Should we leave the paper currency? A microbiological examination / ¿Deberíamos dejar de usar los billetes? Análisis microbiológico

OBJECTIVES: Pathogens can be transmitted to banknotes due to the personal unhygienic habits. The aim of study was to find the possible pathogens on the banknotes circulating in the market and also to present their antibacterial resistance and their various virulence factors using genotypic and phenotypic methods. MATERIAL AND METHODS: A total of 150 samples of bank-notes were randomly collected between August 2017 and March 2018. VITEK systems were used for identification and antimicrobial susceptibility testing respectively. Antimicrobial resistance genes (mecA, van, extended-spectrum β-lactamase [ESBL] and carbapenemases) and staphyloccoccal virulence genes (staphyloccoccal enterotoxins [SEs], pvl, and tsst-1) were determined using with real-time PCR. RESULTS: Staphylococcus aureus, coagulase-negative staphylococci (CoNS), Enterococcus spp., Gram-negative enteric bacteria, non-fermentative Gram-negative bacteria and Candida spp. were detected 48%, 54.7%, 56%, 21.3%, 18.7%, and 4%, respectively. Methicillin-resistant S. aureus, vancomycin-resistant enterococci and ESBL producing Gram-negative were found 46.8%, 1.3%, and 28.7%, respectively. Pvl, tsst-1, and SEs genes were found in a 2.8/4.9%, 1.4/1.2%, and 100/ 87.8% of the S. aureus/CoNS strains, respectively. The sea gene was found the most common enterotoxigenic gene. blaTEM, blaSHV, blaCTX-M-2, blaCTX-M-1, blaKPC, and blaOXA-48 were found 55.8%, 46.5%, 41.2%, 18.6%, 18.6%, and 18.6%, respectively in Gram-negative strains. CONCLUSION: These results is very important to highlight hygienic status of paper currencies. This can be considered as an indication that banknotes may contribute to the spread of pathogens and antimicrobial resistance. Therefore, we may need to start using alternative products instead of banknotes

OBJETIVO: Los patógenos se pueden transmitir a los billetes debido a los hábitos antihigiénicos personales. El objetivo del estudio fue buscar los posibles patógenos en los billetes que circulan en el mercado y también observar su resistencia antibacteriana así como sus diversos factores de virulencia utilizando métodos genotípicos y fenotípicos. MATERIAL Y MÉTODOS: Se recogieron al azar un total de 150 muestras de billetes entre agosto de 2017 y marzo de 2018. Se utilizaron los sistemas VITEK para la identificación y las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos, respectivamente. Los genes de resistencia a los antimicrobianos (mecA, van, betalactamasas de espectro ampliado [BLEA] y carbapenemasas) y los genes de virulencia estafilocócica (SE, pvl y tsst -1) se determinaron mediante PCR a tiempo real. RESULTADOS: Se detectó la presencia de cepas de Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulasa negativos (SCN), Enterococcus spp, bacterias gramnegativas, bacterias gramnegativas no fermentativas y Candida spp en un 48%, 54,7%, 56%, 21,3%, 18,7% y 4% de los billetes, respectivamente. Se observó la presencia de S. aureus resistente a meticilina, Enterococcus resistentes a vancomicina y gramnegativos productores de BLEA en un 46,8%, 1,3% y 28,7%, respectivamente. Los genes Pvl, tsst-1 y SE se encontraron en un 2,8/4,9%; 1,4/1,2% y 100/87,8% de las cepas de S. aureus/SCN, respectivamente. El gen sea fue el gen enterotoxigénico más frecuente. Los genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M-2, blaCTX-M-1, blaKPC, y blaOXA-48 se encontraron 55,8%, 46,5%, 41,2%, 18,6%, 18,6%, y 18,6%, respectivamente en cepas gramnegativas. CONCLUSIÓN: Estos resultados son muy importantes para resaltar el estado higiénico de los billetes. De este modo, los billetes pueden contribuir a la propagación de patógenos y de la resistencia a los antimicrobianos. Por lo tanto, es posible que debamos comenzar a utilizar productos alternativos a los billetes

Variabilidad genética de Klebsiella pneumoniae con carbapenemasa tipo KPC proveniente de diferentes estados de Venezuela / Genetic variability of carbapenemase KPC-producing Klebsiella pneumoniae isolated at different states in Venezuela

Introducción: En Venezuela hay reportes de Klebsiella pneumoniae con carbapenemasa tipo KPC. Sin embargo, desde su primer reporte en el 2008, son muy escasos los estudios de epidemiología molecular que se han realizado en estos aislados. Métodos: Los objetivos de esta investigación fueron detectar la producción de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) (blaTEM y grupo blaCTX-M-1) y determinar la relación genética de 30 aislados pertenecientes a brotes importantes de K. pneumoniae productores de carbapenemasa tipo KPC derivados por once centros sanitarios de diferentes estados de Venezuela entre enero de 2008 y diciembre de 2012 mediante electroforesis en campo pulsante (ECP). Resultados: Todos los aislados fueron identificados como K. pneumoniae subsp. pneumoniae. Los aislados mostraron el mayor porcentaje de resistencia al ertapenem, un 97%. En todos los aislados se detectó el gen tipo KPC. El 73% presentó BLEE (en el 68% se detectó blaTEM y en el 27% blaTEM, CTX-M-1). En la ECP se detectaron 11 agrupaciones. Conclusión: Durante los años 2008-2012 se demostró que existe una gran diversidad genética en los aislados en estudio. Se determinó que algunos aislados circularon en los 11 centros sanitarios. Los resultados de esta investigación plantean la necesidad de fortalecer la vigilancia epidemiológica y el desarrollo de actividades para prevenir y controlar este tipo de microorganismo

