Entrega em adoção e demanda de reencontro à justiça: motivações da genitora / Voluntary relinquishment and request to justice for reunion: birth mother's motivations / Entrega en adopción y solicitud de reencuentro a la justicia: motivaciones de la madre biológica

Mudanças legislativas em relação à adoção vêm trazendo importantes repercussões para a compreensão do instituto. Neste artigo, temos como objetivo discutir especificidades da entrega voluntária de uma criança para adoção, no contexto da Justiça, e as motivações de demanda posterior da genitora para a viabilização de um reencontro. Problematizamos a amplitude do direito de acesso às origens, assegurado em lei aos adotados, a partir do entrelaçamento das temáticas entrega e reencontro, procurando compreender essas experiências pela perspectiva da genitora. Este trabalho parte de um caso paradigmático, atendido em uma Vara da Infância, Juventude e Idoso no estado do Rio de Janeiro, que culminou com o contato, mediado pelo Poder Judiciário, entre a adotada e sua genitora, por iniciativa desta. Trata-se de um estudo qualitativo, no qual foi realizada uma entrevista semiestruturada com a genitora, quatro anos após o acolhimento de seu pedido à Justiça. Os dados obtidos na entrevista foram analisados por meio do método de análise de conteúdo, em sua vertente categorial, resultando em duas categorias: entrega em adoção e segredos; reencontro: motivações e trajetórias. Constatamos a ausência de publicações brasileiras sobre a temática do reencontro, apontando que o assunto ainda é um tabu. Identificamos que, após o reencontro com a filha, foi possível à genitora uma transformação de si mesma, favorecendo o rompimento do segredo da entrega e de parte de sua história. Assinalamos a necessidade de mais pesquisas, incluindo-se a possibilidade da inserção do Judiciário na mediação dessas demandas.(AU)

Legislative changes related to adoption have brought important repercussions for understanding its regulations. In this article, we aim to discuss the peculiarities of a voluntary relinquishment of a child for adoption, in the context of justice, and the motivations of subsequent demand from the birth mother to set a reunion. We problematize the dimension of the right to access origins, guaranteed by law to adoptees, based on the intertwining of the themes voluntary relinquishment and reunion, seeking to understand these experiences from the perspective of the biological mother. This work is based on a paradigmatic case, attended at a Juvenile Court in the State of Rio de Janeiro, that culminated on the reunion of the adopted and her birth mother, at the initiative of the latter, mediated by the Judiciary. This is a qualitative study, in which we interviewed the biological mother, four years after her legal requirement. The data obtained in the interview were analyzed using the content analysis method, in its categorical aspect, resulting in two categories: voluntary relinquishment in adoption and secrets; reunion: motivations and trajectories. We concluded the absence of Brazilian studies about the theme of reunion, pointing out that the subject still as a taboo. We identified that, after the reunion with the daughter, it was possible for the biological mother to modify herself, favoring the breaking of the secret about the relinquishment and of part of her story. We point out the need of more research, including the possibility of inserting the Judiciary as a mediator for such demands.(AU)

Los cambios legislativos respecto a la adopción han tenido importantes repercusiones en la comprensión de la materia. Este artículo pretende discutir los detalles de la entrega espontánea de un niño para adopción, en el contexto de la Justicia, y las motivaciones de la posterior demanda de la madre biológica para hacer factible un reencuentro. Se problematiza la amplitud del derecho de acceso a los orígenes, garantizado por la ley a los adoptados, a partir del entrelazamiento de los temas entrega y reencuentro, analizando estas experiencias desde la perspectiva de la madre biológica. Este trabajo parte de un caso paradigmático que se llevó a cabo en un Juzgado de la Infancia, Juventud y Persona Mayor del Estado de Río de Janeiro y que culminó en el contacto entre la adoptada y su madre, por iniciativa de esta última, mediado por el Poder Judicial. Este estudio cualitativo realizó una entrevista semiestructurada con la madre biológica cuatro años después de su solicitud a la Justicia. A los datos obtenidos en la entrevista se aplicaron el método de análisis de contenido en su vertiente categórica, en el cual surgieron dos categorías: entrega en adopción y secretos; reencuentro: motivaciones y trayectorias. Se encontró que la falta de estudios brasileños sobre reencuentro apunta a que el concepto del sujeto todavía es un tabú. Se constató que luego del encuentro la madre biológica pasó por una autotransformación, lo que favoreció la ruptura del secreto sobre la entrega y parte de su historia. Es necesario realizar más investigaciones sobre el tema, incluida la posibilidad de insertar al Poder Judicial como mediador de tales demandas.(AU)

