Detection of Trypanosoma vivax in tissues of experimentally infected goats: what is the role of adipose tissue in the life cycle of this protozoon? / Detecção de Trypanosoma vivax em tecidos de caprinos experimentalmente infectados: qual é o papel do tecido adiposo no ciclo de vida desse protozoário?

Abstract Trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, is responsible for great economic losses among livestock in Africa and South America. During the life cycle of these parasites, they may present different morphological, metabolic and physiological characteristics depending on the interactions that are encountered at each point of their life cycle. Although T. vivax is frequently reported in the circulation of its mammalian hosts, it has the ability to migrate to the tissues of these individuals. However, this characteristic is poorly understood. In this context, we aimed to investigate the presence of T. vivax and the changes caused in different tissues of experimentally infected goats. Despite the animals were not perfused before tissues collection, using different approaches, we demonstrated its presence in different samples, including in the adipose tissue and skin of infected animals. In addition, a mononuclear inflammatory reaction, mostly characterized by an infiltrate of lymphocytes, plasma cells and macrophages were observed. The results highlight the possibility that, like other trypanosomatids, T. vivax may use these tissues during its life cycle. Future studies aiming to elucidate the length of time for which T. vivax remains active in these sites, and whether it uses these sites as a refuge from trypanocidal drugs, and whether it is capable of recolonizing the blood circulation, are much needed.

Resumo A tripanossomíase, causada por Trypanosoma vivax, é responsável por grandes perdas econômicas na bovinocultura da África e da América do Sul. Durante seu ciclo de vida, o parasita pode apresentar diferentes características morfológicas, metabólicas e fisiológicas em função das interações que ele encontra em cada ponto do seu ciclo. Embora o T. vivax seja reportado, frequentemente, na circulação dos seus hospedeiros mamíferos, o protozoário tem a capacidade de migrar para os tecidos desses indivíduos. Entretanto, essa característica é pobremente conhecida. Neste contexto, o objetivo foi verificar a presença, assim como as alterações causadas pelo T. vivax nos diferentes tecidos de caprinos experimentalmente infectados. Apesar dos animais não terem sido perfundidos antes da coleta dos tecidos, utilizando-se diferentes abordagens, foi evidenciada a presença do T. vivax em diferentes amostras teciduais, incluindo no tecido adiposo e pele dos animais infectados. Além disso, foi observada reação inflamatória mononuclear, caracterizada majoritariamente por infiltrado de linfócitos, plasmócitos e macrófagos. Os resultados evidenciam a possibilidade de que, assim como outros tripanossomatídeos, T. vivax pode usar esses tecidos durante o seu ciclo de vida. São necessários futuros estudos, objetivando elucidar o período em que o T. vivax permanece ativo nesses sítios, se ele utiliza esses locais como refúgio das drogas tripanocidas, e se ele é capaz de recolonizar a circulação sanguínea.

Extracellular vesicles and its advances in female reproduction

Intercellular communication is an essential mechanism for development and maintenance of multicellular organisms. Extracellular vesicles (EVs) were recently described as new players in the intercellular communication. EVs are double-membrane vesicles secreted by cells and are classified according to their biosynthesis, protein markers and morphology. These extracellular vesicles contain bioactive materials such as miRNA, mRNA, protein and lipids. These characteristics permit their involvement in different biological processes. Reproductive physiology is complex and involves constant communication between cells. Different laboratories have described the presence of EVs secreted by ovarian follicular cells, oviductal cells, in vitro produced embryos and by the endometrium, suggesting that EVs are involved in the development of gametes and embryos, in animals and humans. Therefore, is important to understand physiological mechanisms and contributions of EVs in female reproduction in order to develop new tools to improve in vivo reproductive events and assisted reproductive techniques (ARTs). This review will provide the current knowledge related to EVs in female reproductive tissues and their role in ARTs.