Introduction: In Venezuela, there have been some reports of carbapenemase KPC-producing Klebsiella pneumoniae. Nevertheless, since the first report in 2008, only a few studies have been done on their molecular epidemiology in this country. Methods: The aims of this study were to detect extended-spectrum betalactamase (ESBL)-producing (blaTEM and blaCTM-M-1) and to determine the genetic relationship between 30 isolates of carbapenemase KPC-producing K. pneumoniae taken from patients at eleven health centers in different states of Venezuela from January 2008 to December 2012, using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Results: All isolates were identified as K. pneumoniae subsp. pneumoniae. Isolates showed the highest resistance to the ertapenem, 97%. The KPC gene was detected in all studied strains. Seventy three percent showed ESBL, having the blaTEM in 68% and blaTEM, CTX-M-1 in 27% of the strains. Eleven groups were found using the field-pulsed gel electrophoresis. Conclusion: High genetic diversity was found during 2008-2012 in K. pneumoniae isolated at different states in Venezuela, some of them circulating at eleven health centers. Results showed the importance of performing epidemiologic studies and the need to develop some activities to control this type of microorganisms

Identification of Streptococcus pneumoniae lytA, plyA and psaA genes in pleural fluid by multiplex real-time PCR / Identificación de los genes lytA, plyA y psaA de Streptococcus pneumoniae en líquido pleural mediante una técnica de PCR múltiple en tiempo real

INTRODUCTION: The aim was to evaluate the utility of a multiplex real-time PCR to detect Streptococcus pneumoniae lytA, plyA and psaA genes in pleural fluid (PF). METHODS: A collection of 81 PF samples was used. Sixty were considered positive for S. pneumoniae according to previous results (54 by an in-house lytA gene PCR and eight by universal rRNA PCR). RESULTS: The sensitivity for detection of the lytA, plyA and psaA genes by multiplex PCR was 100% (60/60), 98.3% (59/60) and 91.7% (55/60), respectively. The detection of all three genes was negative in 21 samples formerly confirmed as negative for S. pneumoniae (100% specificity) by the other procedures (9 by in-house lytA PCR and 12 by rRNA PCR). CONCLUSIONS: The use of this multiplex PCR may be a useful option to identify S. pneumoniae directly in PF samples

INTRODUCCIÓN: El objetivo fue evaluar la utilidad de una técnica de PCR múltiple para detectar los genes lytA, plyA y psaA de Streptococcus pneumoniae en líquido pleural. MÉTODOS: Se empleó una colección de 81 muestras de líquido pleural. Sesenta habían sido consideradas positivas para S. pneumoniae según resultados previos (54 por una prueba casera de PCR para el gen lytA y 8 por una PCR universal rRNA). RESULTADOS: La sensibilidad de la técnica para la detección de los genes lytA, plyA y psaA fue respectivamente 100% (60/60), 98,3% (59/60) y 91,7% (55/60). La detección de los tres genes resultó negativa en 21 muestras negativas (especificidad 100%) por los otros procedimientos (9 por la prueba casera de PCR para lytA y 12 por la PCR rRNA). CONCLUSIONES: El uso de esta técnica de PCR múltiple puede ser una opción útil para la detección directa de S. pneumoniae en líquido pleural

De novo synthesis and functional analysis of the phosphatase-encoding gene acI-B of uncultured Actinobacteria from Lake Stechlin (NE Germany)

The National Center for Biotechnology Information [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/taxonomy/] database enlists more than 15,500 bacterial species. But this also includes a plethora of uncultured bacterial representations. Owing to their metabolism, they directly influence biogeochemical cycles, which underscores the important status of bacteria on our planet. To study the function of a gene from an uncultured bacterium, we have undertaken a de novo gene synthesis approach. Actinobacteria of the acI-B subcluster are important but yet uncultured members of the bacterioplankton in temperate lakes of the northern hemisphere such as oligotrophic Lake Stechlin (NE Germany). This lake is relatively poor in phosphate (P) and harbors on average ~1.3 x 106 bacterial cells/ml, whereby Actinobacteria of the ac-I lineage can contribute to almost half of the entire bacterial community depending on seasonal variability. Single cell genome analysis of Actinobacterium SCGC AB141-P03, a member of the acI-B tribe in Lake Stechlin has revealed several phosphate-metabolizing genes. The genome of acI-B Actinobacteria indicates potential to degrade polyphosphate compound. To test for this genetic potential, we targeted the exoP-annotated gene potentially encoding polyphosphatase and synthesized it artificially to examine its biochemical role. Heterologous overexpression of the gene in Escherichia coli and protein purification revealed phosphatase activity. Comparative genome analysis suggested that homologs of this gene should be also present in other Actinobacteria of the acI lineages. This strategic retention of specialized genes in their genome provides a metabolic advantage over other members of the aquatic food web in a P-limited ecosystem (AU)

