Viability of fibroblasts from "Curraleiro Pé Duro" cattle after different cryopreservation protocols / Viabilidade de fibroblastos de bovinos da raça Curraleiro Pé Duro submetidos a diferentes protocolos de criopreservação

A raça tropicalmente adaptada Curraleiro Pé Duro (CPD) possui grande rusticidade e capacidade de produção. A técnica de criopreservação de células somáticas permite estocar, por tempo indeterminado, o material genético. O objetivo deste trabalho é avaliar a viabilidade de fibroblastos, pós-criopreservação, em protocolos diferentes. Foi utilizada uma biópsia auricular de um bovino CPD, que passou por antissepsia e anestesia local. Posteriormente o material foi processado e incubado para ser observado quanto à confluência e à morfologia. Em seguida, os fibroblastos foram criopreservados em três tratamentos (T1, T2 e T3). Após serem criopreservados, foram descongelados e analisados quanto à viabilidade celular, à capacidade de crescimento e à morfologia. Na análise de variância e das médias, foram comparados pelo teste de Tukey com significância de 5%. Não foram observadas, nos protocolos, diferenças estatísticas entre a viabilidade celular (T1 = 67,98%, T2 = 71,42% e T3 = 69,93%), a capacidade de confluência (T1 = 80%, T2 = 90%, T3 = 85%) ou a passagem de origem das células. A criopreservação de fibroblastos auriculares de bovinos CPD não mostrou diferença entre os três métodos, sugerindo até que o método que demanda equipamentos menos especializados (T1) é tão eficiente quanto os demais.

Avaliação das técnicas de imunodifusão em gel de ágar, ensaio imunoenzimático indireto e reação em cadeia da polimerase no diagnóstico da brucelose ovina / Evaluation of technical, immunodiffusion agar gel, enzyme-linked immunosorbent assay and polymerase chain reaction in the diagnosis of ovine brucellosis

A brucelose na espécie ovina tem recebido destaque, uma vez que se trata de uma enfermidade que acomete o sistema reprodutivo dos animais, provocando sério comprometimento no setor produtivo. Dessa forma, objetivou-se a avaliação de três métodos para o diagnóstico da brucelose ovina: o ensaio imunoenzimático indireto (ELISAi), a técnica imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR). Para tanto, utilizaram-se 211 amostras de sangue de ovinos oriundos de propriedades de nove municípios da microrregião homogênea de Teresina, Piauí. As 211 amostras de sangue foram submetidas aos testes sorológicos e à PCR, visando detectar anticorpos anti-B. ovis e DNA de Brucella ovis, respectivamente. Foram obtidos resultados positivos nos testes sorológicos, sendo 36 (17,06%) positivos no teste IDGA e sete (3,31%) positivos no teste ELISAi, contudo não houve resultados positivos na técnica de PCR. Dos métodos de diagnóstico utilizados neste estudo, o teste IDGA foi o que apresentou melhor desempenho na detecção de animais reagentes, quando comparado ao teste ELISAi e à PCR em amostras de sangue, e o percentual de animais soropositivos sugere uma ampla distribuição de ovinos infectados por Brucella ovis na região em estudo, o que pode causar prejuízos aos produtores.(AU)

Brucellosis in sheep has received a major focus, since it is a disease that affects the reproductive system of animals, causing serious impairment in the productive sector. Thus, three methods for the diagnosis of ovine brucellosis were evaluated as goal, the indirect Linked Immunosorbent Assay (ELISAi) test, the Immunodiffusion Agar Gel (AGID) technique and the Polymerase Chain Reaction (PCR). Therefore, we used 211 sheep blood samples from properties of nine municipalities of the homogeneous micro-region of Teresina, Piaui. The 211 blood samples were subjected to serologic testing and PCR to detect anti-B. ovis antibodies, and Brucella ovis DNA, respectively. Positive results in serological tests were obtained, 36 (17%) positive in the AGID test and seven (3.3%) positive to the ELISAi test, however, there were no positive results in the PCR technique. Of the diagnostic methods used in this study, the AGID test was the one that presented the best performance in the detection of reactive animals, when compared to ELISAi and PCR in blood samples and, the percentage of seropositive animals suggests a wide distribution of Brucella ovis infected sheep in the study region and could cause loss to producers.(AU)

