Detecção de anticorpos anti-Rickettsia rickettsii em cães residentes em área negligenciada no município de São Paulo, SP, Brasil / [Detection of anti-Rickettsia rickettsii antibodies in dogs living in a neglected area in São Paulo, SP, Brazil]

A febre maculosa brasileira (FMB), descrita inicialmente nos Estados Unidos como febre maculosa das Montanhas Rochosas, é uma antropozoonose relatada apenas no continente americano e causada pela bactéria Rickettsia rickettsii. No Brasil a transmissão ocorre sobretudo pela picada de carrapatos do gênero Amblyomma spp. A doença foi inicialmente descrita como de transmissão em áreas rurais e silvestres, no entanto áreas periurbanas e urbanas vêm apresentando casos, principalmente relacionados com a presença de humanos residindo em pequenos fragmentos de mata ciliar. O presente estudo teve por objetivo elucidar a dispersão da FMB nas proximidades dos reservatórios Guarapiranga e Billings, na cidade de São Paulo, SP. Para tanto, a presença de anticorpos anti-R. rickettsii, Rickettsia parkeri e Rickettsia bellii foi avaliada em cães atendidos nas campanhas de esterilização cirúrgica e residentes ao redor dos reservatórios. Foram coletadas amostras de 393 cães, e as amostras de soro foram analisadas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 1:64. Os títulos para R. rickettsii variaram de 256 a 4096, com positividade de 3,3% (13/393); para R. bellii, de 128 a 1024 e 4,1% (16/393) de positivos, e um único animal (0,25%) foi soropositivo para R. parkeri, com título de 128. Os achados permitem concluir que a região de estudo apresenta condições de se tornar uma possível área com casos de FMB, pois comporta fragmentação de Mata Atlântica, condições essas ideais para a manutenção do vetor do gênero Amblyomma já descrito na região, bem como para a presença da Rickettsia rickettsii circulante entre os cães, confirmada pela existência de anticorpos. Condutas referentes à conscientização da população por meio de trabalhos educacionais devem ser implantadas para a prevenção da doença na população da área.(AU)

Brazilian Spotted Fever (BSF), initially described in the United States as Rocky Mountain Spotted Fever, is an anthropozoonosis reported only in the Americas and caused by the bacterium Rickettsia rickettsii. In Brazil, transmission occurs mainly through tick bites of the genus Amblyomma spp. The disease was initially described as transmission of rural and wild areas; however, peri-urban and urban areas have been presenting cases, mainly related to the presence of humans residing in small fragments of riparian forest. The present study aimed to elucidate the dispersal of BSF near the Guarapiranga and Billings Reservoirs, in the city of São Paulo, SP. The presence of anti-R. rickettsii, Rickettsia parkeri and Rickettsia bellii antibodies were evaluated in dogs treated in surgical sterilization campaigns and residents around the Reservoirs. Samples were collected from 393 dogs and serum samples were analyzed by indirect immunofluorescence reaction (RIFI) with a cutoff of 1:64. The titles for R. rickettsii varied from 256 to 4096 with a positivity of 3.3% (13/393); for R. bellii from 128 to 1024 and 4.1% (16/393) of positive and a single animal (0.25%) was seropositive for R. parkeri with a titre of 128. The findings allow us to conclude that the study region has conditions to become a possible area with BSF cases, as it involves Atlantic Forest, ideal conditions for the maintenance of the vector of the genus Amblyomma already described in the region and the presence of circulating Rickettsia rickettsii among dogs, confirmed by the presence of antibodies. Conducts regarding the awareness of the population through educational work should be implemented to prevent the disease in the population of the area.(AU)

Diferenciação morfométrica entre larvas de Amblyomma sculptum Berlese, 1888 e Amblyomma dubitatum Neumann, 1899 / Morphometric differentiation between larvae of Amblyomma sculptum Berlese, 1888 and Amblyomma dubitatum Neumann, 1899

Os carrapatos estão envolvidos em processos biológicos de uma grande variedade de organismos patogênicos. O gênero Amblyomma é o de maior importância médica, com a espécie Amblyomma sculptum Berlese, 1888 envolvida no ciclo de transmissão da febre maculosa brasileira (FMB). Neste estudo, objetivou-se a validação molecular para uma diferenciação na característica morfométrica e no tamanho de idiossoma de larvas de duas espécies de carrapatos, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899 e A. sculptum. Larvas não alimentadas foram coletadas em duas áreas de transmissão para FMB, por meio da técnica de armadilha atrativa de CO2. Foram identificadas em nível de espécie por morfometria comparativa, análise molecular por PCR e sequenciamento genômico, com validação pela análise de concordância pelo teste Kappa. As larvas de A. dubitatum apresentaram um comprimento significativamente maior que as larvas de A. sculptum. Embora nenhuma outra espécie do gênero Amblyomma tenha sido testada neste estudo, essa técnica poderá ser utilizada nos locais onde levantamentos acarológicos prévios, baseados nos estádios de ninfa e adultos, indicaram a presença de apenas A. sculptum e A. dubitatum, geralmente mantidos por capivaras. Digno de nota, essa condição é muito comum ao longo das áreas endêmicas para FMB na região Sudeste do Brasil.(AU)

