Influência dos meios de estocagem durante o transporte de ovários bovinos a 4c sobre a recuperação e qualidade oocitária / Influence of storage media during transport of bovine ovaries at 4°c on oocyte recovery and quality

O objetivo foi avaliar diferentes meios na presença e ausência de soro fetal bovino (SFB; 10%) durante o transporte por 24 h de ovários a 4°C sobre a recuperação e a qualidade oocitária bovina. Cinco experimentos foram realizados comparando: (E1) NaCl vs. NaCl+SFB vs. controle (não resfriado), (E2) PBS vs. PBS+SFB vs. controle, (E3) DMEM vs. DMEM+SFB vs. controle, (E4) DPBS vs. DPBS+SFB vs. controle e (E5) melhores resultados dos experimentos anteriores. Após a aspiração folicular, oócitos foram avaliados quanto à qualidade por critérios morfológicos e ensaio de azul cresil brilhante. Ainda, células dos cumulus de oócitos viáveis foram avaliadas quanto à viabilidade pelo azul de tripan. No E1, NaCl permitiu uma maior taxa de recuperação em relação ao NaCl+SFB (46,0% vs. 39,6%), enquanto que os demais parâmetros não foram alterados. Já no E2, o SFB em PBS influenciou positivamente a taxa de recuperação (41,2% vs. 32,8%) e a viabilidade celular (46,3% vs. 41,7%), quando comparado ao PBS. No E3, o SFB em DMEM teve uma influência negativa sobre a taxa de recuperação (39,9% vs. 40,7%) e avaliação morfológica (59,0% vs. 73,1%). Contudo, a adição de SFB ao DMEM se mostrou benéfica à viabilidade celular (42,0% vs. 34,5%). Em relação ao E4, a presença de SFB em DPBS influenciou positivamente a viabilidade celular (50,7% vs. 47,0%). Já no E5, comparando os melhores grupos [NaCl, PBS+SFB, DMEM, DPBS+SFB], a viabilidade celular mostrou uma maior porcentagem em DMEM (54,0%) e DPBS (54,5%), quando comparada a NaCl (48,3%) e PBS (50,1%). Em conclusão, a presença do SFB em meios com alta capacidade de tamponamento (PBS e DPBS) pode se mostrar benéfica. Contudo, DMEM e DPBS resultam num ambiente mais propício para o resfriamento de ovários bovinos.

The aim was to evaluate different media in the presence and absence of fetal bovine serum (FBS; 10%) during 24 h transport of ovaries at 4°C on bovine oocyte recovery and quality. Five experiments were performed comparing: (E1) NaCl vs. NaCl+FBS vs. control (not cold), (E2) PBS vs. PBS+FBS vs. control, (E3) DMEM vs. DMEM+FBS vs. control, (E4) DPBS vs. DPBS+FBS vs. control and (E5) better results from previous experiments. After follicular aspiration, oocytes were evaluated for quality by morphological criteria and brilliant cresyl blue assay. Also, cumulus cells of viable oocytes were evaluated for viability by trypan blue. In E1, NaCl allowed a higher rate of recovery compared to NaCl+FBS (46.0% vs. 39.6%), while the other parameters were not altered. Already in E2, FBS in PBS positively influenced recovery rate (41.2% vs. 32.8%) and cell viability (46.3% vs. 41.7%) when compared to PBS. In E3, FBS in DMEM had a negative influence on the recovery rate (39.9% vs. 40.7%) and morphological evaluation (59.0% vs. 73.1%). Nevertheless, the addition of SFB to DMEM was shown to be beneficial to cell viability (42.0% vs. 34.5%). Regarding E4, the presence of FBS in DPBS positively influenced cell viability (50.7% vs. 47.0%). Already in E5, comparing the best groups (NaCl, PBS+FBS, DMEM, DPBS+FBS), cell viability showed a higher percentage in DMEM (54.0%) and DPBS (54.5%) when compared to NaCl (48.3%) and PBS (50.1%). In conclusion, the presence of FBS in media with high buffering capacity (PBS and DPBS) may show to be beneficial. Nevertheless, DMEM and DPBS result in an environment more favorable to the cooling of bovine ovaries.