Estudos funcionais e biológicos associados à interação de DUSP3 com a proteína HNRNPC1/C2 / Functional and biological studies associated to DUSP3 and HNRNPC1/C2 protein inte ractions

A regulação da fosforilação/desfosforilação das proteínas é o eixo central de muitas cascatas de sinalização. A fosfatase DUSP3, constituída apenas por um único domínio catalítico, desempenha papéis fundamentais na proliferação e senescência celular. Nas células HeLa, submetidas ao estresse genotóxico, o DUSP3 interage fisicamente com as proteínas HNRNPC, mas o efeito dessa função molecular ainda é desconhecido. Aqui demostramos que a ausência de DUPS3 mantem a proteína HNRNPC1/C2 num estado hiperfosforilado. Para entender melhor o envolvimento da interação DUSP3-HNRNPC nas funções biológicas da HNRNPC1/C2, foram estudadas células de fibroblasto deficientes de DUSP3. Foi analisado o efeito da deficiência de DUSP3 na biogênese dos ribossomos através do ensaio de perfil de polirribossomos e quantificação dos rRNAs com RT-qPCR. Os resultados mostraram que a deficiência de DUSP3 não afeta a maturação das subunidades ribossômicas, mas teria um impacto na transcrição dos pré-rRNAs e no acumulo das espécies 47S/45S. A expressado de genes contendo sequencias IRES foi analisado através do RT-qPCR e sua tradução ao longo do ciclo e em condições de estresse. Da expressão, não existe nenhuma diferença nos níveis de transcrição dos genes c-myc e xiap nas células normais e deficientes de DUSP3 em condições basais. Embora a síntese destas proteínas é maior nas células deficientes, mantendo um nível maior de tradução ao longo de todo o ciclo. Sob condições de estresse, esta duas proteínas sempre mantem uma maior expressão nas células Knockdown para DUSP3. Neste trabalho também foi estabelecido a presença de DUSP3 nos complexos da subunidade 40S, através do analise das frações obtidas do ensaio de polirribossomos e interação in vitro (Co-IP). A presença de DUSP3 nas subunidades 40S, os monossomas 80S e polissomos poderia ser através da interação direta com proteínas que possuem um domínio RRM e seria dependente dos complexos formados pelas proteínas e seus RNAs alvos. Aqui mostramos a interação in vitro de DUSP3 com a proteína PABP (com quatro domínios RRM), proteína que tem um papel importante na manutenção da taxa global de tradução, esta interação é enfraquecida na ausência de RNAs. A deficiência de DUSP3 também teria um impacto na interação das proteínas HNRNPC1/C2 e P53 in vitro. A ausência de DUSP3 diminui a interação HNRNPC-P53 através da hiperfosforilação da proteina HNRNPC1/C2. A perda desta interação, aumentaria os níveis da proteína P53 na célula deficiente de DUSP3 e poderia gerar parada no ciclo celular. Através de ensaios de imunofluorescência, se observo uma maior taxa de transcrição global na célula deficiente de DUSP3. Por fim, aqui demostramos que a interação direta de DUSP3 e HNRNPC1/C2 vai permitir a regulação das funções biológicas desta proteína, e a ausência de DUSP3 vai ter efeitos pleiotrópicos na homeostase da célula

