Copro-PCR in the detection and confirmation of Toxoplasma gondii oocysts in feces of stray and domiciled cats / Copro-PCR na detecção e confirmação de oocistos de Toxoplasma gondii emfezes de gatos errantes e domiciliados

Molecular methods such as Copro-PCR stand out in the diagnosis of T. gondii, because they are highly sensitive and specific, and can distinguish T. gondii from other morphologically similar coccids. The purpose was the detection of Toxoplasma gondii copro-prevalence by polymerase chain reaction in 149 fecal samples from stray and domiciled cats, using three distinct markers (B5-B6, 18S and 529bp RE). Oocysts of T. gondii/H. hammondi were detected in 15.4% by parasitology fecal tests (PFT), and 4% of these oocysts were positively identified as T. gondii by Copro-PCR. The presence of T. gondii genetic material was detected in 16.1%, but 12% of the samples that tested positive by Copro-PCR were negative in PFT. Samples with discordant results were subjected to a new Copro-PCR with 18S marker and a 529, and of the 17 samples, 9 contained T. gondii genetic material. A comparison of the PFT and the molecular methods showed the latter was more sensitive, since it detected 22.1% while the PFT detected 15.4%. Demonstrating the high sensitivity and specificity of the Copro-PCR, particularly with the association of primers (k=0.809), but also confirms the importance of using molecular techniques in laboratories, since Copro-PCR was able to detect samples considered negative by PFT.(AU)

Métodos moleculares como a Copro-PCR se destacam no diagnóstico de T. gondii por serem altamente sensíveis e específicos, podendo distinguir T. gondii de outros coccídeos morfologicamente semelhantes. O objetivo foi a detecção da coproprevalência de Toxoplasma gondii por reação em cadeia da polimerase, em 149 amostras fecais de gatos errantes e domiciliados, utilizando-se três marcadores distintos (B5-B6, 18S e 529pb RE). Oocistos de T. gondii/H. hammondi foram detectados em 15,4% pelos exames parasitológicos de fezes (EPF), e 4% desses oocistos foram identificados positivamente como T. gondii pela Copro-PCR. A presença de material genético de T. gondii foi detectada em 16,1%, mas 12% das amostras positivas pelo Copro-PCR foram negativas no EPF. As amostras com resultados discordantes foram submetidas a uma nova Copro-PCR com os marcadores 18S e 529 e, das 17 amostras, 9 continham material genético de T. gondii. A comparação do EPF com os métodos moleculares mostrou que esse último foi mais sensível, pois detectou 22,1%, enquanto o EPF detectou 15,4%. Isso demonstra a alta sensibilidade e especificidade da Copro-PCR, principalmente com a associação de marcadores (k = 0,809); mas também confirma a importância do uso de técnicas moleculares em laboratórios, uma vez que a Copro-PCR foi capaz de detectar amostras consideradas negativas pelo EPF.(AU)

Toxoplasmosis outbreak in sheep in northern-central Paraná, Brazil / Surto de toxoplasmose em ovinos na Região Norte Central do Paraná, Brasil

In this study, we aimed to investigate an outbreak of abortion in a herd of beef sheep on a property in Ivaiporã, north central Paraná, Brazil. A total of 64 blood samples were collected from the sheep, 33 of which were mothers with reports of abortion or stillbirth, and 7 with weak lamb birth. For epidemiological investigation of the parasite, fourteen samples were collected from different sources on the property, six from water, three from soil, one from trough, and four from feed. Indirect immunofluorescence (IFI) analysis and polymerase chain reaction were performed for detecting anti-Toxoplasma gondii antibodies in the sheep and molecular identification of the protozoan in the environment, respectively. The IFI results showed that 95.3% of the sheep were seropositive for anti-T. gondii antibodies; however, the environmental samples tested negative. During the visit to the property and interview with the owner, free-roaming cats were observed on the property for biological control of rodents that had access to the food deposits. This type of management may have triggered the outbreak, which reinforces the importance of preventive management and veterinary medical monitoring on sheep farms.(AU)

Esse estudo teve como objetivo investigar um surto de aborto em um rebanho de ovinos de corte em uma propriedade de Ivaiporã, região norte central do Paraná, Brasil. Foram coletados 64 amostras de sangue dos ovinos, sendo, que destes, eram 33 matrizes com relato de abortamento ou natimortos, sete com nascimento de descendentes fracos. Para investigação ambiental do parasito, foram coletadas seis amostras de diferentes fontes de água da propriedade, duas de solo, duas de cocho e duas de ração. Realizou-sea imunofluorescência indireta (RIFI) para a detecção de anticorpos anti- Toxoplasma gondii e reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificação molecular do protozoário no ambiente. Os resultados da RIFI demostraram que 95,3% (61/64) dos ovinos eram soropositivos ao T. gondii, contudo, as amostras ambientais foram negativas. Durante a visita à propriedade e entrevista com o proprietário, foi observado presença de gatos de forma livre na propriedade, inclusive com acesso ao depósito de ração para controle biológico de roedores, é possível que esse tipo de manejo tenha desencadeado o surto, o que reforça a importância do manejo preventivo e acompanhamento médico veterinário em propriedades de ovinocultura.(AU)

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and meta-analysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were “neospora AND sheep,” “neosporosis AND sheep,” “neospora AND lamb,” “neosporosis AND lamb,” “neospora AND ewe,” and “neosporosis AND ewe.” The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I2 test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via metaanalysis that the use of indirect immunofluorescence assay (IFAT) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the diagnosis of ovine neosporosis was not a source of data heterogeneity. The presence of dogs on the properties was reported as the main risk factor associated with the occurrence of ovine neosporosis; however, this was not confirmed by the meta-analysis.(AU)

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram “neospora AND sheep”, “neosporose AND sheep”, “neospora AND lamb”, “neosporose AND lamb”, “neospora AND ewe” e “neosporose AND ewe”. Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continentes de acordo com as prevalências demonstradas. Confirmamos por meio de meta-análise que o uso de ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) no diagnóstico de neosporose ovina não foi uma fonte de heterogeneidade de dados. A presença de cães nas propriedades foi relatada como o principal fator de risco associado à ocorrência de neosporose ovina; no entanto, isso não foi confirmado pela meta-análise.(AU)

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and meta-analysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were “neospora AND sheep,” “neosporosis AND sheep,” “neospora AND lamb,” “neosporosis AND lamb,” “neospora AND ewe,” and “neosporosis AND ewe.” The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I2 test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via metaanalysis that the use of indirect immunofluorescence assay (IFAT) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the diagnosis of ovine neosporosis was not a source of data heterogeneity. The presence of dogs on the properties was reported as the main risk factor associated with the occurrence of ovine neosporosis; however, this was not confirmed by the meta-analysis.

