyzed. PCR was used for identification of the carbapenemase genes blaKPC, blaVIM, and blaOXA-48. RESULTS: A total of 301 CPE isolates were obtained (107 in 2014, 89 in 2015 and 105 in 2016). Klebsiella pneumoniae (73.4%) was the most prevalent microorganism. Hundred and seventy (56.7%) of carbapenemases detected were blaOXA-48, 73 (24.3%) were blaKPC and 57 (19%) were blaVIM. In year 2014 KPC was predominant while in 2016 OXA-48 predominated. In 2014 we observed a significant association between the medical wards and the ICU with a higher prevalence of OXA-48 (OR 4.15; p < 0.001) and VIM (OR 7.40; p < 0.001) in the univariate analysis, in the following years there was no association. Regarding the clinical significance of microbiological results after assessing our patients, 60% of isolates represented infection and 40% behaved as colonizers. One third of hospitalized patients with CPE isolation died within 30 days, regardless of whether they were colonized or infected. CONCLUSIONS: We have observed an epidemiological change in the genotypes of our isolates along the study period. A thorough knowledge of the CPE's epidemiological distribution in each hospital is fundamental for optimizing antimicrobial chemotherapy

OBJETIVOS: Se realizó un análisis epidemiológico de aquellos pacientes con aislamiento de Enterobacterias portadoras de carbapenemasas (EPC) en un hospital terciario, así como una descripción temporal de los genotipos de dichas EPC. MATERIAL Y MÉTODOS: Estudio de cohortes prospectivo observacional que incluyó todos los aislamientos de EPC obtenidos de muestras clínicas entre noviembre de 2014 y noviembre de 2016 en un hospital universitario. Los pacientes fueron evaluados clínicamente para determinar si el aislamiento era en el contexto de una infección o de una colonización. También se recopiló la información acerca del consumo de carbapenémicos en el hospital durante el periodo de estudio. Se usó la técnica PCR para la identificación de los genes de carbapenemasas blaKPC, blaVIM, and blaOXA-48. RESULTADOS: Se obtuvieron un total de 301 aislamientos de EPC (107 en 2014, 89 en 2015 y 105 en 2016). Klebsiella pneumoniae (73,4%) fue el microorganismo más prevalente. De las carbapenemasas aisladas, 170 (56,7%) correspondieron a blaOXA-48, 73 (24,3%) a blaKPC y 57 (19%) a blaVIM. En el año 2014 KPC fue la predominante mientras que en 2016 lo fue OXA-48. En 2014 la prevalencia de OXA-48 (OR 4,15;p < 0,001) y de VIM (OR 7,40; p < 0,001) fue significativamente mayor en las áreas médicas y en la UCI en el análisis univariante, sin embargo en los siguientes años no hubo ninguna asociación. Respecto a la significación clínica de los resultados microbiológicos, un 60% de los aislamientos correspondían a una infección y un 40% a una colonización. Un tercio de los pacientes hospitalizados con aislamiento para EPC murieron en los 30 días siguientes al mismo, independientemente de si representaba una colonización o una infección. CONCLUSIONES: Hemos constatado un cambio en el patrón epidemiológico de los genotipos de nuestros aislamientos a lo largo del período de estudio. Un conocimiento pormenorizado de los patrones de distribución epidemiológica de las EPC dentro de cada hospital es fundamental para optimizar la terapéutica antimicrobiana

Evaluation of the commercial combined disk test and minimum inhibitory concentration (MIC) determination for detection of carbapenemase producers among Gram-negative bacilli isolated in a region with high prevalence of blaOXA-48 and blaNDM