Ticks are involved in biological processes of a wide variety of pathogenic organisms. The genus Amblyomma presents the greatest medical importance, with the species Amblyomma sculptum Berlese, 1888 involved in the transmission cycle of Brazilian Spotted Fever (BSF). In this study, we performed a molecular validation of the morphometric differentiation based on the idiosomal length of the larvae of A. dubitatum and A. sculptum. Unfed larvae were collected in two BSF-transmission areas, using the attractive CO2 trap technique. Larvae were identified at the species level by comparative morphometry, molecular analysis by PCR and genomic sequencing, with validation through agreement analysis by the Kappa test. The larvae of A. dubitatum showed a significantly longer idiosomal length than A. sculptum larvae. Although no other species of the genus Amblyomma has been tested in this study, this technique can be applied to places where previous acarological surveillances based on adult and nymphal ticks stages have indicated the presence of only A. sculptum and A. dubitatum, usually sustained by capybaras. Noteworthy, this condition is very common among many BSF-endemic areas in southeastern Brazil.(AU)

Diversidade de carrapatos (Acari: Ixodidae) em animais silvestres recebidos pelo Zoológico Municipal de Guarulhos / Tick diversity (Acari: Ixodidae) on wild animals received by the Municipal Zoo of Guarulhos

O Zoológico Municipal de Guarulhos, localizado no estado de São Paulo, recebe e recupera animais silvestres do próprio município e de alguns municípios limítrofes. Entre os anos de 1997 e 2016 foram coletados carrapatos de animais silvestres (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus e Hydrochoerus hydrochaeris) atendidos pelo Zoológico. Foram identificadas as seguintes espécies de carrapatos: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca e Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899 e Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Apesar de todas as associações carrapato-hospedeiro já terem sido previamente relatadas no território brasileiro, o presente estudo registra pela primeira vez um ginandromorfo de A. dubitatum.

The Municipal Zoo of Guarulhos, located in the state of São Paulo, receives and recovers wild animals from the Guarulhos municipality and from some neighboring municipalities. Between the years of 1997 and 2016 ticks were collected on wild animals (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus, and Hydrochoerus hydrochaeris) attended by the Zoo. The following tick species have been identified: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca and Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899, and Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Although all tick-host associations have previously been reported in Brazilian territory, the present study records for the first time a gynandromorph of A. dubitatum.

Diversidade de carrapatos (Acari: Ixodidae) em animais silvestres recebidos pelo Zoológico Municipal de Guarulhos / Tick diversity (Acari: Ixodidae) on wild animals received by the Municipal Zoo of Guarulhos

O Zoológico Municipal de Guarulhos, localizado no estado de São Paulo, recebe e recupera animais silvestres do próprio município e de alguns municípios limítrofes. Entre os anos de 1997 e 2016 foram coletados carrapatos de animais silvestres (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus e Hydrochoerus hydrochaeris) atendidos pelo Zoológico. Foram identificadas as seguintes espécies de carrapatos: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca e Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899 e Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Apesar de todas as associações carrapato-hospedeiro já terem sido previamente relatadas no território brasileiro, o presente estudo registra pela primeira vez um ginandromorfo de A. dubitatum.(AU)

The Municipal Zoo of Guarulhos, located in the state of São Paulo, receives and recovers wild animals from the Guarulhos municipality and from some neighboring municipalities. Between the years of 1997 and 2016 ticks were collected on wild animals (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus, and Hydrochoerus hydrochaeris) attended by the Zoo. The following tick species have been identified: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca and Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899, and Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Although all tick-host associations have previously been reported in Brazilian territory, the present study records for the first time a gynandromorph of A. dubitatum.(AU)

A manutenção de Ehrlichia canis em macrófagos é dependente da evasão lisossomal / The maintenance of Ehrlichia canis in macrophages is dependent on lysosomal evasion

Ehrlichia canis é o agente etiológico de Erliquiose Monocítica Canina (EMC), uma das mais importantes doenças infecciosas de cães no Brasil. Bactérias intracelulares obrigatórias de monócitos e macrófagos, como E. canis, desenvolvem diversos mecanismos celulares para assegurar a sua evasão das defesas do hospedeiro, que envolvem distintas adaptações para sobrevivência nos compartimentos intracelulares. No entanto, estudos sobre essas estratégias ainda são escassos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo investigar se a E. canis possui a capacidade de evitar a fusão de lisossomos às inclusões citoplasmáticas, o que favoreceria sua multiplicação. A fusão de lisossomos com endossomos contendo E. canis foi investigada utilizando cultivo celular de histiócitos caninos (DH82) infectados com a cepa São Paulo de E. canis, em uma momento no qual 50% das células estavam parasitadas. Para esse fim as células infectadas foram marcadas citoquimicamente para fosfatase ácida, uma enzima presente nos compartimentos fusionados a lisossomos. Após o processo de inclusão em resina, os cortes ultrafinos foram analisados e documentados fotograficamente em um microscópio eletrônico de transmissão. Foram reazaliadas comparações entre três pares de controle e grupos experimentais em relação a número de bactérias por célula, número de lisossomos marcados por célula e número de vacúolos marcados contendo E. canis por célula. A análise estatística foi realizada pelo teste de Mann-Whitney, sendo considerados significativos valores p<0,05. A marcação citoquímica da enzima lisossomal não foi observada em vacúolos contendo E. canis íntegras indicando que essas bactérias são capazes de inibir a fusão lisossomal aos endossomos, como um mecanismo de evasão imune. A evasão da fusão lisossomal por inclusões erliquiais é fundamental para a sobrevivência e reprodução do patógeno, apesar de ser baseado em diferentes estratégias de acordo para as espécies de Ehrlichia spp. A demonstração da evasão lisossomal durante a propagação de E. canis serve como base para o desenvolvimento e elaboração de novas estratégias terapêuticas.