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram “neospora AND sheep”, “neosporose AND sheep”, “neospora AND lamb”, “neosporose AND lamb”, “neospora AND ewe” e “neosporose AND ewe”. Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continentes de acordo com as prevalências demonstradas. Confirmamos por meio de meta-análise que o uso de ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) no diagnóstico de neosporose ovina não foi uma fonte de heterogeneidade de dados. A presença de cães nas propriedades foi relatada como o principal fator de risco associado à ocorrência de neosporose ovina; no entanto, isso não foi confirmado pela meta-análise.

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and metaanalysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were "neospora AND sheep," "neosporosis AND sheep," "neospora AND lamb," "neosporosis AND lamb," "neospora AND ewe," and "neosporosis AND ewe". The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I² test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via meta analysis that the use of indirect immunofluorescence assay (IFAT) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the diagnosis of ovine neosporosis was not a source of data heterogeneity. The presence of dogs on the properties was reported as the main risk factor associated with the occurrence of ovine neosporosis; however, this was not confirmed by the meta-analysis.

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram "neospora AND sheep", "neosporose AND sheep", "neospora AND lamb", "neosporose AND lamb", "neospora AND ewe" e "neosporose AND ewe". Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continentes de acordo com as prevalências demonstradas. Confirmamos por meio de meta-análise que o uso de ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) no diagnóstico de neosporose ovina não foi uma fonte de heterogeneidade de dados. A presença de cães nas propriedades foi relatada como o principal fator de risco associado à ocorrência de neosporose ovina; no entanto, isso não foi confirmado pela meta-análise.

Identification, molecular characterization and factors associated with occurrences of Cryptosporidium spp. in calves on dairy farms in Brazil / Identificação, caracterização molecular e fatores associados à ocorrência de Cryptosporidium spp. em bezerros de propriedades leiteiras no Brasil

Abstract Cattle are an important source of zoonotic species of Cryptosporidium for humans. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium, identify the species and determine the risk factors relating to environment, animals and management among dairy calves in eight Brazilian states. A total of 408 fecal samples from calves aged 1-60 days were analyzed. An epidemiological questionnaire was completed. Sample screening was performed using Ziehl-Neelsen technique and the positive samples were subjected to nested PCR. Cryptosporidium species were identified by means of the PCR-RFLP technique, using SSPI, ASEI and MBOII enzymes. The Ziehl-Neelsen technique showed that 89.7% (35/39) of the farms and 52.9% (216/408) of the samples were positive. Through nested PCR, these protozoa were detected in 54.6% of the samples. The 56 samples subjected to PCR-RFLP presented Cryptosporidium parvum. There was higher prevalence of the parasite in animals aged 7 to 28 days (62.6%). Diarrhea, ages between seven and 28 days and a spring water source were factors associated with the risk of infection. The calf hutch-type management system was associated with reduced infection. These findings demonstrate the high level of Cryptosporidium spp. circulation in cattle herds and the predominance of the species C. parvum.

Resumo O gado é uma fonte importante de espécies zoonóticas de Cryptosporidium para o homem. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de Cryptosporidium, identificar a espécie e determinar os fatores de risco relacionados ao meio ambiente, aos animais e ao manejo em bezerros leiteiros em oito estados brasileiros. Um total de 408 amostras fecais de bezerros, com idade entre 1 e 60 dias, foram analisadas. Um questionário epidemiológico foi preenchido. A triagem das amostras foi realizada pela técnica de Ziehl-Neelsen, e as amostras positivas foram submetidas à "nested" PCR. As espécies de Cryptosporidium foram identificadas pela técnica de PCR-RFLP, utilizando-se as enzimas SSPI, ASEI e MBOII. A técnica de Ziehl-Neelsen mostrou que 89,7% (35/39) das fazendas e 52,9% (216/408) das amostras foram positivas. Por meio de nested PCR, esses protozoários foram detectados em 54,6% das amostras. As 56 amostras submetidas à PCR-RFLP apresentaram Cryptosporidium parvum. Houve maior prevalência do parasita em animais de 7 a 28 dias (62,6%). Diarreia, idade entre sete e 28 dias, e fonte de água mineral foram fatores associados ao risco de infecção. O sistema de manejo do tipo "casinha" para bezerros foi associado à redução da infecção. Esses achados demonstram o alto nível de Cryptosporidium spp. em circulação nos rebanhos bovinos e o predomínio da espécie C. parvum.

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and metaanalysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were "neospora AND sheep," "neosporosis AND sheep," "neospora AND lamb," "neosporosis AND lamb," "neospora AND ewe," and "neosporosis AND ewe". The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I² test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via meta analysis that the use of indirect immunofluorescence assay (IFAT) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the diagnosis of ovine neosporosis was not a source of data heterogeneity. The presence of dogs on the properties was reported as the main risk factor associated with the occurrence of ovine neosporosis; however, this was not confirmed by the meta-analysis.(AU)

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram "neospora AND sheep", "neosporose AND sheep", "neospora AND lamb", "neosporose AND lamb", "neospora AND ewe" e "neosporose AND ewe". Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continentes de acordo com as prevalências demonstradas. Confirmamos por meio de meta-análise que o uso de ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) no diagnóstico de neosporose ovina não foi uma fonte de heterogeneidade de dados. A presença de cães nas propriedades foi relatada como o principal fator de risco associado à ocorrência de neosporose ovina; no entanto, isso não foi confirmado pela meta-análise.(AU)

Molecular survey of Cryptosporidium spp. in calves from the state of Mato Grosso, Brazil / Levantamento molecular de Cryptosporidium spp. em bezerros do estado de Mato Grosso, Brasil

Cryptosporidium spp. is a protozoan that infects a wide range of vertebrate hosts; it has been reported to be the cause of severe illness or death in livestock worldwide, which leads to decreased performance and production losses, especially in young animals. This study investigated the presence of Cryptosporidiumin calves from beef farms in the state of Mato Grosso, midwestern Brazil. For this purpose, fecal samples from 237 animals aged ≤ 45 days, raised in 20 rural properties were subjected to DNA extraction and nested polymerase chain reaction (nPCR) targeting 18S ribosomal RNA (18S rRNA) gene followed by sequencing. Additionally, positive samples, previously identified as Cryptosporidium parvum by sequencing and phylogenetic analyses based on 18S rRNA gene, were subsequently analyzed focusing the amplification and sequencing using nPCR of a fragment of the 60 kDa glycoprotein (gp60) gene. Of the 237 fecal samples analyzed by PCR (18S rRNA), 50 (21.1%) fecal samples were positive for Cryptosporidium spp., while 14 (70%) of the 20 properties had at least one positive animal. The following Cryptosporidium species were detected: C. bovis, C. parvum, and C. ryanae. Thereafter, two potentially zoonotic subtypes (IIaA15G2R1 and IIaA16G3R1) of C. parvum were identified based on gp60 gene sequences. This study resulted in the detection of subtype IIaA16G3R1 for the first time in South America and showed a wide distribution of the protozoan in beef farms in the studied area of the State.