inglêsProtein phosphorylation/dephosphorylation regulation is a central axis of many signaling cascades. DUSP3 phosphatase, consisting only of a single catalytic domain, plays key roles in cell proliferation and senescence. In HeLa cells subjected to genotoxic stress, DUSP3 physically interacts with HNRNPC proteins, but the effect of this molecular function is still unknown. Here we demonstrate that the absence of DUPS3 keeps the HNRNPC1/C2 proteins in a hyperphosphorylated state. To better understand the involvement of DUSP3- HNRNPC interaction on the biological functions of HNRNPC1/C2, DUSP3 deficient fibroblast cells were studied. The effect of DUSP3 deficiency on ribosome biogenesis was analyzed by polyribosome profile assay and RT-qPCR for rRNA quantification. The results showed that DUSP3 deficiency does not affect ribosomal subunit maturation, but would have an impact on transcription of pre-rRNAs and accumulation of 47S / 45S species. The expression of genes containing IRES sequences was analyzed by RT-qPCR and their translation throughout the cycle and under stress conditions. From expression, there is no difference in transcriptional levels of c-myc and xiap genes in normal and DUSP3 deficient cells under basal conditions. Although, the synthesis of these proteins is higher in deficient cells and these maintain a higher level of translation throughout the cell cycle. Under stress conditions, these two proteins always maintain higher expression in Knockdown cells for DUSP3. In this work, the presence of DUSP3 in the 40S ribosomal subunit complexes was also established by analyzing the fractions obtained from the polyribosome assay and in vitro interaction (CoIP). The presence of DUSP3 in the 40S subunits, 80S monosomes and polysomes could be through direct interaction with proteins that have an RRM domain and would be dependent on the complexes formed by the proteins and their target RNAs. Here we show the in vitro interaction of DUSP3 with PABP protein (with four RRM domains), a protein that plays an important role in maintaining the overall translation rate, this interaction is weakened in the absence of RNAs. DUSP3 deficiency would also have an impact on the interaction of HNRNPC1/C2 and P53 proteins in vitro. The absence of DUSP3 decreases HNRNPC-P53 interaction through hyperphosphorylation of the HNRNPC1/C2 proteins. Loss of this interaction would increase P53 protein levels in the DUSP3 deficient cell and could lead to cell cycle arrest. Through immunofluorescence assays, a higher overall transcription rate is observed in the DUSP3 deficient cell. Finally, we demonstrate that the direct interaction of DUSP3 and HNRNPC1/C2 will allow the regulation of the biological functions of this protein, and the absence of DUSP3 will have pleiotropic effects on cell homeostasis

On the origin of life

The origin of life is a very rich field, filled with possibilities and ripe for discovery. RNA replication requires chemical energy and vesicle division is easy to do with mechanical energy. These requirements point to a surface lake, perhaps at some time following the period of concentrated cyanide chemistry that gave rise to nucleotides, amino acids and (maybe) fatty acids. A second requirement follows specifically from the nature of the RNA replication cycle, which requires generally cool to moderate temperatures for the copying chemistry, punctuated by brief periods of high temperature for strand separation. Remarkably, lakes in a geothermal active area provide just such a fluctuating temperature environment, because lakes similar to Yellowstone can be generally cool (even ice covered in winter), but they contain numerous hydrothermal vents that emit streams of hot water. Protocells in such an environment would occasionally be swept into these hot water streams, where the transient high temperature exposure would cause RNA strand separation. However, the protocells would be quickly mixed with surrounding cold water, and would therefore cool quickly, before their delicate RNA molecules could be destroyed by heat. Because of the combination of favorable chemical and physical environments, this could be the most likely scenario for the early Earth environment that nurtured the origin of life.

El origen de la vida es un campo lleno de posibilidades, listas para ser descubiertas. Basados en lo conocido sobre modelos de sistemas de membranas y sobre ARN, se comienza a deducir algunas características necesarias del entorno inicial. La replicación del ARN requiere energía química y la división de la vesícula es fácil de hacer con la energía mecánica. Estos requisitos apuntan a la superficie de un lago, en algún momento después del período en que la química del cianuro concentrado dio origen a los nucleótidos, aminoácidos y (tal vez) ácidos grasos. Un segundo requisito surge de la naturaleza del ciclo de replicación del ARN, que requiere temperaturas moderadas para la química de la copia, interrumpidas por breves períodos de alta temperatura para la separación en hebras. Solo lagos en una zona de actividad geotérmica proporcionan un ambiente de temperatura tan oscilante, lagos similares a Yellowstone pueden ser frescos (cubiertos de hielo en invierno), pero contienen numerosas fuentes hidrotermales que emiten chorros de agua caliente. Las protocélulas, en un ambiente así, de vez en cuando serían barridas en estas corrientes de alta temperatura, que podrían causar la separación transitoria de ARN de cadena. Pero las protocélulas serían mezcladas con rapidez en la zona de agua fría, y enfriarse antes de que sus delicadas moléculas de ARN fueran destruidas por el calor. La combinación de estos ambientes químicos y físicos favorables serían el escenario más probable del medio ambiente de la Tierra temprana que nutrió el origen de la vida.

