Construção, caracterização biológica e imunológica de vírus recombinante de vírus vacinal da febre amarela 17d, que expressam o fator de infectividade viral (vif) do vírus da imunodeficiência símia sivmac239 / Construction, biological and immunological characterization of 17d yellow fever vaccine virus recombinant virus, which express the viral infectivity factor (vif) of the simian immunodeficiency virus sivmac239

O desenvolvimento de uma vacina segura e eficiente contra o HIV é considerada uma ótima medida/estratégia para controlar a epidemia mundial do HIV. Este projeto visou construir e avaliar a imunogenicidade dos vírus da febre amarela recombinante da vacina 17D que expressam antígenos do fator de infectividade viral (Vif) do vírus da imunodeficiência símia SIVmac239. O vírus da vacina da febre amarela 17D tem sido usado como vetor de protótipos de vacinas por ser um imunógeno robusto e seguro. Nosso objetivo foi avaliar vírus recombinantes da febre amarela 17D que carreiam fragmentos de genes Vif (HIV/SIV), e que foram construídos com a tecnologia do clone infeccioso e a inserção do gene de Vif na região intergênica E/NS1 do genoma do vírus vacinal da febre amarela 17D. Verificamos anteriormente que o vírus recombinante FA/Vif 1-110 original era geneticamente instável, perdendo completamente o fragmento Vif 1-110 até à quinta passagem em série em células Vero. Nós alcançamos a estabilidade genética quando deletamos a região N-terminal de Vif, que provavelmente estava interferindo na replicação do vírus da FA 17D. Chamamos de FA/Vif 42-110, o vírus que sofreu a deleção do N-terminal, e que é geneticamente estável. Mas também construímos o FA/Vif 1-110 variante, que possui o mesmo fragmento do FA/Vif 1-110 original, porém é mais estável devido as mudanças realizadas na plataforma de expressão da proteína heteróloga. Incluímos nas primeiras investigações de imunogenicidade, o FA/Vif 102-214 construído anteriormente. Nós hipotetizamos que a estabilidade genética viral poderia aumentar a imunogenicidade viral

Assim, realizamos duas imunizações em camundongos C57BL/6 com os vírus FA/Vif para a avaliação da imunogenicidade em relação à formação de células T de memória contra o vírus da FA e Vif, e indução de anticorpos neutralizantes contra o vírus da FA, gerados pelas imunizações. O vírus FA/Vif 1-110 variante e o FA/Vif 42-110 se apresentaram como bons indutores de resposta celular, porém o FA/Vif 42-110 apresentou a menor média de título de anticorpos neutralizantes. O vírus FA/Vif 102-214 apresentou bons resultados de resposta imune celular e humoral, apesar de não ter sido avaliado dentro da resposta imune celular específica. O vírus FA/Vif 1-110 variante conseguiu uma boa indução da resposta celular e humoral, e o vírus FA/Vif 1-110 original parece promissor segundo os nossos dados de resposta celular de memória efetora, apesar de ter apresentado uma média baixa de títulos de anticorpos neutralizantes. De maneira geral, os vírus FA/Vif induzem diferentes braços de resposta imune, sendo uns mais indutores de resposta celular que humoral e vice-versa. Com os vírus FA/Vif apresentando essas características em relação a resposta imune, não conseguimos relacionar a estabilidade genética com imunogenicidade, mas uma estratégia promissora para abranger os dois tipos de resposta, seria o uso de formulações virais, utilizando dois ou mais vírus FA/Vif no regime vacinal. (AU)

Co-administration of plasmid-encoded granulocyte-macrophage colony-stimulating factor increases human immunodeficiency virus-1 DNA vaccine-induced polyfunctional CD4+ T-cell responses