Ehrlichia canis is the etiologic agent of canine monocytic ehrlichiosis (CME), one of the most important infectious diseases of dogs in Brazil. Obligate intracellular bacteria of monocytes and macrophages like E. canis develop various cellular mechanisms to avoid host defenses, which involve different adaptations for survival in intracellular compartments. However, studies about these strategies are scarce. Thus, the present study aimed to investigate whether E. canis has the ability to prevent the fusion of lysosomes to cytoplasmic inclusions, which would favor its multiplication. The fusion of lysosomes with endosomes containing E. canis was investigated using cell culture of canine histiocytes (DH82) infected with the São Paulo strain of E. canis when 50% of the cells were parasitized. To this end, infected cells were cytochemistrically labeled for acid phosphatase, an enzyme present in the fused lysosome compartments. After resin embedding process, the ultrathin sections were analyzed and photographically documented in a transmission electron microscope (TEM). We compared three control pairs and experimental groups in relation to the number of bacteria per cell, number lysosomes marked per cell and the number of labeled vacuoles containing E. canis per cell. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney test, at p<0.05 significance level. The cytochemical staining of the lysosomal enzyme was not observed in vacuoles containing intact E. canis indicating that these bacteria are able to inhibit lysosomal fusion to endosomes, as a mechanism of immune evasion. The evasion of lysosomal fusion by erlichia inclusions is critical to the survival and reproduction of the pathogen, despite being based on different strategies according to the species of Ehrlichia spp. Demonstration of lysosomal escape during the propagation of E. canis serves as a basis for the development and design of new therapeutic strategies.

A MANUTENÇÃO DE Ehrlichia canis EM MACRÓFAGOS É DEPENDENTE DA EVASÃO LISOSSOMAL / THE MAINTENANCE OF Ehrlichia canis IN MACROPHAGES IS DEPENDENT ON LYSOSOMAL EVASION

Ehrlichia canis é o agente etiológico de Erliquiose Monocítica Canina (EMC), uma das mais importantes doenças infecciosas de cães no Brasil. Bactérias intracelulares obrigatórias de monócitos e macrófagos, como E. canis, desenvolvem diversos mecanismos celulares para assegurar a sua evasão das defesas do hospedeiro, que envolvem distintas adaptações para sobrevivência nos compartimentos intracelulares. No entanto, estudos sobre essas estratégias ainda são escassos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo investigar se a E. canis possui a capacidade de evitar a fusão de lisossomos às inclusões citoplasmáticas, o que favoreceria sua multiplicação. A fusão de lisossomos com endossomos contendo E. canis foi investigada utilizando cultivo celular de histiócitos caninos (DH82) infectados com a cepa São Paulo de E. canis, em uma momento no qual 50% das células estavam parasitadas. Para esse fim as células infectadas foram marcadas citoquimicamente para fosfatase ácida, uma enzima presente nos compartimentos fusionados a lisossomos. Após o processo de inclusão em

O PROCESSO DE PROPAGAÇÃO DE Ehrlichia canis EM MACRÓFAGOS É DEPENDENTE DO CITOESQUELETO DE ACTINA E DO INFLUXO DE CÁLCIO E FERRO / THE SPREADING PROCESS OF Ehrlichia canis IN MACROPHAGES IS DEPENDENT ON ACTIN CYTOSKELETON AND IRON AND CALCIUM INFLUX

Erliquioses são enfermidades de importância médica e veterinária, causadas por α-proteobactéria Gram-negativa pertencente à ordem Rickettsiales. No Brasil, o principal agente etiológico da Erliquiose Monocítica Canina (EMC) é a Ehrlichia canis, patógeno intracelular obrigatório com tropismo para monócitos e macrófagos. Este microrganismo tem ampla distribuição mundial, mais comumente encontrada em regiões tropicais e subtropicais devido à distribuição geográfica de sua principal vetor, o carrapato Rhipicephalus sanguineus. O processo de invasão já descrito para algumas bactérias deste gênero, tais como E. muris e E. chaffeensis,  compreende quatro fases: adesão, internalização, proliferação intracelular e propagação intercelular. Entretanto, pouco se sabe sobre os mecanismos celulares envolvidos no processo de invasão nas células-alvo por parte da Ehrlichia canis. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o papel do citoesqueleto de actina, do cálcio e do ferro durante o processo de propaga&a

A manutenção de Ehrlichia canis em macrófagos é dependente da evasão lisossomal / The maintenance of Ehrlichia canis in macrophages is dependent on lysosomal evasion