Extracellular vesicles and its advances in female reproduction

Intercellular communication is an essential mechanism for development and maintenance of multicellular organisms. Extracellular vesicles (EVs) were recently described as new players in the intercellular communication. EVs are double-membrane vesicles secreted by cells and are classified according to their biosynthesis, protein markers and morphology. These extracellular vesicles contain bioactive materials such as miRNA, mRNA, protein and lipids. These characteristics permit their involvement in different biological processes. Reproductive physiology is complex and involves constant communication between cells. Different laboratories have described the presence of EVs secreted by ovarian follicular cells, oviductal cells, in vitro produced embryos and by the endometrium, suggesting that EVs are involved in the development of gametes and embryos, in animals and humans. Therefore, is important to understand physiological mechanisms and contributions of EVs in female reproduction in order to develop new tools to improve in vivo reproductive events and assisted reproductive techniques (ARTs). This review will provide the current knowledge related to EVs in female reproductive tissues and their role in ARTs.(AU)

AMH Polymorphisms and their association with traits indicative of sexual precocity in nelore heifers / Polimorfismos do AMH e suas associações com características indicadoras de precocidade sexual em novilhas nelore

Anti-Müllerian Hormone (AMH) is a protein expressed in the gonads and related to ovarian follicular development. The aim of this study was to investigate the presence of polymorphisms in the AMH gene in a Nelore herd to analyze the genetic constitution of this population and to perform association studies with early pregnancy occurrence (EPO) and age at first calving (AFC). Phenotypic data consisted of verification of early pregnancy and age at first calving of 197 unrelated heifers exposed to the mating season and aged between 15 and 17 months (precocious group) and 24 months (non-precocious group). The “precocious” group consisted of 67 heifers with age at first calving of 26.5 ± 0.59 months, and the “non-precocious” group was composed of 130 heifers with age at first calving of 36.4 ± 0.99 months. All five exons of the AMH gene were amplified by Polymerase Chain Reaction (PCR) and sequenced. A total of three SNPs were identified in this study, all of them located in exon 5 (rs527023314, rs722016629, and rs134387246), the latter one positioned in the stop codon. All three SNPs identified in exon 5 characterized synonymous mutations. Only SNP rs134387246 exhibited a significant value (P ≤ 0.10) for EPO and AFC. The association study of SNP rs134387246 revealed an over-dominance effect (P = 0.056), and no additive effect was observed (P = 0.67). A reduction of 2.5 months (75 days) in the age at first calving of heterozygous heifers for the SNP rs134387246 was observed. For the first time, polymorphisms of the AMH gene were described in Nelore heifers and associated with sexual precocity traits.

O hormônio Anti-Mülleriano (AMH) é uma proteína expressa nas gônadas e está relacionada ao desenvolvimento folicular ovariano. O objetivo desse trabalho foi investigar a presença de polimorfismos do gene AMH em um rebanho Nelore, analisar a constituição genética da população para o gene e estudar a associação entre os polimorfismos e as características ocorrência de prenhez precoce (OPP) e idade ao primeiro parto (IPP). Os dados fenotípicos consistiram da verificação da prenhez precoce e idade ao primeiro parto de 197 novilhas, não aparentadas, expostas à estação de monta com idade entre 15 e 17 meses (grupo precoce) ou 24 meses (grupo não precoce). O grupo denominado “precoce” foi composto por 67 novilhas com idade ao primeiro parto de 26.5±0.59 meses, e o segundo denominado “não precoce” composto por 130 novilhas com idade ao primeiro parto de 36.4±0.99 meses. Os cinco éxons do gene AMH foram amplificados por meio da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e sequenciados. Um total de três SNPs foram identificados nesse estudo, todos localizados no éxon 5 (rs527023314, rs722016629 and rs134387246), sendo o último posicionado stop codon. Os três SNPs identificados caracterizaram mutações sinônimas. Somente o SNP rs134387246 exibiu associação significante (P ≤ 0.10) para ambas características (OPP e IPP). O estudo de associação do SNP rs134387246 revelou um efeito de sobre dominância (P=0,056), e ausência de ação gênica aditiva (P=0,67). Foi observada redução de 2,5 meses (75 dias) na idade ao primeiro parto de novilhas heterozigotas para o SNP rs134387246. Pela primeira vez na literatura, polimorfismos do gene AMH foram descritos em novilhas da raça Nelore e associados a características indicadoras de precocidade sexual.