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Carbapenemases in Enterobacteriaceae: Types and molecular epidemiology / Carbapenemasas en enterobacterias: tipos y epidemiología molecular

The most important mechanism of carbapenem resistance in Enterobacteriaceae is the production of carbapenemases, although resistance can also result from the synergistic activity between AmpC-type or (to a lesser extent) extended-spectrum beta-lactamases combined with decreased outer membrane permeability. Three major molecular classes of carbapenemases are recognized: A, B and D. Classes A and D are serine-beta-lactamases, whereas class B are metallo-beta-lactamases (their hydrolytic activity depends on the presence of zinc). In addition to carbapenems, carbapenemases also hydrolyze other beta-lactams, but the concrete substrate profile depends on the enzyme type. In general terms, class A enzymes are to some extent inhibited by clavulanic acid, and class B enzymes do not affect monobactams and are inhibited by zinc chelators. Given Enterobacteriaceae producing carbapenemases usually also contain gene coding for other mechanisms of resistance to beta-lactams, it is not unusual for the organisms to present complex beta-lactam resistance phenotypes. Additionally, these organisms frequently contain other genes that confer resistance to quinolones, aminoglycosides, tetracyclines, sulphonamides and other families of antimicrobial agents, which cause multiresistance or even panresistance. Currently, the most important type of class A carbapenemases are KPC enzymes, whereas VIM, IMP and (particularly) NDM in class B and OXA-48 (and related) in class D are the more relevant enzymes. Whereas some enzymes are encoded by chromosomal genes, most carbapenemases are plasmid-mediated (with genes frequently located in integrons), which favors the dissemination of the enzymes. Detailed information of the genetic platforms and the context of the genes coding for the most relevant enzymes will be presented in this review (AU)

El mecanismo más importante de resistencia a carbapenémicos en enterobacterias es la producción de carbapenemasas, aunque dicha resistencia también puede deberse a la combinación de betalactamasas tipo AmpC o, en menor medida, de espectro extendido, combinadas con disminución de la permeabilidad de la membrana externa. Se conocen 3 tipos moleculares de carbapenemasas: A, B y D. Las de las clases A y D son betalactamasas de serina, mientras que las de clase B son metalobetalactamasas (su actividad depende del cinc). Las carbapenemasas también hidrolizan otros betalactámicos, además de carbapenémicos, pero el perfil de sustrato concreto depende de la enzima considerada. En términos generales, las enzimas de clase A se inhiben en mayor o menor medida por ácido clavulánico y las de clase B no afectan a los monobactámicos y se inhiben por quelantes del cinc. Las enterobacterias que producen carbapenemasas, generalmente contienen otros genes de resistencia a betalactámicos y no es raro que presenten fenotipos de resistencia a betalactámicos complejos. Además, estos organismos frecuentemente contienen genes de resistencia a quinolonas, aminoglucósidos, tetraciclinas, sulfonamidas y otros antimicrobianos, causando multirresistencia o incluso panresistencia. Actualmente, las carbapenemasas más importantes de clase A son KPC, las de clase B son VIM, IMP, y en especial NDM, y las de clase D, OXA-48 y similares. Aunque algunas enzimas están codificadas por genes cromosómicos, la mayoría están mediadas por plásmidos (y los correspondientes genes con frecuencia se encuentran en integrones), lo cual favorece la diseminación de estas enzimas. En esta revisión se presenta información detallada sobre las plataformas y los contextos genéticos de los genes que codifican las enzimas más relevantes (AU)

Espectro antimicrobiano de ceftarolina. Actividad in vitro frente a estafilococos resistentes a la meticilina / Antimicrobial spectrum of ceftaroline. In vitro activity against methicillinresistant staphylococci

El aumento de la resistencia bacteriana hace necesario el desarrollo de nuevos antimicrobianos. En particular, Staphylococcus aureus, agente causal frecuente de infecciones graves, es capaz de desarrollar multirresistencia antibiótica que incluye a glucopéptidos, linezolid y daptomicina. Aunque la incidencia de S. aureus resistente a la meticilina (SARM) parece haberse estabilizado en los últimos años, es preocupante su amplia diseminación en los medios hospitalario y extrahospitalario. Ceftarolina es una nueva cefalosporina de amplio espectro con actividad bactericida frente a bacterias grampositivas incluyendo SARM y Streptococcus pneumoniae multirresistente. Además es activa frente a estafilococos resistentes a glucopéptidos, linezolid y daptomicina. La CMI90 de ceftarolina frente a SARM oscila entre 0,5-2 mg/l y frente a estafilococos coagulasa negativa resistentes a la meticilina es de 0,5 mg/l. Ceftarolina posee también buena actividad frente a patógenos respiratorios como Haemophilus influenzae y Moraxella catarrhalis y, aunque es activa frente a las enterobacterias, carece de actividad frente a las que producen betalactamasas de espectro extendido, carbapenemasas y las que hiperproducen AmpC, y tampoco es activa frente a los bacilos gramnegativos no fermentadores. Ceftarolina es una interesante adición al arsenal terapéutico frente a SARM y una alternativa importante para el tratamiento de las infecciones polimicrobianas causadas por microorganismos grampositivos multirresistentes (AU)