Ehrlichia canis é o agente etiológico de Erliquiose Monocítica Canina (EMC), uma das mais importantes doenças infecciosas de cães no Brasil. Bactérias intracelulares obrigatórias de monócitos e macrófagos, como E. canis, desenvolvem diversos mecanismos celulares para assegurar a sua evasão das defesas do hospedeiro, que envolvem distintas adaptações para sobrevivência nos compartimentos intracelulares. No entanto, estudos sobre essas estratégias ainda são escassos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo investigar se a E. canis possui a capacidade de evitar a fusão de lisossomos às inclusões citoplasmáticas, o que favoreceria sua multiplicação. A fusão de lisossomos com endossomos contendo E. canis foi investigada utilizando cultivo celular de histiócitos caninos (DH82) infectados com a cepa São Paulo de E. canis, em uma momento no qual 50% das células estavam parasitadas. Para esse fim as células infectadas foram marcadas citoquimicamente para fosfatase ácida, uma enzima presente nos compartimentos fusionados a lisossomos. Após o processo de inclusão em resina, os cortes ultrafinos foram analisados e documentados fotograficamente em um microscópio eletrônico de transmissão. Foram reazaliadas comparações entre três pares de controle e grupos experimentais em relação a número de bactérias por célula, número de lisossomos marcados por célula e número de vacúolos marcados contendo E. canis por célula. A análise estatística foi realizada pelo teste de Mann-Whitney, sendo considerados significativos valores p<0,05. A marcação citoquímica da enzima lisossomal não foi observada em vacúolos contendo E. canis íntegras indicando que essas bactérias são capazes de inibir a fusão lisossomal aos endossomos, como um mecanismo de evasão imune. A evasão da fusão lisossomal por inclusões erliquiais é fundamental para a sobrevivência e reprodução do patógeno, apesar de ser baseado em diferentes estratégias de acordo para as espécies de Ehrlichia spp. A demonstração da evasão lisossomal durante a propagação de E. canis serve como base para o desenvolvimento e elaboração de novas estratégias terapêuticas.(AU)

Ehrlichia canis is the etiologic agent of canine monocytic ehrlichiosis (CME), one of the most important infectious diseases of dogs in Brazil. Obligate intracellular bacteria of monocytes and macrophages like E. canis develop various cellular mechanisms to avoid host defenses, which involve different adaptations for survival in intracellular compartments. However, studies about these strategies are scarce. Thus, the present study aimed to investigate whether E. canis has the ability to prevent the fusion of lysosomes to cytoplasmic inclusions, which would favor its multiplication. The fusion of lysosomes with endosomes containing E. canis was investigated using cell culture of canine histiocytes (DH82) infected with the São Paulo strain of E. canis when 50% of the cells were parasitized. To this end, infected cells were cytochemistrically labeled for acid phosphatase, an enzyme present in the fused lysosome compartments. After resin embedding process, the ultrathin sections were analyzed and photographically documented in a transmission electron microscope (TEM). We compared three control pairs and experimental groups in relation to the number of bacteria per cell, number lysosomes marked per cell and the number of labeled vacuoles containing E. canis per cell. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney test, at p<0.05 significance level. The cytochemical staining of the lysosomal enzyme was not observed in vacuoles containing intact E. canis indicating that these bacteria are able to inhibit lysosomal fusion to endosomes, as a mechanism of immune evasion. The evasion of lysosomal fusion by erlichia inclusions is critical to the survival and reproduction of the pathogen, despite being based on different strategies according to the species of Ehrlichia spp. Demonstration of lysosomal escape during the propagation of E. canis serves as a basis for the development and design of new therapeutic strategies.(AU)

Antibodies against rickettsiae from spotted fever groups in horses from two mesoregions in the state of Santa Catarina, Brazil / Anticorpos contra rickettsias do grupo da febre maculosa em equinos de duas mesorregiões de Santa Catarina, Brasil

Bacteria of the Rickettsia genus are agents of Brazilian Spotted Fever (BSF), a zoonotic disease which is difficult to diagnose, evolves quickly and can result in death. Antibodies against Rickettsia spp. in horses were studied, by means of Indirect Immunofluorescence Assay (IFAT ≥64), in 150 blood samples taken from animals in two Santa Catarina mesoregions (Planalto Serrano and Vale do Itajaí). The overall occurrence of Rickettsia spp. antibodies in horses was 18.66%, with cross-reactivity occurring in all positive samples for at least two of the species tested. Separately, according to the species, 25 (16.66%) samples were positive for R. rickettsii, 15 (10%) for R. parkeri, 22 (14.66%) for R. amblyommii, 23 (15.33%) for R. rhipicephali, 16 (10.66%) for R. bellii and 19 (12.66%) for R. felis. Only two animals resulted in a conclusive serodiagnosis, one for R. bellii and the other for R. rickettsii, at maximum dilutions of 1:4096 and 1:512, respectively. The occurrence of antibodies against Rickettsia spp. in horses from two mesoregions in the state of Santa Catarina indicates the movement of BSF agents in these sentinel animals and confirms the importance of studying spotted fever in the state of Santa Catarina.(AU)