T-cell based vaccines against human immunodeficiency virus (HIV) generate specific responses that may limit both transmission and disease progression by controlling viral load. Broad, polyfunctional, and cytotoxic CD4+T-cell responses have been associated with control of simian immunodeficiency virus/HIV-1 replication, supporting the inclusion of CD4+ T-cell epitopes in vaccine formulations. Plasmid-encoded granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (pGM-CSF) co-administration has been shown to induce potent CD4+ T-cell responses and to promote accelerated priming and increased migration of antigen-specific CD4+ T-cells. However, no study has shown whether co-immunisation with pGM-CSF enhances the number of vaccine-induced polyfunctional CD4+ T-cells. Our group has previously developed a DNA vaccine encoding conserved, multiple human leukocyte antigen (HLA)-DR binding HIV-1 subtype B peptides, which elicited broad, polyfunctional and long-lived CD4+ T-cell responses. Here, we show that pGM-CSF co-immunisation improved both magnitude and quality of vaccine-induced T-cell responses, particularly by increasing proliferating CD4+ T-cells that produce simultaneously interferon-γ, tumour necrosis factor-α and interleukin-2. Thus, we believe that the use of pGM-CSF may be helpful for vaccine strategies focused on the activation of anti-HIV CD4+ T-cell immunity.

Avaliação da resposta de células T frente aos peptídeos de GAG e NEF do HIV-1 e de parâmetros imunológicos e genéticos associados ao controle da replicação viral / Evaluation of t cells responses against hiv-1 gag and nef peptides and immunological and genetic parameters associated to control of viral replication

A pandemia do HIV-1 é a infecção emergente mais importante das últimas décadas. O desenvolvimento de uma vacina é colocado como a melhor estratégia para o controle da pandemia. No entanto, entre os candidatos vacinais que evoluíram para testes clínicos de eficácia, apenas um mostrou resultados positivos, mas com uma modesta eficácia (31,2 por cento). Além da busca por uma vacina eficiente contra a infecção pelo HIV-1, o desenvolvimento de estratégias para se atingir a cura também é essencial. Considerando esses dois objetivos principais, diversos fatores são colocados como obstáculos, sendo a enorme diversidade genética do HIV-1 e a falta de correlatos de proteção contra a doença ou a infecção, os pontos centrais e nos quais focamos nossa atenção. No primeiro trabalho, foi avaliada a resposta de células T frente a peptídeos derivados de sequências consensos e sequências de isolados virais mais próximos ao consenso (CVI) dos três subtipos prevalentes no Brasil,B, C e F1 e do grupo M. O estudo incluiu 32 indivíduos infectados com o HIV-1, subtipo B (n= 13), subtipo C (n = 11) e subtipo F1 (n = 8). As respostas específicas frente a Gag e Nef foram avalidas usando o ensaio de ELISpot IFN-gama. Peptídeos baseados nas sequências CVI apresentaram capacidade de redução da distância genética e de detecção da resposta de células T similar ao observado para as sequências consenso. Em geral, o nível de reatividade cruzada entre os subtipos B e F1 foi maior do que entre os subtipos B e C ou entre os subtipos C e F1. Esses resultados sugerem que o obstáculo imposto pela diversidade genética no desenho de vacinas é dependente dos subtipos envolvidos. No segundo trabalho foi avaliada a resposta de células T de indivíduos controladores da replicação viral frente aos peptídeos consenso, derivados do primeiro estudo...

Formulação vacinal trivalente voltada para o controle profilático/terapêutico de tumores induzidos pelo vírus do papiloma humano tipo 16 (HPV-16) e infecções pelos vírus da imunodeficiência adquirida (HIV) e herpes vírus humano (HSV) / Trivalent vaccine formulation focused on the prophylactic / therapeutic control of tumors induced by human papillomavirus type 16 (HPV-16) and infection by human immunodeficiency virus (HIV) and human herpes virus (HSV)

As proteínas E7 (HPV), p24 (HIV) e gD (HSV) são exclusivamente expressas por células infectadas ou tumorais e, por isso, são utilizadas como alvos para vacinas com características terapêuticas. Foram desenvolvidas duas vacinas de DNA capazes de expressar as três proteínas virais por meio de um vetor de expressão bicistrônico baseado na sequência IRES. As vacinas, denominadas pIRES I e pIRES II, diferem entre si por transportarem os genes que codificam as proteínas E7 do HPV-16 e p24 do HIV fusionadas à proteína gD do HSV-1 em ordem inversa. Células COS-7 transfectadas com os plasmídeos vacinais expressaram as proteínas alvo, como determinado por imunofluorecência com anticorpos específicos para as proteínas gD, p24 e E7. As vacinas foram testadas em modelo murino quanto à capacidade de gerar anticorpos e células T CD8+ específicas. Observamos que animais vacinados desenvolveram baixas taxas de anticorpos contra gD, p24 e E7. Em contrapartida, demonstramos a indução de células T CD8+ específicas para os três antígenos testados. Os plasmídeos vacinais foram capazes de proteger camundongos inoculados com células tumorais TC-1 (que expressam a proteína E7 do HPV-16), embora apresentando diferentes níveis de proteção em ensaios profiláticos e terapêuticos. As formulações foram testadas em relação à capacidade de proteger animais frente a desafio com o HSV-1 sendo que apenas um deles gerou efeito protetor. Em conclusão, os resultados demonstram que vacinas voltadas para o controle terapêutico de infecções ou processos tumorais associados aos vírus HPV, HIV e HSV representam uma meta viável e promissora