Caracterização zoosanitária da ovinocultura e da caprinocultura na microrregião homogênea de Teresina, Piauí, Brasil / Zoosanitary characterization of sheep and goat farming in homogenous microregions of Teresina, Piaui, Brazil

O objetivo deste trabalho foi caracterizar o manejo sanitário e descrever as características da ovinocaprinocultura na microrregião homogênea (MRH) de Teresina, Piauí, Brasil. Foram investigadas 45 propriedades capriovinícolas, distribuídas em 14 municípios. O número médio de animais foi de 129 e 121 nos rebanhos caprinos e ovinos, respectivamente. Os animais utilizados na formação dos rebanhos base tiveram como origem os estados da Bahia, Pernambuco e Ceará. Animais SPRD (45,8%) e da raça Santa Inês (35,4%) são os mais encontrados entre os ovinos e na espécie caprina animais SPRD (55,3%) e animais da raça Anglo-Nubiana (28,6%). O estudo demostrou que 42,2% propriedades pesquisadas exploravam bovinos e caprinos e/ou ovinos. O sistema de criação extensivo foi adotado em 71,1% dos criatórios. As práticas sanitárias adotadas com maior frequência foram descarte de agulhas após o uso, isolamento de animais doentes e corte e desinfecção do umbigo. A desverminação foi a prática utilizada no controle de verminoses por 100,0% dos produtores. A vacinação foi adotada em 48,8% dos rebanhos. As alterações clínicas mais citadas foram linfadenite caseosa (64,4%), pododermatite (62,2%) e diarreia (60,0%). Portanto, a ovinocaprinocultura na MRH de Teresina é praticada, em sua grande maioria, de forma extensiva e que, apesar de contar com instalações razoáveis, ainda apresenta deficiências quanto à utilização de práticas de manejo sanitário, o que acaba impossibilitando a prevenção e o controle de doenças, principalmente as de origem infecciosas e parasitárias.

The objective of this study was to characterize the health practices and describe the characteristics of sheep and goat farming in the homogeneous microregion (HMR) in Teresina, Piaui, Brazil. Forty-five goat and sheep farms were investigated, distributed in 14 cities. The average number of animals per herd was 129 and 121, for the goats and sheep, respectively. The animals used to form the herds originated in the states of Bahia, Pernambuco and Ceará. Animals with undefined breed (45.8%) and Santa Ines breed (35.4%) were the most frequent among the sheep, while for the goats it was undefined breed (55.3%) and Nubian goats (28.6%). The study showed that 42.2% of the 45 farms surveyed raised cattle as well as goats and/or sheep. The extensive rearing system was adopted on 71.1% of the farms. The health practices adopted most often by farmers were the disposing of needles and syringes after use, isolation of sick animals, and cutting and disinfecting the navel. Deworming was a practice used to control worms by 100.0% of producers. Vaccination was a practice adopted in 48.8% of the herds. The clinical changes most often mentioned were caseous lymphadenitis (64.4%), foot rot (62.2%) and diarrhea (60.0%). In conclusion, sheep and goat farming in the Teresina HMR is practiced extensively with reasonably proper installations, but still shows deficiencies in the use of health practices, which impair the prevention and control of diseases, particularly infectious and parasitic diseases.