Carbapenem-resistant Gram-negative bacilli (GNB) are a concern in the Middle East and worldwide. Simple screening methods have been sought to detect carbapenemase producers to determine appropriate therapeutic measures and implement infection control interventions. In this study, we evaluated the efficiency of agar disc diffusion, commercial combined disc test (Rosco), and carbapenem MIC determination in comparison to molecular detection of carbapenemase genes among 82 carbapenem non-susceptible Enterobacteriaceae (CNSE) and 37 Acinetobacter/Pseudomonas isolates. The blaOXA-48, blaNDM, blaNDM/OXA-48, and blaIMP were detected in 68 out of 82 CNSE isolates. All of the Acinetobacter baumannii isolates were positive for the blaOXA-51 (n=23), of those some were positive for blaOXA-48 (n=13) and blaNDM (n=3). Sensitivities and specificities of combined disc test for detection of blaNDM and blaOXA-48 carrying Enterobacteriaceae isolates were 92.5% and 100%, and 58.5% and 100%, respectively, while those for Acinetobacter/Pseudomonas isolates were 100%, 81.8% and 96.2%, 89%, respectively. While carbapenem MIC values had excellent concordance with phenotypic combined disc test for detection of blaOXA-48 producers (area under curve >90%), only ertapenem MIC's could precisely detect blaOXA-48 PCR-positive Enterobacteriaceae isolates (AUC 70%, sensitivity 70%, specificity 50%). The phenotypic commercial test showed excellent sensitivity for detection of blaNDM producers, but had poor sensitivity for blaOXA-48-producing Enterobacteriaceae. Ertapenem MIC values had low sensitivity and specificity for detection of the blaOXA-48-carrying Enterobacteriaceae. This is the first report of A. baumannii isolates co-harbored the blaOXA-48/blaNDM carbapenemases from Iran

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Carbapenemases: The never-ending story / Carbapenemasas: la historia interminable

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Variabilidad genética de Klebsiella pneumoniae con carbapenemasa tipo KPC proveniente de diferentes estados de Venezuela / Genetic variability of carbapenemase KPC-producing Klebsiella pneumoniae isolated at different states in Venezuela

Introducción: En Venezuela hay reportes de Klebsiella pneumoniae con carbapenemasa tipo KPC. Sin embargo, desde su primer reporte en el 2008, son muy escasos los estudios de epidemiología molecular que se han realizado en estos aislados. Métodos: Los objetivos de esta investigación fueron detectar la producción de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) (blaTEM y grupo blaCTX-M-1) y determinar la relación genética de 30 aislados pertenecientes a brotes importantes de K. pneumoniae productores de carbapenemasa tipo KPC derivados por once centros sanitarios de diferentes estados de Venezuela entre enero de 2008 y diciembre de 2012 mediante electroforesis en campo pulsante (ECP). Resultados: Todos los aislados fueron identificados como K. pneumoniae subsp. pneumoniae. Los aislados mostraron el mayor porcentaje de resistencia al ertapenem, un 97%. En todos los aislados se detectó el gen tipo KPC. El 73% presentó BLEE (en el 68% se detectó blaTEM y en el 27% blaTEM, CTX-M-1). En la ECP se detectaron 11 agrupaciones. Conclusión: Durante los años 2008-2012 se demostró que existe una gran diversidad genética en los aislados en estudio. Se determinó que algunos aislados circularon en los 11 centros sanitarios. Los resultados de esta investigación plantean la necesidad de fortalecer la vigilancia epidemiológica y el desarrollo de actividades para prevenir y controlar este tipo de microorganismo

Introduction: In Venezuela, there have been some reports of carbapenemase KPC-producing Klebsiella pneumoniae. Nevertheless, since the first report in 2008, only a few studies have been done on their molecular epidemiology in this country. Methods: The aims of this study were to detect extended-spectrum betalactamase (ESBL)-producing (blaTEM and blaCTM-M-1) and to determine the genetic relationship between 30 isolates of carbapenemase KPC-producing K. pneumoniae taken from patients at eleven health centers in different states of Venezuela from January 2008 to December 2012, using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Results: All isolates were identified as K. pneumoniae subsp. pneumoniae. Isolates showed the highest resistance to the ertapenem, 97%. The KPC gene was detected in all studied strains. Seventy three percent showed ESBL, having the blaTEM in 68% and blaTEM, CTX-M-1 in 27% of the strains. Eleven groups were found using the field-pulsed gel electrophoresis. Conclusion: High genetic diversity was found during 2008-2012 in K. pneumoniae isolated at different states in Venezuela, some of them circulating at eleven health centers. Results showed the importance of performing epidemiologic studies and the need to develop some activities to control this type of microorganisms