The proteins E7 (HPV), p24 (HIV) and gD (HSV) are exclusively expressed by infected cells or tumors and therefore are used as targets for vaccines with therapeutic characteristics. We developed two DNA vaccines capable of expressing these three viral proteins using a bicistronic expression vector based on IRES sequence. The plasmid vaccines, named pIRES I and pIRES II, differ by carrying the genes that encode proteins of HPV-16 E7 and p24 fused to the HIV protein gD of HSV-1 in reverse order. Transfected COS-7 cells expressed the target proteins, as determined by immunofluorescence with specific antibodies for gD, p24 and E7. The vaccines were tested in mice for their ability to generate antibodies and specific CD8+ T cells. We observed that vaccinated animals developed low levels of antibodies against gD, E7 and p24. In contrast, we demonstrate the induction of specific CD8+ T cells for the three antigens. The plasmid vaccines were able to protect mice inoculated with TC-1 tumor cells (which express the E7 protein of HPV-16), although with different levels of protection in prophylactic and therapeutic trials. The formulations were tested for ability to protect animals against challenge with HSV-1 and only one of them generated a protective effect. In conclusion, the results show that vaccines directed to therapeutic control of infections or tumor process associated with HPV, HSV or HIV represents a promising and viable goal

Recruitment of Caribbean female commercial sex workers at high risk of HIV infection / Captación de mujeres profesionales del sexo con alto riesgo de infección por VIH en el Caribe

OBJECTIVE: To evaluate novel eligibility criteria and outreach methods to identify and recruit women at high risk of HIV-1 infection in the Caribbean. METHODS: A prospective cohort study was conducted in 2009-2012 among 799 female commercial sex workers in the Dominican Republic, Haiti, and Puerto Rico. Minimum eligibility criteria included exchange of sex for goods, services, or money in the previous 6 months and unprotected vaginal or anal sex with a man during the same period. Sites used local epidemiology to develop more stringent eligibility criteria and recruitment strategies. Participants were asked questions about HIV/AIDS and their level of concern about participating in an HIV vaccine trial. Logistic regression modeling was used to assess predictors of prevalent HIV infection and willingness to participate in a future HIV vaccine study. RESULTS: HIV prevalence at screening was 4.6%. Crack cocaine use [odds ratio (OR) = 4.2, 95% confidence interval (CI) (1.8-9.0)] was associated with and having sex with clients in a hotel or motel [OR = 0.5, CI (0.3-1.0)] was inversely associated with HIV infection. A total of 88.9% of enrolled women were definitely or probably willing to participate in a future HIV vaccine trial. CONCLUSIONS: This study indicated that local eligibility criteria and recruitment methods can be developed to identify and recruit commercial sex workers with higher HIV prevalence than the general population who express willingness to join an HIV vaccine trial.