AMH Polymorphisms and their association with traits indicative of sexual precocity in nelore heifers / Polimorfismos do AMH e suas associações com características indicadoras de precocidade sexual em novilhas nelore

Anti-Müllerian Hormone (AMH) is a protein expressed in the gonads and related to ovarian follicular development. The aim of this study was to investigate the presence of polymorphisms in the AMH gene in a Nelore herd to analyze the genetic constitution of this population and to perform association studies with early pregnancy occurrence (EPO) and age at first calving (AFC). Phenotypic data consisted of verification of early pregnancy and age at first calving of 197 unrelated heifers exposed to the mating season and aged between 15 and 17 months (precocious group) and 24 months (non-precocious group). The “precocious” group consisted of 67 heifers with age at first calving of 26.5 ± 0.59 months, and the “non-precocious” group was composed of 130 heifers with age at first calving of 36.4 ± 0.99 months. All five exons of the AMH gene were amplified by Polymerase Chain Reaction (PCR) and sequenced. A total of three SNPs were identified in this study, all of them located in exon 5 (rs527023314, rs722016629, and rs134387246), the latter one positioned in the stop codon. All three SNPs identified in exon 5 characterized synonymous mutations. Only SNP rs134387246 exhibited a significant value (P ≤ 0.10) for EPO and AFC. The association study of SNP rs134387246 revealed an over-dominance effect (P = 0.056), and no additive effect was observed (P = 0.67). A reduction of 2.5 months (75 days) in the age at first calving of heterozygous heifers for the SNP rs134387246 was observed. For the first time, polymorphisms of the AMH gene were described in Nelore heifers and associated with sexual precocity traits.(AU)

O hormônio Anti-Mülleriano (AMH) é uma proteína expressa nas gônadas e está relacionada ao desenvolvimento folicular ovariano. O objetivo desse trabalho foi investigar a presença de polimorfismos do gene AMH em um rebanho Nelore, analisar a constituição genética da população para o gene e estudar a associação entre os polimorfismos e as características ocorrência de prenhez precoce (OPP) e idade ao primeiro parto (IPP). Os dados fenotípicos consistiram da verificação da prenhez precoce e idade ao primeiro parto de 197 novilhas, não aparentadas, expostas à estação de monta com idade entre 15 e 17 meses (grupo precoce) ou 24 meses (grupo não precoce). O grupo denominado “precoce” foi composto por 67 novilhas com idade ao primeiro parto de 26.5±0.59 meses, e o segundo denominado “não precoce” composto por 130 novilhas com idade ao primeiro parto de 36.4±0.99 meses. Os cinco éxons do gene AMH foram amplificados por meio da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e sequenciados. Um total de três SNPs foram identificados nesse estudo, todos localizados no éxon 5 (rs527023314, rs722016629 and rs134387246), sendo o último posicionado stop codon. Os três SNPs identificados caracterizaram mutações sinônimas. Somente o SNP rs134387246 exibiu associação significante (P ≤ 0.10) para ambas características (OPP e IPP). O estudo de associação do SNP rs134387246 revelou um efeito de sobre dominância (P=0,056), e ausência de ação gênica aditiva (P=0,67). Foi observada redução de 2,5 meses (75 dias) na idade ao primeiro parto de novilhas heterozigotas para o SNP rs134387246. Pela primeira vez na literatura, polimorfismos do gene AMH foram descritos em novilhas da raça Nelore e associados a características indicadoras de precocidade sexual.(AU)

Intrinsic and extrinsic factors that influence ovarian environment and efficiency of reproduction in cattle

The emergent concepts on ovary environment,reproductive physiology and the development ofpharmacology are constantly supporting the advance ofassisted reproduction. Within the last years, thebiotechnics related to the synchronization of folliculardevelopment and the manipulation of bovine estruscycle have progressed rapidly and consistently. Thecombined use of timed-artificial insemination (TAI),superovulation (SOV), ovum pick up (OPU), in vitroembryo production (IVEP) and timed-embryo transfer(TET) has a great potential to improve reproductiveoutcomes and disseminate selected genetics,diminishing the interval of generations and improvingherds genetic gain. However, several factors canpotentially affect the efficiency of these procedures. Theknowledge of the particularities of the genetic groups,follicular growth manipulation, follicular populationpredictors, and metabolic and environmental aspectsthat interfere with ovarian environment and,consequently, oocyte quantity and quality is crucial tooptimize the reproductive programs. This review aimsto elucidate some factors that affect the ovarianenvironment and must be well known in order toimprove the efficiency of reproduction in cattle.