Caso importado de infección por Shigella sonnei portadora de betalactamasa de espectro extendido CTX-M-15 / Imported infection by CTX-M-15 extended-spectrum beta-lactamase-producing Shigella sonnei

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Prevalencia en España de mecanismos de resistencia a quinolonas en enterobacterias productoras de betalactamasas de clase C adquiridas y/o carbapenemasas / Prevalence of quinolone resistance mechanisms in Enterobacteriaceae producing acquired AmpC Beta-lactamases and/or carbapenemases in Spain

Introducción: En los últimos años se ha observado un incremento de la resistencia a fluoroquinolonas en enterobacterias, estando asociado significativamente a la resistencia a betalactámicos. Nuestro objetivo fue conocer la prevalencia de mecanismos cromosómicos y plasmídicos de resistencia a quinolonas en aislados productores de betalactamasas de claseC adquiridas y/o carbapenemasas. Métodos: Se evaluó la presencia de mecanismos cromosómicos y plasmídicos de resistencia a quinolonas [mutaciones en la región determinante de resistencia a quinolonas de gyrA y parCy genes qnr, aac(6')-Ib-cr y qepA] en 289 aislados de enterobacterias productoras de betalactamasas de claseC adquiridas y/o carbapenemasas recogidos entre febrero y julio de 2009 en 35 hospitales españoles. Resultados: Se detectaron determinantes plasmídicos en 92 aislados (31,8%); en 83 aislados (28,7%) se detectó algún gen qnr, y en 20 (7%), la variante aac(6')-Ib-cr. El gen qnr más prevalente fue qnrB4 (20%), asociado en la mayoría de los casos a DHA-1. El 14,6% de los aislados con una CMI de ciprofloxacino superior a 0,25mg/l no presentaban mutaciones en gyrA ni parC, detectándose en el 90% de los mismos algún determinante plasmídico de resistencia a quinolonas. Conclusión: qnrB4 fue el determinante plasmídico más prevalente, claramente asociado a DHA-1. Los mecanismos plasmídicos en asociación con mecanismos cromosómicos diferentes a las mutaciones en los genes de las topoisomerasas (sobreexpresión de bombas de expulsión, alteración del lipopolisacárido o disminución de porinas) pueden dar lugar a valores de CMI de ciprofloxacino que superan los puntos de corte establecidos por los principales comités internacionales de definición de puntos de corte para interpretación de datos de sensibilidad (AU)

Background: Quinolone resistance in Enterobacteriaceae species has increased over the past few years, and is significantly associated to beta-lactam resistance. The aim of this study was to evaluate the prevalence of chromosomal- and plasmid-mediated quinolone resistance in acquired AmpC Beta-lactamase and/or carbapenemase-producing Enterobacteriaceae isolates. Methods: The presence of chromosomal- and plasmid-mediated quinolone resistance mechanisms [mutations in the quinolone resistance determining region (QRDR) of gyrA and parC and qnr, aac(6')-Ib-cr and qepA genes] was evaluated in 289 isolates of acquired AmpC Beta -lactamase- and/or carbapenemase-producing Enterobacteriaceae collected between February and July 2009 in 35 Spanish hospitals. Results: Plasmid mediated quinolone resistance (PMQR) genes were detected in 92 isolates (31.8%), qnr genes were detected in 83 isolates (28.7%), and the aac(6')-Ib-cr gene was detected in 20 isolates (7%). qnrB4 gene was the most prevalent qnr gene detected (20%), associated, in most cases, with DHA-1. Only 14.6% of isolates showed no mutations in gyrA or parC with a ciprofloxacin MIC of 0.5mg/L or higher, whereas PMQR genes were detected in 90% of such isolates. Conclusion: qnrB4 gene was the most prevalent PMQR gene detected, and was significantly associated with acquired AmpC Beta -lactamase DHA-1. PMQR determinants in association with other chromosomal-mediated quinolone resistance mechanisms, different to mutations in gyrA and parC (increased energy-dependent efflux, altered lipopolysaccharide or porin loss), could lead to ciprofloxacin MIC values that exceed breakpoints established by the main international committees to define clinical antimicrobial susceptibility breakpoints (AU)

