Blood parasites (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) infecting birds in the Brazilian Amazon / Parásitos sanguíneos (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) que infectan aves en la Amazonía brasileña

Abstract Introduction: Trypanosomes are hemoparasites that can be observed circulating in the peripheral blood of birds. Parasitological studies in birds in their natural environment are neglected, but are important for research relating to transmission, maintenance of the biological cycle, and abundance, among other parasitological aspects. Objective: To describe infections by Trypanosoma sp. in birds in the Brazilian Amazon, as well as the prevalence, morphological and morphometric characteristics of this hemoparasite. Methods: In the Tapajós National Forest, we captured a total of 125 birds, mostly from the order Passeriformes. We obtained blood samples from the ulnar vein using sterile insulin needles, and aliquots of blood using a microhematocrit capillary tube. We made blood smears in triplicate and stained with the Giemsa method. We viewd the morphotypes of the Trypanosoma sp. under the light microscope with objective lenses of 40 X and 100 X. To determine the morphometric characteristics of Trypanosomatidae, we used the Zen Blue Edition 2 software package. Results: We observed the presence of hemoparasites in the trypomastigote form in specimens of Thamnophilidae, Dendrocolaptidae and Conopophagidae, with low prevalence. Only one morphotype of Trypanosoma sp. was detected and measurement. Conclusions: We report the infection by Trypanosoma sp. in species of ecological importance, such as Phlegopsis nigromaculata, endangered in Brazil. The morphology and morphometry of the morphotype found could contribute to more detailed descriptions of these hemoparasites.

Resumen Introducción: Los tripanosomas son hemoparásitos que pueden observarse circulando en la sangre periférica de las aves. Los estudios parasitológicos en aves en el medio natural son escasos, pero son importantes para la investigación relacionada con la transmisión, el mantenimiento del ciclo biológico y la abundancia, entre otros aspectos parasitológicos. Objetivo: Describir infecciones por Trypanosoma sp. en aves de la Amazonia brasileña, así como la prevalencia, características morfológicas y morfométricas de este hemoparásito. Métodos: En la Floresta Nacional de Tapajós, capturamos un total de 125 aves, la mayoría del orden Passeriformes. Obtuvimos muestras de sangre por punción de la vena cubital del ala con agujas estériles de insulina. Con un tubo capilar microhematocrito, obtuvimos alícuotas de sangre. Realizamos frotis de sangre por triplicado y teñimos con el método de Giemsa. Visualizamos los morfotipos de Trypanosoma sp. al microscopio óptico con lentes objetivos de 40 X y 100 X. Para determinar las características morfométricas de Trypanosomatidae, usamos el paquete informático Zen Blue Edition 2. Resultados: Observamos la presencia de hemoparásitos en la forma tripomastigote en ejemplares de la familia de aves Thamnophilidae, Dendrocolaptidae y Conopophagidae, con baja prevalencia. Solo detectamos un morfotipo de Trypanosoma sp. Conclusión: Reportamos la infección por Trypanosoma sp. en especies de importancia ecológica, como Phlegopsis nigromaculata en peligro de extinción en Brasil. La morfología y morfometría del morfotipo encontrado puede contribuir con descripciones más detalladas de estos hemoparásitos.

Analysing ambiguities in trypanosomatids taxonomy by barcoding

BACKGROUND Biodiversity screens and phylogenetic studies are dependent on reliable DNA sequences in public databases. Biological collections possess vouchered specimens with a traceable history. Therefore, DNA sequencing of samples available at institutional collections can greatly contribute to taxonomy, and studies on evolution and biodiversity. METHODS We sequenced part of the glycosomal glyceraldehyde phosphate dehydrogenase (gGAPDH) and the SSU rRNA (V7/V8) genes from 102 trypanosomatid cultures, which are available on request at www.colprot.fiocruz.br. OBJECTIVE The main objective of this work was to use phylogenetic inferences, using the obtained DNA sequences and those from representatives of all Trypanosomatidae genera, to generate phylogenetic trees that can simplify new isolates screenings. FINDINGS A DNA sequence is provided for the first time for several isolates, the phylogenetic analysis allowed the classification or reclassification of several specimens, identification of candidates for new genera and species, as well as the taxonomic validation of several deposits. MAIN CONCLUSIONS This survey aimed at presenting a list of validated species and their associated DNA sequences combined with a short historical overview of each isolate, which can support taxonomic and biodiversity research and promote culture collections.

Análise filogenética da subfamília leishmaniinae e identificação taxonômica de isolados de lepidoptera pertencentes a família trypanosomatidae / Phylogenetic analysis of the leishmaniinae subfamily and taxonomic identification of lepidoptera isolates belonging to the trypanosomatidae family