Así comienza la vida plaquetaria: un viaje desde los megacariocitos medulares a las plaquetas circulantes / The birth of a platelet: A trip from bone marrow megakaryocytes to circulating platelets / Começa assim a vida plaquetária: uma viagem desde os megacariócitos medulares às plaquetas circulantes

Tal vez por haber sido consideradas como simples restos citoplasmáticos de los megacariocitos encargadas únicamente de la reparación de heridas, las plaquetas han tenido un lugar secundario en cuanto a su estudio e interés en comparación con los otros componentes celulares de la sangre. Sin embargo, en los últimos 20 años se ha avanzado mucho en el conocimiento de estas fascinantes células que de a poco han recobrado un lugar destacado dentro de la hematología. A lo largo de este trabajo se han revisado los aportes más destacados y novedosos acerca del proceso de biogénesis plaquetaria, su regulación por el microambiente medular y factores humorales, recorriendo desde la generación de megacariocitos hasta la liberación de plaquetas libres.

Perhaps for being considered mere megakaryocyte cytoplasmic debris responsible for wound repair alone, platelets have had a secondary role when compared to other cellular blood components. However, in the last 20 years we have learned much more about these fascinating cells, which have slowly regained a prominent place in hematology. This review discusses the most outstanding and novel contributions on platelet biogenesis, its regulation by the bone marrow microenvironment and humoral factors, analyzing from megakaryocyte generation to platelet release.

Talvez por ter sido considerados simples restos citoplasmáticos dos megacariócitos, encarregadas apenas da reparação de feridas, as plaquetas têm tido um lugar secundário quanto a seu estudo e interesse em comparação com os outros componentes celulares do sangue. Entretanto, nos últimos 20 anos foi possível aprender muito a respeito destas fascinantes células que aos poucos foram recobrando um lugar de destaque dentro da hematologia. Ao longo deste trabalho foram revistas as contribuições mais destacadas e novas acerca do processo de biogênese plaquetária, sua regulação pelo microambiente medular e fatores humorais, percorrendo desde a geração de megacariócitos até a liberação de plaquetas livres.

Teoria do design inteligente / Theory of intelligent design

A teoria do design inteligente (TDI) é definida como “uma teoria científica que defende que certas características do universo e dos seres vivos são mais bem explicadas por uma causa inteligente ao invés de processo não direcionado, como a seleção natural”1. Também pode ser entendida como o estudo dos padrões na natureza que carregam as marcas de causalidade inteligente. Cada vez mais adeptos têm se unido à comunidade pró-design...

The importance of resveratrol in tissue aging: a review

Some theories point to the relationship between endocrinology and aging, while others support that agingis either linked to the immune system, or related to the thelomeres shortening and free radicals. However,what deserve the attention from the scientific community are the silent regulatory proteins 2 (Sir2). Theseproteins are dependent on Nicotinamide Adenin Dinucleodide (NAD+) and can be activated by either caloricrestriction or by a poliphenol, the resveratrol (3,5,4’-triidroxistilbene), also known as 3,5,4’stilbenetriol.Besides exerting benefits to health as a whole, resveratrol has been demonstrated to promote live extension.The resveratrol bring a diversity of benefits to health because they activate the same metabolic pathways asthose activated by the caloric restriction, demonstrating to be efficient to increase the lifespan. Moreover, itseems that the regulation of the mitochondrial biogenesis by the resveratrol is a potential therapeutic targetto deal with endothelial dysfunction and vascular diseases. In addition resveratrol could act as a prominentactivator of Sirt1 by amplifying the relationship NAD+/NADH, by increasing the expression of PGC-1 andby decreasing the expression of UCP2. A functional analysis of the resveratrol acting over the aging and thelife extension brings up the need for the investigation of multiple tissues by the fact that resveratrol could beassociated with the expression of genes in distinct metabolic functions that could be affected by aging.