Utilidad de la resistencia a piperacilina/tazobactam como factor predictor de carbapenemasa OXA-48 en enterobacterias / Usefulness of piperacillin/tazobactam resistance as a predictor of OXA-48 carbapenemase in Enterobacteriaceae

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Evaluación de un ensayo inmunocromatográfico para la detección de carbapenemasa OXA-48 / Evaluation of an immunochromatographic test for the detection of OXA-48 carbapenemase

Introducción. La detección y diferenciación de los distintos tipos de carbapenemasas es crucial para el control y diseminación de las mismas. OXA-48 es la carbapenemasa más frecuente en España y en nuestro medio. El objetivo del estudio fue evaluar el nuevo test inmunocromatográfico OXA-48 Card letitest (Coris, BioConcept Belgium) para detectar esta carbapenemasa a partir de medios sólidos. Material y Métodos. Durante el último año se han aislado 151 cepas productoras de carbapenemasas, de las cuales 136 presentaban OXA-48 (126 Klebsiella pneumoniae, 1 Klebsiella oxytoca, 5 Escherichia coli, 4 Enterobacter cloacae) y 15 productoras de otras carbapenemasas. Estas 15 cepas junto con otras 73 con distintos mecanismos de resistencia: 54 productoras de β-lactamasas de espectro extendido y 19 con otros mecanismos, fueron utilizadas como controles negativos. Resultados. Las 136 cepas portadoras de OXA-48 resultaron positivas en la prueba OXA-48 Card letitest y las 88 especies utilizadas como controles fueron negativos, por lo que la sensibilidad y especificidad de la prueba OXA-48 Card letitest fue del 100%. Discusión. La OXA-48 Card letitest resulta ser una prueba fácil, rápida, segura y barata (aproximadamente unos 6 Euros por test) que puede utilizarse en los laboratorios de Microbiología para confirmar la producción de carbapenemasa OXA-48 a partir de los aislamientos clínicos (AU)

Introduction. Detection and differentiation of various types of carbapenemases is crucial to their control and dissemination. OXA -48 is the most common carbapenemase in Spain and in our environment. The aim of this study is the evaluation of a new immunochromatographic test OXA-48 Card letitest (Coris, BioConcept Belgium) to detect this carbapenemase from solid media. Material and Methods. During the last year 151 strains of carbapenemase producing bacteria have been isolated, of which 136 were OXA-48 (126 Klebsiella pneumoniae, 1 Klebsiella oxytoca, 5 Escherichia coli, 4 Enterobacter cloacae), and 15 producing other carbapenemases . These 15 strains with other 73 carrying other resistance mechanisms (54 extended-spectrum β-lactamases producers and 19 with other mechanisms) were used as negative controls. Results. One hundred and thirty six strains carrying OXA- 48 were positive with the test OXA-48 Card letitest and the 88 species used as controls were negative, resulting in a sensitivity and specificity of 100%. Discussion. The OXA-48 Card letitest is simple, quick, safe and cheap (approx. 6Euros/test) and can be used in microbiology laboratories to confirm the production of OXA-48 carbapenemase in clinical isolates (AU)

Bacteriemias por enterobacterias productoras de beta-lactamasas (BLEE, AmpC y carbapenemasas): asociación con los cuidados sanitarios y los pacientes oncológicos / Bacteraemia due to extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) and other beta-lactamases (ampC and carbapenemase) producing Enterobacteriaceae: association with health-care and cancer