Because of the increase in bacterial resistance, there is a need for new antimicrobial agents. In particular, Staphylococcus aureus is a frequent cause of severe infections and has an extraordinary capacity to develop antibiotic multiresistance, including resistance to glycopeptides, linezolid, and daptomycin. Although the incidence of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) seems to have stabilized in the last few years, its wide dissemination in healthcare settings and in the community is a cause of concern. Ceftaroline is a new broad-spectrum cephalosporin with bactericidal activity against Gram-positive bacteria, including MRSA and multidrug-resistant Streptococcus pneumoniae. In addition, this drug is active against staphylococci showing resistance to glycopeptides, linezolid, and daptomycin. The ceftaroline MIC90 against MRSA ranges from 0.5-2 mg/L and that against methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci is 0.5 mg/L. Ceftaroline has also good activity against respiratory pathogens including Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis. Although this drug is active against Enterobacteriaceae, it does not retain activity when these isolates produce extended-spectrum beta-lactamases, carbapenemases or hyperproduce AmpC. Ceftaroline is not active against nonfermentative Gram-negative bacilli. Ceftaroline is an interesting addition to the therapeutic armamentarium against MRSA and constitutes an important option for the treatment of polymicrobial infections caused by multidrug-resistant Gram-positive microorganisms (AU)

Ingeniería evolutiva en Salmonella: la emergencia de plásmidos híbridos de virulencia-resistencia a antimicrobianos en serotipos no tifoideos / Evolutionary engineering in Salmonella: emergence of hybrid virulence-resistance plasmids in non-typhoid serotypes

Un ejemplo de ingeniería evolutiva en bacterias patógenas es la emergencia en Salmonella enterica de plásmidos híbridos que han surgido por asociación de determinantes de resistencia (R) a antimicrobianos con plásmidos de virulencia (V) específicos de los serotipos typhimurium y choleraesuis. Los plásmidos VR poseen en común el operón spv (Salmonella plasmid virulence, que interviene en la infección sistémica) aunque difieren en la presencia de otros determinantes V y en el perfil de genes R. Los del serotipo typhimurium se han encontrado en Europa, y presentan regiones R con diferente grado de complejidad, pudiendo incluir integrones de clase 1 y distintos transposones. Los del serotipo choleraesuis proceden de cepas aisladas en Taiwán y sólo confieren resistencia a ampicilina y sulfonamidas. Ambos serotipos son zoonóticos y la formación de plásmidos VR puede aportar una ventaja selectiva en determinadas circunstancias, originando cepas más difíciles de tratar y con mayor potencial epidémico (AU)

An example of evolutive engineering in bacterial pathogens is the emergence of hybrid virulence-resistance (VR) plasmids in Salmonella enterica, resulting from an association between antimicrobial resistance determinants and specific virulence plasmids of the S. typhimurium and S. choleraesuis serotypes. VR plasmids all possess the spv (Salmonella plasmid virulence) operon, which is involved in systemic infection; however, they differ in the presence of other virulence determinants and in the resistance gene profile. VR plasmids of S. typhimurium have been found in Europe, and show resistance regions with different levels of complexity that can include class 1 integrons and various transposons. VR plasmids of S. choleraesuis, detected in strains isolated in Taiwan, only confer resistance to ampicillin and sulfonamides. Both serotypes are zoonotic and the presence of hybrid VR plasmids may confer an adaptive advantage under certain conditions, resulting in bacterial strains that are more difficult to treat and have a higher epidemic potential (AU)

Fenotipos y mecanismos genéticos de resistencia a macrólidos y lincosamidas en estreptococos del grupo viridans / Phenotypes and genetic mechanisms of resistance to macrolides and lincosamides in viridans group streptococci

Los estreptococos del grupo viridans forman parte de la flora orofaríngea, intestinal y genital, pero pueden causar endocarditis y bacteriemia en pacientes susceptibles. Cada vez se describen más cepas resistentes a las penicilinas y a los macrólidos. El objetivo de nuestro estudio fue conocer los mecanismos de resistencia a los macrólidos en aislamientos con significación clínica. De enero de 2004 a junio de 2006 se identificaron 85 cepas de estreptococos del grupo viridans. Se determinó la sensibilidad a penicilina, cefotaxima, eritromicina, clindamicina y gentamicina. Se estableció el fenotipo de resistencia a los macrólidos mediante aproximación de discos (eritromicina-clindamicina). Se detectó el mecanismo genético de resistencia mediante PCR para los genes ermB, ermA, ermC, ermA (TR) y mefA/E. Se identificaron 51 cepas pertenecientes a especies del grupo anginosus, obtenidas mayoritariamente de abscesos abdominales, y 34 cepas de otras especies, obtenidas mayoritariamente de hemocultivos. La tasa de resistencia a los macrólidos fue del 28,2% (24/85). El fenotipo MLSB se observó en el 66,7% de las cepas, principalmente del grupo anginosus. El fenotipo M predominó en S. mitis y S. oralis. En las cepas con fenotipo MLSB constitutivo se detectó el gen ermB, mientras que en las cepas con expresión inducible se detectó el gen ermA. En las cepas con fenotipo M se detectó el gen mefA/E. Se observó corresistencia con penicilina en el 20,8% (5/24) de las cepas. La resistencia a los macrólidos en los estreptococos del grupo viridans es ligeramente menor que la observada en otros estudios. Destacamos mayor resistencia y presencia del fenotipo MLSB en cepas del grupo anginosus, y del fenotipo M en las restantes especies, lo cual podría estar relacionado con el origen anatómico de las cepas. La corresistencia a la penicilina fue baja. Sería recomendable vigilar periódicamente la resistencia a los macrólidos en los estreptococos del grupo viridans, posibles transmisores de resistencia a otras especies de estreptococos patógenos