Influência dos meios de estocagem durante o transporte de ovários bovinos a 4c sobre a recuperação e qualidade oocitária / Influence of storage media during transport of bovine ovaries at 4°c on oocyte recovery and quality

O objetivo foi avaliar diferentes meios na presença e ausência de soro fetal bovino (SFB; 10%) durante o transporte por 24 h de ovários a 4°C sobre a recuperação e a qualidade oocitária bovina. Cinco experimentos foram realizados comparando: (E1) NaCl vs. NaCl+SFB vs. controle (não resfriado), (E2) PBS vs. PBS+SFB vs. controle, (E3) DMEM vs. DMEM+SFB vs. controle, (E4) DPBS vs. DPBS+SFB vs. controle e (E5) melhores resultados dos experimentos anteriores. Após a aspiração folicular, oócitos foram avaliados quanto à qualidade por critérios morfológicos e ensaio de azul cresil brilhante. Ainda, células dos cumulus de oócitos viáveis foram avaliadas quanto à viabilidade pelo azul de tripan. No E1, NaCl permitiu uma maior taxa de recuperação em relação ao NaCl+SFB (46,0% vs. 39,6%), enquanto que os demais parâmetros não foram alterados. Já no E2, o SFB em PBS influenciou positivamente a taxa de recuperação (41,2% vs. 32,8%) e a viabilidade celular (46,3% vs. 41,7%), quando comparado ao PBS. No E3, o SFB em DMEM teve uma influência negativa sobre a taxa de recuperação (39,9% vs. 40,7%) e avaliação morfológica (59,0% vs. 73,1%). Contudo, a adição de SFB ao DMEM se mostrou benéfica à viabilidade celular (42,0% vs. 34,5%). Em relação ao E4, a presença de SFB em DPBS influenciou positivamente a viabilidade celular (50,7% vs. 47,0%). Já no E5, comparando os melhores grupos [NaCl, PBS+SFB, DMEM, DPBS+SFB], a viabilidade celular mostrou uma maior porcentagem em DMEM (54,0%) e DPBS (54,5%), quando comparada a NaCl (48,3%) e PBS (50,1%). Em conclusão, a presença do SFB em meios com alta capacidade de tamponamento (PBS e DPBS) pode se mostrar benéfica. Contudo, DMEM e DPBS resultam num ambiente mais propício para o resfriamento de ovários bovinos.(AU)

The aim was to evaluate different media in the presence and absence of fetal bovine serum (FBS; 10%) during 24 h transport of ovaries at 4°C on bovine oocyte recovery and quality. Five experiments were performed comparing: (E1) NaCl vs. NaCl+FBS vs. control (not cold), (E2) PBS vs. PBS+FBS vs. control, (E3) DMEM vs. DMEM+FBS vs. control, (E4) DPBS vs. DPBS+FBS vs. control and (E5) better results from previous experiments. After follicular aspiration, oocytes were evaluated for quality by morphological criteria and brilliant cresyl blue assay. Also, cumulus cells of viable oocytes were evaluated for viability by trypan blue. In E1, NaCl allowed a higher rate of recovery compared to NaCl+FBS (46.0% vs. 39.6%), while the other parameters were not altered. Already in E2, FBS in PBS positively influenced recovery rate (41.2% vs. 32.8%) and cell viability (46.3% vs. 41.7%) when compared to PBS. In E3, FBS in DMEM had a negative influence on the recovery rate (39.9% vs. 40.7%) and morphological evaluation (59.0% vs. 73.1%). Nevertheless, the addition of SFB to DMEM was shown to be beneficial to cell viability (42.0% vs. 34.5%). Regarding E4, the presence of FBS in DPBS positively influenced cell viability (50.7% vs. 47.0%). Already in E5, comparing the best groups (NaCl, PBS+FBS, DMEM, DPBS+FBS), cell viability showed a higher percentage in DMEM (54.0%) and DPBS (54.5%) when compared to NaCl (48.3%) and PBS (50.1%). In conclusion, the presence of FBS in media with high buffering capacity (PBS and DPBS) may show to be beneficial. Nevertheless, DMEM and DPBS result in an environment more favorable to the cooling of bovine ovaries.(AU)

Caracterização histomorfológica do sistema tegumentar auricular de cateto - Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Histomorphological characterization of collared peccary (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) ear integumentary system

A criopreservação de tecido somático derivado da pele de catetos consiste numa alternativa para a conservação da biodiversidade por meio da associação com a transferência nuclear. Nesse contexto, a manipulação de tecidos da pele é uma etapa crucial para o sucesso dessa biotécnica. Portanto, o objetivo do presente estudo, foi caracterizar o sistema tegumentar auricular periférico de catetos, visando aprimorar a conservação tecidual. Para tanto, fragmentos auriculares de oito animais foram avaliados quanto às camadas teciduais, aos componentes, à atividade proliferativa e à viabilidade metabólica, usando-se as colorações hematoxilina-eosina e tricrômico de Gomori, quantificação de AgNORs e microscopia eletrônica de transmissão. Assim, tamanhos de 104,2µm e 222,6µm foram observados para epiderme e derme, com uma proporção volumétrica de 36,6% e 58,7%, respectivamente. Além disso, na epiderme, foram evidenciadas as camadas basal (22,5µm), intermediárias (53,5µm) e córnea (28,2µm), com valores médios de 65,3 células epidermais, 43,4 melanócitos e 14,8 halos perinucleares. Já a derme apresentou 127 fibroblastos, com 2,5 AgNORs/nucléolo. Adicionalmente, a atividade metabólica foi de 0,243. Em conclusão, o sistema tegumentar auricular periférico de catetos possui algumas marcantes variações em relação a outros mamíferos, quanto ao número de camadas e espessura da epiderme, quantidade de células epidermais, melanócitos e parâmetros proliferativos.(AU)