OBJETIVO: Evaluar nuevos criterios de selección y métodos extrainstitucionales encaminados a detectar y captar a las mujeres con alto riesgo de contraer la infección por virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en el Caribe. MÉTODOS: Del 2009 al 2012, se llevó a cabo un estudio prospectivo de cohortes de 799 mujeres profesionales del sexo en la República Dominicana, Haití y Puerto Rico. Los requisitos mínimos de selección fueron el intercambio de relaciones sexuales por bienes, servicios o dinero en los últimos 6 meses y las relaciones sexuales vaginales o anales sin protección con un hombre durante el mismo período. En cada centro se aplicaron criterios de selección y estrategias de captación más restrictivos, en función de las características epidemiológicas locales. Se formularon a las participantes preguntas acerca de la infección por el VIH/sida y su motivación para participar en un estudio clínico sobre la vacuna contra el VIH. Se usó un modelo de regresión logística con el fin de analizar los factores pronósticos de prevalencia de infección por el VIH y la voluntad de participar en un estudio futuro sobre la vacuna contra el virus. RESULTADOS: La prevalencia de infección por el VIH en el momento del tamizaje fue 4,6%. El consumo de crack se asoció con la infección por el VIH (razón de posibilidades [OR]: 4,2; intervalo de confianza [IC] de 95%: 1,8-9,0) y la práctica de relaciones sexuales con clientes en un hotel o un motel se asoció inversamente con esta infección (OR: 0,5; IC 95%: 0,3-1,0). El 88,9% de las mujeres inscritas manifestó una disposición decidida o probable de participar en un estudio futuro sobre la vacuna contra el VIH. CONCLUSIONES: Los resultados del estudio indican que es posible formular criterios de selección e introducir métodos de captación locales con el propósito de detectar y captar a las mujeres profesionales del sexo, que presentan una prevalencia de infección por el VIH mayor que la población general y manifiestan una buena disposición de participar en un ensayo clínico sobre la vacuna contra el VIH.

Eventos adversos supuestamente atribuibles a la vacunación e inmunización en hijos de madres infectadas con el virus de la inmunodeficiencia humana / Supposedly attributable to vaccination and immunization in children of mothers infected with human immunodeficiency virus adverse events

Introducción: las vacunas son una de las intervenciones sanitarias más importantes y difundidas. La monitorización de su seguridad a través del registro de eventos adversos es imprescindible. Los hijos de madre infectada por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), expuestos,infectados o serorrevertidos son un grupo particular de individuos dentro del esquema de inmunización. El objetivo del presente estudio fue describir la frecuencia de eventos adversos supuestamente atribuibles a la vacunación e inmunización (ESAVI) en los hijos de madres infectadas con VIH. Metodología: se realizó un estudio descriptivo, de corte transversal entre el 1º de setiembre de 2008 y el 28 de febrero de 2011 en el Centro Nacional de Referencia Obstétrico-Pediátrico VIH-SIDA del Centro Hospitalario Pereira Rossell con los pacientes allí controlados ( infectados y no infectados) que requerían vacunación en sus controles. Se registró el porcentaje y tipo de eventos producidos. Resultados: de 189 pacientes, 110 (58%) entregaron el formulario con un total de 157 registros. La mediana de edad fue de 2 meses (rango de 2 meses a 17 años). El 63% era menor de 6 meses. De los 110 niños, 34 eran infectados y 76 no infectados. Se registraron eventos adversos en 49 (44,5%) pacientes. Hubo 108 eventos leves y 23 graves. El porcentaje de ESAVI en ambos grupos fue similar (p>0,05). No se registraron hospitalizaciones ni eventos difíciles de catalogar como relacionados a vacunación. Conclusiones: las vacunas administradas en eseperíodo fueron seguras con similares ESAVI en ambos grupos de pacientes. Continuar vigilando la aparición de ESAVI y comparar los resultados año a año será importante para actualizar recomendaciones y garantizar la seguridad de los pacientes y sus cuidadores.

Perspectivas de curación: DermaVir, una vacuna de ADN con efecto terapéutico contra el VIH/sida y desarrollada racionalmente / Towards a cure: DermaVir, a rationally designed therapeutic DNA vaccine against HIV/AIDS

Hallazgos recientes en el área de la intensificación de los tratamientos antirretrovirales demuestran que la forma de llegar a una curación para el VIH exige la inclusión de nuevas estrategias de tratamiento como las vacunas terapéuticas. La vacuna terapéutica DermaVir incluye elementos tecnológicos clave en el diseño de una vacuna racional: un único inmunógeno plásmido de ADN (pADN) que expresa a 15 antígenos del VIH, formulación de nanomedicina y una única administración tópica de la vacuna enfocada a las células dendríticas. Luego de su administración tópica sobre la piel preparada, las células epidérmicas de Langerhans activadas transportan la nanomedicina DermaVir a los nódulos linfáticos para expresar a los antígenos del VIH codificados como pADN e inducir a las células T precursoras/de memoria con una alta capacidad de proliferación. Se han demostrdo la seguridad, la inmunogenicidad y la eficacia preliminar de la DermaVir en varios modelos animales y en humanos con infección por VIH. Esta novedosa tecnología de vacunación terapéutica podría constituir un nuevo paradigma en el trtamiento contra el VIH.