Bactérias do gênero Rickettsia são agentes da Febre Maculosa Brasileira (FMB), uma doença zoonótica, de difícil diagnóstico, rápida evolução e que pode levar o indivíduo à morte. Anticorpos contra Rickettsia spp. em equinos foram pesquisados, por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI≥64), em 150 amostras de sangue colhidas de animais em duas mesorregiões de Santa Catarina (Planalto Serrano e Vale do Itajaí). A ocorrência de anticorpos contra Rickettsia spp. observada em equinos de duas mesorregiões de Santa Catarina foi de 18,66%, ocorrendo reações cruzadas em todas as amostras positivas para, no mínimo, duas das espécies testadas. Isoladamente, de acordo com as espécies, 25 (16,66%) amostras foram positivas para R. rickettsii, 15 (10%) para R. parkeri, 22 (14,66%) para R. amblyommii, 23 (15,33%) para R. rhipicephali, 16 (10,66%) para R. bellii e 19 (12,66%) para R. felis. Somente dois animais resultaram em um sorodiagnóstico conclusivo, um para Rickettsia bellii e outro para R. rickettsii, nas diluições máximas de 1:4096 e 1:512, respectivamente. A ocorrência de anticorpos contra Rickettsia spp. em equinos de duas mesorregiões de Santa Catarina indica a circulação de agentes da FMB nestes animais sentinela e ratificam a importância do estudo da febre maculosa no estado de Santa Catarina.(AU)

Rickettsial infection in Cerro Largo, State of Rio Grande do Sul, Brazil / Infecção rickettsial em Cerro Largo, Rio Grande do Sul

O presente estudo teve por objetivo avaliar, por imunofluorescência indireta, infecções ricketsiais em animais e humanos assintomáticos da área rural de Cerro Largo, RS. Dezesseis (51.6%) equinos, seis (22.3%) cães e oito (29.6%) humanos mostraram anticorpos reagentes (título <64) para Ricksettia rickettsii e para Ricksettia parkeri. Os estudos sorológicos indicaram que equinos, cães e humanos entraram em contato com rickettsias do grupo da febre maculosa nesse município. Dois cães mostraram títulos de R. parkeri no mínimo quatro vezes maior que os demais agentes ricketsiais testados e sugerindo que R. parkeri ou um genótipo próximo está circulando na região.(AU)

Prevalência de anticorpos anti-Rickettsia spp. em cães da cidade de Belo Horizonte, MG / Prevalence of antibodies anti-Rickettsia in dogs from Belo Horizonte, MG, Brazil

A cross-sectional study was conducted to determine the seroprevalence of anti-Rickettsia spp. in dogs from Belo Horizonte, MG. For this purpose, serum samples from 453 dogs were collected during the rabies vaccination campaign and tested by the indirect immunofluorescence assay (IFA) using five antigens: Rickettsia bellii, Rickettsia amblyommii, Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, and Rickettsia felis. The endpoint titer reacting with each antigen was determined and serum was considered positive if it reacted at the 1:64 dilution. Serum showing titer for a Rickettsia species at least four-fold higher than that observed for any other Rickettsia species was considered homologous to the first Rickettsia species. Only three (0.66%) dogs reacted positively to at least one Rickettsia species and one serum showed to be homologous to R. rickettsii. These results showed a low prevalence of antibodies anti-Rickettsia spp. in dogs from Belo Horizonte city. However, other serosurvey needs to be performed for surveillance of the endemic status of the disease in the municipal district.(AU)

Anticorpos anti-rickettsias do grupo da febre maculosa em equídeos e caninos no norte do estado do Paraná, Brasil / Anti rickettsia-antibody for spotted fever group in horses and dogs in the north of Paraná stated, Brazil

The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonosis that can be fatal if not trteated. As there are few studies of the BSF in the Paraná State, the occurrence of BSF was serologically investigated in dogs and horses by indirect immunofluorescence assay (IFA), in the North of that State, in animals that are regarded as sentinels for BSF. A total of 241 samples of sera of equine, four of asinine, and 29 of dogs were collected in nine farms of three municipalities in the North of Paraná: Arapongas, Douradina, and Umuarama. From fifteen samples of equine serum with positive titres for RIFI, eight (53.3 percent) had titre of 64 against R. rickettsii, two (13.3 percent) 128 against R. rickettsii, and five (33.3 percent) were reactants for R. parkeri and R. rickettsii, with titres ranging from 64 to 2048, and 128 to 1024, respectively. The results showed that domestic animals, sentinels for BSF, are under low exposition to ticks infected with spotted fever group Rickettsia, indicating low risk of human infection by these agents in the studied area.(AU)

Anticorpos anti-Leptospira spp. em ovinos do município de Monte Negro, estado de Rondônia / Anti-Leptospira spp. antibodies in ovines from Monte Negro municipality, Rondonia state, Brazil

O presente estudo determinou a prevalência de anticorpos anti-Leptospira spp. em ovinos do Município de Monte Negro, RO. Foram examinados soros de 141 ovinos de raça, idade e sexo variados provenientes de 15 fazendas, pela técnica de Soroaglutinação Microscópica. Doze (80,0%) propriedades apresentaram pelo menos um animal reagente. Títulos de anticorpos iguais ou superiores a 100 foram detectados em 47 (33,3%) animais, e os sorovares mais frequentes foram Patoc (29,7%), Autumnalis (14,8%), Pyrogenes (10,6%), Australis (4,2%), Bratislava (4,2%), Hardjo (4,2%), Icterohaemorrhagiae (4,2%), Castellonis (2,1%) e Hebdomadis (2,1%). Em 11 (23,4%) soros não foi possível a determinação do provável sorovar envolvido na reação. Alerta-se também para a possibilidade de infecção no homem, tendo em vista as características regionais de fronteira agrícola amazônica.