A Classe Kinetoplastea abrange a ordem Trypanosomatida que apresenta uma única família: Trypanosomatidae. Os representantes dessa família possuem como apomorfia o cinetoplasto, DNA mitocondrial único e altamente compactado, e um único flagelo. A classificação taxonômica desses tripanossomatídeos fundamentada unicamente em caracteres morfológicos e nos seus ciclos de vida não reflete a diversidade genética e as relações evolutivas do grupo. Atualmente, as abordagens moleculares são rotineiramente empregadas para estudos filogenéticos e taxonômicos. Neste trabalho, realizamos uma revisão das relações filogenéticas entre os gêneros da subfamília Leishmaniinae para espécies selecionadas do gênero Leishmania, Paraleishmania e Endotrypanum (nomem dubium), além de analisar novos isolados oriundos de projetos de prospecção de biodiversidade da Coleção de Protozoários da Fiocruz (COLPROT) visando avaliar a ocorrência de tripanossomatídeos na ordem Lepidoptera. Para isto, foram sequenciados e analisados dois genes gGAPDH e 18S que possuem uma base de dados ampla disponível no Genbank e são difundidos como ferramenta taxonômica de tripanossomatídeos, embora sejam pouco explorados para resolver questões taxonômicas do gênero Leishmania. As análises corroboram com a proposição de criação de duas infrafamílias na subfamília Leishmaniinae. Na infrafamília Leishmaniatae, a análise concatenada das sequências dos genes demonstrou que esses genes não possuem boa resolução para identificar espécies do gênero Leishmania, mas permite a classificação em complexos e subgêneros

Também foi definida a sinonímia de uma cepa de Leishmania forattinii em Herpetomonas samuelpessoai. As análises também mostram que os gêneros Paraleishmania, Endotrypanum (nomen dubium) e Leishmania são filogeneticamente próximos entre si. Na infrafamília Crithidiatae, as análises mostram proximidades filogenéticas entre espécies de Crithidia e Leptomonas. Além disso, foi realizada a identificação taxonômica de 33 isolados de tripanosomatídeos obtidos de insetos da ordem Lepidoptera, sendo possível constatar três espécies já descritas na literatura: C. mellificae, C. thermophila e C. insperata; isolados representantes de seis OTUs possíveis candidatas a: i) novas espécies do gênero Crithidia (Crithidia sp1; Crithidia sp2; Crithidia sp3; Crithidia sp4); ii) uma nova espécie do gênero Strigomonas (Strigomonas sp.) e iii) um possível novo gênero (Trypanosomatidae sp.). Os resultados aqui apresentados indicam a necessidade da integração dos dados obtidos por análises moleculares com critérios bioquímicos, morfológicos e de interação parasito-hospedeiro para compreender melhor a filogenia e evolução da subfamília Leishmaniinae, assim como o aprofundamento da biodiversidade do grupo. (AU)

Actividad in vitro anti-Leishmania (Trypanosomatidae) del epóxido trans-Z-&-bisaboleno y del Safrol, en frutos de Piper auritum (Piperaceae) / Anti-Leishmania (Trypanosomatidae) activity of trans-Z-&-bisabolene epoxide and isolation of safrole, in fruits of Piper auritum (Piperaceae)

Resumen La leishmaniasis es una enfermedad con una alta incidencia en el ser humano, que puede ser controlada, pero como los tratamientos tienen efectos secundarios importantes se han realizado estudios de diversas plantas con el fin de encontrar compuestos con actividad antileishmaniásica que presenten pocos efectos nocivos para el ser humano. El presente estudio consistió en realizar un tamizaje fitoquímico de la planta, para identificar la presencia de cumarinas, terpenos, triterpenos y azúcares reductores. El objetivo fue encontrar componentes químicos puros con actividad contra el parásito Leishmania sp. Por tal razón se purificaron los compuestos: trans-Z-alfabisaboleno y el Safrol, a los que se les realizaron pruebas del efecto anti parasitario que presentaron un CI50 de 50.0 µg/mL y 0.0 µg/mL, respectivamente. Además, se discute la importancia de estos nuevos hallazgos. El compuesto mayoritario presente en los aceites esenciales (Safrol) no es el componente que presentó la actividad. Es importante realizar estudios sobre su proyección en el tratamiento de la leishmaniasis.

Abstract The leishmaniosis disease incidence is high in tropical regions, and its current treatment has shown severe secondary effects. Considering this problem, many studies have focused on plants, looking for chemical components that have anti-leishmanial activity, and are free of adverse effects for human beings. The purpose of this work was to find a chemical component with this kind of activity in Piper auritum. In a phytochemical screening of this plant, we found some cumarins, terpens, triterpens and reducing sugars; and later, we identified the components trans-Z-α-bisabolene epoxide and Safrol. The first component presented a CI50 of 50.0 µg/mL of anti-Leishmania activity. The Safrol, which is the major component of the essential oils of this plant, did not show antiparasitic activity. These results are discussed considering treatment of leishmaniasis. Rev. Biol. Trop. 66(2): 826-835. Epub 2018 June 01.