Cryptosporidium spp. é um protozoário que infecta uma grande variedade de hospedeiros vertebrados, sendo descrito como causa de doenças graves ou morte na pecuária em todo o mundo, o que leva à diminuição do desempenho e à perda de produção, especialmente em animais jovens. Este estudo investigou a presença de Cryptosporidium em bezerros de fazendas de bovinocultura de corte no estado de Mato Grosso, Centro-Oeste do Brasil. Para esse fim, amostras fecais de 237 animais com idade ≤ 45dias, criados em 20 propriedades rurais foram submetidas à extração de DNA e uma "nested" da reação em cadeia pela polimerase (nPCR) direcionada ao gene 18S RNA ribossomal (18S rRNA), seguido do sequenciamento. Adicionalmente, amostras positivas, previamente identificadas como Cryptosporidium parvum pelo sequenciamento e análises filogenéticas baseadas no gene 18S rRNA, foram posteriormente analisadas usando a nPCR buscando a amplificação e sequenciamento de um fragmento do gene de uma glicoproteína de 60 kDa (gp60). Das 237 amostras fecais analisadas pela PCR (18S rRNA), 50 (21,1%)amostras fecais foram positivas para Cryptosporidium spp., enquanto 14 (70%) das 20 propriedades tinham ao menos um animal positivo. As seguintes espécies de Cryptosporidium foram detectadas: C. bovis, C. parvum e C. ryanae. Posteriormente, dois subtipos potencialmente zoonóticos (IIaA15G2R1e IIaA16G3R1) foram identificados. Este estudo resultou na detecção do subtipo IIaA16G3R1 pela primeira vez na América do Sul e mostrou uma ampla distribuição do protozoário em rebanhos de corte na área estudada do Estado.

Occurrence of gastrointestinal protozoans in cats from Londrina, Paraná, Brazil / Ocorrência de protozoários gastrointestinais em gatos de Londrina, Paraná, Brasil

Protozoans are widely distributed, and several species may parasitize the digestive tracts of cats (Felis catus), and can be transmitted to humans. The present study aimed to evaluate the species and occurrence of gastrointestinal protozoans in cats in the city of Londrina, Paraná, Brazil. A total of 206 cat fecal samples were tested, of which 141 were from shelter animals, and 65 were from pets owned by local people. Samples were processed by parasitological techniques. Coproparasitological techniques (Willis, Faust and Ziehl-Neelsen) were performed for detection of protozoan parasites. Subsequently, all samples were processed by PCR protocols specific to Toxoplasma gondii, Giardia spp., and Cryptosporidium spp. PCR products from positive samples were selected for sequencing. No samples were found to be positive for Cryptosporidium spp. using the Ziehl-Neelsen technique. Using specific PCR protocols, 1/206 (0.48%) samples tested positive for Cryptosporidium spp. After purification, this one positive sample was sequenced, and it demonstrated a 100% identity match to Cryptosporidium muris. Using specific PCR protocols, 13/206 (9.22%) cat fecal samples tested, including 2/65 (3.08%) pet cat fecal samples, were positive for T. gondii. PCR analysis revealed that 37/206 (17.96%) of cat fecal samples were positive for Giardia spp., including 27/141 (19.15%) of shelter cat fecal samples, and 10/65 (15.38%) pet cat fecal samples (p = 0.5124). When sequenced, these positive samples showed a 100% identity match with Giardia duodenalis. This study demonstrated that infections with Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii, and Giardia duodenalis are present in the population of both pet cats and shelter cats in the city of Londrina. This poses a risk to public health, because these parasites have a high zoonotic potential.

Os protozoários são amplamente distribuídos, e várias espécies podem parasitar o trato digestivo de gatos (Felis catus) e podem ser transmitidas para humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar as espécies e a ocorrência de protozoários gastrintestinais em gatos na cidade de Londrina, Paraná, Brasil. Um total de 206 amostras de fezes de gato foram testadas, das quais 141 eram de animais de abrigo, e 65 eram de animais de propriedade da população local. As amostras foram processadas por técnicas parasitológicas. Willis e esfregaços fecais foram confeccionados e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. Posteriormente, todas as amostras foram processadas por protocolos de PCR específicos para Toxoplasma gondii, Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os produtos de PCR de amostras positivas foram selecionados para sequenciamento. Nenhuma amostra foi considerada positiva para Cryptosporidium spp. usando a técnica de Ziehl-Neelsen. Utilizando protocolos específicos de PCR, 1/206 (0,48%) amostras apresentaram resultados positivos para Cryptosporidium spp. Após a purificação, essa amostra positiva foi sequenciada e demonstrou 100% de equivalência de identidade com Cryptosporidium muris. Utilizando protocolos específicos de PCR, 13/206 (9,22%) amostras fecais de gatos testadas, incluindo 2/65 (3,08%) amostras fecais de gatos de estimação, foram positivas para T. gondii. A análise de PCR revelou que 37/206 (17,96%) das amostras de fezes de gatos foram positivas para Giardia spp., Incluindo 27/141 (19,15%) de amostras fecais de gatos de abrigo, e 10/65 (15,38%) amostras fecais de gatos de estimação (p = 0,5124). Quando sequenciadas, essas amostras positivas apresentaram 100% de equivalência de identidade com Giardia duodenalis. Este estudo demonstrou que as infecções por Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Giardia duodenalis estão presentes na população de gatos de estimação e gatos de abrigo na...