The cryopreservation of somatic tissue derived from skin of collared peccaries is an alternative for biodiversity conservation through association with nuclear transfer. In this context, tissue manipulation of skin is a critical step for the success of this biotechnique. Therefore, the aim was to characterize the peripheral ear integumentary system derived from collared peccaries, directing to improve tissue conservation. Thus, ear fragments of eight animals were evaluated for tissue layers, components, proliferative activity and metabolic viability, using hematoxylin-eosin and Gomori Trichrome, AgNORs quantification and transmission electronic microscopy. Hence, sizes of 104.2 µm and 222.6 µm were observed in the epidermis and dermis, with a volumetric ratio of 36.6% and 58.7%, respectively. Moreover, basal layer (22.5 µm), intermediate (53.5 µm) and cornea (28.2 µm), with mean values of 65.3 epidermal cells, 43.4 melanocytes and 14.8 perinuclear halos were evidenced in the epidermal. Already the dermis has 127 fibroblasts with 2.5 AgNORs/nucleolus. Additionally, the metabolic activity was 0.243. In conclusion, the peripheral ear integumentary system derived from collared peccaries possessed some important variations compared to other mammals, as the number of layers and thickness of the epidermis, number of epidermal cells, melanocytes and proliferative parameters.(AU)

Caracterização histomorfológica do sistema tegumentar auricular de cateto - Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Histomorphological characterization of collared peccary (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) ear integumentary system

A criopreservação de tecido somático derivado da pele de catetos consiste numa alternativa para a conservação da biodiversidade por meio da associação com a transferência nuclear. Nesse contexto, a manipulação de tecidos da pele é uma etapa crucial para o sucesso dessa biotécnica. Portanto, o objetivo do presente estudo, foi caracterizar o sistema tegumentar auricular periférico de catetos, visando aprimorar a conservação tecidual. Para tanto, fragmentos auriculares de oito animais foram avaliados quanto às camadas teciduais, aos componentes, à atividade proliferativa e à viabilidade metabólica, usando-se as colorações hematoxilina-eosina e tricrômico de Gomori, quantificação de AgNORs e microscopia eletrônica de transmissão. Assim, tamanhos de 104,2µm e 222,6µm foram observados para epiderme e derme, com uma proporção volumétrica de 36,6% e 58,7%, respectivamente. Além disso, na epiderme, foram evidenciadas as camadas basal (22,5µm), intermediárias (53,5µm) e córnea (28,2µm), com valores médios de 65,3 células epidermais, 43,4 melanócitos e 14,8 halos perinucleares. Já a derme apresentou 127 fibroblastos, com 2,5 AgNORs/nucléolo. Adicionalmente, a atividade metabólica foi de 0,243. Em conclusão, o sistema tegumentar auricular periférico de catetos possui algumas marcantes variações em relação a outros mamíferos, quanto ao número de camadas e espessura da epiderme, quantidade de células epidermais, melanócitos e parâmetros proliferativos.(AU)

The cryopreservation of somatic tissue derived from skin of collared peccaries is an alternative for biodiversity conservation through association with nuclear transfer. In this context, tissue manipulation of skin is a critical step for the success of this biotechnique. Therefore, the aim was to characterize the peripheral ear integumentary system derived from collared peccaries, directing to improve tissue conservation. Thus, ear fragments of eight animals were evaluated for tissue layers, components, proliferative activity and metabolic viability, using hematoxylin-eosin and Gomori Trichrome, AgNORs quantification and transmission electronic microscopy. Hence, sizes of 104.2 µm and 222.6 µm were observed in the epidermis and dermis, with a volumetric ratio of 36.6% and 58.7%, respectively. Moreover, basal layer (22.5 µm), intermediate (53.5 µm) and cornea (28.2 µm), with mean values of 65.3 epidermal cells, 43.4 melanocytes and 14.8 perinuclear halos were evidenced in the epidermal. Already the dermis has 127 fibroblasts with 2.5 AgNORs/nucleolus. Additionally, the metabolic activity was 0.243. In conclusion, the peripheral ear integumentary system derived from collared peccaries possessed some important variations compared to other mammals, as the number of layers and thickness of the epidermis, number of epidermal cells, melanocytes and proliferative parameters.(AU)