Biogênese, estabilidade e localização sub-celular de RNAs não-codificadores longos expressos em regiões intrônicas do genoma humano / Biogenesis, stability and sub-cellular localization of long non-coding RNAs expressed in intronic regions of the human genome

Trabalhos recentes indicam que a maior parte do transcriptoma de células de mamíferos é composto por RNAs não-codificadores de proteínas (ncRNAs). Nosso grupo tem identificado e caracterizado ncRNAs longos (>200 nt), sem splicing, expressos em regiões intrônicas de genes codificadores de proteína. Contudo, a biogênese, processamento e localização sub-celular desta classe de RNAs permanecem desconhecidos. Este trabalho teve como objetivos i) investigar a contribuição da RNA Polimerase II (RNAP II) na transcrição de ncRNAs intrônicos, ii) avaliar a meia-vida destes ncRNAs em relação a mRNAs, e iii) verificar a distribuição sub-celular de ncRNAs intrônicos. Os resultados obtidos indicaram que ncRNAs intrônicos são predominantemente transcritos pela RNAP II a partir de regiões promotoras funcionalmente semelhantes as que controlam a transcrição de mRNAs. Ensaios de estabilidade revelaram que, em média, ncRNAs intrônicos possuem meia-vida igual ou maior (3,4h a 4,2h) do que mRNAs (3,1h). A maior parte dos ncRNAs intrônicos possui estrutura cap 5', sugerindo que sejam estabilizados para desempenhar papéis na biologia da célula que não dependam de um rápido turnover. A maior parte dos ncRNAs intrônicos é exportada para o citoplasma, indicando que devam exercer alguma função biológica neste compartimento. Em conjunto, este trabalho fornece informações novas a respeito da biogênese, estabilidade e localização sub-celular ncRNAs intrônicos expressos em células humanas, contribuindo para avançar o conhecimento sobre esta classe de transcritos celulares.

Recent studies have shown that most of the mammalian transcriptome is comprised of non-coding RNAs (lncRNAs). Our group has identified and characterized long (>200 nt), unspliced lncRNAs expressed in intronic regions of protein coding genes. However, the biogenesis, processing, stability and subcellular localization of members from this RNA class remain unknown. The aims of this work were i) to investigate the contribution of RNA Polymerase II (RNAP II) to the transcription of intronic, ii) to evaluate the half-life of these ncRNAs relative to mRNAs, and iii) determine their subcellular distribution. Our results indicate that intronic ncRNAs are predominantly transcribed by RNAP II from promoter regions functionally similar to those that control the transcription of mRNAs. Stability assays revealed that intronic ncRNAs have an average half-life equal or greater (3.4h to 4.2h) than mRNAs (3.1h). The majority of intronic ncRNAs have 5' cap modification suggesting that these transcripts are stabilized, possibly to exert roles in the biology of the cell that does not depend on a rapid turnover. Although intronic ncRNAs do not encode proteins, most of these transcripts are transported to the cytoplasm which indicates that they may perform some biological function in this compartment. Altogether, this study reveals with novel information regarding the biogenesis, stability and subcellular localization of intronic ncRNAs expressed in human cells, thus contributing to advance the knowledge on this class of cellular transcripts.

Mecanismos celulares e moleculares modulados por PGE2 e TGFβ durante a progressão do câncer colorretal

Um dos primeiros eventos associados à progressão do câncer colorretal (CCR) é a perda dos contatos célula-célula, seguido da aquisição de um fenótipo indiferenciado e aumento na motilidade celular. Estes eventos estão associados com um processo conhecido como transição epitélio-mesenquimal (TEM), na qual as células adquirem capacidade para invadir tecidos vizinhos. A biogênese deste tipo de câncer envolve uma série de fatores predisponentes dentre os quais está o processo infamatório, onde a prostaglandina E2 (PGE2) e o fator transformador β de crescimento (TGFβ) cumprem importante função. Vários estudos têm mostrado que a PGE2 induz proliferação, migração e invasão celular. Já o TGFβ, apesar de ter uma função dual como promotor ou supressor da tumorigênese, é conhecido também por promover TEM em diferentes tipos de câncer. No entanto, a associação entre as vias de sinalização celular ativada por estes agentes na indução da perda da adesão célula-célula e da TEM em CCR não é conhecida. No presente estudo, usando linhagens celulares de CCR, analisamos a associação entre a PGE2 e o TGFβ sobre as alterações no fenótipo celular e eventos relacionados com a TEM. Na primeira etapa do estudo, usando células Caco-2, mostramos que o tratamento com PGE2 promoveu alterações na localização e função de proteínas do complexo juncional apical (CJA) concomitantemente com a perda da funcionalidade da barreira paracelular. Mostramos também que a via de sinalização responsável nesse evento foi a PKC através de um mecanismo envolvendo os receptores prostanóides EP1 e EP2 e a proteína claudina-1 na modulação do CJA. Na segunda etapa do estudo, analisamos eventos relacionados com a TEM usando linhagens celulares de CCR que diferem no fenótipo e no grau de invasão mediante tratamentos com PGE2 e TGFβ...