Trypanosoma janseni n. sp. (Trypanosomatida: Trypanosomatidae) isolated from Didelphis aurita (Mammalia: Didelphidae) in the Atlantic Rainforest of Rio de Janeiro, Brazil: integrative taxonomy and phylogeography within the Trypanosoma cruzi clade

BACKGROUND Didelphis spp. are a South American marsupial species that are among the most ancient hosts for the Trypanosoma spp. OBJECTIVES We characterise a new species (Trypanosoma janseni n. sp.) isolated from the spleen and liver tissues of Didelphis aurita in the Atlantic Rainforest of Rio de Janeiro, Brazil. METHODS The parasites were isolated and a growth curve was performed in NNN and Schneider's media containing 10% foetal bovine serum. Parasite morphology was evaluated via light microscopy on Giemsa-stained culture smears, as well as scanning and transmission electron microscopy. Molecular taxonomy was based on a partial region (737-bp) of the small subunit (18S) ribosomal RNA gene and 708 bp of the nuclear marker, glycosomal glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gGAPDH) genes. Maximum likelihood and Bayesian inference methods were used to perform a species coalescent analysis and to generate individual and concatenated gene trees. Divergence times among species that belong to the T. cruzi clade were also inferred. FINDINGS In vitro growth curves demonstrated a very short log phase, achieving a maximum growth rate at day 3 followed by a sharp decline. Only epimastigote forms were observed under light and scanning microscopy. Transmission electron microscopy analysis showed structures typical to Trypanosoma spp., except one structure that presented as single-membraned, usually grouped in stacks of three or four. Phylogeography analyses confirmed the distinct species status of T. janseni n. sp. within the T. cruzi clade. Trypanosoma janseni n. sp. clusters with T. wauwau in a well-supported clade, which is exclusive and monophyletic. The separation of the South American T. wauwau + T. janseni coincides with the separation of the Southern Super Continent. CONCLUSIONS This clade is a sister group of the trypanosomes found in Australian marsupials and its discovery sheds light on the initial diversification process based on what we currently know about the T. cruzi clade.

Aplicação de planejamento baseado na estrutura do receptor na busca de inibidores de cisteíno-proteases parasitárias (cruzaína (T. cruzi) e PCB (Leishmanioses) / Structure-based virtual screening in the search of parasitic cysteine-proteases inhibitors

Doenças causadas por agentes infecciosos e parasitários são chamadas negligenciadas por não despertarem interesse das indústrias farmacêuticas para o desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas. Essas doenças são responsáveis por levar milhões de pessoas à morte todos os anos e afetam principalmente os países pobres e em desenvolvimento. Dentre estas, a doença de Chagas e as leishmanioses, parasitoses causadas por parasitas flagelados pertencentes à família Trypanosomatidae, T. cruzi e Leishmaina sp., respectivamente, se apresentam como um sério problema de saúde pública mundial. Endêmicas em vários países e causando milhões de mortes anualmente, ainda hoje não existem fármacos eficientes e seguros para o tratamento dessas doenças. Este panorama torna eminente a necessidade de pesquisa e desenvolvimento de novos fármacos para essas parasitoses. A busca por agentes quimioterápicos envolve a seleção de vias metabólicas essenciais à sobrevivência dos parasitas. Dentre estas, destacamse cisteíno-proteases presentes nesses tripanossomatídeos, deste modo a cruzaína no T. cruzi, e a CPB2.8 na Leishmania mexicana, se mostram como alvos bioquímicos promissores. A disponibilidade de estruturas cristalográficas da cruzaína e do sequenciamento genômico da CPB2.8, nos permite utilizar estratégias de planejamento de fármacos baseado no receptor (SBDD) na identificação de candidatos a fármacos para essas doenças. Entre as técnicas modernas de SBDD utilizadas, a triagem virtual possibilita identificar promissores candidatos a novos fármacos. Assim neste trabalho, obteve-se por meio da técnica de modelagem comparativa o modelo da enzima CPB2.8 de L. mexicana, visto a indisponibilidade da estrutura cristalográfica no Protein Data Bank (PDB). De modo a refinar o modelo construído realizou-se a simulação por dinâmica molecular de 100ns, apresentando estabilização a partir de 80ns. A simulação por dinâmica molecular foi validada por meio do gráfico de Ramachandran, gráfico de raio de giro, RMSD, gráfico de superfície hidrofóbica. Foram calculados os mapas de interação molecular no programa GRID das seguintes proteínas: cruzaína, CPB2.8, catepsina B e catepsina L, e, posteriormente, foi construído um modelo farmacofórico baseado no sítio ativo das enzimas cruzaína e CPB2.8. O modelo farmacofórico da cruzaína foi validado por curva ROC apresentando valor de AUC 61%. A triagem virtual foi realizada para ambas as proteínas e foram obtidos 369 compostos para a cuzaína e 225 compostos para a CPB2.8. Foi realizado o ancoramento molecular desses compostos obtidos pela triagem virtual a fim de diminuir a quantidade de compostos a serem avaliados experimentalmente

Neglected diseases are caused by parasites and infectious agents and affect mainly people in poor areas being prevalent in 149 countries and causing 534,000 deaths per year. Among neglected diseases we can highlight Chagas Disease and Leishmaniasis, both have a high rate of morbidity and mortality and both are addressed in this project in the search of new drugs against a NTD. Nowadays, the search for new drugs involves the selection of biological pathways essential for parasite survival, in this class of parasites we can suggest the cysteine proteases, a proteases family present in Trypanosoma cruzi and and Leishmania ssp. In order to obtain a new agent against Neglected Disease in this work was obtained the model of the enzyme CPB2.8 of L. mexicana using the comparative modeling technique, due to the unavailability of the crystallographic structure in the Protein Data Bank (PDB). In order to refine the constructed model was performed the molecular dynamics simulation of 100ns, stabilization was achieved from 80ns. Molecular dynamics simulation was validated using the Ramachandran graph, radius of rotation graph, RMSD, hydrophobic surface area graph. The molecular interaction fields were calculated in the GRID program to cruzain, CPB2.8, cathepsin B and cathepsin L. Based on molecular interaction fields generated pharmacophoric models were constructed using information about the active site of the enzymes cruzain and CPB2.8. The pharmacophoric model of cruzain was validated by ROC curve presenting AUC value of 61%. Virtual screening was performed for both proteins and 369 compounds were obtained for cuzain and 225 compounds for CPB2.8. Docking studies of these compounds was performed in order to decrease the amount of compounds to be evaluated experimentally