Influência do método de recuperação oocitária sobre os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos / Influence of the recovery method on the quanti-qualitative parameters of bovine oocytes

Os objetivos foram avaliar os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos após recuperação usando diferentes métodos de colheita e tipos de êmbolo da seringa de aspiração. Assim, dois experimentos foram realizados usando ovários de fêmeas post-mortem. No primeiro experimento, duas técnicas de colheita oocitária foram empregadas: aspiração de folículos (2–8 mm) com agulha 21G e seringa de 5 mL e, fatiamento da superfície ovariana (slicing). No segundo experimento, folículos (2–8 mm) foram aspirados usando seringa com distintos êmbolos (borracha vs. plástico). Os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram classificados por critérios morfológicos em viáveis e não viáveis. Em seguida, CCOs foram corados com o azul de cresil brilhante (ACB) (60 min; 26 μM) e classificados como ACB+ (viáveis) e ACB- (não viáveis). Um total de cinco repetições por experimento foi realizado e os dados analisados pelo teste exato de Fisher (P0,05) foi observada entre os tipos de êmbolos quanto aos parâmetros quantitativos. Quanto à qualidade oocitária avaliada por critérios morfológicos, um percentual maior de oócitos viáveis foi recuperado usando êmbolo de borracha (75,4% vs. 58,2%; P<0,05). Em conclusão, oócitos de melhor qualidade podem ser obtidos a partir da aspiração folicular, especialmente usando seringa com êmbolo de borracha.

The aims were to evaluate qualitative-quantitative parameters of bovine oocytes after recovery using different collectionmethods and piston type from the aspiration syringe. Thus, two experiments were performed using ovaries from postmortemfemales. In the first experiment, two techniques of oocyte recovery were used: aspiration of follicles (2–8 mm)with 21G needle and 5 mL syringe, and slicing of the ovarian surface. In the second experiment, follicles (2–8 mm)were aspirated using syringes with different pistons (rubber vs. plastic). The cumulus-oocyte complexes (COCs) wereclassified by morphological criteria as viable and non-viable. Then, COCs were stained with brilliant cresyl blue (BCB)(60 min, 26 µM) and categorized as BCB+(viable) and BCB-(non-viable). A total of five repetitions per experimentwas performed and the data analyzed by Fisher's exact test (P0.05) was observed the piston type as the quantitativeparameters. As the oocyte quality evaluated by morphological criteria, a higher percentage of viable oocytes wererecovered using rubber piston (75.4% vs. 58.2%; P<0.05). In conclusion, better quality oocytes can be obtained fromfollicular aspiration, especially by using a rubber piston syringe

Cultivo in vitro de células derivadas de pele em mamíferos silvestres - estado da arte / In vitro culture of wild mammals skin derived cells - state of art

O cultivo de células somáticas derivadas da pele consiste numa técnica de relevante aplicabilidade,tanto para a investigação básica quanto para o uso em biotécnicas reprodutivas. Além disso, o cultivo de célulasda pele derivadas de mamíferos silvestres tem sido uma etapa interessante na formação de criobancos, visando àpreservação da biodiversidade genética. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar os progressos técnicosalcançados no cultivo de células somáticas em mamíferos silvestres, destacando as principais variaçõesencontradas nos meios e evidenciando os avanços em algumas espécies.(AU)

The culture of somatic cells derived from skin is a technique of important applicability, both for basicresearch and for the use in reproductive biotechnologies. Moreover, skin cell culture derived from wildmammals has been an interesting step to build a cryobank, aimed at preserving genetic biodiversity. Thus, theaim of this review is to present the technical progress achieved in the somatic cell culture in wild mammals,highlighting the main variances found in the media and showing the progress in some species.(AU)

Cultivo in vitro de células derivadas de pele em mamíferos silvestres - estado da arte / In vitro culture of wild mammals skin derived cells - state of art

O cultivo de células somáticas derivadas da pele consiste numa técnica de relevante aplicabilidade,tanto para a investigação básica quanto para o uso em biotécnicas reprodutivas. Além disso, o cultivo de célulasda pele derivadas de mamíferos silvestres tem sido uma etapa interessante na formação de criobancos, visando àpreservação da biodiversidade genética. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar os progressos técnicosalcançados no cultivo de células somáticas em mamíferos silvestres, destacando as principais variaçõesencontradas nos meios e evidenciando os avanços em algumas espécies.