CARACTERIZAÇÃO ZOOSANITÁRIA DA OVINOCULTURA E DA CAPRINOCULTURA NA MICRORREGIÃO HOMOGÊNEA DE TERESINA, PIAUÍ, BRASIL

ABSTRACT The objective of this study was to characterize the health practices and describe the characteristics of sheep and goat farming in the homogeneous microregion (HMR) in Teresina, Piaui, Brazil. Forty-five goat and sheep farms were investigated, distributed in 14 cities. The average number of animals per herd was 129 and 121, for the goats and sheep, respectively. The animals used to form the herds originated in the states of Bahia, Pernambuco and Ceará. Animals with undefined breed (45.8%) and Santa Ines breed (35.4%) were the most frequent among the sheep, while for the goats it was undefined breed (55.3%) and Nubian goats (28.6%). The study showed that 42.2% of the 45 farms surveyed raised cattle as well as goats and/or sheep. The extensive rearing system was adopted on 71.1% of the farms. The health practices adopted most often by farmers were the disposing of needles and syringes after use, isolation of sick animals, and cutting and disinfecting the navel. Deworming was a practice used to control worms by 100.0% of producers. Vaccination was a practice adopted in 48.8% of the herds. The clinical changes most often mentioned were caseous lymphadenitis (64.4%), foot rot (62.2%) and diarrhea (60.0%). In conclusion, sheep and goat farming in the Teresina HMR is practiced extensively with reasonably proper installations, but still shows deficiencies in the use of health practices, which impair the prevention and control of diseases, particularly infectious and parasitic diseases.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi caracterizar o manejo sanitário e descrever as características da ovinocaprinocultura na microrregião homogênea (MRH) de Teresina, Piauí, Brasil. Foram investigadas 45 propriedades capriovinícolas, distribuídas em 14 municípios. O número médio de animais foi de 129 e 121 nos rebanhos caprinos e ovinos, respectivamente. Os animais utilizados na formação dos rebanhos base tiveram como origem os estados da Bahia, Pernambuco e Ceará. Animais SPRD (45,8%) e da raça Santa Inês (35,4%) são os mais encontrados entre os ovinos e na espécie caprina animais SPRD (55,3%) e animais da raça Anglo-Nubiana (28,6%). O estudo demostrou que 42,2% propriedades pesquisadas exploravam bovinos e caprinos e/ou ovinos. O sistema de criação extensivo foi adotado em 71,1% dos criatórios. As práticas sanitárias adotadas com maior frequência foram descarte de agulhas após o uso, isolamento de animais doentes e corte e desinfecção do umbigo. A desverminação foi a prática utilizada no controle de verminoses por 100,0% dos produtores. A vacinação foi adotada em 48,8% dos rebanhos. As alterações clínicas mais citadas foram linfadenite caseosa (64,4%), pododermatite (62,2%) e diarreia (60,0%). Portanto, a ovinocaprinocultura na MRH de Teresina é praticada, em sua grande maioria, de forma extensiva e que, apesar de contar com instalações razoáveis, ainda apresenta deficiências quanto à utilização de práticas de manejo sanitário, o que acaba impossibilitando a prevenção e o controle de doenças, principalmente as de origem infecciosas e parasitárias.

Avaliação imunohistoquímica e ultraestrutural de gametas e embriões caprinos infectados com o CAEV / Immunohistochemical and ultrastructural evaluation of gametes and embryos of goats infected with CAEV

O objetivo do presente estudo foi determinar a susceptibilidade dos folículos ovarianos, espermatozoides e embriões caprinos ao Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV). Para isto, foram analisados espermatozoides e folículos ovarianos pelas técnicas de imunohistoquímica e microscopia eletrônica de transmissão, antes e após protocolos de infecção in vitro com o CAEV. Foram submetidos à análise ultraestrutural, embriões caprinos produzidos in vivo, oriundos de cabras negativas e positivas para o CAEV. Nas amostras seminais, provenientes de animais tanto com infecção natural quanto dos artificialmente infectados, foi observada imunomarcação positiva dos espermatozoides, assim como alterações degenerativas na sua análise ultraestrutural. Já nas amostras de tecido ovariano, a imunomarcação foi mais discreta e identificada na região do estroma. No tocante à análise ultraestrutural, folículos e embriões se apresentaram íntegros. De acordo com esses resultados, pode-se concluir que os espermatozoides caprinos apresentaramse infectados, assinalando a susceptibilidade dessas células ao vírus, bem como a potencialidade do CAEV ser carreado ao cerne do oócito, originando embriões infectados.

The aim of this study was to determine the susceptibility of goat ovarian follicles, spermatozoa and embryos to caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV). Spermatozoa and ovarian follicles were analyzed, before and after in vitro infection with CAEV, through immunohistochemistry and transmission electron microscopy techniques. Goat embryos, produced in vivo from infected and non-infected goats, were submitted to ultrastructural analysis. Immunohistochemical examination of seminal samples from goats naturally and artificially infected with CAEV revealed viral antigens in spermatozoa, while the ultrastructural analysis showed degenerative changes in these cells. Ovarian tissue samples presented a more discreet immunohistochemical positive reaction situated in the stroma region. Ultrastructural analysis revealed that the embryos and ovarian follicles were intact. These results indicate that the spermatozoa were infected, confirming the susceptibility of these cells to the virus, as well as the potential of CAEV entering the oocyte, giving rise to infected embryos.