Introducción. Las bacteriemias por enterobacterias multirresistentes suponen un gran motivo de preocupación actualmente. Para conocer el impacto de dichas infecciones en nuestra área, realizamos el presente estudio. Método. Estudio observacional prospectivo de una cohorte de pacientes con bacteriemia por enterobacterias productoras de BLEE y otras beta-lactamasas (BE-BL) ingresados en el Hospital Universitario Cruces durante 2 años. Estudio descriptivo y análisis de mortalidad y por subgrupos, con especial atención a los pacientes oncológicos. Resultados. Durante el periodo estudiado, se diagnosticaron 3.409 episodios de bacteriemia, de los cuales 124 (3,6%) fueron BE-BL. El 40,3% de los casos fueron de origen nosocomial, el 15,3% comunitario y el 44,4% asociados a cuidados sanitarios. El 44,4% de la cohorte presentaba cáncer. La presencia de E. coli fue mayoritaria en las BE-BL de cualquier foco (83%). El 58,1% recibió un tratamiento empírico inadecuado. La mortalidad a los 7 días fue del 10,5% y a los 30 días del 21,8%. Ninguna de las variables analizadas mostró asociación con la mortalidad a los 7 y 14 días, aunque la presencia de cáncer de órgano sólido (p= 0,032) así como de infección por VIH en estadio avanzado (p=0,027), se asociaron con una mayor mortalidad a los 30 días. Conclusiones. Más de la mitad de los casos de BE-BL fueron de origen extra-hospitalario, y dentro de ellos, fueron mayoritarios los casos asociados a cuidados sanitarios. A pesar de que más de la mitad de los pacientes recibieron un tratamiento antibiótico empírico inadecuado, este hecho no se asoció a mayor mortalidad; encontrándose únicamente una asociación entre mortalidad a los 30 días y presencia de neoplasia sólida subyacente o de VIH avanzado (AU)

Introduction. Bloodstream infections due to multiresistant Enterobacteriaceae are a major matter of concern nowadays. The present study evaluated the impact of these infections in our area. Methods. Prospective observational study of a cohort of patients with bacteraemia due to extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) and other beta-lactamases producing organisms among hospitalized patients in Cruces Hospital for 2 years. We conducted a descriptive analysis, a subgroup analysis (cancer vs. non-cancer patients) and a mortality analysis. Results: During the study period, 3409 episodes of bacteremia were diagnosed, of which 124 (3.6%) were ESBL and other beta-lactamases producing Enterobacteriaceae. 40.3% of the cases were nosocomial, 15.3% community acquired and 44.4% were health-care associated. 44.4% of the cohort had cancer as underlying disease. The most commonly isolated organism was E. coli (83% of cases), regardless of the source of infection. 58.1% of patients received inadequate empirical therapy. 7 day-mortality was 10.5% and 30 day-mortality was 21.8%. None of the analyzed variables showed association with 7 and 14 day-mortality, but the presence of solid cancer (p= 0.032) and advanced HIV infection (p = 0.027), were significantly associated with higher 30 day-mortality. Conclusions. More than half of bacteraemia episodes affected outpatients and most of them were health-care associated episodes. Even though more than half of the patients received inadequate empirical treatment, this was not related to higher mortality. We only found an association between 30 day-mortality and the presence of underlying solid malignancy or advanced HIV infection (AU)

Nuevos avances metodológicos: propuesta de algoritmo para el manejo de la infección por Clostridium difficile / New methodological advances: algorithm proposal for management of Clostridium difficile infection

Introducción. La infección por Clostridium difficile (ICD) es la causa más frecuente de diarrea asociada a los cuidados sanitarios y también se reconoce un papel etiológico en la diarrea de adquisición comunitaria. El objetivo de este trabajo fue evaluar si la detección simultánea de GDH y toxinas A/B de C. difficile, seguida de PCR como test confirmatorio supuso una mejora frente a la detección única de toxinas A/B, y plantear un algoritmo más eficiente. Material y métodos. Entre Junio 2012 y Enero 2013, en el Hospital Infantil Universitario Niño Jesús, Madrid, se estudiaron muestras de heces para la detección simultánea de GDH y toxinas A/B, y también para la detección única de toxinas A/B. Cuando los resultados entre GDH y toxinas A/B fueron discordantes, se seleccionó una única muestra por paciente para la detección de toxina B (tcdB) de C. difficile por PCR. Resultados. Se estudiaron 116 muestras de 52 pacientes. Por ambos tests, 4 muestras fueron positivas y 75 negativas para la detección de C. difficile toxigénico. En las 37 muestras restantes se detectó C. difficile pero no producción de toxinas independientemente del método utilizado, salvo en un caso. De estas muestras se seleccionaron 20 para detección de toxina B (tcdB) por PCR, siendo 7 positivas. Discusión. La detección simultánea de GDH y toxinas A/B seguida de PCR supuso la recuperación de casos de ICD. La detección de GDH y PCR (en muestras GDH positivas) es la combinación que ofrecería una superior relación coste/efectividad en la población atendida (AU)