RNA viruses in trypanosomatid parasites: a historical overview

Viruses of trypanosomatids are now being extensively studied because of their diversity and the roles they play in flagellates' biology. Among the most prominent examples are leishmaniaviruses implicated in pathogenesis of Leishmania parasites. Here, we present a historical overview of this field, starting with early reports of virus-like particles on electron microphotographs, and culminating in detailed molecular descriptions of viruses obtained using modern next generation sequencing-based techniques. Because of their diversity, different life cycle strategies and host specificity, we believe that trypanosomatids are a fertile ground for further explorations to better understand viral evolution, routes of transitions, and molecular mechanisms of adaptation to different hosts.

Symbiont modulates expression of specific gene categories in Angomonas deanei

Trypanosomatids are parasites that cause disease in humans, animals, and plants. Most are non-pathogenic and some harbor a symbiotic bacterium. Endosymbiosis is part of the evolutionary process of vital cell functions such as respiration and photosynthesis. Angomonas deanei is an example of a symbiont-containing trypanosomatid. In this paper, we sought to investigate how symbionts influence host cells by characterising and comparing the transcriptomes of the symbiont-containing A. deanei (wild type) and the symbiont-free aposymbiotic strains. The comparison revealed that the presence of the symbiont modulates several differentially expressed genes. Empirical analysis of differential gene expression showed that 216 of the 7625 modulated genes were significantly changed. Finally, gene set enrichment analysis revealed that the largest categories of genes that downregulated in the absence of the symbiont were those involved in oxidation-reduction process, ATP hydrolysis coupled proton transport and glycolysis. In contrast, among the upregulated gene categories were those involved in proteolysis, microtubule-based movement, and cellular metabolic process. Our results provide valuable information for dissecting the mechanism of endosymbiosis in A. deanei.

Diagnóstico paleoparasitológico de protozoários do gêneroLeishmania Ross, 1903 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae)em material arqueológico da América do Sul / Parasitological diagnosis paleo protozoa of the genus Leishmania Ross, 1903 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) in archaeological material from South America

Espécies do gênero Leishmania (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) são agentescausadores de leishmanioses, que representam um complexo de doenças com variado espectroclínico e diversidade epidemiológica que, em alguns países, constituem-se em grave problema de saúde pública. A origem e evolução das leishmanioses têm estado em debate em seus aspectos clínicos e parasitológicos. Com a introdução da paleoparasitologia baseada na aplicação de diferentes técnicas, tornou-se possível a recuperação de vestígios do parasito,assim como o diagnóstico de infecções em humanos e em outros hospedeiros no passado. Os objetivos desta pesquisa foram diagnosticar parasitos do gênero Leishmania spp., em materiais arqueológicos da América do Sul por meio de técnicas moleculares e imunológicas. Estes são os primeiros registros de recuperação de DNA de Leishmania sp. em material arqueológico do Brasil, assim como também o primeiro registro deL. tarentolae em material antigo. Dois pares de primers que amplificam outras regiões de L. tarentolae foram desenhados para o estudo no intuito de averiguar se outros trechos de DNA desta espécie também teriam se preservado no material, tendo os mesmos não amplificado.Duas explicações são possíveis: devido a natureza fragmentada do DNA antigo o mesmo não se conservou de maneira homogenia no material, ou pode se tratar de um infectron, o que também é um dado relevante pois é uma assinatura da relação estabelecida entre parasito e hospedeiro...

Species of the genus Leishmania (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) are causativeagents of leishmaniasis, which represents a complex disease with varied clinical spectrum and epidemiological diversity that, in some countries, constitute a serious public health problem. The origin and evolution of leishmaniasis has been under discussion in clinical and parasitological aspects. By the introduction of paleoparasitology based on the application of different techniques, as well as the diagnosis of infections in humans and other hosts in the past. Theaims of this research were: diagnosis by molecular PCR technique parasites of the genus Leishmaniain archaeological materials of South America, with the comparison of the sequences obtained from the GenBank for both recent and archaeological material, diagnosis through serological techniques: rapid test DPP and Western Blot, anti-Leishmania antibodies in the samples submitted to PCR, with subsequent comparison of these serological techniques with the previous lyused molecular technique and thus contribute to the knowledge of paleoparasitology of leishmaniasis, giving contributing to studies on the origin and evolution of Leishmania genus...