Viridans group streptococci (VGS) are part of the oropharyngeal, intestinal and genital flora, but they may cause endocarditis and bacteremia in susceptible patients. Penicillin- and macrolide-resistant strains are increasing every year. The aim of this study was to investigate genetic mechanisms of resistance to macrolides in clinically relevant isolates. We identified 85 isolates from January 2004 to June 2006. Susceptibility to penicillin, cefotaxime, erythromycin, clindamycin and gentamycin was determined. A resistance phenotype was assigned according to the disk approximation test (erythromycin-clindamycin). The mechanism of resistance was determined by PCR for the following genes: ermB, ermA, ermC, ermA (TR) and mefA/E. We identified 51 isolates belonging to Streptococcus anginosus species, most of which were obtained from abdominal abscesses, and 34 isolates belonging to other species, most of which were obtained from blood cultures. The macrolide resistance rate was 28.2% (24/85). The MLSB phenotype was observed in 66.7% of the isolates, primarily in the S. anginosus group. The M phenotype was predominant in S. mitis and S. oralis. Isolates that expressed the constitutive MLSB phenotype carried the ermB gene, and those that expressed the inducible MLSB phenotype carried the ermA gene. Isolates that expressed the M phenotype carried the mefA/E gene. There was coresistance with penicillin in 20.8% (5/24) of the isolates. Coresistance with penicillin was low. These results suggest that screening for macrolide resistance in VGS would be desirable because of the potential transmission of resistance genes to other pathogenic streptococci

Inactivation of the Sinorhizobium fredii HH103 rhcJ gene abolishes nodulation outer proteins (Nops) secretion and decreases the symbiotic capacity with soybean / La inactivación del gen rhcJ de Sinorhizobium fredii HH103 elimina la secreción de las proteínas externas de nodulación (Nops) y disminuye la capacidad de simbiosis con la soja

It has been postulated that nodulation outer proteins (Nops) avoid effective nodulation of Sinorhizobium fredii USDA257 to nodulate with American soybeans. S. fredii HH103 naturally nodulates with both Asiatic (non-commercial) and American (commercial) soybeans. Inactivation of the S. fredii HH103 gene rhcJ, which belongs to the tts (type III secretion) cluster, abolished Nop secretion and decreased its symbiotic capacity with the two varieties of soybeans. S. fredii strains HH103 and USDA257, that only nodulates with Asian soybeans, showed different SDS-PAGE Nop profiles, indicating that these strains secrete different sets of Nops. In coinoculation experiments, the presence of strain USDA257 provoked a clear reduction of the nodulation ability of strain HH103 with the American soybean cultivar Williams. These results suggest that S. fredii Nops can act as either detrimental or beneficial symbiotic factors in a strain-cultivar-dependent manner. Differences in the flavonoid-mediated expression of rhcJ with respect to nodA were also detected. In addition, one of the Nops secreted by strain HH103 was identified as NopA (AU)

Se ha propuesto que las proteínas externas de nodulación (Nops) impiden la nodulación efectiva de Sinorhizobium fredii USDA257 con las sojas americanas. S. fredii HH103 nodula de forma natural tanto con las sojas asiáticas (no comercializadas) como con las americanas (comercializadas). La inactivación del gen rhcJ de HH103, que pertenece a la agrupación génica tts (secreción de tipo III), anuló la secreción de Nops y redujo la capacidad simbiótica de esta bacteria con las dos variedades de soja. Las cepas HH103 y USDA257 de S. fredii, que sólo nodula sojas asiáticas, mostraron perfiles SDS-PAGE diferentes de Nop, lo cual sugiere que estas cepas podrían secretar distintos conjuntos de Nops. Cuando las cepas USDA257 y HH103 fueron inoculadas conjuntamente, la capacidad de nodulación de esta última cepa con el cultivar americano Williams de soja se redujo significativamente. Estos resultados indican que las Nops secretadas por S. fredii pueden actuar como factores simbióticos tanto positivos como negativos dependiendo de la cepa-cultivar rizobiana. Se detectaron también diferencias entre la expresión mediada por flavonoides del gen rhcJ y del nodA. Además, una de las Nops secretadas por la cepa HH103 fue identificada como NopA (AU)

Prevalencia de los genes tetA y tetB como mecanismo de resistencia a tetraciclina y minociclina en aislamientos clínicos de Acinetobacter baumannii / Prevalence of the tetA and tetB genes as mechanisms of resistance to tetracycline and minocycline in Acinetobacter baumannii clinical isolates