The present study determined the prevalence of anti-Leptospira spp.antibodies in 141 ovines from 15 farms of the Monte Negro Municipality, Rondonia State, Brazil, by the microscopic agglutination test. Twelve (80.0%) farms presented at least 1 reactive animal. Antibodies titers of ? 100 were detected in 47 (33.3%) animals, the most frequent serovars being Patoc (29.7%), Autumnalis (14.8%), Pyrogenes (10.6%), Australis (4.2%), Bratislava (4.2%), Hardjo (4.2%), Icterohaemorrhagiae (4.2%), Castellonis (2.1%) and Hebdomadis (2.1%). In 11 (23.4%) sera it was not possible to determine the most frequent serovar involved. The results raise a warning as to the possibility of infection in the human being by Leptospira in light of the regional characteristics of the Amazon agricultural frontier.

ANTICORPOS ANTI-LEPTOSPIRA SPP. EM OVINOS DO MUNICÍPIO DE MONTE NEGRO, ESTADO DE RONDÔNIA

ABSTRACT The present study determined the prevalence of anti-Leptospira spp.antibodies in 141 ovines from 15 farms of the Monte Negro Municipality, Rondonia State, Brazil, by the microscopic agglutination test. Twelve (80.0%) farms presented at least 1 reactive animal. Antibodies titers of ? 100 were detected in 47 (33.3%) animals, the most frequent serovars being Patoc (29.7%), Autumnalis (14.8%), Pyrogenes (10.6%), Australis (4.2%), Bratislava (4.2%), Hardjo (4.2%), Icterohaemorrhagiae (4.2%), Castellonis (2.1%) and Hebdomadis (2.1%). In 11 (23.4%) sera it was not possible to determine the most frequent serovar involved. The results raise a warning as to the possibility of infection in the human being by Leptospira in light of the regional characteristics of the Amazon agricultural frontier.

RESUMO O presente estudo determinou a prevalência de anticorpos anti-Leptospira spp. em ovinos do Município de Monte Negro, RO. Foram examinados soros de 141 ovinos de raça, idade e sexo variados provenientes de 15 fazendas, pela técnica de Soroaglutinação Microscópica. Doze (80,0%) propriedades apresentaram pelo menos um animal reagente. Títulos de anticorpos iguais ou superiores a 100 foram detectados em 47 (33,3%) animais, e os sorovares mais frequentes foram Patoc (29,7%), Autumnalis (14,8%), Pyrogenes (10,6%), Australis (4,2%), Bratislava (4,2%), Hardjo (4,2%), Icterohaemorrhagiae (4,2%), Castellonis (2,1%) e Hebdomadis (2,1%). Em 11 (23,4%) soros não foi possível a determinação do provável sorovar envolvido na reação. Alerta-se também para a possibilidade de infecção no homem, tendo em vista as características regionais de fronteira agrícola amazônica.

Risk factors and seroprevalence of brucella spp. in cattle from western amazon, brazil

ABSTRACT The seroprevalence of Brucella spp. and the possible associated risk factors were estimated for 2,109 adult cows in Monte Negro county, State of Rondônia, Brazil. A questionnaire was completed for each farm where cattle were sampled. Laboratory tests were Rose-Bengal Agglutination, Standard Tube agglutination, and Mercaptoethanol. The adjusted overall prevalence of Brucella spp. seropositive cows for Monte Negro county was 15% and at least 54 herds (63%) were positive. A logistic regression analysis suggested that the herd size of more than 25 cows and the presence of pigs were significant factors associated with the seropositivity (herd size: OD = 2.8; P=0.02; presence of pigs: OD = 2.5; P =0.04). Other significant variables associated to the infection, analysed by Chi-Square were the presence of seropositivity cows with the herd that were repeat breeders and birth of weak calves (P 0.05).

RESUMO A soroprevalência e os possíveis fatores de risco para a infecção por Brucella spp. foram estimados em 2.109 vacas do Município de Monte Negro, Rondônia. De cada animal selecionado foi coletado soro sangüíneo e para as propriedades envolvidas foi preenchido um questionário. As amostras coletadas foram analisadas pelas provas de Antígeno Acidificado Tamponado corado com Rosa Bengala, Soroalgutinação Lenta em Tubos e 2-Mercaptoetanol. A prevalência total da infecção por Brucella spp. em vacas no Município de Monte Negro foi de 15%, sendo 54 (63%) fazendas com animais reagentes. A regressão logística sugeriu que rebanhos com mais de 25 vacas (OD = 2,8; P = 0,02) e a presença de suínos (OD = 2,5; P = 0,04) foram fatores associados a soropositividade dos bovinos. Outras variáveis associadas à infecção pelo teste do Qui-Quadrado foram repetição de cio e nascimento de bezerros enfermos (P 0,05).