Introduction. Clostridium difficile infection (CDI) is considered the most common cause of health care-associated diarrhea and also is an etiologic agent of community diarrhea. The aim of this study was to assess the potential benefit of a test that detects glutamate dehydrogenase (GDH) antigen and C. difficile toxin A/B, simultaneously, followed by detection of C. difficile toxin B (tcdB) gene by PCR as confirmatory assay on discrepant samples, and to propose an algorithm more efficient. Material and Methods. From June 2012 to January 2013 at Hospital Infantil Universitario Niño Jesús, Madrid, the stool samples were studied for the simultaneous detection of GDH and toxin A/B, and also for detection of toxin A/B alone. When results between GDH and toxin A/B were discordant, a single sample for patient was selected for detection of C. difficile toxin B (tcdB) gene. Results. A total of 116 samples (52 patients) were tested. Four were positive and 75 negative for toxigenic C. difficile (Toxin A/B, alone or combined with GDH). C. difficile was detected in the remaining 37 samples but not toxin A/B, regardless of the method used, except one. Twenty of the 37 specimens were further tested for C. difficile toxin B (tcdB) gene and 7 were positive. Discussion. The simultaneous detection of GDH and toxin A/B combined with PCR recovered undiagnosed cases of CDI. In accordance with our data, we propose a two-step algorithm: detection of GDH and PCR (in samples GDH positive). This algorithm could provide a superior cost-benefit ratio in our population (AU)

Carbapenemase-producing Enterobacteriaceae: The end of the antibiotic era? / Enterobacterias productoras de carbapenemasas: ¿el fin de la era antibiótica?

Infections produced by carbapenemase-producing Enterobacteriaceae (CPE) are increasing worldwide. Therapeutic options are scarce because many of these bacteria are resistant to other antimicrobial groups. Furthermore, the dissemination of some carbapenemases and CPE is occurring rapidly. Health care authorities should be aware of the relevance of this problem, and coordinated surveillance and control strategies at all levels of the health system should be undertaken. The Spanish Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases (SEIMC) and The Spanish Network for Research on Infectious Diseases (REIPI, Institute of Health Carlos III, Ministry of Health, Spain) has selected a panel of Spanish experts on infections caused by CPE from the areas of clinical microbiology, infectious diseases and public health to review and discuss the most controversial issues regarding this increasing threat (AU)

Las infecciones causadas por enterobacterias productoras de carbapenemasas (EPC) están aumentando en el mundo entero. Las posibilidades terapéuticas son escasas, puesto que estas bacterias suelen ser resistentes a diferentes grupos de antibacterianos. Además, la diseminación de algunos tipos de carbapenemasas y de EPC está ocurriendo con mucha rapidez. Las autoridades sanitarias deberían ser conscientes de la relevancia de este problema y coordinar medidas de vigilancia y control en todos los ámbitos sanitarios. La Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica (SEIMC) y la Red Española de Investigación en Patología Infecciosa (REIPI; Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Sanidad, España) han seleccionado un panel de expertos en infecciones producidas por EPC que provienen del campo de la microbiología clínica, enfermedades infecciosas y salud pública para revisar y discutir los aspectos más controvertidos de esta amenaza (AU)

Carbapenemases in Enterobacteriaceae: Types and molecular epidemiology / Carbapenemasas en enterobacterias: tipos y epidemiología molecular