AVALIAÇÃO IMUNOHISTOQUÍMICA E ULTRAESTRUTURAL DE GAMETAS E EMBRIÕES CAPRINOS INFECTADOS COM O CAEV

ABSTRACT The aim of this study was to determine the susceptibility of goat ovarian follicles, spermatozoa and embryos to caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV). Spermatozoa and ovarian follicles were analyzed, before and after in vitro infection with CAEV, through immunohistochemistry and transmission electron microscopy techniques. Goat embryos, produced in vivo from infected and non-infected goats, were submitted to ultrastructural analysis. Immunohistochemical examination of seminal samples from goats naturally and artificially infected with CAEV revealed viral antigens in spermatozoa, while the ultrastructural analysis showed degenerative changes in these cells. Ovarian tissue samples presented a more discreet immunohistochemical positive reaction situated in the stroma region. Ultrastructural analysis revealed that the embryos and ovarian follicles were intact. These results indicate that the spermatozoa were infected, confirming the susceptibility of these cells to the virus, as well as the potential of CAEV entering the oocyte, giving rise to infected embryos.

RESUMO O objetivo do presente estudo foi determinar a susceptibilidade dos folículos ovarianos, espermatozoides e embriões caprinos ao Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV). Para isto, foram analisados espermatozoides e folículos ovarianos pelas técnicas de imunohistoquímica e microscopia eletrônica de transmissão, antes e após protocolos de infecção in vitro com o CAEV. Foram submetidos à análise ultraestrutural, embriões caprinos produzidos in vivo, oriundos de cabras negativas e positivas para o CAEV. Nas amostras seminais, provenientes de animais tanto com infecção natural quanto dos artificialmente infectados, foi observada imunomarcação positiva dos espermatozoides, assim como alterações degenerativas na sua análise ultraestrutural. Já nas amostras de tecido ovariano, a imunomarcação foi mais discreta e identificada na região do estroma. No tocante à análise ultraestrutural, folículos e embriões se apresentaram íntegros. De acordo com esses resultados, pode-se concluir que os espermatozoides caprinos apresentaramse infectados, assinalando a susceptibilidade dessas células ao vírus, bem como a potencialidade do CAEV ser carreado ao cerne do oócito, originando embriões infectados.

Parâmetros clínicos e hematológicos de reprodutores caprinos infectados naturalmente pelo vírus da artrite encefalite caprina durante a transição da estação seca para chuvosa no ceará

ABSTRACT Caprine arthritis encephalitis (CAE) is a specific infectious disease of caprines. It usually leads to a chronic disease, being characterized by a long incubation period and a slow and progressive clinical evolution. The aim of this work was to evaluate the clinical and hematologic parameters of bucks naturally infected by the CAE virus, as well to verify the influence of the transition from the dry to rainy season in the state of Ceará, Brazil, on these parameters. The work was carried out at the Brazilian Agricultural Research Corporation Goats in Sobral, state of Ceará. A total of 8 bucks positive for CAE were used, maintained in a semi-intensive raising system and submitted to biweekly clinical exams and complete blood count monthly, from September 2006 to February 2007. The data were expressed as means and analyzed using the software Staview with 5% of probability. A significant increase of the heart rate was observed during the rainy station (90.09 ± 16.21 bpm). An articular clinical index superior to 7, considered as a clinical indication of arthritis, was verified in 3 animals during the experiment, although the climatic season did not influence this parameter. A significant increase was observed in the absolute count of eosinophiles (90.09 ± 16.21 /µL) and monocytes (100.91 ± 21.12 /µL) during the rainy season. We conclude that the climatic season did not alter the physical parameters of the CAEV-infected bucks studied in this experiment in the north of the state of Ceará, Brazil. However, the rainy station provides climatic and environmental conditions that alter the monocyte and eosinophile count of these bucks.