Fatores de risco associados à ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp. em cães do município de Monte Negro, Rondônia, Amazônia Ocidental Brasileira / Risk factors associated with anti-Leptospira spp antibodies occurrence in dogs from Monte Negro County, Rondônia, Brazilian Western Amazon

Foram testados, pela técnica de soroaglutinação microscópica aplicada à leptospirose, 329 cães provenientes do município de Monte Negro, RO, dos quais 156 eram da área urbana e 173 da área rural. Simultaneamente foi aplicado questionário para verificar a existência de possíveis fatores de risco pela regressão logística. Abordaram-se questões referentes a idade, sexo, dieta, tipo de criação, ambiente, contato com outras espécies e hábito de caça. Foram detectadas reações com títulos >100 em 27,3%, com 90 cães positivos ao agente, das quais 23,7% eram da área (37/156) urbana e 30,6% (53/173), da área rural (P>0,05). Os sorovares predominantes, reatores com títulos mais elevados, foram Autumnalis (22%), Pyrogenes (12%), Canicola (10%) e Shermani (7,5%). Cães com idade acima de 12 meses apresentaram maior ocorrência de anticorpos quando comparados aos cães mais jovens (P<0,05). Dentre os fatores de risco analisados, foram significativos a alimentação (dieta à base de ração comercial - odds ratio: 3,3; intervalo de confiança: 95%: 1,2 9,2; P=0,02) e o sexo (macho - odds ratio: 2,3; intervalo de confiança: 95%: 1,3 3,9; P=0,003). Ressalta-se a ocorrência de reações para sorovares mantidos na natureza por animais silvestres.(AU)

The microscopic agglutination test was applied to 329 samples taken from 156 dogs from urban area and 173 from rural areas of Monte Negro County, Rondônia State, Brazil, to determine anti-Leptospira spp. antibodies. A survey was concomitantly done to detect eventual risk factors thru the use of logistic regression. Studied variables were age, sex, diet, management, environment, contact with other species and hunting habit. Titers >100 were detected in 27.3% (90/329) of the dogs, being 23.7% (37/156) urban and 30.6% (53/173) rural dogs. The most frequent serovars were Autumnalis (22.0%), Pyrogenes (12.0%), Canicola (10.0%) and Shermani (7.5%). Dogs older than 12 months showed higher positive frequencies than younger animals (P<0.05). Risk factor were associated with commercial food as compared to homemade food (odds ratio: 3.3; 95% confidence interval : 1.3 3.9; P=0.02) and associated with sex, with higher occurrence in males than in females (odds ratio: 2.3; 95% confidence interval: 1.3 3.9; P=0.003). It was emphasized the serological occurrence of serovars kept and spread in nature by wild animals.(AU)

Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) / Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae)

O ciclo biológico do Amblyomma dubitatum, que se alimentava experimentalmente em coelhos domésticos, foi avaliado em condições laboratoriais e comparado com dados recentemente obtidos de infestações experimentais em capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris), hospedeiros naturais para essa espécie. Os coelhos foram considerados hospedeiros experimentais adequados para larvas e ninfas porque quatro dos cinco parâmetros avaliados (número de carrapatos que ingurgitaram, período de alimentação, percentagem de carrapatos que realizaram muda e período de pré-muda) foram semelhantes aos resultados obtidos com capivaras. As percentagens diárias de desprendimento e de muda das larvas e ninfas confirmam os coelhos como hospedeiros experimentais adequados para esses estágios de A. dubitatum. Os resultados do experimento indicam que os coelhos são hospedeiros inadequados para os adultos.(AU)

Prevalência de endoparasitas em cães da área urbana do município de monte negro, rondônia

ABSTRACT From July to August 2001, individual fecal samples were collected from 95 dogs (13.8% of the canine population) living in the urban area of Monte Negro, Rondônia. The fecal samples were processed by the following coproparasitological methods: Willis (simple flotation), centrifugal flotation employing sacarose solution, and centrifugal sedimentation employing water-ether. Only 15 (15.8%) out of 95 fecal samples were negative. Five helminth genera were found: Ancylostoma, Toxocara, Trichuris, Spirocerca, Physaloptera; as well as 5 protozoan genera: Sarcocystis, Giardia, Cystoisospora, Cryptosporidium, Hammondia-Neospora. Ancylostoma spp. eggs were the most prevalent (73.6% of positive samples), followed by Toxocara canis eggs (18.9%) and Sarcocystis spp. sporocysts (18.9%). Prevalence of the remaining parasites was less than 10%. The results were compared with other Brazilian studies, showing that the genus Ancylostoma is the most frequently found on dogs in Brazil.

RESUMO De julho a agosto de 2001, foram colhidas amostras de fezes de 95 cães (13,8% da população canina) da área urbana do Município de Monte Negro, Rondônia. As amostras de fezes foram examinadas pelos métodos coproparasitológicos de Willis, centrífugo-flutuação em solução de sacarose e centrífugo-sedimentação em água-éter. Das 95 amostras de fezes, somente 15 (15,8%) foram negativas. Foram encontrados helmintos pertencentes a 5 gêneros: Ancylostoma, Toxocara, Trichuris, Spirocerca, Physalopterae 5 protozoários: Sarcocystis, Giardia, Cystoisospora, Cryptosporidium, Hammondia-Neospora. Ovos de Ancylostoma spp. foram os mais prevalentes (73,7% de amostras positivas), seguidos por ovos de Toxocara canis (18,9%) e esporocistos de Sarcocystis spp. (18,9%). Os demais parasitos tiveram prevalências abaixo de 10%. Os resultados encontrados foram comparados com outros trabalhos brasileiros, demonstrando que o gênero Ancylostoma é o mais freqüentemente diagnosticado em cães no Brasil.

