Efeito do eCG ou benzoato de estradiol associado ao norgestomet na taxa de concepção de vacas de corte submetidas à IATF no pós-parto / Effect of eCG or estradiol benzoate associated with norgestomet on the conception rate of beef cows submitted to FTAI in the postpartum

Este estudo objetivou comparar as taxas de concepção, em vacas de corte no período pós-parto (PPP), tratadas com Gonadotrofina Coriônica Eqüina (eCG) ou Benzoato de Estradiol (BE), após o uso de Norgestomet submetidas à inseminação artificial em tempo fixo(IATF). A hipótese é que a administração de eCG ou BE aumenta as taxas de concepção. Vacas Nelore (n=138) e Brangus (n=63), lactantes,entre 26 e 118 dias do PPP, foram divididas em três grupos homogêneos e dentro de cada grupo subdivididas em dois blocos, um com um PPP < 45 dias (PPP1; n=107) e outro > 45 dias (PPP2;n=94). Todas as fêmeas receberam um implante auricular contendo 3mg de Norgestomet (Crestar®), seguido pela administração de 5mg de Valerato de Estradiol. Os implantes auriculares foram mantidos durante 10 dias. Na retirada dos implantes, as fêmeas receberam 1mL de solução fisiológica (n=68; Grupo Controle) ou 500 UI de eCG (Folligon®; n=67; Grupo eCG) ou 1mg de Benzoato de Estradiol (Index; n=66; Grupo BE) 24 horas após a retirada do implante. AIATF foi realizada 54 horas após a retirada do implante. O diagnóstico de gestação foi realizado por ultra- sonografia 30 dias após a IATF. Houve interação entre os tratamentos e o PPP. No PPP1, a taxa de concepção foi maior no grupo eCG comparado ao BE (47,22% vs.15,38%; P<0,01). No PPP2, as taxas de concepção dos grupos eCG eBE foram maiores que no grupo controle (41,93%, 44,44% vs.22,22%; P<0,01). Conclui-se que vacas, com até 45 dias do PPP, o eCG associado ao Norgestomet aumenta as taxas de concepção.(AU)

This study aimed to compare conception rates at the post partum period (PPP) in beef cows which were administered either Equine Chorionic Gonadotrophin (eCG) or Estradiol Benzoate (EB) after Norgestomet and submitted to fixed-time artificial insemination(FTAI). The hypothesis was that the administration of eCG or E Benhances the conception rate. Lactating Nelore cows (n=138) and Brangus (n = 63), between 26 and 118 days of post partum period(PPP) were divided into three homogeneous groups, and subdividedin two blocks, inside each group one of them with a PPP d” 45 days (PPP1; n=107) and another with a PPP > 45 days (PPP2; n=94). Allcows received an auricular implant containing 3mg Norgestomet(Crestar®), followed by the administration of 5mg Estradiol Valerate.The auricular implants were kept during 10 days. Cows received 1mL saline solution (n=68, Control Group) or 500IU eCG (Folligon®;n=67; eCG Group) or 1mg Estradiol Benzoate (Index, n=66; EB Group) 24 hours after the removal of the implant. FTAI was made 54 hours after the implant removal. The pregnancy diagnosis was carried through ultrasonography 30 days after FTAI. There was an interaction between treatments and PPP. In the PPP1, the conception rate was higher in the eCG Group than in the EB Group (47.22% vs.15.38%; Pd”0.01). In the PPP2, the conception rates of the eCG and EB Groups were higher than in the Control Group (41.93%, 44.44%vs. 22.22%: Pd”0.01). It was concluded that in cows up to 45 days of PPP, the eCG associated with Norgestomet enhances the conception rates.(AU)

Quantificação do interferon-tau durante o reconhecimento materno da gestação em fêmeas bovinas Bos taurus indicus / Quantification of interferon-tau during the maternal recognition of pregnancy in Bos taurus indicus cows