In vitro oocyte transport through the oviduct of buffalo and crossbred beef cows / Transporte de oócitos in vitro através do oviduto de búfalas e vacas de corte cruzadas

The present study was conducted to verify if the elevation of plasma concentrations of estradiol during superovulatory treatments affects the oocyte transport in buffalo females, as well as if the inferior quality of buffalo oocytes and/or some functional difference on the oviduct of these animals is responsible for the low embryo recovery rate in superovulated buffaloes when compared to cows subjected to the same treatment. Oviducts of 10 buffaloes and 15 of cows, treated to induce a single ovulation were used. The oviducts were placed on Petri dishes and received the following treatments: 5 buffalo oocytes with no E2 (G-BufBuf and G-BovBuf), 5 bovine oocytes with no E2 (G-BufBov and G-BovBov), 5 buffalo oocytes with E2 (G-BufE2Buf and G-BovE2Buf) and 5 bovine oocytes with E2 (G-BufE2Bov and G-BovE2Bov; factorial 2x2x2). Oocytes were incubated for 24h. Subsequently, oviducts were washed and oocytes were recovered and counted. Since no interactions were found between E2 treatment, oviducts and oocytes species, main effects were analyzed separately. Recovery rate and number of oocytes was higher on cattle compared to buffaloes (35.0+8.6% and 1.4+0.3 vs. 10.0±4.6% and 0.5±0.2, respectively; p<0.05); no effect of E2 treatment was observed on recovery rate and number of oocytes (29.8±9.0% and 1.3±0.4 vs. 16.9±6.1% and 0.7±0.2, respectively; p>0.05); the number of buffaloes and bovine oocytes recovered were similar (1.4±0.4 and 0.6±0.2, respectively; p>0.05). Oocytes recovery rate showed a trend (P=0.07) to be higher when buffalo oocytes were implanted when compared to bovine oocytes (35.2±9.2% vs. 12.9±5.4%). Present results suggest that oocyte transport by the oviduct of buffaloes and bovine was not dependent on oocytes species or E2 supplementation to the culture medium.(AU)

O presente estudo foi realizado para verificar se a elevação das concentrações plasmáticas de estradiol durante os tratamentos superovulatórios afeta o transporte dos oócitos em fêmeas bubalinas, bem como se a qualidade inferior dos oócitos de búfalos e/ou alguma diferença funcional no oviduto destes animais é responsável pela baixa taxa de recuperação de embriões em búfalas superovuladas quando comparadas a vacas submetidas ao mesmo tratamento. Foram utilizados 10 ovidutos de búfalas e 15 de vacas, tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram colocados em placas de Petri e receberam os seguintes tratamentos: sem E2 e inseridos com 5 oócitos de búfalas (G-BufBuf e G-BovBuf); sem E2 e com 5 oócitos de vacas (G-BufBov e G-BovBov); com E2 e com 5 oócitos de búfalas (G-BufE2Buf e G-BovE2Buf); e com E2 e com 5 oócitos de vacas (G-BufE2Bov e G-BovE2Bov; fatorial 2x2x2). Posteriormente, foram incubados por 24h e, após esse período, foram lavados para a recuperação e contagem dos oócitos. Como não foi verificado efeito de interação, foram analisados os efeitos principais. O número e a taxa de recuperação de oócitos foi maior em ovidutos de vacas que de búfalas (1,4±0,3/35,0±8,6% vs. 0,5±0,2/10,0±4,6%; P<0,05). Foi verificado que o tratamento com ou sem E2 não interferiu no número e na taxa de recuperação de oócitos (1,3±0,4/29,8±9,0% vs. 0,7±0,2/16,9±6,1%; P>0,05). Não foi verificada diferença no número de oócitos de búfalas ou de vacas recuperados (1,4±0,4 e 0,6±0,2; P>0,05). Observou-se também que houve tendência (P=0,07) de maior taxa de recuperação de oócitos de búfalas que de vacas (35,2±9,2% vs. 12,9±5,4%). Os dados são indicativos de que o transporte de oócitos pelo oviduto de búfalas e de vacas independe da espécie do oócito e não é influenciado pelo E2.(AU)