The lost of cell-cell adhesion followed by increased motility and acquisition of an undifferentiated phenotype are initial events associated with colorectal cancer (CCR) progression. These events are associated with a process known as epithelial-mesenchymal transition (TEM) in which cells acquire the ability to invade neighboring tissues. The biogenesis of this type of cancer predisposes a series of conditions for which the inflammatory process, known as an important inductor of prostaglandin E2 (PGE2) and tumor growth factor β (TGFβ), plays an important function. Various studies have shown that PGE2 is able to induce proliferation, migration and invasion. TGFβ plays a dual function either as promoter or tumor suppressor and is also a TEM inductor in different types of cancer. However, a crosslink between the cell signaling pathways activated by these agents in relation to lost of cell-cell adhesion and TEM development in CCR is unknown. In the present study, using CCR cell lines, we analyze the association between PGE2 and TGFβ...

Identificação e análise de expressão de RNAs intrônicos não codificadores humanos / Identification and expression analysis of human intronic noncoding RNAs

Nesse trabalho, nós mostramos estudos em larga-escala de RNAs não codificadores antisenso que são transcritos em regiões intrônicas de genes humanos. Alguns destes transcritos intrônicos possuem níveis de expressão correlacionados ao grau de diferenciação tumoral de câncer de próstata, apontando para uma relevância biológica destas mensagens em doenças complexas como o câncer. Nós também avaliamos a existência de um mecanismo comum de regulação de transcrição, compartilhado por mRNAs codificadores de proteína e RNAs intrônicos, através de análises de perfís de expressão de uma linhagem tumoral de próstata estimulada por andrógeno. A análise de ESTs e mRNAs depositados em bancos públicos de seqüência revelou mais de 55 mil RNAs Totalmente Intrônicos Não-codificadores (TIN), transcritos dos íntrons de 74% de todos os genes RefSeq únicos. Guiados por esta informação, nós desenhamos uma plataforma de oligonucleotídeos contendo sondas senso e antisenso para cada um de 7.520 transcritos TIN selecionados aleatoriamente, além de sondas para os genes codificadores de proteína correspondentes. Nos identificamos assinaturas intrônicas e exônicas de expressão tecido-específicas em fígado, próstata e rim.Os RNAs TIN antisenso mais altamente expressos eram transcritos de íntrons de genes codificadores de proteína enriquecidos na categoria “Regulação da transcrição...

From geochemistry and biochemistry to prebiotic evolution... we necessarily enter into Gánti's fluid automata

The present study is just an overview of the opening of the geochemical stage for the appearance of life. But that opening would not have been sufficient for the intellectual discovery of the origin of life! The excellent works and many commendable efforts that advance this explanation have not shown the fundamental elements that participate in the theoretical frame of biological evolution. The latter imply the existence of evolutionary transitions and the production of new levels of organization. In this brief analysis we do not intend to introduce the audience to the philosophy of biology. But we do expect to provide a modest overview, in which the geochemical chemolithoautotrophic opening of the stage should be seen, at most, as the initial metabolism that enabled organic compounds to follow the road where a chemical fluid machinery was thus able to undertake the more [quot ]sublime[quot ] course of organic biological evolution. We think that Tibor Gánti's chemoton is the most significant contribution to theoretical biology, and the only course now available to comprehend the unit of evolution problem without the structuralist and functionalist conflict prevalent in theoretical biology. In our opinion Gánti's chemoton theory travels to the [quot ]locus[quot ] where evolutionary theory dares to extend itself to entities at many levels of structural organization, beyond the gene or the group above. Therefore, in this and subsequent papers on the prebiotic conditions for the eventual appearance of the genetic code, we explore the formation and the presence of metal sulfide minerals, from the assembly of metal sulfide clusters through the precipitation of nanocrystals and the further reactions resulting in bulk metal sulfide phases. We endeavor to characterize pristine reactions and the modern surfaces, utilizing traditional surface science techniques and computational methods. Moreover, mechanistic details of the overall...