Durante o período crítico do reconhecimento materno, compreendidoentre o 15º e 19º dias da gestação, o concepto deve sintetizarcompetentemente moléculas capazes de bloquear a síntese deprostaglandina F2α (PGF2α) e a luteólise. Em bovinos, a principalmacromolécula protéica envolvida em tal bloqueio é o interferon-tau(IFN-τ). Durante o período crítico, falhas neste reconhecimentodeterminam à mortalidade embrionária em até 40% das fêmeasinseminadas. Informações sobre o IFN-τ em animais Bos taurus indicus,ainda são restritas. Este estudo objetivou uma avaliação quantitativado IFN-τ durante o período crítico do reconhecimento materno, emlavados uterinos obtidos por sonda de Foley (dias 14, 16 e 18 pósestro) ou post-mortem (dia 18 pós-estro). Para tanto, foram utilizadasfêmeas multíparas azebuadas (Bos taurus indicus), cíclicas ou prenhes,nos dias 14, 16 e 18 pós-estro. Para a obtenção dos lavados, os úterosforam infundidos com solução de Ringer Simples. Os lavados foramconcentrados por ultra-filtração e liofilizados. As macromoléculasprotéicas foram separadas por Eletroforese Unidimensional SDSPAGE, em gel com 15% de poliacrilamida. A quantificação doIFN-τ nos lavados uterinos foi realizada por Western-Blotting edensitometria. Tanto nos lavados obtidos por sonda de Foley quantonos post-mortem foi possível observar bandas de proteínas queapresentaram reação cruzada com os anticorpos utilizados no WesternBlotting. O IFN-τ foi detectado apenas nos lavados uterinospost-mortem de vacas prenhes (P<0,05). A densidade óptica não foiafetada pelo dia do período crítico, estado (cíclico ou prenhe) ouinteração dia x estado. Nos lavados post-mortem não houve efeito depeso do concepto ou concentração de progesterona plasmática no diado lavado na densidade da banda protéica referente ao IFN-τ .(AU)

During the critical period of the maternal recognition, which occursbetween days 15 and 19 of pregnancy, the conceptus must competentlysynthesize molecules capable of blocking the synthesis ofprostaglandin F2α (PGF2α) and luteolysis. In cattle, the majormacromolecule involved in suck blockage is the protein interferontau (IFN-τ). During the critical period, failures in the recognition ofpregnancy determine embryonic mortality on up to 40% ofinseminated cows. Data about IFN-τ in Bos taurus indicus are stillscarce. Objective of this study was to quantitatively evaluate the presenceof IFN-τ during the critical period for maternal recognition ofpregnancy in uterine flushings obtained in vivo by Foley catheter (Days14, 16 and 18 post estrus) or post-mortem (Day 18 post estrus).Multiparous, cyclic or pregnant zebu cows (Bos taurus indicus) on days14, 16 and 18 post estrus were used for in vivo or post mortem uterineflushing collection. In both cases, a Ringer solution was used to washthe uterus of cows. Uterine flushings were concentrated by ultrafiltration and lyophilized. Proteins were separated by one-dimensionalelectrophoresis (SDS-PAGE) in a 15% polyacrilamide gel. Interferontau quantification in uterine flushings was performed by westernblotting and densitometry. Non-specific protein bands were observedin both in vivo and post mortem uterine flushings. Interferon-tau wasdetected only in uterine flushings obtained from pregnant cowspost-mortem (P<0.05). Optical density of protein bands was not affectedby the day of the critical period, state (cyclic or pregnant) or interactionday x state. There was no effect of the conceptus weight orprogesterone concentration on the day of uterine flushing collectionin the optical density of the IFN-τ protein band.(AU)

Caracterização do estro de novilhas cruzadas (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus) por radiotelemetria / Estrous characterization in cross-bred heifers (Bos taurus indicus X Bos taurus taurus) by radiotelemetry

Embora a técnica de inseminação artificial (IA) apresente inúmeras vantagens, no Brasil é empregada em apenas 7% das fêmeas de corte. Falhas na detecção de estros constituem o principal fator limitante para a obtenção de êxito no emprego da técnica. Um sistema eletrônico, que se baseia na radiotelemetria, foi desenvolvido para a detecção de estros. Este sistema fornece o registro da data, horário e duração das montas ocorridas. O presente estudo teve como objetivo avaliar, pelo sistema de radiotelemetria, as características comportamentais de estro em novilhas cruzadas de corte (Bos taurus taurus x Bos taurus indicus), criadas em regime extensivo, na região sudoeste do Brasil. A hipótese testada foi que a duração dos estros e o número de montas são bastante variáveis entre as fêmeas e que a maioria das montas ocorre no período noturno. Para a sincronização dos estros as novilhas receberam 0,5mg de MGA/cabeça/dia, uma vez ao dia, durante 8 dias, e uma injeção de 15mg de luprostiol (PG) via IM no último dia da ingestão de MGA. Os estros foram registrados pelo sistema de radiotelemetria "Heat-Watch", durante um período de até 120 horas após a aplicação de PG. A duração média dos estros foi de 10,4 ± 5,7 horas, duração que variou de 45 minutos a 22,7 horas. O número médio de montas foi de 26,2 ± 13,6 e variou de 3 a 81 montas. A duração média das montas foi de 2,7 ± 0,3 segundos. Dransfield et al. classificaram os estros em curta (< 7 horas) e longa (≥. 7 horas) duração e baixa (< 1,5 montas/hora) e alta (≥ 1,5 montas/hora) intensidade. Houve uma maior incidência dos estros de longa duração quando comparados aos de curta duração (72,8% vs. 27,2%; P<0,05) e uma maior incidência dos estros de alta intensidade quando comparados aos de baixa intensidade (70,2% vs. 29,8%; P<0,05).(AU)