Recent findings on the field of antiretroviral treatment intesnsification demonstrate thar the way towards a cure for HIV requires the involvement of novel treatment strategies like therapeutic vaccines. DermaVir therapeutic vaccine includes key technological elements of rational vaccine design: a single plasmid DNA (pDNA) immunogen that expresses 15 HIV antigens, nanomedicine formulation and a unique dendritic cell-targeting topical vaccine administration. Following topical administration on the prepared skin, DermaVir nanomedicine is transported by activated epidermal Langerhans cells to the lymph nodes to express the pDNA-encoded HIV antigens and induce precursor/memory T cells with high proliferation capacity. Safety, immunogenicity and preliminary efficacy of DermaVir have been demonstrated in several animal models and HIV-infected human subjects. This novel therapeutic vaccination technology might offer a new treatment paradigm against HIV.

Voluntariado e negociacao de protocolos de vacinas anti-HIV no Brasil / Volunteers and negotiation of anti-HIV vaccine protocols in Brazil

O estudo acompanhou a rotina de um ensaio clinico de vacinas experimentais anti-HIV no Rio de Janeiro, Brasil, focalizando os processos de recrutamento, selecao e seguimento dos voluntarios. Utilizaram-se tecnicas de observacao da rotina do centro de pesquisas e entrevistas a profissionais e voluntarios. Os resultados evidenciaram que o ensaio e uma atividade coletiva, em que constantes negociacoes sao necessarias entre o que e exigido pelo protocolo e o que precisa, pode ou deve ser adaptado para que ele funcione, em funcao de situacoes como: tempo prolongado de aprovacao do estudo pelas instancias regulatorias, dificuldades no recrutamento de voluntarios, ate problemas maiores como a descontinuidade das vacinacoes (ocorrida no protocolo estudado). Discute-se como a aplicacao do protocolo transborda o script tecnico-cientifico, transformando-se em um objeto fronteirico entre mundos sociais diferentes. O protocolo e adaptado segundo uma ordem local, de acordo com a dinamica das relacoes sociais, nao podendo desconsiderar-se a constante inter-relacao entre ciencia, sociedade, tecnica e politica.

This study monitored the protocol of a clinical trial for experimental anti-HIV vaccines in Rio de Janeiro, Brazil, focusing on the recruitment, selection, and follow-up of volunteers. The techniques included observation of the research center's routine and interviews with health professionals and volunteers. The results show that the trial is a collective activity, in which constant negotiations are needed between the protocol requirements and what can, should, or must be adapted in order for it to work, as a function of: prolonged time before the trial's approval by the regulatory bodies, difficulties in recruiting volunteers, and even larger problems like discontinuity in the vaccines (which occurred in a specific protocol). The article discusses how the protocol's application extends beyond the technical and scientific "script", transforming it into a boundary object between different social worlds. The protocol is adapted according to a local order, based on the dynamics of social relations and the constant interrelationship between science, society, technique, and politics.

Análise da imunogenicidade de uma vacina de DNA codificando epitopos CD4 promíscuos e conservados do HIV-1 em camundongos BALB/c e transgênicos para moléculas de HLA classe II / Immunogenicity analysis of a DNA vaccine encoding promiscuous and conserved HIV-1 CD4 epitopes in BALB/c and HLA class II transgenic mice