Occurrence of gastrointestinal protozoans in cats from Londrina, Paraná, Brazil / Ocorrência de protozoários gastrointestinais em gatos de Londrina, Paraná, Brasil

Protozoans are widely distributed, and several species may parasitize the digestive tracts of cats (Felis catus), and can be transmitted to humans. The present study aimed to evaluate the species and occurrence of gastrointestinal protozoans in cats in the city of Londrina, Paraná, Brazil. A total of 206 cat fecal samples were tested, of which 141 were from shelter animals, and 65 were from pets owned by local people. Samples were processed by parasitological techniques. Coproparasitological techniques (Willis, Faust and Ziehl-Neelsen) were performed for detection of protozoan parasites. Subsequently, all samples were processed by PCR protocols specific to Toxoplasma gondii, Giardia spp., and Cryptosporidium spp. PCR products from positive samples were selected for sequencing. No samples were found to be positive for Cryptosporidium spp. using the Ziehl-Neelsen technique. Using specific PCR protocols, 1/206 (0.48%) samples tested positive for Cryptosporidium spp. After purification, this one positive sample was sequenced, and it demonstrated a 100% identity match to Cryptosporidium muris. Using specific PCR protocols, 13/206 (9.22%) cat fecal samples tested, including 2/65 (3.08%) pet cat fecal samples, were positive for T. gondii. PCR analysis revealed that 37/206 (17.96%) of cat fecal samples were positive for Giardia spp., including 27/141 (19.15%) of shelter cat fecal samples, and 10/65 (15.38%) pet cat fecal samples (p = 0.5124). When sequenced, these positive samples showed a 100% identity match with Giardia duodenalis. This study demonstrated that infections with Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii, and Giardia duodenalis are present in the population of both pet cats and shelter cats in the city of Londrina. This poses a risk to public health, because these parasites have a high zoonotic potential.(AU)

Os protozoários são amplamente distribuídos, e várias espécies podem parasitar o trato digestivo de gatos (Felis catus) e podem ser transmitidas para humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar as espécies e a ocorrência de protozoários gastrintestinais em gatos na cidade de Londrina, Paraná, Brasil. Um total de 206 amostras de fezes de gato foram testadas, das quais 141 eram de animais de abrigo, e 65 eram de animais de propriedade da população local. As amostras foram processadas por técnicas parasitológicas. Willis e esfregaços fecais foram confeccionados e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. Posteriormente, todas as amostras foram processadas por protocolos de PCR específicos para Toxoplasma gondii, Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os produtos de PCR de amostras positivas foram selecionados para sequenciamento. Nenhuma amostra foi considerada positiva para Cryptosporidium spp. usando a técnica de Ziehl-Neelsen. Utilizando protocolos específicos de PCR, 1/206 (0,48%) amostras apresentaram resultados positivos para Cryptosporidium spp. Após a purificação, essa amostra positiva foi sequenciada e demonstrou 100% de equivalência de identidade com Cryptosporidium muris. Utilizando protocolos específicos de PCR, 13/206 (9,22%) amostras fecais de gatos testadas, incluindo 2/65 (3,08%) amostras fecais de gatos de estimação, foram positivas para T. gondii. A análise de PCR revelou que 37/206 (17,96%) das amostras de fezes de gatos foram positivas para Giardia spp., Incluindo 27/141 (19,15%) de amostras fecais de gatos de abrigo, e 10/65 (15,38%) amostras fecais de gatos de estimação (p = 0,5124). Quando sequenciadas, essas amostras positivas apresentaram 100% de equivalência de identidade com Giardia duodenalis. Este estudo demonstrou que as infecções por Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Giardia duodenalis estão presentes na população de gatos de estimação e gatos de abrigo na...(AU)

Molecular survey of Cryptosporidium spp. in calves from the state of Mato Grosso, Brazil / Levantamento molecular de Cryptosporidium spp. em bezerros do estado de Mato Grosso, Brasil

Cryptosporidium spp. is a protozoan that infects a wide range of vertebrate hosts; it has been reported to be the cause of severe illness or death in livestock worldwide, which leads to decreased performance and production losses, especially in young animals. This study investigated the presence of Cryptosporidiumin calves from beef farms in the state of Mato Grosso, midwestern Brazil. For this purpose, fecal samples from 237 animals aged ≤ 45 days, raised in 20 rural properties were subjected to DNA extraction and nested polymerase chain reaction (nPCR) targeting 18S ribosomal RNA (18S rRNA) gene followed by sequencing. Additionally, positive samples, previously identified as Cryptosporidium parvum by sequencing and phylogenetic analyses based on 18S rRNA gene, were subsequently analyzed focusing the amplification and sequencing using nPCR of a fragment of the 60 kDa glycoprotein (gp60) gene. Of the 237 fecal samples analyzed by PCR (18S rRNA), 50 (21.1%) fecal samples were positive for Cryptosporidium spp., while 14 (70%) of the 20 properties had at least one positive animal. The following Cryptosporidium species were detected: C. bovis, C. parvum, and C. ryanae. Thereafter, two potentially zoonotic subtypes (IIaA15G2R1 and IIaA16G3R1) of C. parvum were identified based on gp60 gene sequences. This study resulted in the detection of subtype IIaA16G3R1 for the first time in South America and showed a wide distribution of the protozoan in beef farms in the studied area of the State.(AU)

Cryptosporidium spp. é um protozoário que infecta uma grande variedade de hospedeiros vertebrados, sendo descrito como causa de doenças graves ou morte na pecuária em todo o mundo, o que leva à diminuição do desempenho e à perda de produção, especialmente em animais jovens. Este estudo investigou a presença de Cryptosporidium em bezerros de fazendas de bovinocultura de corte no estado de Mato Grosso, Centro-Oeste do Brasil. Para esse fim, amostras fecais de 237 animais com idade ≤ 45dias, criados em 20 propriedades rurais foram submetidas à extração de DNA e uma "nested" da reação em cadeia pela polimerase (nPCR) direcionada ao gene 18S RNA ribossomal (18S rRNA), seguido do sequenciamento. Adicionalmente, amostras positivas, previamente identificadas como Cryptosporidium parvum pelo sequenciamento e análises filogenéticas baseadas no gene 18S rRNA, foram posteriormente analisadas usando a nPCR buscando a amplificação e sequenciamento de um fragmento do gene de uma glicoproteína de 60 kDa (gp60). Das 237 amostras fecais analisadas pela PCR (18S rRNA), 50 (21,1%)amostras fecais foram positivas para Cryptosporidium spp., enquanto 14 (70%) das 20 propriedades tinham ao menos um animal positivo. As seguintes espécies de Cryptosporidium foram detectadas: C. bovis, C. parvum e C. ryanae. Posteriormente, dois subtipos potencialmente zoonóticos (IIaA15G2R1e IIaA16G3R1) foram identificados. Este estudo resultou na detecção do subtipo IIaA16G3R1 pela primeira vez na América do Sul e mostrou uma ampla distribuição do protozoário em rebanhos de corte na área estudada do Estado.(AU)