Although artificial insemination (AI) has countless advantages, in Brazil this technique is performed in only 7% of beef cattle. Failures on estrous detection are the main limiting factor to the success of this technique. An electronical system, based on radiotelemetry, was developed for estrous detection. This system provides day, hour and service length. The present study aimed to evaluate by radiotelemetry system the behavioral characteristics of the estrous of crossbred heifers (Bos taurus taurus x Bos taurus indicus) raised at pasture regimen in southwest.(AU)

Mecanismos endócrinos e moleculares envolvidos na formação do corpo lúteo e na luteólise - revisão de literatura / Endocrine and molecular mechanisms involved in the formation of corpus luteum and luteolysis - A Review

O corpo lúteo (CL) é uma estrutura endócrina transitória formada por células luteais esteroidogênicas pequenas (SLC) e grandes (LLC), que associadas aos fibroblastos e a uma ampla rede de capilares constituem uma estrutura especializada na síntese de progesterona (P4). De maneira geral, para a síntese de P4 nas células luteais esteroidogênicas, o colesterol se liga a receptores específicos na membrana celular e é transportado ao citosol. Posteriormente, o colesterol dirige-se a membrana mitocondrial interna e por ação da enzima P450scc transforma-se em pregnenolona. No retículo endoplasmático liso a pregnenolona é convertida a P4 pela enzima 3β-hidroxiesteróide deidrogenase (3β-HSD). A proteína de regulação aguda da esteroidogênese (StAR), o receptor benzodiazepínico tipo periférico (PBR) e a endozepina participam no transporte do colesterol para os diferentes compartimentos mitocondriais. Assim, supõe-se que a capacidade de síntese de P4 no CL esteja relacionada à concentração celular de receptores que captam o colesterol, às enzimas P450scc e 3β-HSD, e às proteínas celulares transportadoras de colesterol. Na espécie bovina, as LLC são responsáveis por mais de 80% da produção deste hormônio no CL. A menor concentração de proteínas transportadoras de colesterol na mitocôndria parecem limitar a síntese de P4 nas SLC. A P4 favorece um meio ambiente uterino apropriado para o desenvolvimento do(s) concepto(s), dependendo da espécie. Na maioria das espécies, a ausência da fertilização ou a incapacidade do concepto em sinalizar sua existência no útero estabelecem a luteólise. Tal evento fisiológico caracteriza-se pela regressão funcional e estrutural do(s) corpo(s) lúteo(s). Para o estabelecimento e a manutenção da prenhez torna-se necessário o bloqueio da luteólise por mecanismos que diferem entre as espécies. Em primatas e equídeos esse reconhecimento ocorre pela secreção de gonadotrofinas específicas e em ruminantes pela presença de fatores anti-luteolíticos.(AU)

The corpus luteum (CL) is a transitory endocrinal structure formed by steroidogenic small luteal cells (SLC) and large luteal cells (LLC) that associated with fibroblast and a wide web of capillaries form a structure specialized in synthesis of progesterone (P4) In general, for the synthesis of P4 in the steroidogenic luteal cells, cholesterol joints specific receptors on the cellular membrane and is transported to the cytosol. Later, cholesterol goes to an internal mitochondrial membrane and by the action of the enzyme P450scc is transformed into pregnenolone. In the smooth endoplasmic reticulum pregnenolone is converted to P4 by the enzyme 3β-hydroxysteroid dehydrogenase (3 β -HSD). The steroidogenic acute regulatory protein (StAR), the peripheral benzodiazepine receptor (PBR) and endozepine participate in the transport of cholesterol to the different mitochondrial compartments. Therefore, it is supposed that the capacity of synthesis of P4 in the CL is related to the cellular concentration of receptors that catch cholesterol, to the enzymes P450scc and 3β-HSD and to the cholesterol cellular transport proteins. In bovine, the LLC are responsible for more than 80 of P4 production in the CL. The lowest concentration of cholesterol transport proteins in the mitochondria seems to limit the synthesis of P4 in the SLC. P4 supports a proper uterine environment for the development of conceptuses, depending on the specie. In most species, the lack of fertilization or the conceptus incapacity to signalize its presence in the uterus establishes luteolysis. This physiolocal event is characterized by the functional and structural regression of the CL. For the establishment and maintenance of pregnancy it is necessary to block luteolysis through different mechanisms among species. In primates and equids it occurs by the secretion of specific gonadotropins and in ruminants by antiluteolytic factors. (AU)