Identificacao e caracterizacao de transcritos humanos: novas famílias de pequenas GTPases e novos Longos RNAs intrônicos não-codificantes / Identification and caracterization of human transcripts: novel small GTPase gene families and novel Long Intronic non-coding RNAs

Terminado o sequenciamento do genoma humano, as atenções se voltaram para a determinação do conjunto completo de transcritos humanos. Diversos trabalhos sugerem que enquanto apenas uma pequena fração de mRNAs codificantes para proteína não é conhecida, existe um grande número de RNAs não-codificantes (ncRNAs) ainda não caracterizados. Nesse contexto, o presente trabalho visou explorar as informações de expressão gênica contidas em ESTs para identificar e caracterizar novos transcritos humanos. A busca genômica por membros de famílias gênicas relacionadas com câncer levou a identificação de novas pequenas GTPases, destacando uma subfamília que deve apresentar função supressora tumoral em próstata. Uma classe de ncRNAs longos, sem splicing, expressos antisenso a partir de regiões intrônicas foi descrita utilizando plataformas de microarrays, construídas pelo grupo, enriquecidas com seqüências sem anotação. O perfil de expressão de 23 ncRNAs intrônicos estava significativamente correlacionado com o grau de diferenciação de tumores de próstata (Gleason Score), e pode ser utilizado como candidato a marcador molecular de prognóstico. Um total de 39 ncRNAs intrônicos responderam à estimulação por andrógeno, apontando para um mecanismo regulatório da expressão intrônica por sinais fisiológicos hormonais. A biogênese da expressão intrônica parece ser complexa, pois uma fração não é transcrita pela RNA Polimerase II. A transcrição intrônica estava correlacionada com uso de exons em células tratadas com andrógeno. Assinaturas de expressão intrônica conservadas em tecidos humanos e de camundongos, e interações de transcritos intrônicos com proteínas regulatórias foram observadas. Este trabalho contribui com novas e originais evidências que dão apoio ao papel postulado para esses ncRNAs no controle fino do programa transcricional humano

Paracoccidioides brasiliensis RNA biogenesis apparatus revealed by functional genome analysis

The RNA biogenesis machinery of Paracoccidioides brasiliensis was assessed by comparative analyses of PbAESTs (P. brasiliensis assembled expressed sequence tags (ESTs)) with sequences from Saccharomyces cerevisiae MIPS database. PbAESTs related to almost all categories of S. cerevisiae RNA biogenesis were found. Two of the 12 S. cerevisiae RNA Pol II core subunits, Rpb3 and Rpb7, were found, probably reflecting the growth phase from which the cDNA libraries used in ESTs generation were constructed, as well as the low abundance of some of these transcripts. We have also found orthologs to TATA-box-binding protein (TBP), and at least one subunit of each TBP-associated factors (TFII) in P. brasiliensis transcriptome, except TFIIB. Genes associated to the chromatin remodeling complex, as well as transcription factors probably involved in the control of genes associated to a sexual cycle and virulence, were also identified. With respect to the pre-mRNA processing, 65 PbAEST orthologs to S. cerevisiae basal splicing machinery and 21 orthologs of 5'- and 3'-end formation processes were found. Components involved in RNA interference were detected, suggesting that this gene expression regulation mechanism is probably used by P. brasiliensis. Twelve PbAESTs related to Pol I and Pol III machineries were assigned as S. cerevisiae orthologs. Finally, 25 and 10 PbAESTs associated to rRNA and tRNA processing, respectively, were detected. Taken together, our results enable us to depict, for the first time, a global view of transcription and RNA processing in P. brasiliensis.