Surveillance of Giardia and Cryptosporidium in sewage from an urban area in Brazil / Monitoramento de Giardia e Cryptosporidium em esgoto de uma área urbana no Brasil

Cryptosporidium and Giardia are protozoan parasites that cause diarrhea in humans and animals. Molecular characterization of these pathogens in sewage may provide insight on their occurrence and prevalence in Brazil. This study aimed to investigate the presence of Giardia and Cryptosporidium in raw and treated sewage from Londrina, Paraná, Brazil. Samples were collected every two weeks during a year. Samples were concentrated, then DNA was extracted and subjected to a nested PCR targeting the Giardia 18S rRNA gene and the Cryptosporidium 18S rRNA gene. Species of Cryptosporidium were characterized by restriction fragment length polymorphism (RFLP). All raw sewage and 76% of the treated sewage were positive for Giardia; 84% of raw sewage samples and 8% of treated sewage were positive for Cryptosporidium. C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. parvum and C. suis were detected in 100%, 19%, 9%, 9% and 4% of raw sewage, respectively. C. muris was the only species found in treated sewage. Multiple species of Cryptosporidium were present in 19.04% of the raw sewage. Treated sewage water can pose a threat to human health. The speciation of Cryptosporidium revealed the presence of non-common zoonotic species as C. suis and C. muris.(AU)

Cryptosporidium e Giardia são protozoários causadores de diarreia em animais e humanos. A caracterização molecular destes protozoários em esgoto pode prover dados ainda desconhecidos da ocorrência de espécies. O objetivo do presente estudo foi monitorar a ocorrência de Giardia e espécies de Cryptosporidium em esgoto bruto e tratado em uma estação de tratamento de esgoto (ETE) de Londrina, Paraná. Amostras de esgoto bruto e tratado foram coletadas no período de um ano, com periodicidade quinzenal. A ocorrência destes protozoários foi caracterizada por meio de concentração das amostras e posterior extração de DNA seguida de nested-PCR para amplificação de fragmentos dos genes 18S rRNA de Giardia e 18S rRNA de Cryptosporidium. A caracterização das espécies de Cryptosporidium foi realizada por meio de análise por polimorfismo de comprimento do fragmento de restrição (RFLP) dos produtos obtidos. Foram coletadas no total 25 amostras de cada, esgoto bruto e esgoto tratado. Para Giardia, todas as amostras de esgoto bruto e 76% das de esgoto tratado foram positivas. Cryptosporidium esteve presente em 84% das amostras de esgoto bruto e em 8% do tratado. No esgoto tratado foi encontrado apenas C. muris, já nas amostras de esgoto bruto foram encontradas cinco espécies: C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. suis e C. parvum em 100%, 19%, 9%, 9% e 4%, respectivamente. A presença de espécies mistas foi observada em 19,04% das amostras. A presença de Giardia e Cryptosporidium em esgoto tratado pode pôr em risco a saúde humana. A discriminação de espécies de Cryptosporidium revelou a presença de espécies zoonóticas incomuns como C. suis e C. muris.(AU)

Neospora caninum: seroepidemiology of cows and dogs from milk farms of Cunha, São Paulo, Brazil / Neospora caninum: soroepidemiologia de vacas e cães de propriedades leiteiras de Cunha, São Paulo, Brasil

Neosporosis, a parasitic disease prevalent worldwide, is caused by the protozoan Neospora caninum, an obligatory intracellular parasite that can cause abortions and infertility in females, resulting in high economic losses. The aim of this study was to determine the seroprevalence of antibodies against N. caninum in dairy cattle, and the occurrence of antibodies in dogs from farms in the municipality of Cunha, São Paulo, Brazil. Additionally, eighteen months after the primary study, an analysis to determine the incidence, seroconversion, and occurrence of anti-N. caninum antibodies was conducted in cows. Sampling was carried out in two phases: during the first one, 400 dairy cattle and 50 dog blood samples from 40 farms were collected. During the second phase, blood samples were collected from 119 cows belonging to 16 farms visited 18 months before. Serum samples were analyzed by indirect immunofluorescence (IFI) with titers ≥ 100 for cattle and ≥ 50 for dogs considered as positives. The occurrence of antibodies against N. caninum was 15.0% (60/400) and 14.0% (7/50) for cattle and dogs, respectively. After 18 months, the observed incidence of antibodies was 7.4% (4/54), the conversion detected was 71.4% (seropositive to seronegative) and 7.4% (seronegative to seropositive animals), and the observed occurrence was 7.56% (9/119). The calculated odds ratio (OR) was significant (p < 0.05) for abortions, presence of dogs, and parturition stalls. However, protection factors were identified in 2- to 4-year-old dairy cattle and in the number of lactating cows ≤ 10 animals. Thus, the presence of antibodies against N. caninum in the studied suggested both vertical and horizontal transmission are occurring in cattle.

A neosporose é uma doença parasitária de distribuição mundial, cujo agente etiológico é o protozoário intracelular obrigatório Neospora caninum, o qual pode causar abortamentos e infertilidade em fêmeas, promovendo elevados prejuízos econômicos. O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência de anticorpos contra N. caninum em bovinos de leite e a ocorrência de anticorpos em cães destas propriedades do município de Cunha, São Paulo, Brasil. Como segunda etapa, 18 meses após o primeiro estudo, foi conduzido outro estudo em vacas para determinar da incidência, soroconversão e ocorrência de anti-N. caninum. As colheitas foram realizadas em duas fases. Na primeira, participaram do estudo 400 bovinos de leite e 50 cães pertencentes a 40 propriedades rurais. Na segunda fase, foram efetuadas novas colheitas em 119 vacas de 16 propriedades já anteriormente visitadas na fase 1. Amostras de soro foram analisadas por imunofluorescência indireta (IFI) com títulos ≥100 para bovinos e ≥50 para cães foram considerados positivos. A ocorrência de anticorpos contra N. caninum foi de 15,0% (60/400) e 14,0% (7/50) para bovinos e cães respectivamente. Após 18 meses a incidência de anticorpos observada foi de 7,4% (4/54), a conversão detectada foi de 71,4% (animais soropositivos para soronegativos) e 7,4% (animais soronegativos para soropositivos) e a ocorrência observada foi de 7,56% (9/119). O “odds ratio” (OR) calculado revelou significância estatística (p < 0,05) para os seguintes fatores; abortamentos, propriedades com cães, e piquetes de parição. No entanto, fatores associados a proteção da positividade foram identificados entre; vacas entre 2 a 4 anos de idade, e o número de vacas em lactação ≤10 animais. Neste trabalho foi revelada a presença do N. caninum circulando na região estudada, sugerindo o papel de fêmeas bovinas e cães como transmissores do agente etiológico...