The culture of somatic cells derived from skin is a technique of important applicability, both for basicresearch and for the use in reproductive biotechnologies. Moreover, skin cell culture derived from wildmammals has been an interesting step to build a cryobank, aimed at preserving genetic biodiversity. Thus, theaim of this review is to present the technical progress achieved in the somatic cell culture in wild mammals,highlighting the main variances found in the media and showing the progress in some species.

Reproductive parameters and the use of MOET in transgenic founder goat carrying the human granulocyte colony-stimulating factor (hG-CSF) gene

This study aimed to monitor estrous cycle parameters of a human granulocyte colony-stimulating factor (hG-CSF)-transgenic founder female goat and to perform superovulation and embryo recovery (surgical or transcervical method) for further transfer to recipients to quickly obtain offspring. Two experiments were performed using a transgenic (TF) and a non-transgenic (NTF) female. In experiment 1, three estrous cycles were monitored for the following parameters: estrus behavior, progesterone concentration and ovarian activity. In experiment 2, two superovulation/embryo recovery sessions were performed and the recovered embryos were transferred to previously prepared recipients. Data were compared by either t test or Fisher's exact test. The mean interval between natural estrus was 20.7 ± 0.6 and 19.7 ± 0.6 (P > 0.05) days for the TF and NTF, respectively. Progesterone concentrations and ovarian activity were normal and similar between goats. The ovulation rate was similar between TF and NTF (12.0 ± 1.4 vs. 18.0 ± 4.2 CL; P > 0.05). No significant differences in embryo recovery rate (P > 0.05) were observed between the surgical and transcervical methods for TF (69.2 vs. 72.7%) or NTF (100.0 vs. 86.7%). Sixteen embryos from the TF were transferred to recipients, and eight kids were born. Among these kids, the transgene was identified in three (two males and one female), resulting in a transgenesis rate of 37.5%. In summary, the TF is a true founder, since she proved fertility and capacity of transmitting the hG-CSF transgene to progeny, suggesting that the analyzed reproductive traits were not compromised by the presence of the transgene.

Reproductive parameters and the use of MOET in transgenic founder goat carrying the human granulocyte colony-stimulating factor (hG-CSF) gene

This study aimed to monitor estrous cycle parameters of a human granulocyte colony-stimulating factor (hG-CSF)-transgenic founder female goat and to perform superovulation and embryo recovery (surgical or transcervical method) for further transfer to recipients to quickly obtain offspring. Two experiments were performed using a transgenic (TF) and a non-transgenic (NTF) female. In experiment 1, three estrous cycles were monitored for the following parameters: estrus behavior, progesterone concentration and ovarian activity. In experiment 2, two superovulation/embryo recovery sessions were performed and the recovered embryos were transferred to previously prepared recipients. Data were compared by either t test or Fisher's exact test. The mean interval between natural estrus was 20.7 ± 0.6 and 19.7 ± 0.6 (P > 0.05) days for the TF and NTF, respectively. Progesterone concentrations and ovarian activity were normal and similar between goats. The ovulation rate was similar between TF and NTF (12.0 ± 1.4 vs. 18.0 ± 4.2 CL; P > 0.05). No significant differences in embryo recovery rate (P > 0.05) were observed between the surgical and transcervical methods for TF (69.2 vs. 72.7%) or NTF (100.0 vs. 86.7%). Sixteen embryos from the TF were transferred to recipients, and eight kids were born. Among these kids, the transgene was identified in three (two males and one female), resulting in a transgenesis rate of 37.5%. In summary, the TF is a true founder, since she proved fertility and capacity of transmitting the hG-CSF transgene to progeny, suggesting that the analyzed reproductive traits were not compromised by the presence of the transgene.(AU)

Physical characteristics of the eggs of red-legged partridge (Alectoris rufa) reared in captivity / Características físicas dos ovos da perdiz vermelha (Alectoris rufa) criada em cativeiro

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da idade das fêmeas (um, dois e três anos) e do mês de postura (março, abril e maio) sobre as características físicas dos ovos da perdiz vermelha (Alectoris rufa) criada em cativeiro. O peso (W), o comprimento máximo (L) e a largura máxima (B) de 2878 ovos foram determinados diretamente, enquanto o índice de forma (B/L), o volume (V) e a superfície (S) foram calculados com base nos parâmetros determinados diretamente. A análise mostrou diferenças significativas (P<0,01) no peso dos ovos entre as diferentes idades e entre meses de postura, com menor peso nas fêmeas mais jovens. Observaram-se diferenças significativas (P<0,01) no comprimento do ovo entre as classes de idade, mas não entre os meses de postura (P>0,05). Observaram-se diferenças significativas (P<0,01) na largura máxima e no índice de forma do ovo entre as diferentes classes de idades, com valores mais elevados nas fêmeas mais velhas e no período de postura mais tardio. O volume dos ovos estimados por meio de V1= 0,51LB2e V2=0,913W foi afetado significativamente (P<0,01) pela idade e pelo mês de postura, bem como as áreas, S1=4.835W0,662, S2=4,951V10,666e S3=4,951V20,666, as quais apresentaram os mesmos efeitos.(AU)