Doscientas veintiuna cepas clínicas de Acinetobacter baumannii fueron recogidas de 25 hospitales en España. El objetivo de estudiar este grupo de cepas era ver el predominio de los genes tetA y tetB en una colección de cepas de A. baumannii no relacionadas epidemiológicamente. Métodos. Las cepas fueron distribuidas en 79 clones por análisis del ADN cromosómico mediante digestión con SmaI y electroforesis de campo pulsado. La concentración inhibitoria mínima (CIM) a tetraciclina y minociclina se determinó por E-test. Una cepa en representación de cada clon resistente a tetraciclina fue estudiada mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con cebadores específicos para tetA y tetB. Resultados. Cincuenta y nueve (74,7%) de los 79 clones eran resistentes a tetraciclina (CIM≥16 mg/l), 40 de los cuales (50,6% del total) eran resistentes además a minociclina (CIM > 1 mg/l). Se tomó una cepa en representación de cada clon resistente a tetraciclina para estudiar la prevalencia de los genes tetA y tetB. El análisis por PCR de las cepas dio como resultado que un total de 39 cepas representativas de otros tantos clones (66%) poseían el gen tetB, mientras que sólo ocho (13,6%) fueron positivos para el gen tetA. Doce cepas no tenían ninguno de estos dos genes. Ninguna de las cepas analizadas presentaba ambos genes. Conclusión. Aunque la resistencia a tetraciclina es superior a minociclina en aislamientos clínicos de A. baumannii, el gen tetB que afecta ambos agentes antimicrobianos es más prevalente que el gen tetA que sólo afectaa tetraciclina (AU)

Two hundred twenty-one Acinetobacte baumannii clinical strains were collected from 25 hospitals in Spain. The aim of this study was to analyze the prevalence of the tetA and tetB genes in a collection of A. baumannii strains that were not epidemiologically related. METHODS. The strains were distributed in 79 clones by genomic DNA analysis with low frequency restriction enzymes and pulsed-field gel electrophoresis. The MICs for tetracycline and minocycline were determined by the E-test. One strain representing each of the tetracycline-resistant clones was analyzed by polymerase chain reaction (PCR) with specific primers for the tetA and tetB genes. RESULTS. Fifty-nine (74.7%) out of the 79 clones were tetracycline-resistant (MIC ≥ 16 mg/l) and 40 (50.6% of the total) were also minocycline-resistant (MIC > 1 mg/l). One strain representative of each tetracycline-resistant clone was taken to study the prevalence of the tetA and tetB (..) (AU)

Resistencia enzimática a betalactámicos en el género Proteus y evaluación de los fenotipos y genotipos de resistencia a cefalosporinas de tercera y cuarta generación en Proteus mirabilis / Enzymatic resistance to betalactam antibiotics within the genus Proteus and evaluation of third and fourth generation cephalosporins resistance phenotypes and genotypes within Proteus mirabilis

INTRODUCCIÓN. El objetivo de este trabajo fue evaluar la resistencia a betalactámicos en el género Proteusy caracterizar las betalactamasas responsables de dicha resistencia. MÉTODOS. Se analizaron 99 cepas (87 P. mirabilis;10 P. vulgaris, y 2, P. penneri) aisladas de pacientes atendidos en un Hospital Universitario. Los ensayos de susceptibilidad a antibióticos se realizaron de acuerdo con las recomendaciones del National Committee for Clinical Laboratory Standards. La presencia de betalactamasas de espectro extendido (BLEE)fue inferida por el método de difusión de doble disco y por la concentración inhibitoria mínima (CIM) de cefalosporinas de tercera y cuarta generación solas y en presencia de ácido clavulánico. Se estimó el punto isoeléctrico (pI) por isoelectro-enfoque y la presencia de los genes codificantes se confirmó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR).RESULTADOS. Una betalactamasa de amplio espectro fue detectada en aquellos aislamientos resistentes apenicilinas y cefalosporinas de primera generación (28%),mientras que la enzima CTX-M-2 fue detectada en los aislamientos de P. mirabilis resistentes a cefalosporinas de tercera y cuarta generación (18%). Uno de los P. vulgaris presentó sensibilidad disminuida a cefotaxima debido a una enzima de pI 7,4, mientras que la resistencia a cefotaxima en un P. penneri fue relacionada con una enzima de pI 6,8. Ambas enzimas fueron activas sobre cefotaxima (1.000 mg/l) en el ensayo iodométrico. CONCLUSIÓN. La betalactamasa de amplio espectro en el género Proteus fue TEM-1 mientras queCTX-M-2 fue la BLEE responsable de la resistencia a cefalosporinas de tercera y cuarta generación en P. mirabilis. En P. vulgaris y P. penneri esta resistencia se asoció a la hiperproducción de la betalactamasa cromosómica (AU)