Colaboração para o conhecimento do histórico da Leishmaniose Tegumentar Americana no Brasil: possíveis casos entre escravos na Vila de Vassouras - RJ, nos anos 1820 a 1880 / Contribution to the knowledge of the history of American Cutaneous Leishmaniasis in Brazil, possible cases in slaves at Vila de Vassouras, Rio de Janeiro, Brazil, between 1820 and 1880

No Brasil, a leishmaniose tegumentar americana (LTA) só foi confirmada em 1909 por Lindemberg, que encontrou seus parasitos em lesões cutâneas de indivíduos que trabalhavam nas matas do interior do estado de São Paulo e os assemelhou à Leishmania tropica, variação encontrada no Velho Mundo. Gaspar Vianna, por considerar o parasito diferente da L. tropica, batizou-o de L. braziliensis, ficando assim denominado o agente etiológico da LTA. Apesar de sua importância no cenário mundial, avolumam-se ainda dúvidas acerca de sua origem e dispersão. O presente trabalho objetiva demonstrar a possibilidade de existência da LTA na cidade de Vassouras-RJ no início do século XIX, período anterior ao considerado como o marco da chegada da doença ao sudeste brasileiro. O presente trabalho baseou-se na análise de inventários post-mortem alocados no Centro de Documentação Histórica desta cidade.

In Brazil, American cutaneous leishmaniasis (ACL) was only confirmed in 1909 by Lindemberg, who found parasites in cutaneous lesions of people working in the countryside of São Paulo state that resembled Leishmania tropica, a variety that affects the Old World. Gaspar Vianna, considered it as a different parasite to L. tropica and christened it Leishmania braziliensis, thus determining the etiological agent of ACL. Despite its importance on the world, there are still questions about its origin and spread. This paper aims to demonstrate the possibility of the existence of ACL in the town of Vassouras RJ- in the early XIX century, a period prior to that considered as the arrival of the disease in southeastern Brazil. The work was performed by analysis of postmortem inventories held at the Historical Documentation Center in this city.

Atividade biológica do extrato hidroalcoólico de Bauhinia forficata Link sobre Herpetomonas samuelpessoai (Galvão. ) Roitman / Biologic activity of the hydroalcoholic extract of Bauhinia forficata Link on Herpetomonas samuelpessoai (Galvão. ) Roitman

Inúmeros esforços têm sido dirigidos para conferir às plantas seu real papel e valor na terapia. Este estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana, mutagênica, toxicidade, e os efeitos no crescimento e diferenciação de Herpetomonas samuelpessoai, do extrato hidroalcoólico de Bauhinia forficata. Para avaliar a atividade antimicrobiana foi realizado o teste de difusão em ágar, bem como a determinação das concentrações inibitória (CIM) e microbicida mínimas (CMM). O potencial clastogênico e/ou aneugênico, in vivo, foi avaliado usando o teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos Swiss albinus. Foi determinada também a dose letal média (DL50). O extrato inibiu o crescimento de oito bactérias, mostrando-se mais ativo para Gram-positivas e não foi eficiente para os fungos, tendo sido ativo nas concentrações de 2000, 1000, 500 e 250 mg/mL contra os microrganismos testados. Os resultados mostraram que nas concentrações administradas (500, 1000 e 2000 mg/Kg), não houve aumento estatisticamente significativo de micronúcleos. Não houve ação no crescimento e diferenciação de Herpetomonas samuelpessoai nas concentrações testadas. Com relação a DL50, o extrato não apresentou toxicidade.

Numerous efforts have been directed to discover the role and the value of plants in therapy. This work aimed to evaluate the antimicrobial activity, mutagenicity, toxicity and effects on growth and differentiation of Herpetomonas samuelpessoai of the hydroalcoholic extract of Bauhinia forficata. To evaluate the antimicrobial activity it was performed the agar diffusion test, minimum inhibitory (MIC) and microbicidal (MMC) concentrations. The in vivo clastogenic and / or aneugênic potential was evaluated using the micronucleus test in mice bone marrow Swiss albinus. It was also determined the median lethal dose (LD50). The extract inhibited the growth of eight bacteria, being more active against Gram-positiveones, and was not active against fungi. The microorganisms tested had MIC concentrations of 2000, 1000, 500 and 250 mg / mL. The results showed that the tested concentrations (500, 1000 and 2000 mg / kg) had no statistically significant increasedthe micronucleus. There was no action on the growth and differentiation of Herpetomonas samuelpessoai at the concentrations tested. In respect to the LD50, the extract showed no toxicity.

Actin expression in trypanosomatids (Euglenozoa: Kinetoplastea)

Heteroxenic and monoxenic trypanosomatids were screened for the presence of actin using a mouse polyclonal antibody produced against the entire sequence of the Trypanosoma cruzi actin gene, encoding a 41.9 kDa protein. Western blot analysis showed that this antibody reacted with a polypeptide of approximately 42 kDa in the whole-cell lysates of parasites targeting mammals (T. cruzi, Trypanosoma brucei and Leishmania major), insects (Angomonas deanei, Crithidia fasciculata, Herpetomonas samuelpessoai and Strigomonas culicis) and plants (Phytomonas serpens). A single polypeptide of approximately 42 kDa was detected in the whole-cell lysates of T. cruzi cultured epimastigotes, metacyclic trypomastigotes and amastigotes at similar protein expression levels. Confocal microscopy showed that actin was expressed throughout the cytoplasm of all the tested trypanosomatids. These data demonstrate that actin expression is widespread in trypanosomatids.