Perfil de FSH e LH na divergência folicular em novilhas Nelore (Bos indicus) / FSH and LH profiles during follicle deviation in Nelore heifers (Bos indicus)

O presente estudo teve como objetivo traçar o perfil de gonadotrofinas em 12 novilhas Nelore, a fim de testar a hipótese de que há declínio nas concentrações de FSH e elevação transitória nos níveis de LH durante a seleção folicular. A partir da ovulação (D0) foram colhidas amostras de sangue da veia jugular a cada 12 horas até o D5, para a dosagem de FSH e LH plasmáticos. Empregou-se o método de radioimunoensaio de duplo anticorpo. A sensibilidade do ensaio de LH foi de 0,02ng/ml e a de FSH de 0,005ng/ml. Os coeficientes de variação intra-ensaio foram 13,6% e 18,8%, respectivamente. Os dados (média±EPM) foram normalizados para o momento da divergência folicular e, posteriormente, analisados por ANOVA e por regressão inear, cúbica e quadrática. Também foi empregado o Teste t para comparação entre o ponto mais alto e o mais baixo da curva. Não se verificou efeito de tempo sobre as concentrações plasmáticas de FSH e de LH quando se utilizou análise de variância e de regressão. Entretanto, através do Teste t pontual, o FSH atingiu as menores concentrações plasmáticas 36 (0,40±0,05ng/ml) e 60 horas (0,42±0,04ng/ml) após a divergência, comparativamente às 36 horas anteriores ao desvio, quando as concentrações foram máximas (0,63±0,08ng/ml). Conclui-se, portanto, que há declínio nas concentrações plasmáticas de FSH, contudo, não foi comprovada elevação transitória nas concentrações de LH próximo ao momento do desvio folicular em fêmeas Nelore.(AU)

Present study aimed to evaluate gonadotropins profiles in 12 Nelore heifers, in order to test the hypothesis that FSH concentrations decrease and LH presents a transient increase during follicle selection. Blood samples from jugular vein were harvested twice daily starting at the time of ovulation (D0) until D5. Plasma samples were assayed for FSH and LH by double antibody radioimmunoassay method. LH and FSH assay sensitivity was 0,02ng/ml and 0,005ng/ml, respectively. The intraassay coefficient of variation was 13,6% and 18,8%, respectively. Data (mean±SEM) were normalized to follicle deviation and analyzed by ANOVA and by linear, cubic, and quadratic regressions. Comparisons between higher and lower FSH values were also performed by T-test. There was no effect of time in plasmatic FSH and LH circulating levels when variance analysis or regression analysis were performed. However, by T-test, FSH concentrations reached the lowest plasmatic levels 36 (0,40±0,05ng/ml) and 60 hours (0,42±0,04ng/ml) after follicular deviation, comparatively to 36 hours before deviation, when the concentrations were maximal (0,63±0,08ng/ml). In conclusion, there is a FSH decrease, although a transient LH elevation has not been confirmed encompassing follicle deviation in Nelore females.(AU)

Taxa de recuperação in vivo e competência in vitro de oócitos bubalinos, zebuínos e taurinos aspirados em diferentes fases da onda de crescimento folicular / In vivo recovery rate and in vitro competence of Bubalus bubalis, Bos indicus and Bos taurus oocytes obtained at different phases of follicular wave