Mensurações ultrassonográficas da cisterna da glândula mamária de caprino transgênico / Ultrasound measurements of the mammary gland of transgenic hormone-induced lactating goat

Milk production of transgenic does was evaluated by ultrasound measurements of the mammary gland. Two Canindé goats, which were nine months of age were used in the trial, one non-transgenic or other transgenic for hG-CSF. For hormone-induced lactation, animals were given estradiol (0.25mg/kg, IM), progesterone (0.75mg/kg, IM), and prednisolone (0.4mg/kg, IM). Ultrasonographic exams were carried out during milking, using a Falcon 100 ultrasound equipment with a 5MHz convex probe and were performed by the same operator. The results were expressed as mean±standard error. The maximum greater length and shorter length of the cistern were respectively 5.14cm and 1.36cm for the transgenic animal and 7.28cm and 2.25cm for non-transgenic, which is consistent with the maximum milk volume produced. The relationship between the average area of cisterns and milk yield was expressed as a linear correlation curve, with a correlation coefficient significantly positive for both transgenic (Y=-1.1314+10.8538*x; r=0.97) and non-transgenic (Y=-21.7551+18.3634*x; r=0.97) animals. In conclusion, the ultrasound is a practice and appropriate technique to evaluate the cisterns in ruminant udders in transgenic animal.(AU)

Oocytoe production and in vitro maturation in Canindé goats following hormonal ovarian stimulation

This study e valuated the effect of hormonal ovarian stimulation regimes on the quantity and quality of the cumulus - oocyte complexes (COCs) recovered by laparoscopy and their subsequent in vitro matur ation (IVM) . Eighteen cyclic Canindé goats received a vaginal sponge with 60 mg m edroxyprogesterone acetate for 11 days, together with a n injection of 50 μg d - cloprostenol on the 8 th day , along with additional treatment re g imens , as follows : i) five doses (5D), 120 mg of NIH - FSH - P1 in five injections at 12 h inter vals; ii) three doses (3D), 120 mg of NIH - FSH - P1 in three injections at 24 h i nterv als; iii) single dose (1D), 70 mg of NIH - FSH - P 1 and 200 IU of eCG at 36 h prior to sponge rem oval. Three sessions of hormonal treatment/oocyte recover y w ere performed and goats ( n = 6 / group) were allocated to different grou ps . The oocytes were collect ed by laparoscopy at the time of sponge removal and the IVM of the oocytes was monitored. A total of 14.8 ± 0.8 follicles were aspirated per animal with 11.1 ± 0.6 COCs being rec overed , resulting in a recovery rate of 74.7 % ( 577/772 ) . The mean number of CO Cs/goat did not differ (P > 0.05) between treatments (11.7 ± 1.1, 10.7 ± 0.9 and 10.8 ± 1.0 for the 5D, 3D and 1D groups, respectively). R ecovery rate was higher (P < 0.05) in the 5 D group ( 84.1 % ; 211/251 ) compared to the 3 D ( 68.2 % ; 182/267 ) and 1D group s (72.4% ; 184/254 ). T he lowest (P < 0.05) maturation rate was recorded in the 3D group (32.1% ; 27/84 ), while the rate for the 5D and 1D groups was 49.1% ( 53/108 ) and 46.2% ( 42/91 ) , respectively. Finally, taking into account the main performance results of th e three treatments, it i s advisable to use the 5D regime in future Canindé breed preservation programs based on laparoscopy technology as a means to recover oocytes .