Natural infection of triatomines (Hemiptera: Reduviidae) by trypanosomatids in two different environments in the municipality of Ouro Preto do Oeste, State of Rondônia, Brazil / Infecção natural de triatomíneos (Hemiptera: Reduviidae) por tripanosomatídeos em dois ambientes distintos no município de Ouro Preto do Oeste, Estado de Rondônia, Brasil

INTRODUCTION: This study analyzed the occurrence and the contamination of triatomines by trypanosomatids in Orbignya speciosa (babassu) specimens in the State of Rondônia, Brazil, in two different environments (pasture and woods). METHODS: Capture of triatomines on babassus and microscopic search for trypanosomatids in their digestive tube were carried out. RESULTS: Four hundred ninety-four (494) specimens were captured (Rhodnius prolixus and R.robustus), of which 35.6% of the triatomines were positive for trypanosomatids. CONCLUSIONS: The high index of natural infection along with the abundance of triatomines points out to the necessity to create an epidemiological surveillance system to monitor vector-borne transmission and deepen the studies on the ecology of such vectors in the Amazon.

INTRODUÇÃO: O estudo analisou a ocorrência e o índice de contaminação por tripanosomatídeos de triatomíneos em Orbynia speciosa no Estado de Rondônia, Brasil, em 2 ambientes (pastagem e floresta). MÉTODOS: Captura em palmeiras e esfregaços do conteúdo do tubo digestivo dos triatomíneos analisados por microscopia óptica. RESULTADOS: Capturaram-se 494 espécimes (Rhodnius prolixus e R. robustus), sendo que 35,6% dos triatomíneos estavam positivos para tripanosomatídeos. CONCLUSÕES: O elevado índice de infecção natural, aliados à abundância de triatomíneos, mostram a necessidade de se criar um sistema de vigilância epidemiológica para monitorar a transmissão vetorial e aprofundar estudos sobre a ecologia destes vetores na Amazônia.

Morphological and molecular description of Blastocrithidia cyrtomeni sp. nov. (Kinetoplastea: Trypanosomatidae) associated with Cyrtomenus bergi Froeschner (Hemiptera: Cydnidae) from Colombia

A new trypanosomatid species, Blastocrithidia cyrtomeni, is herein described using morphological and molecular data. It was found parasitising the alimentary tract of the insect host Cyrtomenus bergi, a polyphagous pest. The morphology of B. cyrtomeni was investigated using light and transmission microscopy and molecular phylogeny was inferred from the sequences of spliced leader RNA (SL rRNA) - 5S rRNA gene repeats and the 18S small subunit (SSU) rRNA gene. Epimastigotes of variable size with straphanger cysts adhering to the middle of the flagellum were observed in the intestinal tract, hemolymph and Malpighian tubules. Kinetoplasts were always observed anterior to the nucleus. The ultrastructure of longitudinal sections of epimastigotes showed the flagellum arising laterally from a relatively shallow flagellar pocket near the kinetoplast. SL RNA and 5S rRNA gene repeats were positive in all cases, producing a 0.8-kb band. The amplicons were 797-803 bp long with > 98.5 percent identity, indicating that they originated from the same organism. According to the sequence analysis of the SL-5S rRNA gene repeats and the 18S SSU rRNA gene, B. cyrtomeni is different from all other known species or isolates of Trypanosomatidae. Both analyses indicate that among known species, it is most closely related to Blastocrithidia triatomae.

Gingko biloba leaves extract on growth and morphology of trypanosomatids / Efecto del extracto de las hojas de Gingko biloba en el crecimiento y la morfología de tripanosomátidos

Gingko biloba has been one of the most used medicinal plants all over the world in the past years. In this study, our group has studied the effect of a hydroethanolic extract from the aerial parts of this plant on the growth and morphological differentiation of trypanosomatids. Herpetomonas samuelpessoai and Herpetomonas sp were used in this study. The extract was obtained in a Soxhlet apparatus (50 oC, 2 hours). This extract was aseptically added to Roitman’s medium in different concentrations (4, 20, 40, 60, 80 and 100 mg/ml). The growth rate was determined using a Newbauer chamber to count numbers of cells after the extract inoculation (24 and 72 hours later). Smears stained by the Panotic method was used to determine the percentages of pro, para and opisthomastigote forms. The extract inhibited Herpetomonas sp growth in concentrations higher than 20 mg/ml. H. samuelpessoai has been inhibited in doses higher than 40 mg/ml. No morphological differentiation was observed in Herpetomonas sp cell. However, morphological differentiations could be noticed in H. samuelpessoai cell using doses higher than 40 mg/ml. These alterations are probably related to the cell division process, since cells with 3 or 4 nucleus were observed. Also, cytoplasmatic expansions, representing unsuccessful process of cell division were frequently found out. Further ultrastructural analysis using a transmission electron microscope showed cells with homogeneous nucleus or the absence of it. Protozoan protein profile was also analyzed. It was possible to notice changes in both trypanosomatids used in this study. H. samuelpessoai has shown over expression and accumulation of proteins which its degradation is essential to continue the cell differentiation. Also, it is possible to suggest that this extract acts through the modulation of the genetic expression and may be harmful to human cells if not purified.