O objetivo do presente estudo foi o de determinar em qual fase da onda de crescimento folicular são obtidas maiores taxas de recuperação e competência de oócitos obtidos por aspiração folicular (OPU) em novilhas cruzadas (Bos indicus x Bos taurus; Capítulo 1) ou em novilhas bubalinas (Bubalus bubalis), zebuínas (Nelore; Bos indicus) e taurinas (Holandês; Bos taurus; Capítulo 2). No Capítulo 1, 30 novilhas cruzadas foram submetidas à OPU aos 2 (D2), 4 (D4) e 6 (D6) dias após a emergência da onda de crescimento folicular (n=10/ grupo), em delineamento "cross-over" realizado em 3 réplicas. Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos de produção in vitro. Os dados foram analisados por ANOVA, utilizando o PROC MIXED, considerando os efeitos fixos de momento de OPU, de réplica e da interação entre eles, e o efeito aleatório de doadora. Foram produzidos maior taxa de blastocistos aos 6 dias pós-FIV, bem como maior número de blastocistos aos 9 dias pós-FIV e maior número de núcleos dos embriões eclodidos quando procedeu-se com aspiração no D2. Contudo, a OPU realizada no D6 também influenciou positivamente a taxa de blastocistos 6 dias pós FIV e não diferiu dos outros momentos com relação ao número de núcleos dos embriões eclodidos. No Capítulo 2, foram realizados 2 experimentos (1 e 2). No Experimento 1, foi avaliado o efeito de 50 mg de progesterona injetável na sincronização de emergência folicular em novilhas Nelore, Holandesas e bubalinas submetidas a protocolo de sincronização à base de progestágeno associado a 2 mg de benzoato de estradiol (n=10/ grupo). Os dados foram analisados por regressão logística, utilizando o PROC GLIMMIX. O momento da emergência folicular não foi afetado pela administração de progesterona injetável, ocorrendo entre 4,2 a 4,5 dias após o início do protocolo de sincronização para os três grupos genéticos. No Experimento 2, foram avaliados os efeitos de momento de sincronização da emergência folicular para a aspiração folicular (1, 3 ou 5 dias após a emergência) e de grupo genético (Nelore, Holandês e búfalo) na produção de embriões in vitro. Um total de 27 novilhas (9 de cada grupo genético, subdivididas nos 3 momentos de aspiração folicular) foram submetidas a 6 sessões de OPU, em delineamento "cross-over". Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos de produção in vitro. Os dados foram analisados por ANOVA, utilizando o PROC MIXED, considerando os efeitos fixos de momento de OPU, de grupo genético, de réplica e da interação entre eles, e o efeito aleatório de doadora. Os resultados demonstraram que novilhas Nelore apresentaram melhor eficiência para a produção de embriões in vitro do que as novilhas Holandesas ou bubalinas, e que a aspiração folicular realizada em diferentes momentos da onda folicular sincronizada não influenciou a produção in vitro

The objective of the present study was to determine in which phase of follicular wave higher recovery rates and better oocyte competence can be obtained by ovum pickup (OPU) in crossbred (Bos indicus x Bos taurus; Chapter 1) or buffalo (Bubalus bubalis), Nelore (Bos indicus) and Holstein heifers (Bos taurus; Chapter 2). In Chapter 1, 30 crossbred heifers were submitted to OPU on days 2 (D2), 4 (D4) or 6 (D6) after follicular wave emergence (n=10/ group), in a cross-over design performed in 3 replicates. Oocytes recovered were selected and those viable were submitted to in vitro embryo procedures. Data were analyzed by ANOVA, using PROC MIXED, in which time of OPU, replicate and interaction between these factors were considered as fixed effects, and donor was considered as a random effect. Higher blastocyst rate (6 days after IVF), number of blastocysts (9 days after IVF), and number of nuclei of hatched embryos were produced when OPU was done on D2. However, OPU on D6 also produced a higher blastocyst rate (6 days after IVF), and did not differ from other times of OPU concerning number of nuclei of hatched embryos. In Chapter 2, two experiments were performed. In Experiment 1, the effect of 50 mg of injectable progesterone was evaluated in the synchronization of follicular wave emergence of Nelore, Holstein, and buffalo heifers submitted to a progestin plus 2 mg of estradiol benzoate protocol (n=10/ group). Data were analyzed by logistic regression, by PROC GLIMMIX. The time of follicular wave emergence was not affected by administration of injectable progesterone. Besides, follicular wave emergence occurred between 4.2 and 4.5 days after the beginning of synchronization protocol for all genetic groups. In Experiment 2, the effects of time of OPU relative to follicular wave emergence (1, 3 or 5 days) and of genetic group (Nelore, Holstein, and buffalo) on in vitro embryo production were evaluated. A total of 27 heifers (9 of each genetic group, assigned in the 3 times of OPU) were submitted to 6 OPU sessions, in a cross-over design. Oocytes recovered were selected and those viable were submitted to in vitro embryo procedures. Data were analyzed by ANOVA, using PROC MIXED, in which time of OPU, genetic group, replicate and interaction between these factors were considered as fixed effects, and donor was considered as a random effect. Results demonstrated that Nelore heifers showed a better efficiency for in vitro embryo production than Holstein or buffalo heifers. Additionally, OPU performed at different times of synchronized follicular wave did not influence in vitro embryo production