Abordagens atuais no desenho de vacinas contra o HIV-1 estão focadas em imunógenos que codificam proteínas inteiras do HIV-1 e visam induzir respostas citotóxicas específicas. É concebível que vacinas bem-sucedidas devem induzir respostas contra múltiplos epitopos do HIV-1, coincidindo com seqüências das cepas circulantes do vírus, conhecido por sua grande variabilidade genética. Sabe-se que células T CD4+ são necessárias para indução de respostas efetivas de linfócitos T CD8+ citotóxicos. Neste trabalho, nós avaliamos a imunogenicidade de uma vacina de DNA codificando 18 epitopos para linfócitos T CD4+, conservados e ligadores de múltiplas moléculas HLA-DR em camundongos BALB/c e em quatro linhagens de camundongos transgênicos para moléculas de HLA classe II. Os camundongos imunizados apresentaram respostas de amplitude e magnitude significativas com proliferação e secreção de citocinas por linfócitos T CD4+ e T CD8+. Onze dos 18 epitopos para linfócitos T CD4+ presentes na vacina foram reconhecidos pelas linhagens de camundongos transgênicos para moléculas de HLA classe II. Em suma, 17 dos 18 epitopos codificados pela vacina foram reconhecidos. As células induzidas pela vacina apresentaram um perfil polifuncional com tipo 1 de citocinas, incluindo produção de IFN- , TNF- e IL-2. A vacina também induziu células T CD4+ de memória central de longa duração, capazes de fornecer auxílio contínuo para células T CD8 +. Pela capacidade da vacina HIVBr18 de induzir respostas contra múltiplos epitopos de linfócitos T CD4+ conservados que podem ser reconhecidos no contexto de múltiplas moléculas de HLA classe II, esse conceito vacinal pode solucionar o problema da variabilidade genética viral assim como aumentar a cobertura populacional. Portanto, essa vacina, pode ser útil se utilizada isoladamente ou como fonte de auxílio cognato para células T CD8+ HIV-específicas induzidas por outros imunógenos gerando resposta em uma grande proporção dos vacinados.

Current HIV vaccine approaches are focused on immunogens encoding whole HIV antigenic proteins that elicit cytotoxic CD8+ responses. It is conceivable that successful vaccines have to elicit responses to multiple epitopes, to match circulating strains of HIV, a virus known for its high genetic variability. It is known that CD4+ T cell responses are necessary for effective CD8+ antiviral responses. Here we assessed the immunogenicity of a DNA vaccine encoding 18 conserved, multiple HLA-DR-binding HIV CD4 epitopes in BALB/c and four strains of HLA class II-transgenic mice. Immunized mice displayed CD4+ and CD8+ proliferative and cytokine T cell responses of significant breadth and magnitude. Eleven out of the 18 encoded epitopes were recognized by CD4+ T cells from HLA class IItransgenic strain. Overall, 17 out of the 18 encoded peptides were recognized. The induced T cell response had a polyfunctional type 1 cytokine profile, including IFN- , TNF- and IL-2. The vaccine also induced long-lived central memory CD4+ T cells, which might provide sustained help for CD8+ T cells. By virtue of inducing broad responses against conserved CD4+ T cell epitopes that can be recognized in the context of widely diverse, common HLA class II alleles, this vaccine concept may cope both with HIV genetic variability and increased population coverage. The vaccine may thus be usefull either as a standalone approach or as a source of cognate help for HIV-specific CD8+ T cells elicited by conventional immunogens, eliciting responses in a wide proportion of vaccinees.

Análise do perfil transcricional de células dendríticas derivadas de monócitos utilizadas na vacina terapêutica anti-HIV-1 / Transcription profile of monocyte derived dendritic cells used in therapeutic HIV-1 vaccine model

Aplicando tecnologia de microarray, objetivamos traçar o perfil do programa de maturação das Mo-DC pulsadas com HIV autólogo inativado por AT-2, a fim de identificar marcadores específicos de ativação funcional e sugerir um perfil de expressão de genes úteis na identificação de respostas ao modelo in vitro das Mo-vacina DC. Essas informações podem ajudar a estabelecer assinaturas moleculares das funções celulares mais relevante para a melhoria das vacinas terapêuticas. O perfil transcricional foi analisado com base das vias celulares moduladas das Mo-DCs no estado imaturo, transitório e maduro. O HIV-1 inativado por AT-2 induz ativação de genes associados à apresentação de antígenos. Os conjuntos de genes do citoesqueleto podem influenciar a mudança de comportamento migratório das Mo-DCs ativadas. O aumento na expressão dos receptores celulares contribuem para o recrutamento de monócitos, DCs e macrófagos para o local da infecção. Além disso, modulam a resposta imune inata e adaptativa, incluindo a polarização das células Th e sub-regulação da resposta inflamatória, que pode interferir significativamente com a resposta imune. Coletivamente, o perfil transcricional das Mo-DCs induzido pelo HIV-1 inativado com AT-2 reflete uma significativa reprogramação imunológica e celular das células envolvidas na resposta imune do hospedeiro. Os resultados deste estudo focaram na interpretação de genes específicos dos perfis de transcrição das Mo-DCs como modelo terapêutico utilizado na vacina anti-HIV. As análises de assinaturas gene associado e sua correlação as respostas funcionais simplificam a identificação de indivíduos susceptíveis a vacina e a compreensão de eventuais falhas em ensaios clínicos. Microarray permitiu a análise quantitativa e simultânea da expressão de um elevado número de genes. Os estudos do perfil de expressão foram extremamente úteis para identificar os eventos moleculares e vias envolvidas nas funções de celular induzida por estímulos específicos...