Oocytoe production and in vitro maturation in Canindé goats following hormonal ovarian stimulation

This study e valuated the effect of hormonal ovarian stimulation regimes on the quantity and quality of the cumulus - oocyte complexes (COCs) recovered by laparoscopy and their subsequent in vitro matur ation (IVM) . Eighteen cyclic Canindé goats received a vaginal sponge with 60 mg m edroxyprogesterone acetate for 11 days, together with a n injection of 50 μg d - cloprostenol on the 8 th day , along with additional treatment re g imens , as follows : i) five doses (5D), 120 mg of NIH - FSH - P1 in five injections at 12 h inter vals; ii) three doses (3D), 120 mg of NIH - FSH - P1 in three injections at 24 h i nterv als; iii) single dose (1D), 70 mg of NIH - FSH - P 1 and 200 IU of eCG at 36 h prior to sponge rem oval. Three sessions of hormonal treatment/oocyte recover y w ere performed and goats ( n = 6 / group) were allocated to different grou ps . The oocytes were collect ed by laparoscopy at the time of sponge removal and the IVM of the oocytes was monitored. A total of 14.8 ± 0.8 follicles were aspirated per animal with 11.1 ± 0.6 COCs being rec overed , resulting in a recovery rate of 74.7 % ( 577/772 ) . The mean number of CO Cs/goat did not differ (P > 0.05) between treatments (11.7 ± 1.1, 10.7 ± 0.9 and 10.8 ± 1.0 for the 5D, 3D and 1D groups, respectively). R ecovery rate was higher (P < 0.05) in the 5 D group ( 84.1 % ; 211/251 ) compared to the 3 D ( 68.2 % ; 182/267 ) and 1D group s (72.4% ; 184/254 ). T he lowest (P < 0.05) maturation rate was recorded in the 3D group (32.1% ; 27/84 ), while the rate for the 5D and 1D groups was 49.1% ( 53/108 ) and 46.2% ( 42/91 ) , respectively. Finally, taking into account the main performance results of th e three treatments, it i s advisable to use the 5D regime in future Canindé breed preservation programs based on laparoscopy technology as a means to recover oocytes .(AU)

Edge effects on fern community in an Atlantic Forest remnant of Rio Formoso, PE, Brazil / Efeitos de borda na comunidade de samambaias em um remanescente de Floresta Atlântica de Rio Formoso, PE, Brasil

We have investigated how edge effects influence the fern community of Jaguarão Forest (08º 35' 49" S and 35º 15' 39" W), located in the district of Rio Formoso, Pernambuco, Brazil. A comparative analysis was made of the interior and edge of the fragment of forest, regarding the richness, abundance and diversity of ferns in the two areas. Six plots of 10 × 20 m were chosen, three in each area. A total of 381 ferns were recorded, which were distributed among 25 species, 17 genera and 12 families. The two areas (edge and interior) were found to differ, with distinct relative air humidities and temperatures (p = 0.00254 and p = 0.00019, respectively). The interior showed higher diversity (t = 7.251 and p = 0.018) and richness (t = 6.379 and p = 0.023) than the edge area, but the same abundance (t = 1.728; p = 0.226) as the edge. Regarding the composition of the flora, it was clear that the interior is a habitat completely distinct from the edge with regard to the fern community, given that only one species, Adiantum petiolatum Desv., was common to both environments. It was concluded that the edge effect causes a decrease in richness and abundance of the fern species found in Jaguarão Forest, where the more sensitive species are being replaced by species that are tolerant to the disturbance caused by the creation of an edge.(AU)

Este trabalho verificou como os efeitos de borda influenciam as comunidades de pteridófitas presentes na Mata do Jaguarão (08º 35' 49" S e 35º 15' 39" W), município de Rio Formoso, Pernambuco. O estudo foi feito através de análise comparativa entre os ambientes de interior e de borda. Para verificar a riqueza, abundância e diversidade das pteridófitas nos dois ambientes, foram estabelecidas seis parcelas de 10 × 20 m (200 m²), sendo três para cada ambiente. Foram contabilizados 381 indivíduos de pteridófitas, distribuídos em 25 espécies, 17 gêneros e 12 famílias. Os dois ambientes (interior e borda) caracterizaram-se diferentes entre si, com umidade relativa do ar e temperatura distintas (p = 0,00254 e p = 0,00019, respectivamente). O ambiente de interior apresentou maior diversidade (t = 7,251 e p = 0,018) e riqueza (t = 6,379 e p = 0,023) que o ambiente de borda, de acordo com o teste estatístico empregado (teste t pareado). A abundância, por outro lado, foi a mesma em interiores e bordas do fragmento (t = 1,728 e p = 0,226). Quanto à composição florística, ficou claro que o interior do fragmento estudado constitui um ambiente totalmente distinto da borda, no que se refere à comunidade pteridofítica, com apenas uma espécie comum aos dois ambientes, Adiantum petiolatum Desv. Assim, o presente estudo constatou que o efeito de borda causa diminuição na riqueza e abundancia das espécies de pteridófitas ocorrentes na Mata do Jaguarão, com a existência de substituição das espécies mais sensíveis pelas espécies tolerantes aos impactos causados por esse efeito.(AU)