Estudo da divergência folicular e da capacidade ovulatória em bubalinos (Bubalus bubalis) e zebuínos (Bos indicus) / Study of follicle deviation and ovulatory capacity in buffaloes (Bubalus bubalis) and zebu cattle (Bos indicus)

O presente estudo está apresentado em Capítulo 1 (Divergência folicular; DF) e 2 (Capacidade ovulatória), e em cada estão incluídos dois experimentos [1 - em bubalinos (Bubalus bubalis); 2 - em zebuínos (Bos indicus)]. Os objetivos do Capítulo 1 foram determinar o momento e diâmetro na DF e avaliar o perfil das concentrações plasmáticas de FSH e LH próximo à seleção folicular. No Experimento 1, a ovulação foi considerada o dia zero (D0), a partir do qual 10 novilhas Murrah foram examinadas por ultra-sonografia (US) a cada oito horas (h) até o D4 e, posteriormente, a cada 24h até o D6. A avaliação da DF foi realizada por análise visual do gráfico de cada novilha (Ginther et al., 1996) e regressão linear segmentada (Bergfelt et al. 2003). As amostras de sangue, para dosagem de FSH e LH, foram colhidas com intervalos de 8h nas primeiras 24h pós-ovulação. A partir deste momento foram feitas colheitas a cada 4h até o D4 e após, a cada 12h até o D6. No método visual, o intervalo ovulação-DF, e o diâmetro dos folículos dominante (FD) e subordinado (FS) foram de, respectivamente, 63,2±5,7h; 7,2±0,3mm e 6,4±0,3mm (média±EPM). No método matemático estes mesmos parâmetros foram de, respectivamente, 61,9±4,9h; 7,3±0,3mm e 6,3±0,3mm. Não houve diferença entre os dois métodos de avaliação da DF (P>0,05). As concentrações plasmáticas de FSH e LH não variaram ao longo do tempo (P>0,05). No Experimento 2, 12 novilhas Nelore foram submetidas à US a cada 12h até o D5 e estes mesmos intervalos foram adotados para as colheitas de sangue (dosagem de FSH e LH). No método visual, o intervalo ovulação-DF, e os diâmetros do FD e FS foram de, respectivamente, 61,0±5,8h; 6,2±0,2mm e 5,8±0,2mm. No método matemático estes mesmos parâmetros foram de, respectivamente, 57,2±6,0h; 6,2±0,3mm e 5,9±0,3mm. Não houve diferença entre os métodos (P>0,05). As concentrações plasmáticas de FSH e LH não variaram ao longo do tempo (P>0,05). No Capítulo 2, o objetivo foi avaliar o diâmetro no qual o FD adquire capacidade ovulatória após administração de 25mg de LH. Os grupos foram formados de acordo com o diâmetro do FD no momento do tratamento com LH (7,0-8,4mm; 8,5-10,0mm e >10,0mm, em ambos os experimentos). No Experimento 1, foram utilizadas 29 novilhas bubalinas Murrah x Mediterrâneo. A partir do D3 (pós-ovulação), os exames US foram realizados a cada 12h até 48h do tratamento com LH. Nos grupos 7,0-8,4; 8,5-10,0 e >10,0mm, os diâmetros foliculares no momento da aplicação do LH foram de 7,8c±0,1; 9,3b±0,2 e 11,0a±0,3mm e as taxas de ovulação de 0,0%b (0/10); 50,0%a (5/10) e 55,6%a (5/9), respectivamente. No Experimento 2, 29 novilhas Bos indicus foram monitoradas por US a cada 24h a partir da ovulação até o tratamento com LH, e então a cada 12h durante 48h. Nos grupos 7,0-8,4; 8,5-10,0 e >10,0mm, os diâmetros foliculares no momento da aplicação do LH foram de 7,6c±0,1; 9,6b±0,1 e 10,9a±0,2mm e as taxas de ovulação de 33,3%b (3/9); 80,0%a (8/10) e 90,0%a (9/10), respectivamente