Avaliação de bioensaios para a determinação da atividade biológica da gonadotrofina coriônica humana (hCG) / Evaluation of bioassays for measuring the of biological activity of Human Chorionic Gonadotropin (hCG)

A atividade biológica de um hormônio é mensurada pela sua capacidade em exercer um determinado efeito biológico que possa ser quantificado. Os ensaios biológicos in vivo que avaliam a atividade do hCG baseiam-se na sua capacidade de promover um aumento de peso do sistema genital, vesículas seminais e próstata em ratos impúberes e útero e ovários em camundongas impúberes. A partir destes efeitos, determinam-se equações relacionando as doses de hCG administradas com o aumento de peso do sistema genital. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficiência de bioensaios em mensurarem a atividade biológica do hCG utilizando ratos, ratas e camundongas impúberes. No experimento 1, ratos receberam 0, 4, 8 ou 16UI de hCG, a cada 24 horas, durante 4 dias. A próstata e/ou as vesículas seminais foram pesadas 24 horas após a última injeção. No experimento 2, camundongas receberam 0, 3,33, 10, 33,3 ou 100UI de hCG, em um único dia. Os ovários e/ou útero foram pesados 24horas após a última injeção. O hCG promoveu aumento de peso do sistema genital de camundongas, entretanto, não houve associação linear ou quadrática significativa entre as doses de hCG utilizadas e os pesos das variáveis medidas, impossibilitando a determinação de equações confiáveis. Os protocolos testados, com as doses de hCG utilizadas demonstraram eficiência e sensibilidade limitadas para a quantificação da atividade biológica do hCG.(AU)

Biological activity of a given hormone is measured by its capacity to exert a specific, quantifiable biological effect. Aim of biological assays that measure activity of hCG is to construct prediction equations that associate increasing doses of hCG with changes in weights of genitalia, seminal vesicles and prostate gland in pre-pubertal male rats and weights of uterus and ovaries in pre-pubertal female mice. Objective of the present study was to evaluate efficiency of bioassays which used pre-pubertal male rats and female rats and mice to measure hCG activity. In experiment 1, male rats received 0, 4, 8 or 16IU of hCG daily, for 4 days. Prostate and seminal vesicles were weighed 24 hours after last injection. In experiment 2, female mice received 0, 3.33, 10,33.33 or 100IU of hCG in one day. Ovaries and uteri were weighed24 hours after the last injection. The hCG increased weights of genitaliain female mice. However, there were no satisfactory linear or quadratic associations between doses of hCG used and variables measured. Itwas concluded that assays tested showed only limited efficiency and sensibility to quantify hCG biological activity.(AU)

Indução da ovulação em vacas com gonadotrofina coriônica humana (hCG) purificada por cromatografia de afinidade / Induction of ovulation in cows with affinity chromatography-purified Human Chorionic Gonadotropin (hCG)

O objetivo do presente estudo foi purificar o hCG contido em uma preparação comercial (Pregnyl® Organon) por cromatografia de afinidade e avaliar a taxa de ovulação de vacas injetadas com o hormônio purificado. Uma coluna de cromatografia contendo matriz de Concanavalina-A Sepharose (Con-A) foi equilibrada e cem milunidades internacionais (UI) de Pregnyl® foram aplicadas na coluna. Frações de 3,8mL foram colhidas (4 º C) a cada 5 minutos durante 12,5 horas, resultando em um total de 150 frações. Após a fração 76 adicionou-se à coluna solução tampão contendo 0,3M de alfa−metilglicosidase. A concentração protéica das frações foi estimada por espectrofotometria (280nm). Foram observados dois picos de absorbância, um entre as frações 14 e 19 e outro entre as frações 90 e100. As frações 14 a 19 e 90 a 150 foram reunidas seqüencialmente aos pares, concentradas por ultrafiltração e analisadas por SDS-PAGE. O primeiro pico resultou da eluição das proteínas não adsorvidas pela matriz de Con-A, enquanto o segundo representou as proteínas adsorvidas pela coluna, especialmente o hCG. As frações contendo hCG foram reunidas em uma única amostra cuja concentração protéica foi quantificada pelo método de Lowry. Vacas no 5º dia de um ciclo estral sincronizado, apresentando um folículo dominante maior que 8mm de diâmetro, foram injetadas com 0,1, 0,2 ou 0,3mg de proteína contida na amostra purificada. Após 48 horas, a taxa de ovulação observada foi de 0%, 50% e 75%, respectivamente. Foi demonstrado no presente estudo que a técnica de cromatografia por afinidade foi eficiente para aumentar a concentração relativa do hCG preservando sua atividade biológica.(AU)