INTRODUCTION. The aim of this study was to evaluate betalactam resistance within the genus Proteus and characterize the betalactamases responsible for this resistance. METHODS. We analyzed 99 strains (87, P. mirabilis;10 P. vulgaris, and 2, P. penneri) isolated from patients at one University Hospital. Antibiotic susceptibility tests were performed according to NCCLS recommendations. Presence of extended spectrum betalactamases (ESBL)was inferred by both double disk diffusion tests andminimum inhibitory concentration (MIC) of third and fourth generation cephalosporins alone and in the presence of clavulanic acid. Isoelectric points (pI)of the enzymes were estimated by isoelectrofocusing and the presence of the encoding genes was confirmed by polymerase chain reaction (PCR).RESULTS. A broad spectrum betalactamase could be detected in those isolates (28%) resistant to penicillin and first generation cephalosporins while CTX-M-2 enzyme could be detected in P. mirabilis isolates resistant to third and fourth generation cephalosporins (18%). One of the P. vulgaris displayed reduced susceptibility to cefotaxime due to an enzyme of pI 7.4, while resistance to cefotaximein one P. penneri was related to an enzyme of pI 6.8. Both enzymes were active on cefotaxime (1,000 mg/l)in the iodometric assay. CONCLUSION. The broad extended spectrum betalactamase with in genus Proteus was TEM-1, while CTX-M-2 was the ESBL responsible for the third and fourth generation cephalosporins in P. mirabilis. In P. vulgarisand P. penneri this resistance was associated with the hyperproduction of the chromosomal encoded betalactamase (AU)

Mecanismos de resistencia a quinolonas mediada por plásmidos / Mechanisms of plasmid-mediated resistance to quinolones

La resistencia a quinolonas en bacterias gramnegativas está causada fundamentalmente por mutaciones cromosómicas. En 1998 se describió en cepas clínicas de Klebsiella pneumoniae la existencia de un plásmido conjugativo que confiere resistencia a quinolonas. El locus responsable de la resistencia a quinolonas en este plásmido se designó qnr (quinolone resistance). Se ha propuesto que la función de la proteína que expresa estelocus sea proteger tanto la ADN-girasa como la topoisomerasa IV de la acción de las quinolonas. Además, qnr se ha localizado formando parte de una estructura de tipo integrón aguas arriba de los genes qacEDelta1 y sulI, sugiriendo la posibilidad de su presencia en integronesde clase 1. En este trabajo se lleva a cabo una revisión de la información obtenida en los últimos años sobre este mecanismo de resistencia (AU)

Quinolone resistance is caused mainly by chromosomal mutations in gram negative bacteria. In 1998,plasmid-mediated resistance to quinolones in clinical isolates was first reported in a Klebsiella pneumoniae strain. Locus qnr (quinolone resistance) was responsible of the quinolone resistance in this plasmid. qnr codes a protein whose function is protect both DNA-girase and topoisomerase IV from these antimicrobials. Moreover, qnr is located in an integron-like structure up streamof qacEDelta1 y sul1. A review of the information obtained in the last years about this mechanism of resistance was performed (AU)

Identificación bacteriana mediante secuenciación del ARNr 16S: fundamento, metodología y aplicaciones en microbiología clínica / Identification of bacteria through 16S rRNA sequencing: Principles, methods and applications in clinical microbiology

La comparación de las secuencias de los ARNr 16S (o de los genes que los codifican) permite establecer las relaciones filogenéticas existentes entre los organismos procariotas. Este hecho ha tenido una enorme repercusión en taxonomía bacteriana, dando lugar al sistema de clasificación vigente y permitiendo la identificación rápida y precisa de las bacterias. En microbiología clínica la identificación molecular basada en el ADNr 16S se utiliza fundamentalmente para bacterias cuya identificación mediante otro tipo de técnicas resulta imposible, difícil o requiere mucho tiempo. La amplificación del gen, para su posterior secuenciación, parte preferentemente de ADN extraído de un cultivo puro de la bacteria, pero también puede conseguirse directamente de una muestra clínica. Esto último ha conducido al descubrimiento de nuevos agentes patógenos. Teniendo en cuenta su potencialidad, a medida que los recursos técnicos aumenten y el precio se haga más competitivo, la identificación bacteriana basada en el ADNr 16S encontrará probablemente una aplicación más amplia en el laboratorio de microbiología clínica (AU)

Multiplex PCR for simultaneous detection of enterococcal genes vanA and vanB and staphylococcal genes mecA, ileS-2 and femB / PCR multiplex para la detección simultánea de los genes vanA y vanB de enterococos y mecA, ileS-2 y femB de estafilococos

The experimental transfer of the vanA gene cluster from Enterococcus faecalis to Staphylococcus aureus has raised fears about the occurrence of such genetic transfer in clinical isolates of methicillin-resistant staphylococci. Recently, infections by a S. aureus strain carrying the enterococcal vancomycin resistance vanA gene cluster were reported. The possible emergence and dissemination of these strains is a serious health threat and makes optimization of prevention strategies and fast detection methods absolutely necessary. In the present study, we developed a PCR protocol for simultaneous detection of enterococcal vanA and vanB genes, the staphylococcal methicillin and mupirocin resistance markers mecA and ileS-2, and identification of S. aureus. As no vancomycin-resistant S. aureus isolates were available for our study, we used mixtures of enterococcal and staphylococcal colonies that harbored the different resistance markers to show that these genes could be detected simultaneously. This protocol could be used to facilitate the detection and identification of predictable S. aureus or methicillin-resistant strains carrying vanA or vanB (AU)