Present study is presented in Chapter 1 (Follicle deviation; FD) and 2 (Ovulatory capacity). Each chapter includes two experiments [1 - in buffaloes (Bubalus bubalis); 2 - in zebu cattle (Bos indicus)]. In Chapter 1, aims were to determine moment and diameter deviation and to evaluate FSH and LH plasmatic profiles encompassing follicle selection. In Experiment 1, ovulation was considered day 0 (D0). From D0, 10 Murrah heifers were examined by ultrasound (US) each eight hours (h) until D4 and then, every 24h until D6. FD evaluation was performed by visual analysis (Ginther et al., 1996) and by segmented linear regression (Bergfelt et al., 2003). Blood samples were harvested each 8h in the first 24h post ovulation. From this moment blood collections were performed every 4h until D4 and after that, each 12h until D6. Interval ovulation-FD, dominant (DF) and subordinate follicle (SF) diameters, by visual method, were, respectively, 63.2±5.7h; 7.2±0.3mm and 6.4±0.3mm (mean±SEM). These same end points, by mathematical method, were, respectively, 61.9±4.9h; 7.3±0.3mm and 6.3±0.3mm. No differences between both methods of FD evaluation (P>0.05) were found. No changes in plasmatic FSH and LH levels along the time (P>0.05) were found. In Experiment 2, 12 Nelore heifers were submmited to US each 12h until D5, and these same intervals were used to blood harvests (FSH and LH profiles). Interval ovulation-FD, dominant (DF) and subordinate follicle (SF) diameters, by visual method, were, respectively, 61.0±5.8h; 6.2±0.2mm and 5.8±0.2mm. These same end points, by mathematical method, were, respectively, 57.2±6.0h; 6.2±0.3mm and 5.9±0.3mm. No differences between both methods of FD evaluation (P>0.05) were found. No changes in plasmatic FSH and LH levels along the time (P>0.05) were found. In Chapter 2, aim was to evaluate diameter in which DF acquires ovulatory capacity after administration of 25mg of LH. The animals were assigned in groups according to DF diameter at LH treatment (7.0-8.4mm; 8.5-10.0mm and >10.0mm, in both experiments). In Experiment 1, 29 Murrah x Mediterrâneo heifers were used. From D3 (post ovulation), US examinations were performed each 12h until 48h after LH treatment. Follicle diameters at LH chalenge in groups 7.0-8.4mm, 8.5-10.0mm and >10.0mm, were 7.8c±0.1, 9.3b±0.2 and 11.0a±0.3mm, and ovulation rates were 0.0%b (0/10), 50.0%SUP>a (5/10) and 55.6%a (5/9), respectively. In Experiment 2, 29 Bos indicus heifers were monitored by US every 24h from ovulation until LH chalenge, and then each 12h during 48h. Follicle diameters at LH treatment in groups 7.0-8.4mm, 8.5-10.0mm and >10.0mm, were 7.6c±0.1, 9.6b±0.1 and 10.9a±0.2mm, and ovulation rates were 33.3%b (3/9), 80.0%a (8/10) and 90.0%a (9/10), respectively