Objective of the present study was to purify hCG contained in commercial preparation (Pregnyl®- Organon) by affinity chromatography and to evaluate ovulation rates in cows injected with the purified hormone. A chromatography column containing concanavalin-A sepharose (Con-A) matrix was equilibrated and one hundred thousand international units (UI) of Pregnyl® were applied to the column. Fractions of 3,8mL were collected (4 degree C) every 5 minutes for 12,5h, to yield a total of 150 fractions. After fraction 76, a column buffer containing 0,3M alpha-methylglicoside was added to the column. Protein concentrations were estimated by espectrophotometry(280nm). Two peaks of absorbance were observed, between fractions 14 and 19, and fractions 90 and 100. Fractions 14-19 and 90-150 were sequentially grouped in pairs concentrated by ultrafiltration andanalyzed by SDS-PAGE. The first peak of absorbance resulted from proteins contained in the commercial product, eluted from the column and not adsorbed by the Con-A matrix. The second peak represented proteins adsorbed by the column, especially hCG. The fractions containing hCG were grouped in a single sample and protein concentration was measured by the Lowry method. Cows in day 5 of the estral cycle, which had a dominant follicle larger than 8mm, were injected with 0,1, 0,2 or 0,3mg protein of the purificated sample. The ovulation rate 48 hours after treatment was 0%, 50% and 75%,respectively. It was demonstrated that relative concentration of hCG can be increased by affinity chromatography and biological activity of purified hCG was satisfactory preserved.(AU)

Controle da síntese de prostaglandina F2 ALFA no endométrio bovino in vitro / In vitro control of prostaglandin F2a synthesis in bovine endometrium

A síntese de prostaglandina F2± (PGF2±) endometrial, resulta de uma complexa cascata de eventos intracelulares que ocorrem de maneira altamente coordenada. A síntese de PGF2± pode ser estimulada na presença da melitina e do forbol 12,13 dibutirato (PDBu). O objetivo do presente estudo foi verificar se a produção basal e a estimulação aguda de PGF2± são dependentes da síntese de proteínas. No experimento 1, explantes obtidos de fêmeas bovinas (n=2), cíclicas, não lactantes, no dia 15 do ciclo estral foram incubados em quadruplicata, com meio de cultivo (KHB) ou KHB suplementado com PDBu 10-6M, melitina 10-6M ou melitina 10-5M. Amostras do meio foram coletadas 0 e 60 minutos após os tratamentos e as concentrações de PGF2± foram mensuradas por radioimunoensaio. Com 60 minutos após os tratamentos houve aumento das concentrações médias de PGF2± (P<0,06) em resposta ao tratamento com PDBu comparado ao grupo KHB e melitina. No experimento 2, explantes endometriais de fêmeas bovinas (n=4), não gestantes, no 17° dia do ciclo estral, pesando de 80 a 100mg foram incubados em KHB suplementado com 0, 50, 100 ou 200mg/mL de CHX e 0 ou 100ng/mL de PDBu em um arranjo fatorial 2 x 4, em quadruplicata. Amostras do meio foram coletadas 0 e 60 minutos após os tratamentos e as concentrações de PGF2± foram mensuradas por radioimunoensaio. A integridade dos explantes endometriais tratados com CHX foi avaliada por cortes histológicos. Foi observado aumento na produção de PGF2± em resposta ao tratamento com PDBu (P<0,01), entretanto, não houve diferenças na produção de PGF2± pelos tecidos tratados com diferentes concentrações de CHX, associadas ou não ao PDBu. A integridade histológica dos explantes foi preservada. Conclui-se que a produção basal e a estimulação aguda da síntese de PGF2± não são dependentes da síntese de novas proteínas. (AU)