The most important mechanism of carbapenem resistance in Enterobacteriaceae is the production of carbapenemases, although resistance can also result from the synergistic activity between AmpC-type or (to a lesser extent) extended-spectrum beta-lactamases combined with decreased outer membrane permeability. Three major molecular classes of carbapenemases are recognized: A, B and D. Classes A and D are serine-beta-lactamases, whereas class B are metallo-beta-lactamases (their hydrolytic activity depends on the presence of zinc). In addition to carbapenems, carbapenemases also hydrolyze other beta-lactams, but the concrete substrate profile depends on the enzyme type. In general terms, class A enzymes are to some extent inhibited by clavulanic acid, and class B enzymes do not affect monobactams and are inhibited by zinc chelators. Given Enterobacteriaceae producing carbapenemases usually also contain gene coding for other mechanisms of resistance to beta-lactams, it is not unusual for the organisms to present complex beta-lactam resistance phenotypes. Additionally, these organisms frequently contain other genes that confer resistance to quinolones, aminoglycosides, tetracyclines, sulphonamides and other families of antimicrobial agents, which cause multiresistance or even panresistance. Currently, the most important type of class A carbapenemases are KPC enzymes, whereas VIM, IMP and (particularly) NDM in class B and OXA-48 (and related) in class D are the more relevant enzymes. Whereas some enzymes are encoded by chromosomal genes, most carbapenemases are plasmid-mediated (with genes frequently located in integrons), which favors the dissemination of the enzymes. Detailed information of the genetic platforms and the context of the genes coding for the most relevant enzymes will be presented in this review (AU)

El mecanismo más importante de resistencia a carbapenémicos en enterobacterias es la producción de carbapenemasas, aunque dicha resistencia también puede deberse a la combinación de betalactamasas tipo AmpC o, en menor medida, de espectro extendido, combinadas con disminución de la permeabilidad de la membrana externa. Se conocen 3 tipos moleculares de carbapenemasas: A, B y D. Las de las clases A y D son betalactamasas de serina, mientras que las de clase B son metalobetalactamasas (su actividad depende del cinc). Las carbapenemasas también hidrolizan otros betalactámicos, además de carbapenémicos, pero el perfil de sustrato concreto depende de la enzima considerada. En términos generales, las enzimas de clase A se inhiben en mayor o menor medida por ácido clavulánico y las de clase B no afectan a los monobactámicos y se inhiben por quelantes del cinc. Las enterobacterias que producen carbapenemasas, generalmente contienen otros genes de resistencia a betalactámicos y no es raro que presenten fenotipos de resistencia a betalactámicos complejos. Además, estos organismos frecuentemente contienen genes de resistencia a quinolonas, aminoglucósidos, tetraciclinas, sulfonamidas y otros antimicrobianos, causando multirresistencia o incluso panresistencia. Actualmente, las carbapenemasas más importantes de clase A son KPC, las de clase B son VIM, IMP, y en especial NDM, y las de clase D, OXA-48 y similares. Aunque algunas enzimas están codificadas por genes cromosómicos, la mayoría están mediadas por plásmidos (y los correspondientes genes con frecuencia se encuentran en integrones), lo cual favorece la diseminación de estas enzimas. En esta revisión se presenta información detallada sobre las plataformas y los contextos genéticos de los genes que codifican las enzimas más relevantes (AU)

Epidemiology of infections caused by carbapenemase-producing Enterobacteriaceae: Reservoirs and transmission mechanisms / Epidemiología de las infecciones causadas por enterobacterias productoras de carbapenemasas: reservorios y mecanismos de transmisión

The dissemination of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae has occurred very quickly and has crossed borders rapidly between countries and continents. In some areas, it has exceeded the holding capacity of health systems, reaching epidemic proportions. This form of dissemination has not been the same for all enzymes, with KPC, NDM and OXA-48 genes having a greater ability to spread. These enzymes have primarily been spread clonally in the case of KPC-producing Klebsiella pneumoniae from the initial epicenter located in New York, with a very small number of strains causing outbreaks. For NDM and OXA48, these resistance determinants have been vehiculized by clones with a high transmission capacity; however, simultaneous horizontal transmission is also playing an important role. The most important identified reservoirs are colonized or infected individuals from endemic areas or centers with outbreaks, but the contaminated goods from these endemic areas also play a part. An international effort is needed to control the spread of these multiresistant pathogens (AU)