Anti-Neospora caninum antibodies in beef cattle from the northern region of Paraná state, Brazil / Anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos de corte da região norte do estado do Paraná, Brasil

The presence of anti-Neospora caninum antibodies in beef cattle slaughtered in the northern region of the state of Paraná, Brazil, was evaluated. A total of 401 blood samples were collected; 281 samples from the municipality of Rolândia and 120 from the municipality of Borrazópolis, between April 2015 and November 2016. Of the total samples, 289 were from females and 112 from males, aged one and a half to eight years. Indirect fluorescent antibody test (IFAT) was performed, using a cut-off of 1:100. Variables were tabulated for statistical analyses (Fishers exact test and chi-square tests, p≤0.05). The analysis showed that of the 401 samples, 37 were positive for N. caninum, indicating a prevalence of 9.2 %, and observed titers were 1:100 (16), 1:200 (14), and 1:400 (7). The variables sex, age, and location did not differ statistically (p>0.05). Our results showed a sero-occurrence of N. caninum in cattle slaughtered in the northern region of the state of Paraná.(AU)

A presença de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos de corte, abatidos na região norte do estado do Paraná, Brasil, foi avaliada. Foram coletadas 401 amostras de sangue, sendo 281 amostras no município de Rolândia e 120 no municipio de Borrazopolis, entre os meses de abril de 2015 e novembro de 2016. Do total de amostras, 289 eram de fêmeas e 112 amostras de machos, na faixa etária de um ano e meio até oito anos de idade. Foi realizada a reação da imunofluorescência indireta (RIFI) utilizando ponte de corte de 1:100. Em seguida, foram tabulados as variáveis para análise estatística (testes exato de Fisher e do qui-quadrado, p≤0,05). A análise mostrou que das 401 amostras, 37 foram positivas para N. caninum, indicando uma prevalência de 9,2 % e os títulos observados foram 1:100 (16), 1:200 (14) e 1:400 (7). As variáveis sexo, idade e local não diferiram estatisticamente (p>0,05). Nossos resultados demonstram uma soro-ocorrência de N. caninum em bovinos abatidos na região norte do Paraná.(AU)

Neospora caninum: seroepidemiology of cows and dogs from milk farms of Cunha, São Paulo, Brazil / Neospora caninum: soroepidemiologia de vacas e cães de propriedades leiteiras de Cunha, São Paulo, Brasil

Neosporosis, a parasitic disease prevalent worldwide, is caused by the protozoan Neospora caninum, an obligatory intracellular parasite that can cause abortions and infertility in females, resulting in high economic losses. The aim of this study was to determine the seroprevalence of antibodies against N. caninum in dairy cattle, and the occurrence of antibodies in dogs from farms in the municipality of Cunha, São Paulo, Brazil. Additionally, eighteen months after the primary study, an analysis to determine the incidence, seroconversion, and occurrence of anti-N. caninum antibodies was conducted in cows. Sampling was carried out in two phases: during the first one, 400 dairy cattle and 50 dog blood samples from 40 farms were collected. During the second phase, blood samples were collected from 119 cows belonging to 16 farms visited 18 months before. Serum samples were analyzed by indirect immunofluorescence (IFI) with titers ≥ 100 for cattle and ≥ 50 for dogs considered as positives. The occurrence of antibodies against N. caninum was 15.0% (60/400) and 14.0% (7/50) for cattle and dogs, respectively. After 18 months, the observed incidence of antibodies was 7.4% (4/54), the conversion detected was 71.4% (seropositive to seronegative) and 7.4% (seronegative to seropositive animals), and the observed occurrence was 7.56% (9/119). The calculated odds ratio (OR) was significant (p < 0.05) for abortions, presence of dogs, and parturition stalls. However, protection factors were identified in 2- to 4-year-old dairy cattle and in the number of lactating cows ≤ 10 animals. Thus, the presence of antibodies against N. caninum in the studied suggested both vertical and horizontal transmission are occurring in cattle.(AU)

A neosporose é uma doença parasitária de distribuição mundial, cujo agente etiológico é o protozoário intracelular obrigatório Neospora caninum, o qual pode causar abortamentos e infertilidade em fêmeas, promovendo elevados prejuízos econômicos. O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência de anticorpos contra N. caninum em bovinos de leite e a ocorrência de anticorpos em cães destas propriedades do município de Cunha, São Paulo, Brasil. Como segunda etapa, 18 meses após o primeiro estudo, foi conduzido outro estudo em vacas para determinar da incidência, soroconversão e ocorrência de anti-N. caninum. As colheitas foram realizadas em duas fases. Na primeira, participaram do estudo 400 bovinos de leite e 50 cães pertencentes a 40 propriedades rurais. Na segunda fase, foram efetuadas novas colheitas em 119 vacas de 16 propriedades já anteriormente visitadas na fase 1. Amostras de soro foram analisadas por imunofluorescência indireta (IFI) com títulos ≥100 para bovinos e ≥50 para cães foram considerados positivos. A ocorrência de anticorpos contra N. caninum foi de 15,0% (60/400) e 14,0% (7/50) para bovinos e cães respectivamente. Após 18 meses a incidência de anticorpos observada foi de 7,4% (4/54), a conversão detectada foi de 71,4% (animais soropositivos para soronegativos) e 7,4% (animais soronegativos para soropositivos) e a ocorrência observada foi de 7,56% (9/119). O “odds ratio” (OR) calculado revelou significância estatística (p < 0,05) para os seguintes fatores; abortamentos, propriedades com cães, e piquetes de parição. No entanto, fatores associados a proteção da positividade foram identificados entre; vacas entre 2 a 4 anos de idade, e o número de vacas em lactação ≤10 animais. Neste trabalho foi revelada a presença do N. caninum circulando na região estudada, sugerindo o papel de fêmeas bovinas e cães como transmissores do agente etiológico...(AU)

Investigation and environmental analysis of samples from outbreak of toxoplasmosis at research institution in Londrina, Paraná, Brazil, 2016 / Investigação e análise ambiental de amostras oriundas de surto de toxoplasmose em uma instituição de pesquisa em Londrina, Paraná, Brasil, 2016