Synthesis of endometrial prostaglandin F2a (PGF2a) results from acomplex cascade of highly coordinated intracellular events. Productionof PGF2a can be stimulated by mellitin and 12, 13 phorbol dibutyrate(PDBu). Objective of the present study was to verify whether basalor stimulated synthesis of PGF2a was dependent on de novo proteinsynthesis. In Experiment 1, endometrial explants from cyclic, nonlactating cross-bred beef cows (n=2) on day 15 of the estrous cyclewere incubated in quadruplicate in culture KHB culture medium ormedium supplemented with 10-6M PDBu, 10-6M melittin or 10-5Mmelittin. Medium samples were collected immediately and 60 minutesafter treatment administration and concentration of PGF2a in mediumwere measured by radioimmunoassay. Concentrations of PGF2a inmedium were higher (P<0.06) after treatment with PDBu incomparison with control and melittin. In Experiment 2, endometrialexplants from cyclic, non-lactating cross-bred beef cows (n=4) on day17 of the estrous cycle were incubated in quadruplicate in mediumsupplemented with 0, 50, 100 or 200mg cyclohexamide (CHX) and 0or 100ng/ml PDBu, in a 4 x 2 factorial arrangement. Medium sampleswere collected immediately and 60 minutes after administration oftreatments and concentrations of PGF2a measured byradioimmunoassay. Endometrial integrity was was evaluated byhistology. Treatment with PDBu stimulated production of PGF2a(P<0.01), regardless of concentration of CHX used. The CHX didnot affect production of PGF2a, either in the presence or absence ofPDBu. Histological integrity of explants was preserved. It wasconcluded that both basal and PDBu-stimulated PGF2a productionare not dependent on new protein sythesis. (AU)

Avaliação da reutilização de implantes auriculares contendo norgestomet associados ao valerato ou ao benzoato de estradiol em vacas nelore inseminadas em tempo fixo / Evaluation of norgestomet auricular implants reused associated to valerate or to estradiol benzoate in fixed time artifical insemination in Nelore cows

Em fêmeas bovinas a utilização da técnica de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) é possibilitada pelo emprego de fármacos que tem como objetivos sincronizar a emergência das ondas foliculares, os estros e a ovulação. Em rebanhos comerciais, o custo de tais fármacos deve estabelecer uma vantajosa relação com os benefícios. O presente estudo, objetivou comparar as taxas de prenhez em vacas Nelore (Bos taurus indicus) inseminadas em tempo fixo, tratadas com implantes auriculares contendo 3mg de norgestomet (Crestar®), novos (IN) ou utilizados uma vez (IR; reutilizados), associados a administração de norgestomet (NG) e valerato de estradiol (VE) ou progesterona (P4) e benzoato de estradiol (BE). Vacas Nelore PO (n=241), amamentando, com o bezerro ao pé, receberam um dos quatro tratamentos: Crestar® novo durante 10 dias associado a administração de 3mg de NG e 5mg de VE (grupo IN/NG+VE; n=61); Crestar® novo inserido durante 8 dias associado a 50mg de P4 e 2mg de E (grupo IN/P4+BE; n=61); Crestar® reutilizado inserido durante 10 dias associado a administração de 3mg de NG e 5mg de VE (grupo IR/NG+VE; n=58) ou Crestar® reutilizado inserido durante 8 dias associado a e 50mg de P4 e 2mg de BE (grupo IR/ P4+BE; n=61). No dia da remoção dos implantes os animais receberam 7,5mg de Luprostiol e 24 horas após a remoção 1mg de BE. A IATF foi realizada 54 a 56 horas após a retirada dos implantes. Após a IATF, as vacas tiveram os estros observados durante um período de 49 dias e em estro foram reinseminadas 12 horas após a observação. O diagnóstico de gestação foi realizado por ultra-sonografia 35 dias após a IATF e após o final da estação de monta. Foram avaliadas as taxas de prenhez na IATF (TP IATF) e no final da estação de monta (TP EM). Não houve interação entre as características dos implantes (novos e reutilizados) e os tratamentos administrados no dia da inserção do implante (NG+VE e P4+BE).(AU)

The use of fixed-time artificial insemination (IATF) in cows is possible by the use of drugs that aim at the synchronization of the folicular wave pool, the estrus and ovulation. In trading cattle the costs of these drugs must stablish a profitable relation with the benefits. The present study meant to compare the pregnancy rates in Nelore (Bos taurus indicus) cows inseminated at fixed-time, treated with new (IN) or once used (IR; reused) auricular releasing devices with 3mg of norgestomet (Crestar®), associated with the administration of norgestomet (NG) and estradiol valerate (VE) or progesterone (P4 and estradiol benzoate (BE). Pure breed Nelore cows (n=241), on lactation with calf received one of the four treatments: new Crestar® during 10 days administrated with 3mg of NG and 5 mg of VE (group lN/NG+VE; n=61); new Crestar® inserted during 8 days with 50mg of P4 and 2mg of BE (group lN/P4 +BE; n=61); reused Crestar® inserted during 10 days in association with 3 mg of norgestomet and 5 mg of VE (group IR/NG+ VE; n=58) or reused Crestar® inserted during 8 days in association with 50mg of P 4 and 2mg of BE (group lR/P4+BE; n=61). On the day the releasing devices were removed the animals received 7,5mg of Luprostiol and after 24 hours 1mg of BE. A fixed-time artificial insemination was done 54 to 56 hours after the removal of the releasing devices. Cows detected in estrus after the insemination at fixed-time were observed during a period of 49 days and reinseminated. The pregnancy diagnosis was done by ultrassonography 35 days after the IATF and after the end of the breeding season. The pregnancy rates of IATF (TPIATF) and at the end of the breeding season (TP EM) were estimated. There was no interaction between the characteristics of the (new or reused) releasing devices and the treatment given at the day the releasing devices were inserted (NG+ VE e P4 + BE).(AU)