RESUMO A artrite encefalite caprina (CAE) é uma doença infecciosa específica dos caprinos. Geralmente apresenta-se de forma crônica, caracterizando-se por um longo período de incubação e uma evolução clínica lenta e progressiva. O objetivo deste trabalho foi avaliar os parâmetros clínicos e hematológicos de reprodutores caprinos naturalmente infectados pelo vírus da CAE, bem como verificar a influência da transição das estações seca e chuvosa no Ceará nestes parâmetros. O trabalho foi conduzido na Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Embrapa Caprinos, no Município de Sobral, CE. Foram utilizados oito reprodutores caprinos positivos para CAE, mantidos em um sistema semi-intensivo de criação, submetidos a exames clínicos quinzenais e a hemograma completo mensal, durante o período de setembro de 2006 a fevereiro de 2007. Os dados foram expressos na forma de média e analisados pelo software Staview a 5% de probabilidade. Observou-se um aumento significativo da freqüência cardíaca durante a estação chuvosa (90,09 ± 16,21 bpm). O índice articular clínico superior a sete, considerado indicativo de um quadro clínico de artrite, foi verificado em três animais durante todo o experimento, todavia a estação climática não interferiu neste parâmetro. Foi observado um aumento significativo na contagem absoluta de eosinófilos (90,09 ± 16,21/µL) e monócitos (100,91 ± 21,12/µL) durante a estação chuvosa. Conclui-se que a estação climática não altera os parâmetros físicos de reprodutores caprinos infectados pelo CAEV explorados na região norte do Estado do Ceará. Todavia, a estação chuvosa propicia condições climáticas e ambientais que alteram a contagem de monócitos e eosinófilos desses reprodutores.

Sincronização do estro, indução da ovulação e fertilidade de ovelhas deslanadas após tratamento hormonal com gonadotrofina coriônica eqüina

The aim of this experiment was to evaluate the effect of different doses of eCG on reproductive performance of ewes. The estrus was synchronized with vaginal sponges with 30mg FGA during 12 days. At the time of sponge removal, ewes were distributed in three groups: 0 (n=26), 200IU eCG (n=30) and 400IU eCG (n=30). The estrus was detected by aid of a vasectomized ram. The ewes were inseminated by laparoscopy, 60h after sponge removal. Blood samples were collected at 5 and 18 days after insemination, in order to determine progesterone concentration. It was observed 70.9% of ewes in estrus after the end of treatment. The females that received eCG showed higher (P 0.05) percentage of estrus: 96.7% (400IU) and 76.7% (200IU) versus 34.6% (0 IU). The interval between the end of treatment and estrus onset was higher (P 0.05) in the group that did not receive eCG (54.7±6.3h) in comparison to the groups that received 200IU (45.9±7.8 h) and 400 IU eCG (40.4±10.3h). A lower (P 0.05) number of ovulating and pregnant ewes in the group that did not receive eCG was observed. The eCG withdraw resulted in negative effect on reproductive performance of ewes.

Utilizou-se a sincronização do estro com esponjas vaginais de 30mg de acetato de fluorogestona durante 12 dias para avaliar o efeito de diferentes doses de eCG sobre o desempenho reprodutivo de ovelhas. Na retirada das esponjas as ovelhas foram divididas em três grupos para receberem 0 (n=26), 200 (n=30) ou 400UI (n=30) de eCG. O estro foi detectado a cada 12h utilizando-se um rufião. As fêmeas foram inseminadas por laparoscopia 60h após a retirada das esponjas. Realizaram-se colheitas de sangue aos 5 e 18 dias pós-inseminação para dosagem de progesterona e determinação do número de ovulações e prenhezes, respectivamente. A fertilidade foi verificada por ecografia aos 60 dias e ao parto. Das 86 ovelhas 70,9% apresentaram estro. Essa porcentagem foi maior (P 0,05) nas fêmeas tratadas com eCG: 96,7% (400UI) e 76,7% (200UI) versus 34,6% (0 UI). O intervalo entre o final do tratamento e o início do estro foi maior (P 0,05) no grupo sem eCG, 54,7±6,3h versus 45,9±7,8h para 200UI e 40,4±10,3h para 400UI. Verificou-se menor (P 0,05) número de ovulações e prenhezes no grupo sem eCG. A não aplicação de eCG influiu negativamente no desempenho reprodutivo de ovelhas deslanadas.