The objective of this study was to report an outbreak of human toxoplasmosis at a research institution in Londrina, Paraná, from December 2015 to February 2016. Blood samples from 26 symptomatic individuals were collected and the microparticle chemiluminescence immunoassay was performed to detect IgM, IgG and specific IgG avidity test in the official laboratory. A total of 20 people with symptoms and serology compatible with acute toxoplasmosis (IgM positive and IgG with low avidity) were selected as cases, while 45 asymptomatic employees working in the same teams and during the same shifts were selected as controls. All the participants of the investigation answered an epidemiological questionnaire. Three samples of water and one sludge from the institution's supply cisterns, 10 soil samples, 11 plant samples, three cat fecal samples and one domestic feline cadaver were collected for analysis of the polymerase chain reaction (PCR) for T. gondii. After analyzing the epidemiological data, the consumption of vegetables in the restaurant of the institution was the only variable associated with the occurrence of the disease. In laboratory results, all the samples showed negative results to PCR. The rapid recognition of the outbreak, early notification and investigation could have broken the chain of transmission early, thus preventing the emergence of new cases. In addition, the adoption of good food handling practices could have prevented the occurrence of the outbreak.(AU)

O objetivo deste estudo foi relatar um surto de toxoplasmose humana em uma instituição de pesquisa em Londrina, Paraná, no período de dezembro de 2015 a fevereiro de 2016. Amostras de sangue de 26 indivíduos sintomáticos foram coletadas e o imunoensaio de quimioluminescência de micropartículas foi realizado para detectar IgM, IgG e teste de avidez de IgG específica em laboratório oficial. Um total de 20 pessoas com sintomas e sorologia compatíveis com toxoplasmose aguda (IgM positiva e IgG com baixa avidez) foi selecionado como casos, enquanto 45 funcionários assintomáticos que trabalhavam nas mesmas equipes e durante os mesmos turnos foram utilizados como controles. Todos os participantes da investigação responderam a um questionário epidemiológico. Foram coletadas três amostras de água e uma de lodo das cisternas de abastecimento da instituição, 10 de solo, 11 de vegetais, três amostras de fezes de gato e um cadáver de filhote felino doméstico para detecção de T. gondii pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Após análise dos dados epidemiológicos, o consumo de hortaliças no restaurante da instituição foi a única variável associada à ocorrência da doença. Em resultados laboratoriais, todas as amostras apresentaram resultados negativos a PCR. O rápido reconhecimento do surto, notificação e investigação prematura poderia ter quebrado a cadeia de transmissão, evitando assim o surgimento de novos casos. Além disso, a adoção de boas práticas de manipulação de alimentos poderia ter impedido a ocorrência do surto.(AU)

First study of Cryptosporidium spp. occurrence in eared doves (Zenaida auriculata) / Primeiro estudo de ocorrência de Cryptosporidium spp. em pomba-de-bando (Zenaida auriculata)

Cryptosporidium is a protozoan parasite with a wide range of hosts, including humans. However, only a few Cryptosporidium species have been described in birds (C. meleagridis, C. baileyi, C. galli and C. avium). The aim of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. in feces of eared doves (Zenaida auriculata), followed by molecular characterization of the parasite. A total of 196 animals of both sexes were trap-captured; the animals were culled and the intestinal contents were collected for DNA extraction. After extraction, a nested-PCR (nPCR), which amplifies a fragment of the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp., was performed. The amplicons obtained were purified and sequenced. PCR analysis revealed that 30 animals (15.3%) were positive for Cryptosporidium spp. There was no significant sex-dependent enrichment of Cryptosporidium occurrence (p > 0.05). Only 15 out of the 30 positive samples were successfully sequenced and their species determined, of which, 13 (86.7%) and 2 (13.3%) were C. meleagridis and C. galli, respectively. Herein, we present for the first time a molecular characterization of Cryptosporidium from feces of eared doves (Z. auriculata) and propose that these birds are a potential source of C. meleagridis infection in humans.(AU)

Cryptosporidium é um protozoário com uma grande variedade de hospedeiros, incluindo os seres humanos. No entanto, poucas espécies têm sido descritas em aves (Cryptosporidium meleagridis, C. baileyi, C. galli e C. avium). O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em fezes de pombas-de-bando (Zenaida auriculata), e realizar a caracterização molecular dos isolados. Um total de 196 animais de ambos os sexos foram capturados, eutanasiados e o conteúdo intestinal recolhido para extração de DNA. Após a extração, realizou-se uma nested-PCR (nPCR), que amplifica um fragmento do gene 18S rRNA do Cryptosporidium spp.. Os fragmentos obtidos foram purificados e encaminhados para sequenciamento. Os resultados da n-PCR revelaram 30 animais (15.3%) positivos para Cryptosporidium spp.. Quanto ao sexo dos animais não foram observadas diferenças estatísticas significativas (p > 0.05). Somente 15 de 30 amostras positivas foram sequenciadas com sucesso e as espécies determinadas, das quais, 13 (86.7%) e 2 (13.3%) foram C. meleagridis e C. galli, respectivamente. Esse é o primeiro estudo com caracterização molecular de Cryptosporidium de fezes de pombas-de-bando (Z. auriculata), e propõe serem esses animais potenciais fonte de infecção de C. meleagridis para humanos.(AU)

Cryptosporidium occurrence in ruminants from the North Pioneer mesoregion of Paraná, Brazil / Ocorrência de Cryptosporidium em ruminantes da mesorregião norte pioneiro do Estado do Paraná, Brasil