Uso do hCG, GnRH ou 17 beta-Estradiol e progesterona associados ao acetato de melengestrol e prostaglandina F2 alfa em novilhas cruzadas (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus) / Use of hCG, GnRH or 17 beta-estradiol and progesterone associated with melengestrol acetate and prostaglandin F2 alfa in cross-bred heifers (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus)

O objetivo do presente experimento foi avaliar a performance reprodutiva e as características de estros em novilhas cruzadas de corte (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus) tratadas com o protocolo MGA/Prostaglandina (PG) em associação a outros hormônios. No dia 0 (Dia 0 = início da ingestão do MGA) as novilhas foram distribuídas ao acaso para receber 2mL de solução salina (grupo Salina), 2500UI de hCG (grupo hCG), 20müg de acetato de buserelina (grupo GnRH) ou 5mg de 17beta-estradiol + 100mg de progesterona (grupo 17beta-E2 +P4. Amostras de sangue foram colhidas nos dias - 7, 0, 7 e 10 para a mensuração das concentrações plasmáticas de progesterona. Independentemente do tratamento, todas as novilhas receberam 0,5mg MGA/ animal/ dia durante 8 dias (Dia 0 ao 7) e PG (Dia 7). Os estros foram observados durante 120h, a partir da injeção de PG, pelo sistema Heat- Watch. As novilhas foram inseminadas 12 horas após o início dos estros ou 72h depois da injeção de PG. O diagnóstico de gestação foi realizado 35 dias após a última inseminação, por ultrasonografia. As respostas em estros foram de 50,0%, 22,2%, 59,5% e 71,8% para os grupos Salina, hCG, GnRH e 17beta-E2 +P4, respectivamente (P< ou =0,01). O intervalo médio da injeção de PG ao estro foi de 72,8 + ou - 22,2, 102,0 + ou - 22,7,84,6 + ou - 19,0 e 72,5 + ou - 24,4 horas (P< ou =0,01), sendo o grau de sincronização similar entre os grupos. As taxas de concepção foram de 57,9%, 37,5%, 40,9% e 39,3% e as taxas de prenhez de 29,0%, 11,1 %,27,0% e 28,2%, para os grupos Salina, hCG, GnRH e 17beta-E2 +P4, respectivamente. Não houve efeito do tratamento na duração dos estros (10,4 + ou - 5,7 horas), número de montas (23,0 + ou - 16,9) e duração das montas (2,7 + ou - 0,3 segundos), sendo os valores entre parênteses correspondentes às médias gerais e desvios padrão. Em conclusão, a performance reprodutiva não foi alterada pela adição do hCG, GnRH ou 17beta-E2 +P4 ao protocolo de sincronização MGA/PG.(AU)

Mecanismos endócrinos e moleculares pelos quais o estradiol estimula a síntese de prostaglandina F2α no endometrial em fêmeas bovinas / Endocrine and molecular mechanisms by which estradiol stimulates endometrial prostaglandin F2α synthesis in the cow