Clonagem em ruminantes: progressos e perspectivas atuais / Cloning in ruminants: progress and current perspectives

Desde o nascimento da ovelha Dolly, grupos de pesquisas têm empregado a técnica de transferência nuclear (TN) ou clonagem para a produção de embriões e crias em diferentes espécies de ruminantes. Em geral, a transferência nuclear consiste em transferir núcleos de células doadoras para o interior de oócitos enucleados, resultando na produção de indivíduos geneticamente idênticos ao animal doador de núcleo. Contudo, a eficiência da técnica ainda é baixa devido a inúmeros fatores. Assim, o objetivo deste trabalho é realizar uma revisão sobre a transferência nuclear em suas várias etapas, destacando os principais fatores que interferem no seu sucesso e discutir as perspectivas atuais provenientes do surgimento de metodologias e adaptações aos protocolos experimentais.(AU)

Since the birth of Dolly, research groups have employed the nuclear transfer (NT) or cloning to embryo and offspring production in many ruminant species. In general, this technique consists on nuclear transfer of donor cells into enucleated oocytes, resulting on the production of genetic identical individual to the nucleus donor animal. However, there are many factors that reduce the efficiency of this technique. Thus, the objective of this manuscript is to describe several steps of the technique with emphasis to the main factors that interfere on its success and to discuss current perspectives considering some new approaches in the methodology and experimental protocols.(AU)

Clonagem em ruminantes: progressos e perspectivas atuais / Cloning in ruminants: progress and current perspectives

Desde o nascimento da ovelha Dolly, grupos de pesquisas têm empregado a técnica de transferência nuclear (TN) ou clonagem para a produção de embriões e crias em diferentes espécies de ruminantes. Em geral, a transferência nuclear consiste em transferir núcleos de células doadoras para o interior de oócitos enucleados, resultando na produção de indivíduos geneticamente idênticos ao animal doador de núcleo. Contudo, a eficiência da técnica ainda é baixa devido a inúmeros fatores. Assim, o objetivo deste trabalho é realizar uma revisão sobre a transferência nuclear em suas várias etapas, destacando os principais fatores que interferem no seu sucesso e discutir as perspectivas atuais provenientes do surgimento de metodologias e adaptações aos protocolos experimentais.

Since the birth of Dolly, research groups have employed the nuclear transfer (NT) or cloning to embryo and offspring production in many ruminant species. In general, this technique consists on nuclear transfer of donor cells into enucleated oocytes, resulting on the production of genetic identical individual to the nucleus donor animal. However, there are many factors that reduce the efficiency of this technique. Thus, the objective of this manuscript is to describe several steps of the technique with emphasis to the main factors that interfere on its success and to discuss current perspectives considering some new approaches in the methodology and experimental protocols.

INFLUÊNCIA DOS MEIOS DE ESTOCAGEM DURANTE O TRANSPORTE DE OVÁRIOS BOVINOS A 4°C SOBRE A RECUPERAÇÃO E QUALIDADE OOCITÁRIA

O objetivo foi avaliar diferentes meios na presença e ausência de soro fetal bovino (SFB; 10%) durante o transporte por 24 h de ovários a 4°C sobre a recuperação e a qualidade oocitária bovina. Cinco experimentos foram realizados comparando: (E1) NaCl vs. NaCl+SFB vs. controle (não resfriado), (E2) PBS vs. PBS+SFB vs. controle, (E3) DMEM vs. DMEM+SFB vs. controle, (E4) DPBS vs. DPBS+SFB vs. controle e (E5) melhores resultados dos experimentos anteriores. Após a aspiração folicular, oócitos foram avaliados quanto à qualidade por critérios morfológicos e ensaio de azul cresil brilhante. Ainda, células dos cumulus de oócitos viáveis foram avaliadas quanto à viabilidade pelo azul de tripan. No E1, NaCl permitiu uma maior taxa de recuperação em relação ao NaCl+SFB (46,0% vs. 39,6%), enquanto que os demais parâmetros não foram alterados. Já no E2, o SFB em PBS influenciou positivamente a taxa de recuperação (41,2% vs. 32,8%) e a viabilidade celular (46,3% vs. 41,7%), quando comparado ao PBS. No E3, o SFB em DMEM teve uma influência negativa sobre a taxa de recuperação (39,9% vs. 40,7%) e avaliação morfológica (59,0% vs. 73,1%). Contudo, a adição de SFB ao DMEM se mostrou benéfica à viabilidade celular (42,0% vs. 34,5%). Em relação ao E4, a presença de SFB em DPBS influenciou positivamente a viabilidade celular (50,7% vs. 47,0%). Já no E5, comparando os melhores grupos [NaCl, PBS+SFB,