Anticorpos contra agentes bacterianos e virais em suínos de agricultura familiar do município de monte negro, ro

ABSTRACT Sera from swine fromfamily-employed farms in Monte Negro County, state of Rondônia, Brazil, were evaluated againstbacterial and viral agents. Brucellosis was evaluated by Rose-Bengal agglutination (RBA), standard tube agglutination (STA), and mercaptoethanol (ME); and leptospirosis by microscopic agglutination test (MAT) against 24 leptospira serovars. Anti-porcine parvovirus antibodies were tested by haemmaglutination inhibition assay, and ELISA technique was used for detection of antibodies against classical swine fever virus and Aujeszky disease virus. Only 1 (0.9%) from 104 tested sera reacted by RBA, and no samples reacted in STA and ME. Leptospira spp. antibodies were detected in 29 (32.9%) of 88 tested sera and the most frequent serovars detected were Castellonis, Bratislava and Canicola. Antibodies against porcine parvovirus were detected in 7.7% (8/104) of the sera. None of the examined samples reacted to classical swine fever virus or Aujeszky disease virus.

RESUMO Foram avaliados soros de suínos provenientes de propriedades rurais que desenvolvem agricultura familiar no Município de Monte Negro, Rondônia, frente a agentes bacterianos e virais. Para a pesquisa de anticorpos contra Brucella spp., foram utilizados o Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), a Soroaglutinação Lenta em Tubos (SAL) e a prova do 2-Mercaptoetanol (2-ME). Para a pesquisa de Leptospira spp. utilizou-se a Soroaglutinação Microscópica (SAM) contra 24 sorovares de leptospira. Anticorpos contra Parvovírus Suíno (PVS) foram pesquisados pela Inibição da Hemaglutinação (IH), enquanto que o vírus da Peste Suína Clássica (PSC) e da Doença de Aukeszky (DA) por Ensaio Imunoenzimático (ELISA). Apenas uma (0,9%) das 104 amostras testadas foi reagente na AAT e nenhuma na SAL e 2-ME. Para Leptospira spp. foram testados 88 soros, sendo detectados anticorpos em 29 amostras (32,9%) e os sorovares mais freqüentes foram Castellonis, Bratislava e Canicola. Foram detectados anticorpos contra PVS em 7,7% (8/104) dos soros testados. Nenhuma amostra foi reagente para PSC e DA.

Rickettsia felis (Rickettsiales: Rickettsiaceae) in Ctenocephalides felis felis (Siphonaptera: Pulicidae) in the State of São Paulo, Brazil / Rickettsia felis (Rickettsiales: Rickettsiaceae) em Ctenocephalides felis felis (Siphonaptera: Pulicidae) no estado de São Paulo

Samples of 10 and 14 Ctenocephalides felis felis fleas were collected on dogs from Pedreira and Mogi das Cruzes municipalities, respectively, in the State of São Paulo, Brazil, for detection of Rickettsia spp. Individual fleas were submitted to Polymerase Chain Reaction targeting the 17-kDa and the 190-kDa (OmpA) genes of Rickettsiae. This later gene is specific for spotted fever group. Nine fleas from Pedreira (90%) and four fleas from Mogi das Cruzes (28%) were positive for the 17-kDa gene, and eight fleas from Pedreira (80%) and four from Mogi das Cruzes (28%) were positive for 190-kDa gene. The nucleotide sequence of the 190-kDa products of one flea from Pedreira and one flea from Mogi das Cruzes were 100% identical to each other, and when compared to the GenBank Data, they were 100% identical to the 190-kDa sequence of R. felis. This was the first report of its occurrence in the State of São Paulo.(AU)

Amostras de 10 e 14 pulgas Ctenocephalides felis felis foram coletadas de cães nos municípios de Pedreira e Mogi das Cruzes, respectivamente, no estado de São Paulo, para pesquisa de Rickettsia spp. As pulgas foram individualmente submetidas à reação em cadeia pela polimerase, tendo como alvo os genes 17-kDa e 190-kDa (OmpA) de Rickettsia, sendo esse último específico para o GFM. Nove pulgas de Pedreira (90%) e quatro pulgas de Mogi das Cruzes (28%) foram positivas para o gene 17-kDa, e oito pulgas de Pedreira (80%) e quatro de Mogi das Cruzes (28%) foram positivas para o gene 190-kDa. As seqüências de nucleotídeos do gene 190-kDa de uma pulga de Pedreira e de uma pulga de Mogi das Cruzes foram 100% idênticas; quando comparadas com dados existentes no GenBank, foram 100% idênticas com a seqüência parcial do gene 190-kDa de Rickettsia felis. Esse foi o primeiro relato de sua ocorrência no estado de São Paulo.(AU)