Occurrence of tick-borne pathogens in dogs in a coastal region of the state of Ceará, northeastern Brazil / Ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos em cães em uma região litorânea do estado do Ceará, nordeste do Brasil

Abstract The aim of this study was to determine the occurrence of tick-borne pathogens (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. and Rickettsia spp.) in dogs in Vila de Jericoacoara, coastal region of Ceará, Brazil. Blood samples were collected from 153 animals and analyzed using molecular and serological methods. Sixty animals were found to be infected or exposed to at least one of the pathogens studied. Babesia vogeli was the most prevalent pathogen (15%), followed by E. canis (13.7%) and Hepatozoon spp. (11.8%), which was identified as Hepatozoon canis through sequencing. Twenty dogs (13%) were seroreactive to Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed on 11.8% of the animals. There were associations between age (< 3 years old) and positivity for B. vogeli, and between habitation (stray dogs) and positivity for H. canis. There were also associations between anemia and infection with H. canis, and between leukopenia and exposure to Rickettsia spp. No association was detected between clinical alterations and infection with or exposure to the pathogens studied. The results confirmed that pathogens of veterinary importance are circulating in northeastern Brazil and showed that dogs are exposed to Rickettsia species with zoonotic potential, thus indicating a need for vector control measures.

Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. e Rickettsia spp.) em cães na Vila de Jericoacoara, região costeira do Ceará, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 153 animais e analisadas por métodos moleculares e sorológicos. Sessenta animais foram encontrados infectados ou expostos a pelo menos a um dos patógenos estudados. Babesia vogeli foi o patógeno mais prevalente (15%), seguido por E. canis (13,7%) e Hepatozoon spp. (11,8%), que foi identificado como Hepatozoon canis por sequenciamento. Vinte cães (13%) foram sororreativos à Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi observado em 11,8% dos animais. Houve associações entre idade (<3 anos) e positividade para B. vogeli, e entre habitação (cães de rua) e positividade para H. canis. Também houve associações entre anemia e infecção por H. canis, e entre leucopenia e exposição a Rickettsia spp. Não foi detectada associação entre alterações clínicas e infecção ou exposição aos patógenos estudados. Os resultados confirmaram que patógenos de importância veterinária estão circulando no nordeste do Brasil e mostraram que cães estão expostos a espécies de Rickettsia com potencial zoonótico, indicando a necessidade de medidas de controle do vetor.

Princípios básicos da criomicrobiologia: enfoque nos tipos de micro-organismos e nos principais agentes crioprotetores / Basic principles of criomicrobiologia: focus in kind of microorganisms and principals cryoprotectants agents

O reconhecimento da grande relevância da biodiversidade microbiana para o desenvolvimento humano tem conduzido ao aprimoramento de técnicas destinadas à conservação dos mais diversos espécimes microbiológicos. Contudo, ainda não existe uma fórmula singular, ideal ou universal que possibilite a eficiência da estocagem e preservação microbiana a longo prazo. Consequentemente, diversos micro-organismos para os quais há uma crescente demanda, ainda esperam pelo desenvolvimento de metodologias adequadas à sua conservação, fazendo da criobiologia um campo de vasto potencial para o desenvolvimento de pesquisas. Nesse contexto, a proposta dessa revisão é discutir os princípios básicos da criomicrobiologia, com enfoque na preservação dos variados tipos de micro-organismos e nos principais agentes crioprotetores, tomando como base estudos disponíveis na literatura científica.

The recognizing the great importance of microbial biodiversity for human development has led to the improvement of techniques for the conservation of diverse microbiological specimens. However, there isn't a singular, ideal or universal method to provice the efficiency of the long-term microorganisms stock and preservation. Many microorganisms for which there is a growing demand still wait for the development of satisfactory methodologies to their conservation, making the cryobiology a field of vast potential for the development of researches. Then, the proposal of this review is to discuss the basic principles of cryomicrobiology, focusing the preservation of kinds microorganisms and principals agents cryoprotectants, using the available studies in the comtemporary scientific literature as base.

Avaliação in vitro da atividade citotóxica de drogas antivirais em fibroblastos caprinos / In vitro evaluation of the citotoxic activity of antiviral drugs in goat fibroblasts

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito citotóxico das drogas antivirais em cultivos de fibroblastos que foram isolados por explantation da membrana sinovial de caprinos soronegativos para a presença de anticorpos para lentivírus de pequenos ruminantes. As células eram mantidas em cultivo, para posterior utilização nos testes de citotoxicidade, contendo Meio Essencial Mínimo (MEM) acrescido de SFB 10%, antifúngico, antibióticos e glutamina. Para o teste de citotoxicidade das drogas, alíquotas de 0,1mL de fibroblastos, na concentração de 2 x105 células/mL, foram depositadas em microplacas de 96 poços, incubadas por 24 e 48h com posterior troca do meio por outro contendo diluições de 0,005 μM, 0,05 μM, 0,5 μM, 5μM, 50 μM e 500 μM de cada droga, que foram: zidovudina (AZT), estavudina, lamivudina, didanosina, efavirenz, atazanavir e lopinavir. Após 24 h de incubação o meio foi desprezado e acrescentou-se 100 μL de azul de tetrazólio (MTT) a uma concentração de 5 mg/mL. As microplacas foram incubadas por 4 h/37oC. Posteriormente, adicionou-se 100 μL de uma solução de 95% de isopropanol e 5% de ácido fórmico. A análise espectrofotométrica foi medida em um leitor de ELISA a uma absorbância de 600 nm. A partir dos valores das densidades ópticas determinou-se a concentração da droga capaz de reduzir em 50% as células viáveis. Dessa forma, a zidovudina e a didanosina na concentração de 0,05 μM e a estavudina e a lamivudina nas concentrações de 0,5 μM e 500 μM, respectivamente, não apresentaram efeitos tóxicos. Concluindo-se que essas drogas mostram potencial para o desenvolvimento de testes capazes de mensurar sua atividade antiviral frente aos lentivírus de pequenos ruminantes (SRLV small ruminant lentivirus).(AU)