The aim of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium in cattle and sheep from the North Pioneer mesoregion of the state of Paraná. For this, 317 stool samples were collected from cattle and sheep on 16 properties in six municipalities in the North Pioneer mesoregion of Paraná. For detection of Cryptosporidium species, molecular analysis was performed using nested-PCR techniques targeting the 18S rRNA gene. Of the 37 beef cows and 115 calves analyzed, four (10.8%) and 14 (12.2%), respectively, were positive for Cryptosporidium. Of the 12 cows and 52 calves, one (8.3%) and 14 (26.9%), respectively, were positive for Cryptosporidium; and of the 42 ewes and 59 lambs, six (14.3%) and 12 (20.3%), respectively were positive for Cryptosporidium. Cattle (15.3%) and sheep (17.8%) were both susceptible to infection. All the properties of the municipalities of Assaí, Ibaiti and, Leópolis presented infected animals. The study showed that Cryptosporidium occurs in most municipalities assessed, that dairy calves had a higher risk (Odds Ratio=2,66, p-value=0,018) for infection than beef calves, and that sheep are just as susceptible to infection as are cattle, and that further Cryptosporidium studies are developed.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Cryptosporidium em bovinos e ovinos da mesorregião norte pioneiro do Estado do Paraná. Para tanto, 317 amostras de fezes destes ruminantes foram colhidas de 16 propriedades de seis municípios do Norte Pioneiro do Paraná. Para detecção de Cryptosporidium spp foi realizada análise molecular pela Técnica de nested-PCR direcionada ao gene 18S rRNA. Das 37 vacas de corte e 115 bezerros de corte analisados, quatro (10,8%) e 14 (12,2%) foram respectivamente positivos para Cryptosporidium . Das 12 vacas e 52 bezerros de leite, um (8,3%) e 14 (26,9%) foram positivos para Cryptosporidium e das 42 ovelhas e 59 cordeiros avaliados, seis (14,3%) e 12 (20,3%) amostras estavam positivas para Cryptosporidium, respectivamente. Bovinos (15,3%) e ovinos (17,8%) foram igualmente suscetíveis à infecção. Todas as propriedades dos municípios de Assaí, Ibaiti e Leópolis apresentaram animais infectados. Este estudo demonstrou que Cryptosporidium ocorre na maioria dos municípios avaliados, sendo que os bezerros de leite apresentam maior risco (Razão de chances=2,66, p-value=0,018) à infecção que os bezerros de corte e que os ovinos são tão suscetíveis à infecção quanto os bovinos e por isso, estudos nesta espécie animal devem ser mais desenvolvidos.(AU)

The effect of water source and soil supplementation on parasite contamination in organic vegetable gardens / O efeito da fonte de água e suplementação de solo na contaminação parasitária em hortas orgânicas

The objective of this study was to determine factors associated with vegetable contamination with zoonotic protozoan. Samples of water, soil and vegetables were collected from July/2014 to May/2016, totaling 83 samples, 21 properties of Londrina region, Paraná, Brazil. DNA amplification of Toxoplasma gondii, Cryptosporidium spp. and Giardia intestinalis in the samples was conducted using polymerase chain reaction (PCR). The PCR results were positive for T. gondii in 12.9% (8/62), Cryptosporidium spp. in 11.3% (7/62) and G. intestinalis in 25.8% (16/62) of the samples. DNA sequencing identified C. parvum in five samples and G. intestinalis Assemblage E in three. The statistical associations demonstrated greater probability of positive samples for T. gondii and for at least one of the three protozoa when the source of irrigation water was the river; a greater chance of positive samples for Cryptosporidium spp. when deer were present on the property; and a smaller chance of positive samples for at least one of the three etiologic agents when soil was supplemented with limestone. The results expose some critical contamination points, providing support for training farmers on good management practices during the production process.(AU)

O trabalho teve como objetivo determinar os fatores associados à contaminação de vegetais por protozoários zoonóticos. Amostras de água, solo e vegetais foram coletadas de julho/2014 a maio/2016, totalizando 83 amostras de 21 propriedades da região de Londrina, Paraná, Brasil. A amplificação de fragmentos de DNA de T. gondii, Cryptosporidium spp. e Giardia intestinalis foi realizada por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os resultados da PCR foram positivos para T. gondii em 12,9% (8/62), Cryptosporidium spp. em 11,3% (7/62) e G. intestinalis. em 25,8% (16/62) das amostras. O sequenciamento de DNA identificou C. parvum em cinco amostras e G. intestinalis, Assemblage E em três amostras. As associações estatísticas evidenciaram maior probabilidade de amostras serem positivas para T. gondii ou para pelo menos um dos três protozoários quando a fonte de água de irrigação era o rio; uma maior chance de amostras positivas para Cryptosporidium spp. quando havia cervos na propriedade; e uma menor chance das amostras serem positivas para pelo menos um dos três agentes etiológicos quando o solo era suplementado com calcário. Os resultados expõem alguns pontos críticos de contaminação, fornecendo suporte para capacitar os agricultores em boas práticas de gestão durante o processo de produção.(AU)

An outbreak of caprine toxoplasmosis - investigation and case report / Surto de toxoplasmose caprina-investigação e relato de caso

The present study aimed to investigate an abortion outbreak in a dairy goat herd in the municipality of Arapoti, Parana, Brazil. At the beginning of the outbreak, blood samples were collected from 33 goats with clinical signs; later, of the whole goat herd, two cats and two dogs. Milk samples were collected from 78 lactating goats. Four environmental soil samples and four samples of feed residue from goat feeders were collected too. Immunofluorescence antibody test (IFA) was used for serodiagnosis, the molecular analysis was conducted by means of the polymerase chain reaction (PCR), for the isolation of the etiological agent the bioassay was used. The results of the IFA revealed that 76.53% (137/179) of the goats, two dogs and two cats were seropositive for Toxoplasma gondii. Bioassay revealed one buffy coat and two milk sample having viable T. gondii. In the PCR, 11 whole blood samples, eight milk, three feeder troughs, and all soil samples were positive. The findings of the present study confirmed an outbreak caused by environmental contamination (of soil and feed) with T. gondii oocysts that could have been shed by kittens that lived on the farm and had access to the stock of goat food, facilitating this contamination, which reinforces the need for veterinary assistance and good management practices on farms.

O presente estudo teve como objetivo investigar um surto de aborto em um rebanho de cabras leiteiras no município de Arapoti, Paraná, Brasil. No início do surto, foram coletadas amostras de sangue de 33 cabras com sinais clínicos; mais tarde, de todo o rebanho caprino, dois gatos e dois cachorros. Foram obtidas amostras de leite das 78 cabras em lactação. Quatro amostras ambientais de solo e quatro de resíduos de comedouro também foram coletadas. O teste de imunofluorescência (IFI) foi utilizado para o sorodiagnóstico, a análise molecular foi conduzida por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR), para isolamento do agente etiológico utilizou-se o bioensaio. Os resultados da IFI revelaram que 76,53% (137/179) das cabras, todos os cães e gatos eram soropositivos para Toxoplasma gondii. O bioensaio revelou uma amostra de camada leucocitória e duas de leite contaminadas com T. gondii viável. Na PCR, 11 amostras de sangue total, oito de leite, três resíduos alimentares e todas as amostras de solo foram positivas. Os resultados do presente estudo confirmaram um surto causado por contaminação ambiental (de solo e alimentos) com oocistos de T. gondii que, provavelmente, foram eliminados por gatos que permaneceram na fazenda e tinham acesso ao estoque de alimento dos caprinos, reforçando a necessidade de assistência técnica veterinária e boas práticas de manejo.