O estradiol (E2) é requerido para a luteólise de fêmeas bovinas e injeções de E2 estimulam a liberação de prostaglandina F2α (PGF2α). É possível que o E2 estimule a síntese e/ou a atividade de moléculas envolvidas na cascata geradora de PGF2α, como enzimas e receptores para outros ligantes. O cálcio é um conhecido cofator para a proteína quinase C e fosfolipase A2, enzimas envolvidas na produção PGF2α. O objetivo geral desse estudo foi investigar os mecanismos endócrinos e moleculares estimulados pelo E2 durante a luteólise. No experimento 1, vacas holandesas não lactantes foram tratadas com 3mg de E2 nos dias 13 (n=2), 15 (n=2), 17 (n=3) e 19 (n=5) do ciclo estral e a produção de PGFM (metabólito plasmático da PGF2α) mensurada por radioimunoensaio. Concluiu-se que a administração de E2 no 17º dia do ciclo estral constitui um modelo experimental adequado para determinar os mecanismos envolvidos na síntese de PGF2α. O experimento 2, foi realizado para investigar o papel do E2 na cascata produtora de PGF2α. Novilhas cruzadas de corte, cíclicas, não lactantes, foram pareadas no dia 17 de um ciclo estral sincronizado, injetadas com 0 (n=6) ou 3mg de E2 (n=7) e abatidas 2 horas após. Explantes endometriais foram tratados com os seguintes estimuladores da síntese de PGF2α: ionóforo de cálcio (CI), melitina ou ocitocina. Explantes foram incubados em quadruplicata e amostras de meio foram coletadas imediatamente e 60 minutos após o início da cultura. As concentrações de PGF2α foram mensuradas por radioimunoensaio. Explantes endometriais tratados in vitro com CI tiveram um incremento na síntese de PGF2α de 48,41% quando foram previamente tratados com o E2 (P≤0,01). No experimento 3, células endometriais bovinas (células BEND) foram tratadas com 0, 10-7, 10-6 ou 10-5M CI por 12h em triplicata, em três experimentos independentes. As concentrações de 10-6 e 10-5M de CI estimularam a produção de PGF2α em comparação às outras concentrações (P≤0,05). No experimento 4, células BEND receberam 0 ou 10-13M E2 e 0 ou 10-6M CI em um arranjo fatorial 2 x 2, durante 12h em triplicata, em três experimentos independentes. A produção de PGF2α foi de 33,1; 32,5; 92,4 e 145,6 (EPM: 21,8) pg/mL para células não tratadas, tratadas com E2, CI e E2 + CI, respectivamente. Houve uma tendência do tratamento com CI estimular a produção de PGF2α (P≤0,08), entretanto, na presença de E2 o CI estimulou significativamente a síntese de PGF2≤ (P≤0,01). Conclui-se que em fêmeas bovinas o E2 potencializou os efeitos do CI na síntese de PGF2α endometrial. Propõe-se que o E2 ativa a síntese de enzimas que, estimuladas pelo cálcio, atuam na síntese de PGF2α endometrial

Estradiol (E2) is required for luteolysis in bovine female and E2 injections stimulate prostaglandin F2α (PGF2α) release. It is possible that E2 stimulates synthesis and/or activity of molecules in the cascade of PGF2α production, such as enzymes and receptors to other ligands. Calcium is a known cofactor for protein kinase C and phospholipase A2, enzymes involved in PGF2α production. The main goal of this study was to investigate endocrine and molecular mechanisms stimulated by E2 during luteolysis. In experiment 1, non-lactating Holstein cows were treated with 3mg E2 on days 13 (n=2), 15 (n=2), 17 (n=3) or 19 (n=5) of the day estrous cycle and production PGFM (a PGF2α plasma metabolite) was evaluated by radioimmunassay. It was concluded that E2 administration on day 17 of the cycle was an adequate experimental model to determine mechanisms involved in endometrial PGF2α synthesis. Experiment 2 was designed in order to investigate the role of E2 in the enzymatic cascade of PGF2α production. Cyclic, cross-bred beef heifers were paired on day 17 of a synchronized estrous cycle, injected with 0 (n=6) or 3mg of E2 (n=7) and slaughtered after two hours. Endometrial explants were treated with stimulators of the cascade of PGF2α synthesis, i.e., calcium ionophore (CI), melittin or oxytocin. Explants were incubated in quadruplicate and medium samples were collected immediately and 60min after to begin culture. The concentrations PGF2α were measured by radioimmunoassay. Endometrial explants in vitro treatment with CI production the PGF2α was 48,41% higher in from cows treated with E2 (P≤0,01). In experiment 3, bovine endometrium cells (BEND cells) were treated with 0, 10-7, 10-6 or 10-5M CI for 12h in triplicate, in three independent experiments. The 10-6 and 10-5M concentrations of CI stimulated production of PGF2α in comparison to other concentrations (P≤0,05). In experiment 4, BEND cells received 0 or 10-13M E2 and 0 or 10-6M CI in a 2 x 2 factorial arrangement, for 12h in triplicate cultures in three independent experiments. Production of PGF2α was 33.1, 32.5, 92.4 and 145.6 (pooled SEM: 21.8) pg/mL for cells treated with nothing, E2, CI and E2 + CI, respectively. Treatment with CI alone tended to stimulate PGF2α production (P≤0,08), however, in the presence of E2, CI significantly stimulated PGF2α synthesis (P≤0,01). It was concluded that in bovine female the E2 improved the CI effects in endometrial PGF2α synthesis. It proposes that E2 active the enzyme synthesis that, calcium stimulated, actuate in endometrial PGF2α synthesis