Applying microarray technology, we intend to profile the program to mature Mo-DC pulsed with autologous inactivated HIV by AT-2, in order to identify specific markers of functional activation and suggest a profile of expression of specific genes, useful identification of responders to in vitro model of Mo-DC vaccine. Such information may help to establish detailed molecular signatures of cellular functions most relevant to improving the therapeutic vaccines. The transcriptional profile was analyzed on the basis of the cellular pathways modulated in immature MoDC, transitional MoDC and mature MoDC. The AT-2-inactivated HIV-1 induction of MoDC results in the activation of genes associated with antigen presentation functions. A set of cytoskeletal genes that may potentially mediate shape change and migratory behavior of activated MoDC is also observed. The increase in the expression of immune receptors contribute to the recruitment of monocytes, DCs, and macrophages to the site of infection. Moreover, they modulate both innate and adaptive immune response, including the polarization of Th cells, and the down-regulation of the inflammatory response, which may significantly interfere with the immune response. Collectively, the transcriptional profile induced by AT-2-inactivated HIV-1 in MoDc reflects a significant cellular and immunological reprogramming of cells directly involved in the host immune response. The results of this study focused on the interpretation of specific genes of transcription profile of MoDC used in therapeutic HIV vaccine model. Supplementing the analyses with examination of associated gene signatures and their correlation to functional responses will simplify the identification of responsive vaccine individuals and the understanding of eventual failures in individuals enrolled in clinical trials. Microarray approach allows quantitative and simultaneous analysis of gene expression of a large amount of genes and the systematic studies...

Is an HIV vaccine possible?

The road to the discovery of a vaccine for HIV has been arduous and will continue to be difficult over the ensuing twenty years. Most vaccines are developed by inducing neutralizing antibodies against the target pathogen or by using attenuated strains of the particular pathogen to engender a variety of protective immune responses. Unfortunately, simple methods of generating anti-HIV antibodies have already failed in a phase III clinical trial. While attenuated SIV variants work well against homologous challenges in non-human primates, the potential for reversion to a more pathogenic virus and recombination with challenge viruses will preclude the use of attenuated HIV in the field. It has been exceedingly frustrating to vaccinate for HIV-specific neutralizing antibodies given the enormous diversity of the Envelope (Env) glycoprotein and its well-developed glycan shield. However, there are several antibodies that will neutralize many different strains of HIV and inducing these types of antibodies in vaccinees remains the goal of a vigorous effort to develop a vaccine for HIV based on neutralizing antibodies. Given the difficulty in generating broadly reactive neutralizing antibodies, the HIV vaccine field has turned its attention to inducing T cell responses against the virus using a variety of vectors. Unfortunately, the results from Merck's phase IIb STEP trial proved to be disappointing. Vaccinees received Adenovirus type 5 (Ad5) expressing Gag, Pol, and Nef of HIV. This vaccine regimen failed to either prevent infection or reduce the level of HIV replication after challenge. These results mirrored those in non-human primate testing of Ad5 using rigorous SIV challenge models. This review will focus on recent developments in HIV vaccine development. We will deal largely with attempts to develop a T cell-based vaccine using the non-human primate SIV challenge model.

Caracterização fenotípica e funcional de linfócitos T de memória de indivíduos infectados pelo HIV reativos a epitopos T CD4+ derivados de sequências do consenso B do HIV-1 / Phenotypic and functional characterization of memory T lymphocytes from HIV infected individuals reactive to CD4-T epitopes derived from sequences of the HIV-1 B consensus