This work evaluates the cytotoxic effect of antiviral drugs on cultured fibroblasts that were isolated by explantation from the synovial membrane of goats that were soronegative to the presence of lentivirus antibodies from small ruminants. The cells were grown in MEM supplemented with 10% fetal bovine serum, an antifungal, antibiotics and glutamine. The drug cytotoxicity assay was performed in 0.1 mL of fibroblasts with 2x105 cells per mL, cultivated in 96 well microplates, incubated for 24h and submitted to dilutions of 0.005 μM, 0.05 μM, 0.5 μM, 5 μM, 50 μM and 500 μM of each of zidovudine, stavudine, lamivudine, didanosine, efavirenz, atazanavir and lopinavir. After incubation for 24 hours the medium was removed and replaced by 100 μL of MTT solution (5 mg/mL) for 4 h at 37ºC. Then, the MTT solution was removed and 100 μL of a solution of 95% isopropanol and 5% of acid formic was added in order to dissolve the crystals. The absorbance was read on a multiwell spectrophotometer at 600 nm. The optical density values were used to determine the concentration of the drug capable of reducing the viable cells by 50%. Zidovudine and the didanosine at a concentration of 0.05 μM and stavudine and lamivudine at concentrations of 0.5 μM and 500 μM had no toxic effect. Therefore, these drugs have potential to develop tests to measure their antiviral activity against small ruminant lentiviruses.(AU)

Avaliação in vitro da atividade citotóxica de drogas antivirais em fibroblastos caprinos / In vitro evaluation of the citotoxic activity of antiviral drugs in goat fibroblasts

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito citotóxico das drogas antivirais em cultivos de fibroblastos que foram isolados por explantation da membrana sinovial de caprinos soronegativos para a presença de anticorpos para lentivírus de pequenos ruminantes. As células eram mantidas em cultivo, para posterior utilização nos testes de citotoxicidade, contendo Meio Essencial Mínimo (MEM) acrescido de SFB 10%, antifúngico, antibióticos e glutamina. Para o teste de citotoxicidade das drogas, alíquotas de 0,1mL de fibroblastos, na concentração de 2 x105 células/mL, foram depositadas em microplacas de 96 poços, incubadas por 24 e 48h com posterior troca do meio por outro contendo diluições de 0,005 μM, 0,05 μM, 0,5 μM, 5μM, 50 μM e 500 μM de cada droga, que foram: zidovudina (AZT), estavudina, lamivudina, didanosina, efavirenz, atazanavir e lopinavir. Após 24 h de incubação o meio foi desprezado e acrescentou-se 100 μL de azul de tetrazólio (MTT) a uma concentração de 5 mg/mL. As microplacas foram incubadas por 4 h/37oC. Posteriormente, adicionou-se 100 μL de uma solução de 95% de isopropanol e 5% de ácido fórmico. A análise espectrofotométrica foi medida em um leitor de ELISA a uma absorbância de 600 nm. A partir dos valores das densidades ópticas determinou-se a concentração da droga capaz de reduzir em 50% as células viáveis. Dessa forma, a zidovudina e a didanosina na concentração de 0,05 μM e a estavudina e a lamivudina nas concentrações de 0,5 μM e 500 μM, respectivamente, não apresentaram efeitos tóxicos. Concluindo-se que essas drogas mostram potencial para o desenvolvimento de testes capazes de mensurar sua atividade antiviral frente aos lentivírus de pequenos ruminantes (SRLV – small ruminant lentivirus).

This work evaluates the cytotoxic effect of antiviral drugs on cultured fibroblasts that were isolated by explantation from the synovial membrane of goats that were soronegative to the presence of lentivirus antibodies from small ruminants. The cells were grown in MEM supplemented with 10% fetal bovine serum, an antifungal, antibiotics and glutamine. The drug cytotoxicity assay was performed in 0.1 mL of fibroblasts with 2x105 cells per mL, cultivated in 96 well microplates, incubated for 24h and submitted to dilutions of 0.005 μM, 0.05 μM, 0.5 μM, 5 μM, 50 μM and 500 μM of each of zidovudine, stavudine, lamivudine, didanosine, efavirenz, atazanavir and lopinavir. After incubation for 24 hours the medium was removed and replaced by 100 μL of MTT solution (5 mg/mL) for 4 h at 37ºC. Then, the MTT solution was removed and 100 μL of a solution of 95% isopropanol and 5% of acid formic was added in order to dissolve the crystals. The absorbance was read on a multiwell spectrophotometer at 600 nm. The optical density values were used to determine the concentration of the drug capable of reducing the viable cells by 50%. Zidovudine and the didanosine at a concentration of 0.05 μM and stavudine and lamivudine at concentrations of 0.5 μM and 500 μM had no toxic effect. Therefore, these drugs have potential to develop tests to measure their antiviral activity against small ruminant lentiviruses.