La transferencia experimental del cluster de genes vanA de Enterococcus faecalis a Staphylococcus aureus hace sospechar que esta transferencia genética se pueda dar en muestras clínicas de estafilococos resistentes a la meticilina. Recientemente se han descrito las primeras infecciones por una cepa de S. aureus portadora del cluster de genes enterococales vanA. La posible emergencia y diseminación de estas cepas es una seria amenaza a la salud, y obliga a optimizar las estrategias de prevención y los métodos rápidos de detección. En este estudio, desarrollamos un protocolo de PCR para la detección simultánea de los genes enterococales vanA y vanB, los marcadores estafilococales de resistencia a la meticilina y a la mupirocina mecA y ileS-2, y para la identificación de S. aureus. Al no disponer de cepas de S. aureus resistentes a la vancomicina para nuestro estudio, usamos mezclas de colonias de enterococos y estafilococos que contenían los diferentes marcadores de resistencia para mostrar que estos genes pueden ser detectados simultáneamente. Este protocolo podría usarse para facilitar la detección e identificación de posibles cepas de S. aureus o de otras también resistenten a la meticilina portadoras de los genes vanA o vanB. (AU)

Evidence of an association between poly(3-hydroxybutyrate) accumulation and phosphotransbutyrylase expression in Bacillus megaterium / Evidencia de la asociación entre la acumulación de poly(3-hidroxibutirato) y la expresión de fosfotransbutirilasa en Bacillus megaterium

Molecular analysis of a genomic region of Bacillus megaterium, a polyhydroxybutyrate (PHB)-producing microorganism, revealed the presence of a gene coding for the enzyme phosphotransbutyrylase (Ptb). Enzyme activity was measured throughout the different growth phases of B. megaterium and was found to correlate with PHB accumulation during the late-exponential growth phase. Ptb expression was repressed by glucose and activated by the branched amino acids isoleucine and valine. Overexpression of Act(Bm), a sigma(54) regulator from B. megaterium whose gene is located upstream from ptb, caused an increase in Ptb activity and PHB accumulation in B. megaterium (AU)

El análisis molecular de una región del genoma de Bacillus megaterium, un microorganismo productor de polihidroxibutirato (PHB), reveló la presencia de un gen que codifica la enzima fosfotransbutirilasa (Ptb). La actividad enzimática se midió durante las diferentes fases de crecimiento de B. megaterium y se vio que su actividad estaba asociada a la acumulación de PHB al final de la fase de crecimiento exponencial. La glucosa inhibía la expresión de Ptb, mientras que los aminoácidos ramificados isoleucina y valina la activaban. La sobreexpresión de ActBm, un regulador sigma 54 de B. megaterium cuyo gen se encuentra en dirección 5’ a partir del gen ptb, hacía aumentar la actividad de Ptb y la acumulación de PHB en B. megaterium (AU)

Neumococo y resistencia a quinolonas / Pneumococcus and quinolone resistance

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Guía para el fisiologo microbiano al genoma de la lepra

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¿Qué hay de nuevo en la resistencia bacteriana a los antimicrobianos? / What's new in bacterial resistance to antimicrobials?

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Selección de bacterias resistentes a los antibióticos: factores microbiológicos y farmacológicos / Selection of antibiotic-resistant bacteria: microbiological and pharmacological factors

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Diferencias geográficas y papel del gen cagA en las enfermedades gastroduodenales asociadas a la infección por helicobacter pylori / Geographic differences and the role of cagA gene in gastroduodenal di s eases associated with Helicobacter pylori infection

Helicobacter pylori es el principal agente causante de gastritis, úlcera péptica y cáncer gástrico. Numerosos genes de la bacteria parecen estar involucrados en el mecanismo de patogenicidad. Uno de ellos, el gen c a g A, ha sido extensamente estudiado y caracterizado. En este artículo realizamos una revisión actualizada de las características y la variabilidad genética del gen c a g A en diferentes regiones del mundo. Además, resumimos los diversos estudios que valoran la posible relación de c a g A con las enfermedades gastroduodenales asociadas a la infección por H .p y l o r i. En nuestra revisión encontramos que la presencia del gen c a g A ha sido confirmada en más del 60 por ciento de las cepas de H. pylori distribuidas alrededor del mundo. La prevalencia media del genotipo c a g A es del 65,4 por ciento en los pacientes con gastritis, del 84,2 por ciento en los pacientes con úlcera péptica y del 86,5 por ciento en aquéllos con cáncer gástrico. Se demuestra una elevada variabilidad genética de c a g A asociada a las enfermedades gastroduodenales, que podría servir como marcador de virulencia en los pacientes. Sin embargo, la alta prevalencia de cepas c a g A positivas en algunas regiones geográficas no permite confirmar la estrecha asociación entre este marcador y la virulencia de las cepas que ha sido descrita en otros países. Actualmente, el gen c a g A sólo se considera un marcador de la presencia de la isla de patogenicidad c a g (cag-PAI) en el genoma de H. pylori. Esta región contiene diversos genes involucrados en la producción de citocinas y la consiguiente inflamación de la mucosa gástrica del huésped, pero su función exacta no es conocida. Probablemente, otros factores dependientes de la bacteria, así como la susceptibilidad del huésped y diversos cofactores ambientales, influyan también en el riesgo de desarrollar las diferentes enfermedades gastroduodenales asociadas a la infección por H. pylori (AU)