La diseminación de enterobacterias productoras de carbapenemasas ha sucedido muy deprisa y ha cruzado rápidamente los límites entre países y continentes. En algunas áreas ha excedido la capacidad de manejo de los sistemas sanitarios, alcanzando proporciones epidémicas. Esta forma de diseminación no ha sido la misma para todas las enzimas, siendo los genes KPC, NDM y OXA-48 los que tienen una mayor capacidad de diseminación. Estas enzimas se han extendido principalmente de forma clónica en el caso de la Klebsiella pneumoniae productora de KPC desde el epicentro inicial localizado en Nueva York, con un número muy pequeño de cepas causantes del brote. En el caso de NDM y OXA-48, estos determinantes de resistencia han sido vehiculizados por clones con una alta capacidad de transmisión; no obstante, la transmisión horizontal simultánea está jugando también un papel importante. Los reservorios identificados más importantes son los individuos colonizados o infectados procedentes de las áreas o centros epidémicos con brotes, pero los productos contaminados procedentes de estas áreas también juegan un papel. Se necesita un esfuerzo internacional para controlar la diseminación de estos patógenos multirresistentes (AU)

Evolution of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae at the global and national level: What should be expected in the future? / Evolución de las enterobacterias productoras de carbapenemasas a nivel global y nacional: ¿qué deberíamos esperar en el futuro?

In recent years, Enterobacteriaceae isolates have increased their potential to become highly drug resistant by acquiring resistance to carbapenems, primarily due to the production of acquired carbapenemases. The carbapenemases detected in Enterobacteriaceae are largely of the KPC, VIM, NDM, IMP and OXA-48 types. Although the epidemiological origin and geographic distribution of carbapenemases are clearly different, they all first appeared in the late 20th Century. Only a decade later, these enzymes have already become established and have expanded globally. An important epidemiological change has occurred in Spain in recent years, characterized by a rapid increase in the number of cases of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae (CPE), causing both nosocomial outbreaks and single infections. The impact of CPE in Spain is primarily due to OXA-48- producing and VIM-1-producing Klebsiella pneumoniae isolates, although other species such as Escherichia coli and Enterobacter cloacae are also increasing. The emergence of CPE as a cause of community-onset infections is a matter of great concern. Taking into account recent experience, and considering the fact that increasing numbers of patients are becoming infected by CPE and reservoirs of carbapenemases are growing globally, the trend of the CPE epidemic points toward a rise in its incidence. To prevent a massive CPE pandemic, a well-coordinated response from all health professionals and national and supranational authorities is clearly needed (AU)

En los últimos años, los aislamientos clínicos de enterobacterias resistentes a múltiples antibióticos, incluyendo los antibióticos carbapenémicos, han aumentado debido principalmente a la producción de carbapenemasas. Las principales carbapenemasas detectadas en enterobacterias pertenecen a los tipos KPC, VIM, NDM, IMP y OXA-48. Aunque el origen epidemiológico y la distribución geográfica de las diferentes carbapenemasas son diversos, todas aparecieron en los últimos años del siglo XX. Solo una década más tarde, estas enzimas ya se han establecido y expandido a nivel mundial. En España se ha producido un importante cambio epidemiológico en los últimos años caracterizado por un aumento rápido del número de casos de enterobacterias productoras de carbapenemasas (EPC), causando tanto brotes nosocomiales como infecciones esporádicas. En la actualidad, el mayor impacto de las EPC en España es debido a las cepas de Klebsiella pneumoniae productoras de OXA-48 o VIM-1, aunque la prevalencia de otras especies como Escherichia coli y Enterobacter cloacae también está aumentando. La aparición de EPC como causa de infecciones de inicio en la comunidad es un asunto de gran preocupación. Teniendo en cuenta las últimas tendencias detectadas y el aumento de los reservorios de carbapenemasas a nivel mundial, la evolución futura de la incidencia de las EPC no parece ser otra que la del aumento tanto en infecciones nosocomiales como en las adquiridas en la comunidad. Para prevenir una pandemia por EPC es necesaria una respuesta rotunda, bien coordinada y protocolizada de todos los profesionales sanitarios y autoridades nacionales y supranacionales implicadas (AU)