Gingko biloba es una de las plantas medicinales más utilizadas en todo el mundo en los últimos años. En este estudio, nuestro grupo ha estudiado el efecto de un extracto hidroetanólico de la parte aérea de esta planta sobre el crecimiento y la diferenciación morfológica de tripanosomátidos. Herpetomonas samuelpessoai y Herpetomonas sp se utilizaron en este estudio. El extracto se obtuvo en un aparato Soxhlet (50° C/2 horas). Este extracto se agregó asépticamente a medio Roitman en diferentes concentraciones (4, 20, 40, 60, 80 y 100 mg /ml). La tasa de crecimiento se determinó utilizando una cámara de Newbauer para contar el número de células después de la inoculación de extracto (24 y 72 horas más tarde). Frotis teñidos por el método Panotic se utilizó para determinar los porcentajes de pro, para y las formas opistomastigota. El extracto inhibió el crecimiento Herpetomonas sp en concentraciones superiores a 20 mg /ml. H. samuelpessoai se ha inhibido en dosis superiores a 40 mg /ml. No se observó diferenciación morfológica en la celda Herpetomonas sp. Sin embargo, las diferenciaciones morfológicas se pudo observar en la celda H. samuelpessoai con dosis superiores a 40 mg /ml. Estas alteraciones son probablemente relacionado con el proceso de división celular, ya que las células con 3 o 4 núcleos se observaron. Además, las expansiones citoplasmáticas, lo que representa el proceso fallido de la división celular se encontraron con frecuencia hacia fuera. Un análisis más detallado ultraestructural usando microscopio electrónico de transmisión mostró células con núcleo homogéneo o la ausencia de ella. El perfil de proteínas por Protozoarios también se ha analizado. Fue posible notar cambios tanto en tripanosomátidos utilizados en este estudio. H. samuelpessoai ha demostrado a lo largo de expresión y la acumulación de proteínas que su degradación es esencial para continuar con la diferenciación celular. Además, es posible sugerir que este extracto...

Comparação dos transcritos gênicos sob tensão físico-química entre Trypanosoma cruzi CL-Brener e um tripanossomatídeo monozênico / Comparison of gene transcripts under stress of physical chemistry Trypanosoma cruzi CL-Brener and a trypanosomatid monozênico

Os membros da família Trypanosomatidae são parasitos flagelados que podem infectar vertebrados e ou invertebrados, e de acordo com o tipo e numero de hospedeiros são classificados como parasitas monoxênicos ou heteroxênicos. Neste trabalho realizamos a comparação da detecção de transcritos entre Trypanosoma cruzi clone CL-Brener, espécie heterocênica, e Blastocrithidia culicis, como representante dos tripanossomatídeos monoxênicos, ambos submetidos a tensões físicas, químicas e nutricionais. A questão proposta é se duas espécies de tripanossomatideos com estilos de vida distintos respondem à mesma pressão ambiental (tensão em meio de cultivo) com os mesmos genes. Para tanto foi realizado o crescimento de ambas as espécies em diferentes condições de tensão, como alterações de temperatura, variações de Ph, redução de nutrientes do meio, adição de agentes químicos ao meio, entre outros. O perfil dos transcritos, obtidos, através de RT-PCR com iniciados arbitrário selecionado (RNA fingerprinting), foi comparado entre a condição padrão de crescimento (controle) e as condições alteradas entre as duas espécies. Com isso, foram observados comportamentos distintos dos tripanossomatídeos nas condições físicas impostas, como os extremos de temperaturas. Com esta abordagem metodológica que deve apontar os genes que mais respondem as condições de estresse nas células, obtivemos uma representação do momento transcricional dos protozoários. Foram gerados 772 ESTs após o sequênciamento de fragmentos transcritos de T. cruzi e B. culicis sob tensão, além de ESTs da condição padrão (controle) de B. culicis. Foi observada alta transição de genes de proteínas de superfície (mucinas, trans-sialidades, gp63, etc) sob tensão tanto em T. cruzi como B. culicis, além de proteínas regulatórias da expressão gênica em menos quantidade. Ambas as espécies apresentaram trans splicing de duas formas diferentes, através da utilização de sítios adicionais (AG), antes da ORF, ou splicing alternativo ao gerar transcritos internos às ORFs, concluímos com isso que tripanossomatídeos de espécies e estilos de vida distintos compartilham apenas poucos genes quando em condições de estresse. Grande parte dos transcritos mostraram-se específicos para cada espécie.