A persistência de células T de memória funcionais é importante para garantir uma imunidade protetora na infecção pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV). As células T de memória têm sido subdivididas em memória central (TCM), memória efetora (TEM) e memória efetora altamente diferenciada (TEMRA) com base na expressão de moléculas de superfície como CCR7 e CD45RA, e na capacidade de produzir citocinas e proliferar. Recentemente, identificamos 18 peptídeos derivados de seqüências do consenso B do HIV-1, ligadores de múltiplas moléculas HLA-DR e amplamente reconhecidos por linfócitos T de sangue periférico de pacientes infectados pelo HIV. Diante disso e considerando a importância das células T de memória na manutenção da resposta imune específica, nosso objetivo foi caracterizar fenotípica e funcionalmente as subpopulações de células T de memória de indivíduos infectados pelo HIV envolvidas no reconhecimento in vitro desses epitopos. Foram incluídos 14 indivíduos controles sadios e 61 pacientes HIV+ com contagem de linfócitos T CD4+ maior que 250 células/mm3. Os pacientes HIV+ foram divididos em seis diferentes grupos clínicos de acordo com o estágio da infecção, carga viral (CV) plasmática e uso de terapia anti-retroviral (ART): não progressores por longo tempo (LTNP), avirêmicos em uso de ART (AV-ART), virêmicos em uso de ART (VI-ART), virêmicos sem uso de ART (VI sem ART), virêmicos recém infectados sem uso de ART (VI-RI) e controladores. Células mononucleares do sangue periférico dos indivíduos do estudo foram estimuladas com o conjunto de peptídeos do HIV-1 e com um conjunto de peptídeos do Citomegalovírus (CMV). A freqüência de células de memória produtoras de IFN- e IL-2 e a proliferação celular antígeno-específica foram detectadas por citometria de fluxo de multiparâmetros. Nossos resultados mostraram que o conjunto de peptídeos do HIV-1 foi capaz de ativar subpopulações funcionais de memória TCM, TEM e TEMRA secretoras de IFN- e IL-2 em 100%...

The persistence of functional memory T cell is important to ensure a protective immunity to Human Immunodeficiency Virus (HIV) infection. Memory T cells have been subdivided into central memory (TCM), effector memory (TEM) and highly differentiated effector memory (TEMRA) based on the expression of surface molecules such as CCR7 and CD45RA, and the ability to produce cytokines and proliferate. Recently, we identified 18 peptides derived from B consensus sequences of HIV-1 that bind to multiple HLA-DR molecules and are widely recognized by peripheral blood T lymphocytes from HIV-infected patients. Given this and considering the importance of memory T cells in the maintenance of specific immune response, our objective was to characterize phenotypic and functionally memory T cell subsets from HIV-infected individuals involved in the recognition of these epitopes in vitro. The study included 14 healthy control subjects and 61 HIV+ patients with CD4+ lymphocytes counts higher than 250 cells/mm³. The HIV+ patients were divided into six different clinical groups according to the stage of infection, plasma viral load (VL) and antiretroviral therapy use (ART): long-term non-progressors (LTNP), aviremic under ART (AV-ART), viremic under ART (VI-ART), viremic without using ART (VI without ART), recently infected viremic without using ART (VI-RI) and controllers. Peripheral blood mononuclear cells from study subjects were stimulated with HIV-1 peptide pool and with a cytomegalovirus (CMV) peptide pool. The frequencies of IFN- and IL-2 producing memory cells and antigenspecific cell proliferation were detected by multiparametric flow cytometry. Our results showed that the HIV-1 set of peptides was able to activate TCM, TEM and TEMRA functional memory subsets that secrete IFN- and IL-2 in 100% of the HIV patients from the different clinical groups. The HIV-1 set of peptides also induced memory T lymphocyte subsets proliferation...

The hope for an HIV vaccine based on induction of CD8+ T lymphocytes: a review

The only long-term and cost-effective solution to the human immunodeficiency virus (HIV) epidemic in the developing world is a vaccine that prevents individuals from becoming infected or, once infected, from passing the virus on to others. There is currently little hope for an AIDS vaccine. Conventional attempts to induce protective antibody and CD8+ lymphocyte responses against HIV and simian immunodeficiency virus (SIV) have failed. The enormous diversity of the virus has only recently been appreciated by vaccinologists, and our assays to determine CD8+ lymphocyte antiviral efficacy are inadequate. The central hypothesis of a CTL-based vaccine is that particularly effective CD8+ lymphocytes directed against at least five epitopes that are derived from regions under functional and structural constraints will control replication of pathogenic SIV. This would be somewhat analogous to control of virus replication by triple drug therapy or neutralizing antibodies.

Um brasileiro na luta mundial contra a AIDS / A brazilian in the world-wide fight against the AIDS

Entrevista com o Dr. Marco Antônio de Ávila Vitória.