O ciclo da vesícula sináptica: panorama molecular / The synaptic vesicle cycle: a molecular overview

A presente revisäo aborda um ponto específico dentro da sinapse, provavelmente o mais crucial: as interações moleculares entre proteínas da membrana das vesículas sinápticas e da membrana plasmática pré-sináptica. Uma linguagem molecular muito precisa permite a fusäo entre as membranas da vesícula sináptica e a plasmática, fusäo que libera o neurotransmissor contido na vesícula para a fenda sináptica. A vesícula sináptica foi alvo, nos últimos anos, de uma verdadeira dissecçäo molecular. É a organela celular com a mais completa descriçäo estrutural e cinética de seus componentes protéicos. A descoberta de famílias de proteínas homólogas, presentes em todos os tipos celulares eucariotos, como a Rab e a SNARE (SNAP receptors), demonstrou que o ciclo da vesícula sináptica é uma interaçäo entre sistemas protéicos, universais e específicos, de regulaçäo do tráfego vesícular e de fusäo de membranas lipídicas. O endereçamento e o controle do fluxo das estruturas precursoras das vesículas sinápticas até o terminal sináptico säo realizados pela família Rab de pequenas GTPases. As proteínas da superfamília das kinesinas säo as responsáveis pela açäo mecânica no transporte anterógrado das estruturas precursoras, ao longo dos microtúbulos do citoesqueleto axonal. As proteínas SNARE realizam a fusäo das vesículas com a membrana do terminal pré-sináptico. A proteína sinaptotagmina controla a formaçäo do complexo SNARE em um modo dependente de cálcio. Embora já se tenha conhecimento da maior parte das proteínas envolvidas no ciclo da vesícula sináptica, tem-se ainda que elucidar muitas das funções e interrelações entre elas

Biogênese da fímbria AAF/II de Escherichia coli enteroagregativa / AAF/II fimbriae biogenesis in enteroaggregative Escherichia coli

Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é um patógeno emergente, associado à doença diarreica, que apresenta como característica o padrao de adesao agregativa em células HEp-2. Vários fatores de virulência já foram descritos em amostras de EAEC, utilizando como modelo a amostra 042, comprovadamente virulenta para humanos. Dentre esses fatores estao as enterotoxinas PET e EAST1, além da fímbria denominada AAF/II. Todos esses fatores sao codificados pelo plasmídios de 65 MDa (pAA2). Embora seu papel na virulência tenha sido demonstrado, os determinantes genéticos da biogênese de AAF/II nao eram conhecidos. Para tanto, no presente trabalho foram realizados experimentos para caracterizaçao da regiao de pAA2 relacionada à biogènese de AAF/II. Através da análise das seqüências de nucleotídeos de uma regiao de 25 kb do plasmídio pAA2, foi demonstrado que a mesma alberga os, genes das enterotoxinas (pet e astA), flanqueados por duas regioes relacionadas com a biogênese de AAF/II (regiao l e 2), além do ativador de transcriçao (aggm relacionado à sua expressao. A organizaçao genética da biogenêse de AAF/II identificada na amostra 042 é única, uma vez que na família Dr de adesinas, da qual AAF/II é membro, esses genes estao organizados em um operon. Nessa organizaçao exclusiva, a regiao l apresenta o cluster "chaperonina-pilina-ativador de transcriçao" (aafD-aafA-aggR, enquanto a regiao 2, distante em 12 kb, apresenta o cluster "chaperonina nao funcional-usher-invasina". As duas regioes sao flanqueadas por Seqüências de Inserçao sugerindo que essa regiao seja um local em pAA2 de alta taxa de recombinaçao. A análise de homologias a nível de aminoácidos indicaram que a regiao l deriva do operon da fímbria AAF/I, enquanto a regiao 2 deriva do operon das adesinas AfaE de E. coli uropatogênicas. Os dados de ativaçao da transcriçao através da regulaçao por aggR também corroboram com essa hipótese, pois apenas os genes da regiao l sao fortemente regulados pelo mesmo, como ocorre em AAF/I. Através da mutagênese nao-polar, foi demonstrado que os genes essenciais para a expressao de AAF/II sao: aafA, aafC, aafD e aggR, os quais correspondem à pilina, usher, chaperonina e ativador de transcriçao, respectivamente. Esse locus descrito em pAA2 deve um representar um importante set de determinantes de virulência em outras amostras de EAEC, uma vez que apresenta os potenciais fatores é até entao descritos na amostra 042. Além de AAF/II, a fimbria AAF/I está...(au)