Diagnosis de Herpetomonas sp. en Musca domestica, y su implicación en terapia larval / Diagnosis of Herpetomonas sp. in Musca domestica, and its implication on larval therapy

Los flagelados del género Herpetomonas sp. son parásitos de insectos, y generalmente no son patógenos para el hombre. Sin embargo, tienen importancia médica en la actualidad derivada en primer lugar del uso de varias especies de moscas en terapia larval, desde las cuales han sido aisladas, ejemplo Musca domestica, y en segundo lugar dado a los nuevos registros de casos humanos de co-infección de VIH y Herpetomonas sp., pero con una clínica y sintomatología semejante a la leishmaniasis tipo visceral y cutáneo-difusa. En el presente trabajo, se evalúo un material de colonia de M. domestica, colectado en la localidad de Maracay, Edo. Aragua, y colonizado con fines de terapia larval en un modelo animal de leishmaniasis. La búsqueda parasitológica en frotis preparados a partir de los macerados del tubo digestivo, evidencia la existencia de Herpetomonas sp. y Octosporea sp. en un 90% de los ejemplares evaluados en diferentes estadios de vida, y a todo lo largo del tracto digestivo. Los resultados obtenidos indican la necesidad de evaluar a priori el material de moscas colectado en el campo antes de estabilizar una colonia con fines de terapia larval. Adicionalmente, se recomienda el uso de herramientas moleculares para el diagnostico de leishmaniasis en zonas de alta casuística de SIDA y alta endemicidad de leishmaniasis con el fin de descartar infecciones cruzadas, dado a la co-circulación de Herpetomonas y Leishmania.

Herpetomonas are insect parasites. Although they usually are not pathogenic to man, now they have become very important due to the use of barium species of flies in larval therapy and there are new reports of HIV coinfection of Herpetomonas sp. in whom a similar clinical symptoms and one which causes visceral leishmaniasis and diffuse cutaneous leishmaniasis. From a colony of Musca domestica, mounted in the city of Trujillo Venezuela, took out the search of the protozoan along the entire digestive tract of adult and immature, resulting Herpetomonas positive. sp 90% of those reviewed. The presence of parasites, both Herpetomonas spp. as Octosporea sp. was confirmed by Giemsa staining of smears from intestinal homogenates of adult flies and immature stages. We recommend the use of molecular tools for diagnosis of leishmaniasis in areas of high incidence of AIDS and leishmaniasis are endemic to rule out cross-infection.

Análise do espaçador intergênico do gene de calmodulina em parasitas da família trypanosomatidae: potencial como marcador molecular / Intergenic spacer analysis of calmodulin gene in the family Trypanosomatidae parasites: potential as a molecular marker

Caracterização e descrição de espécie na família Trypanosomatidae ainda depende da morfologia e identidade de hospedeiros dos tripanossomatídeos. Embora vários marcadores moleculaes tenham sido descritos nas ultimas décadas nenhum deles tem sido proposto como uma ferramenta molecular definitiva para complementar a informação ministrada pelas analises morfológicas. Com objetivo de avaliar o potencial do espaçador intergenico do gene de calmodulina como marcador molecular e estudar a composição desta região nos tripanossomatídeos, foram amplificados clonados e seqüenciados os espaçadores intergênicos de Crithidia fasciculata, C. deanei, C. guilhermei, C. acanthocephali, C. luciliae, C. desouzai, Trypanosoma rangeli e comparados com as seqüências que estão publicamente disponíveis de T. brucei, T. cruzi, Leishmania mexicana, L. major, L. infantum, L. arentolae e Phytomonas serpens. Características como organização genética do gene de calmodulina, conteúdo de G+C e presença de repeto~ções de simples seqüência também foram avaliados. O gene de calmodulina mostrou estar organizado in tandem de duas a quatro copias separados por espaçadores intergenicos os quais podem apresentar variação no tamanho. Estes espaçadores mostraram pouca variação intraespecífica no seu conteúdo de G+C sem importar qualquer diferença de tamanho. Nos tripanossomatídeos monoxênicos a tendência aponta que os organismos com um espaçador intergênico maior apresentam um conteúdo maior de G+C. evidenciou-se que a presença de repetições de seqüência simples nos espaçadores, elementos vinculados com a regulação da expressão genética dos tripanossomatideos. Embora o espaçador de calmoduline mostre variabilidade entre as copias do gene, nos demonstramos que seqüências na região 5UTR localizadas imediatamente antes do códon de inicio são espécie-específicas. Uma vez que este segmento genético é de fácil amplificação e esta limitado por uma seqüência conservada (ORF), resulta factível desenvolver uma ferramenta molecular que auxilie a morfologia tradicional na identificação de espécies na família Trypanosomatidae.

Cl gene cluster encoding several small nucleolar RNAs: a comparison amongst trypanosomatids

Small nucleolar RNAs (snoRNAs) are small non-coding RNAs that modify RNA molecules such as rRNA and snRNA by guiding 2'-O-ribose methylation (C/D box snoRNA family) and pseudouridylation reactions (H/ACA snoRNA family). H/ACA snoRNAs are also involved in trans-splicing in trypanosomatids. The aims of this work were to characterise the Cl gene cluster that encodes several snoRNAs in Trypanosoma rangeli and compare it with clusters from Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei, Leishmania major, Leishmania infantum, Leishmania braziliensis and Leptomonas collosoma. The T. rangeli Cl gene cluster is an 801 base pair (bp) repeat sequence that encodes three C/D (Cl1, Cl2 and Cl4) and three H/ACA (Cl3, Cl5 and Cl6) snoRNAs. In contrast to T. brucei, the Cl3 and Cl5 homologues have not been annotated in the Leishmania or T. cruzi genome projects (http//:www.genedb.org). Of note, snoRNA transcribed regions have a high degree of sequence identity among all species and share gene synteny. Collectively, these findings suggest that the Cl cluster could constitute an interesting target for therapeutic (gene silencing) or diagnostic intervention strategies (PCR-derived tools).